Спосіб отримання вірусінактивованого антипротеїназного засобу широкого спектра дії

Спосіб отримання вірусінактивованого антипротеїназного засобу широкого спектра дії шляхом етанолового осадження білків плазми крові за Коном із фракції ІІ+ІІІ та видалення β-ліпопротеїнів із подальшим їх очищенням фільтруючою і стерилі 3 що дозволяє збільшити в 10-20 разів вміст антипротеїназного засобу і не впливає на ефективність отримання імуноглобулінів G. Спосіб отримання вірусінактивованого антипротеїназного засобу широкого спектра дії демонструється наступним прикладом. Приклад. У гомогенізатор поміщають 30 кг осаду фракції ІІ+III після етанолового фракціонування, додають натрійгідрофосфатний (NaH2PO4) буферний розчин, щоб загальний об'єм становив 80 л і доводять розведеною фосфорною кислотою до рН 5-6, проводять гомогенізацію осаду до однорідної маси, перевантажують у реактор об'ємом 600 л, розбавляючи натрій-ацетатним буферним розчином (50 ммоль/л) до 600 л, рН 4-5, і протягом 4 годин перемішують для екстракції білка. Потім вводять 30 % розчин поліетиленгліколю (ПЕГ) 4000 до кінцевої концентрації ПЕГ 3 %, протягом двох годин проводиться осадження і на проточній центрифузі при 10 тис. g отримують центрифугат антипротеїназного засобу, до якого додають сухий сорбітол як стабілізатор до кінцевої концентрації 2 %, підігрівають суміш до 20-25 °C, вводять сольвент і детергент, інкубують 4-6 годин, доводячи водневий показник розчину до рН 5-6. Далі проводять хроматографічне очищення білків на іонообмінній хроматографічній колонці об'ємом 75 л, яка заповнена сорбентом із функціональною групою диетиламіноетил (ДЕАЕ) на пористій полімерній основі, при цьому розчинний 2-МГ зв'язується з сорбентом, a більшість домішок (ПЕГ, сольвент/детергент, сорбітол) виходять у вільному об'ємі. Потім через колонку з ДЕАЕ з лінійною швидкістю 2-3 см/хв. пропускають 250 л натрійацетатного буферу (рН 6), продовжують відмивання домішок. Отримують 100 л збагаченого розчину 2-МГ (концентрація до 20 г/л, у той час як у нативній плазмі його концентрація становить 2-4 г/л). Далі проводять діа- та ультрафільтрацію проти трьох об'ємів води для ін'єкцій на касетах із номінальним відсіканням 300 кДа, знесолюють і конце Комп’ютерна верстка Л. Ціхановська 67034 4 нтрують отриманий розчин 2-МГ до бажаної концентрації (від 20 до 100 г/л). Завдяки використанню хроматографічних методів очищення і введенню сольвент-детергентної обробки із фракції ІІ+ІІІ білків плазми крові людини отримано вірусінактивований, стабілізований, збагачений антипротеїназний засіб широкого спектра дії. Джерела інформації: 1. Полифункциональные антипротеиназные белки плазмы крови и их роль в регуляции функции печени / Тимченко А.С., Яковенко С.Б., Аношина М.Ю., Борисевич О.С. // Український журнал гематології та трансфузіології. - 2005. - № 4 (5). С. 36-39. 2. Тимченко А.С. Корекція гематологічних показників при опіковій хворобі антипротеїназними засобами на основі (2-макроглобуліну / Тимченко А.С., Яковенко С.Б., Перехрестенко П.М. // Фізіологічний журнал. - 1996. - Т. 42, № 3-4. - С. 95-97. 3. Универсальный регулятор 2макроглобулин (обзор литературы) / Н.А. Зорин, В.Н. Зорина, P.M. Зорина, В.Г. Левченко // Клиническая лабораторная диагностика. - 2004. - № 11. С. 18-22. 4. Веремеєнко К.М. 2-Макроглобулін: структура, фізіологічна роль і клінічне значення / К.М. Веремеєнко, О.Й Кізім, В.Є. Косенко // Лабораторна діагностика. - 2000. - № 2. - С. 3-8. 5. Авт. свид. № 1027865A, SU, МКИ А61К37/02 Способ получения концентрата 2макроглобулина / Лобунец А.К., Терехов Н.Т., Веремеєнко К.Н., Семенюта О.С, Волохонская Л.И. (SU); заявитель и патентообладатель Киевский НИИ гематологии и переливания крови (SU). № 3380090/28-13; заявл. 12.01.1981, не подлежит опубликованию в открытой печати. 6. Патент № 37445A, UA, МПК А61К35/16, А61К38/55, А61К38/57 Протизапальний засіб / Яковенко С.Б., Тимченко А.С, Борисевич О.С. (UA); заявники і патентовласники Яковенко СБ., Тимченко А.С, Борисевич О.С. (UA). - № 98126668; заявл. 17.12.1998, опубл. 15.05.2001. Бюл. № 4. Підписне Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601