Штам вірусу західного нілу (virus nili occidentalis) для виготовлення специфічних імунобіологічних препаратів

Штам вірусу Західного Нілу (Virus Nili Occidentalis) № 4270 для виготовлення специфічних імунобіологічних препаратів, депонований за №70 від 01.01.2002 року в колекції арбовірусів Львівського НДІ епідеміології та гігієни. Корисна модель відноситься до медичної1 вірусології, а саме до лабораторної діагностики і профілактики захворювань, що викликаються вірусом Західного Нілу На сьогодні відомі кілька штамів вірусу Західною Нілу, які використовуються для виготовлення діагностичних та лікувально-профілактичних препаратів, серед яких найбільш широко вживаним для цих цілей в Україні є штам Ед-101, ізольований в Єгипті [1]. В Україні в природних вогнищах Західного Нілу циркулюють ВІДМІННІ від вищезгаданого штаму збудники цієї інфекції, що спричиняють захворювання серед людей [2, 3]. Однак, промислове виготовлення специфічних імунобіологічних препаратів із місцевих штамів до цього часу не налагоджено. Недоліком штаму Ед-101 є його нижча авідність та специфічність у порівнянні із місцевими штамами, що негативно відображується на антигенній активності виготовлених із нього діагностичних препаратів, що застосовуються в Україні. Завданням корисної' моделі є новий оригінальний штам вірусу Західною Нілу, що є етіологічним чинником захворювань людей в Україні і потенційним кандидатом для виготовлення імунобіологічних препаратів для діагностики та профілактики даної інфекції. Вирішити це завдання можливо шляхом використання штаму N 4270 вірусу Західного Нілу, ізольованого з мозку і внутрішніх органів чибіса, відловленого у Черкаській області в 1985 році [2]. Даний штам депонований за №70 від 01.01.2002 року в колекції арбовірусів Львівського НДІ епідеміології та гігієни, яка згідно Постанови Кабінету Міністрів України №1709 від 19.12.2001р. віднесена до наукових об'єктів, що становлять національне надбання України Штам №4270 відноситься до родини Flaviviridae, роду Flavivirus, комплексу японського енцефаліту. З даних таблиці 1 видно, що штам №4270 відноситься до високовірулентних штамів вірусу Західного Нілу. Таблиця 1 Характеристика штаму № 4270 вірусу Західного Нілу за ступенем вірулентності для білих мишей Штам нбм 1С 1С Вірулентність для білих безпородних мишей (Ig LD5o) дорослі 2-тижневі II 1С "Р ір 2,1 3,3 4,9 6,6 4270 7,0 9,5 Примітки: L i e - внутрішньомозкове інфікування. 2. ір - внутрішньоочеревинне інфікування. 3. II - індекс інвазивності 4. нбм - новонароджені білі миші. II 3 ю о 7905 Він високопатогенний для лінійних і безпородних дорослих та новонароджених білих мишей. При зараженні викликає типову картину експериментального енцефаліту з інкубаційним періодом при чнутрішньомозковому шляху зараження 3-5 днів (титр 7,0lg LD5o/O,O2Mn), при внутрішньоочеревинному шляху зараження - 4-7 днів, (максимальний тигр 4,9lg Ю5о/О,2мл). Індекс інвазивності 2,1. Штам N 4270 добре розмножується в перещеплюваній культурі клітин СНЕВ, викликаючи чітку деструкцію клітин на 3-4 добу з вираженим цитопатогенним ефектом (середиьостатистичний титр вірусу в культуральній рідині становить 9,37lg ТЦД 5 0 в0,1мл). Гемаглютинуюча активність пропонованого штаму при репродукції в мозку мишей становить 1:512 в зонах рН 6,0-6,4. Оптимальне значення рН -6,4. Антигенні властивості штаму N4270 вивчені в реакції зв'язування комплементу (РЗК) [4]. Антиген даного штаму в реакції з гомологічною Імунною сироваткою дав титр 1320, з імунною сироваткою Ед-101 - 1:40. Спостерігається спорідненість штаму №4270 з іншими штамами вірусу Західного Нілу, що циркулюють на території України. Таблиця 2 Антигенні звязки штамів вірусу Західного Нілу, визначені в РЗК , Імунні сироватки Ед-101 3266 4270 4541 __^ антигени ——___ 3266 4270 4541 10\20* 160V320 10\80 10\40 40\40 40\40 320\320 40\80 10\40 20\20 80\320 160Л320 Примітка: 10* - титри подані у вигляді обернених величин. Отже, штам №4270 володіє високою антигенною активністю і може бути запропонований для виготовлення ІмунобюлогІчних препаратів для РЗК, а також нРІФ, РГГА [4]. Для цього накопичення біомаси штаму N 4270 вірусу Західного Нілу здійснюється класичним способом шляхом пасажування вірусвмісного матеріалу в живих чутливих системах, в тому числі в організмі лабораторних мишей. Безпородних білих мишей вагою 6-8 грамів заражають у мозок по 0,03мл вірусною суспензією штаму N4270. При появі виражених паралічів на 4-5 добу мишей забивають за правилами евтаназіі, асептичне добувають мозок і шляхом розтирання мозку у фарфоровій ступці із додаванням фізіологічного розчину готують 10% завісину мозкової' тканини. Отриману завісину центрифугують при 1000-1500об/хв протягом 10хв. Рідину, що утворилась над осадом використовують для зараження наступної партії мишей Після проведення 2-3 пасажів інфікований мозок мишей використовується для приготування відповідного діагностикуму [4]. Таким чином, штам N4270 вірусу Західного Нілу, що спричиняє захворювання людей в Україні, має суттєві відмінності у біологічних показниках від прототипного еталонного штаму Ед-101, проявляючи при цьому високу специфічність, антигенну, Комп'ютерна верстка Д. Шеверун імуногенну та репродуктивну активність і відповідає регламентованим параметрам відбору штамівкандидатів для виробництва Імунобіологічних препаратів [5]. Використання цього штаму для виготовлення специфічного діагностикуму та вакцини дозволить суттєво підвищити як достовірність діагностики, так і ефективність профілактики захворювань Західнонільськнм енцефалітом в Україні, та інших країнах де циркулюють споріднені арбовіруси Джерела інформації 1. Львов Д.К., Клименко СМ., Гайдамович С Я. // Арбовирусы и арбовирусные инфекции. - М.: Медицина, -1989. - 335с. 2. Виноград И.А. Арбовирусы в Украинской ССР и их медико-биологическое значение: Дис... д-ра мед. наук. - Львов, 1983 - 505с 3. Лозинський І.М., Виноград І.А. Арбовіруси та арбовірусні Інфекції у лісостеповій зоні України // Мікробіол. журнал. -1998 - т.60, №2. - С.49-60. 4. Арбовирусы. Сборник научных трудов. Москва, 1986- 180с. 5. Верета Л. А., Воробьева М. С. Природная гетерогенность и целенаправленний отбор штамов вируса клещевого енцефалита // -Москва.: Медицина -1990. - 123с. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул Глазунова, 1, м Київ-42, 01601