Штам clostridium perfringens тип д “хмельницький”, що пропонується для виготовлення вакцин проти анаеробних інфекцій сільськогосподарських тварин

Винахід відноситься до ветеринарної мікробіології, зокрема, до біотехнології і може бути використаний для виготовлення вакцин проти анаеробних інфекцій сільськогосподарських тварин, які широко поширені на тваринницьких фермах і завдають значних економічних збитків [5]. Хіміотерапія анаеробних інфекцій мало ефективна і трудомістка. В зв'язку з цим основним ефективним методом боротьби з цими хворобами є вакцинація тварин [5]. Штами анаеробних мікроорганізмів, що пропонуються для виробництва вакцин повинні мати стабільні морфологічні, культурально-біохімічні властивості, добре виражені патогенні властивості, бути нешкідливими та високо імуногенними. Аналогами винаходу є виробничі штами Closlridium perfringens на основі яких отримані вакцини проти анаеробних інфекцій сільськогосподарських тварин [2, 3, 4]. Прототипом винаходу є виробничий штам Closlridium perfringens №91 типу Д, який використовується для виробництва асоційованої вакцини проти сибірки, анаеробної дизентерії та інфекційної ентеротоксемії [4]. У вітчизняній ветеринарній практиці немає штаму Clostridium perfringens тип Д, який би був запропонований для виробництва вакцин проти анаеробних інфекцій. Це затруднює розробку засобів специфічної профілактики проти таких економічно значимих захворювань, як анаеробної ентеротоксемії, анаеробної дизентерії молодняку та інших клостридіозів сільськогосподарських тварин. Задачею даного винаходу є створення вакцинного штаму Clostridium perfringens №133 тип Д, який володіє стабільними морфологічними та культурально-біохімічними властивостями, добре вираженими патогенними властивостями і був виділений з матеріалу відібраного від трупа поросяти з клінічними ознаками ентеротоксемії. Штам Clostridium perfringens тип Д “Хмельницький” задепонований в офіційній колекції мікроорганізмів Державного науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів і має реєстраційний номер 133 (свідоцтво від 5.08.2002р.). Морфологічні властивості. Грампозитивні товсті, нерухливі паличковидні бацили із заокругленими кінцями. Найчастіше розташовані поодиноко, інколи по 4-5 у ланцюжку. Мають спори овальної форми, що розташовані переважно центрально чи субтермінально. Культуральні властивості. Факультативний анаероб. Оптимальна температура культивування 37°C . На середовищі Кітт-Тароцці раннє помутніння (поява росту через 5-6 годин) з інтенсивним газоутворенням та утворенням осаду. Через 48-56 годин просвітління середовища. На кров'яному агарі в анаеробних умовах утворює сірувато-зелені колонії округлої форми, випуклі з рівними краями та зоною гемолізу брудно-коричневого кольору. При доступі кисню колонії зеленіють. На середовищі Вільсон-Блера утворює колонії чорного кольору, при інтенсивному рості середовище чорніє з розривом стовпчика та утворенням газу через 1-3 години. Молоко інтенсивно згортається з утворенням губчатого казеїнового згустку, розріджує желатину. Ферментативні властивості. Штам Clostridium perfringens тип Д “Хмельницький” ферментує з утворенням кислоти і газу глюкозу, сахарозу, мальтозу, галактозу, не ферментує маніт, дульцит, не утворює сірководень. Таблиця 1 Біохімічні властивості вакцинного штаму Clostridium perfringens №133 тип Д Глюкоза Мальтоза Галактоза Сахароза Маніт Дульцит Утворення сірководню + + + + + Патогенні властивості. Штам Clostridium perfringens тип Д “Хмельницький” патогенний для білих мишей та морських свинок. При внутрішньовенному введені білим мишам надосадової рідини бульйонної культури штаму Clostridium perfringens тип Д “Хмельницький” (термін культивування 15-27 годин) в дозі 0,5см3 спостерігається швидка загибель тварин протягом 18-24 годин. При підшкірному чи внутрішньом'язовому введенні бульйонної культури морським свинкам в об'ємі 1,0см3 спостерігається повільна загибель тварин протягом 72 годин. На місці ін'єкції шкіра відшаровується, м'язи мають вигляд вареного м'яса, сіруватобрудного кольору. Кишечник переповнений газами. Визначення типу токсину визначається в реакції нейтралізації специфічними сироватками з послідуючим зараженням тварин живою культурою. Штам Clostridium perfringens тип Д “Хмельницький” продукує термолабільний токсин, максимальна концентрація якого в середовищі спостерігається через 3-5 днів. Мінімальна летальна доза для мишей 0,002см3 . Вбиває повільно. Запропонований штам володіє високою патогенністю, придатний для виробництва вакцини проти анаеробної дизентерії ягнят. Виготовлена вакцина, до складу, до складу якої входить цей штам, захищає від 80%-100% тварин. Запропонований штам може бути використаний для виробництва вакцини проти некробактеріозу та інших анаеробних інфекцій сільськогосподарських тварин. Джерела інформації 1. Определитель бактерий Берджи /под. ред. Дж. Хоулта, Н Крита, П.Снита и др. Перевод с англ. акад. РАН Г.А. Заварзина. - 9-е изд. в 2-х томах . - 1997. - 800с. 2. Патент 2098127 RU, А61К39/116, С12N1/20. Ассоциированная вакцина, "НЕКОВАК" против некробактериоза крупного рогатого скота /Сидорчук А.А., Панасюк С.Д. и др.; №96119157/13. Заявлено 26.09.96; Опубліковано 10.12.97. Бюл.№34. - 4с. 3. Патент 2129441 RU, A61К39/116//А61К39/08, 39/108. Вакцина, ассоциированная против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиоза поросят / Кириллов Л.В., Малахов Ю.А., Пирожков М.К. и др.; № 97120415/13; Заявлено 10.12.97; Опубликовано 27.04.99, Бюл.№12. - 8с. 4. Патент 2141340 RU, А61К39/116//А61К39/07, 39/08. Ассоциированная вакцина против сибирской язвы, анаэробной дизентерии и инфекционной энтеротоксемии овец и способ профилактики этих болезней / Гаврилов В.А., Селиверстов В.В., Бакулов И.А. и др.; №98107544/13; Заявлено 21.04.98; Опубликовано 20.11.99, Бюл. №32. - 4с. 5. Риженко В.В., Марченко О.М., Бондар Т.О., Галка І.В., Риженко І.В., Кравцова О.Л., Черніков О.О. Актуальні питання профілактики анаеробних інфекцій людини і тварини //Бюлетень "Ветеринарна біотехнологія" IBM УААН, Київ, 2002. - №2. - С.199 - 204.