Антитіло до il-36r

Реферат: (74) Представник: Петров Андрій Володимирович, реєстр. №139 (56) Перелік документів, взятих до уваги експертизою: WO 2010025369 A2, 04.03.2010 WO 2008033333 A2, 20.03.2008 IL-1RL2 and its ligands contribute to the cytokine network in psoriasis / Blumberg Hal, Dinh Huyen, Dean Charles et al. // Journal of immunology, 2010. Vol. 185. - no. 7. -P. 4354 - 4362 Opposing activities of two novel members of the IL-1 ligand family regulate skin infl ammation / Blumberg Hal, Dinh Huyen, Trueblood S. Esther et al. // The journal of experimental medicine, Rockefeller university press. - US. - 2007. - Vol. 204. - no. 11. P. 2603 - 2614 Interleukin-36-receptor antagonist deficiency and generalized pustular psoriasis / Marrakchi Slaheddine, Guigue Philippe, Renshaw R. Blair et al. // New england journal of medicine. - 2011. - Vol. 365. - no. 7. - P. 620 - 628 Regulation and function of the IL-1 family cytokine IL-1F9 in human bronchial epithelial cells / Chustz Regina T., Nagarkar Deepti R., Poposki Julie A, et al. // American journal of respiratory cell and molecular biology. -2011. - Vol. 45. - no. 1. - P. 145 153 Psoriasiform dermatitis is driven by IL-36-mediated DC-keratinocyte crosstalk / Tortola Luigi, Rosenwald Esther, Abel Brian et al. // The journal of clinical investigation. - 2012. - Vol. 122. - no. 11. - P. 3965 3976 IL-36[alpha] exerts pro-inflammatory effects in the lungs of mice / Ramadas Ravisankar A., Ewart Susan L., Iwakura Yoichiro et al. // Plos one. - 2012. - Vol. 7. - no. 9. - P. e45784 UA 115540 C2 (12) UA 115540 C2 Винахід стосується антитіла до ІL-36R або його антигензв'язувального фрагмента, фармацевтичної композиції, що його містить, виділеного полінуклеотиду, вектора, клітинихазяїна, способу його одержання та діагностичного набору, що містить антитіло до ІL-36R, та його застосування для лікування запального захворювання, автоімунного захворювання, респіраторного захворювання, метаболічного порушення, опосередковуваного епітелієм запального порушення, фіброзу або раку. UA 115540 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Перелік послідовностей В даний опис входить «Перелік послідовностей», який представлений у форматі ASCII через EFS-Web і який повністю включений в даний опис в якості посилання. Зазначена копія у форматі ASCII, створена 12 листопада 2012, позначена як 09-0583WO.txt і її розмір становить 147 390 байтів. Галузь техніки, до якої належить винахід Даний винахід в цілому належить до антитіл до IL-36R, призначених для діагностичного і терапевтичного застосування. Антитіла можна застосовувати в фармацевтичних композиціях і наборах, що містять зазначені сполуки. Антитіла можна застосовувати в способах лікування різних захворювань чи порушень, наприклад, імунологічних, запальних, аутоімунних, фіброзних і респіраторних захворювань у людини. Передумови створення винаходу Сімейство цитокінів IL-1 складається з 11 різних лігандів, а саме, IL-1α (який позначають також як IL-1F1), IL-1β (IL-1F2), антагоніста рецептора IL-1 (IL-1Ra або IL-1F3) , IL-18 (IL-1F4), IL1F5-IL-1F10 і IL-1F11 (або IL-33). Відомо, що IL-1α і IL-1β індукують прозапальну активність при зв'язуванні з рецептором типу I IL-1 (IL-1RI) і рекрутмент звичайного корецепторного допоміжного (додаткового) білка IL-1-рецептора (IL-1RAcP), а IL-1Ra діє в якості конкурентного інгібітору зв'язування IL-1 з IL-1RI, викликаючи тим самим протизапальну дію. У численних дослідженнях встановлено, що IL-18 являє собою прозапальний цитокін, який є індуктором IFNγ, а IL-33 описаний в якості імунорегулюючого цитокіну, який бере участь, зокрема, в контролі Th2-відповідей. Нові представники сімейства IL-1, включаючи IL-1F5, IL-1F6, IL-1F8 і IL-1F9, були ідентіфіровані допомогою пошуку в базах даних ДНК гомологів IL-1. У людей і мишей всі гени, що кодують ці цитокіни, картовані на ділянці розміром менше 300 т.п.н. на хромосомі 2q, на якій вони фланковані генами IL1A, IL1B і IL1RN. Для IL-1F6, IL-1F8 і IL-1F9 характерна гомологія на рівні амінокислотної послідовності від 21% до 37% з IL-1 і IL-1Ra, в той час як для IL-1F5 на рівні амінокислотної послідовності характерна гомологія 52% з IL-1Ra, це дозволяє припустити, що IL-1F5 може бути ендогенним антагоністом рецептора. IL-1F6, IL-1F8 і IL-1F9 зв'язуються з IL-1Rrp2, рецептором сімейства IL-1R, і вони використовують IL-1RAcP в якості корецептора для стимуляції внутрішньоклітинних сигналів, аналогічних сигналам, які індукуються IL-1, http: //bloodjournal.hematologylibrary.org/content /118/22/5813.full - ref-12, в той час як для IL-1F5 встановлено здатність інгібувати індуковану IL1F9 активацію NF-κB в Т-клітинах лінії Jurkat, які надекспресують IL-1Rrp2. Аналогічно IL-1β, у всіх зазначених гомологах IL-1 відсутній лідерний пептид, і вони не можуть вивільнятися через загальноприйнятий секреторний шлях, хоча відомі результати досліджень, що дозволяють припустити, що вивільнення агоністів IL-1Rrp2 може контролюватися за допомогою механізмів, відмінних від тих, які регулюють секрецію IL-1β. Для підтвердження специфічних біологічних дій цих цитокінів та визнання того, що вони всі зв'язуються з одним і тим же рецептором, в даний час запропоновано внесення поправок в номенклатуру гомологів IL-1. Так, IL-1Rrp2 нині позначають як IL-36R, а його ліганди позначають як IL-36α (IL-1F6), IL-36β (IL-1F8) і IL-36γ (IL1F9). Крім того, IL-1F5, який, як встановлено, проявляє антагоністичну активність щодо рецептора, в даний час перейменований в IL-36Ra. Для матричних РНК IL-36α, IL-36β і IL-36γ характерний високий рівень експресії в деяких тканинах, зокрема, у внутрішніх епітеліальних тканинах, які піддаються дії патогенів, і в шкірі. Важливо відзначити, що експресія IL-36Ra і IL-36α зазнає значної підвищувальної регуляції в стимульованих IL-1β/TNF-α людських кератиноцитах, а рівень мРНК IL-36Ra і IL-36γ в значній мірі підвищується в пошкодженій псоріазом шкірі. Крім того, виробництво білка IL-36γ підвищується в людських кератиноцитах після стимуляції за допомогою TNF-α і IFN-γ. Підвищені рівні експресії мРНК і білка IL-36α описані також при хронічній хворобі нирок. Для трансгенних мишей, у яких відбувається надекспресія IL-36α в кератиноцитах, виникають запальні ушкодження шкіри, які мають деякі ознаки, характерні для псоріазу. Зазначений фенотип виявився більш вираженим, коли трансгенних мишей схрещували з мишами з дефіцитом L-36Ra, що підтверджує регуляторну функцію IL-36Ra in vivo. Запальний стан шкіри у трансгенних мишей з кератиноцит-специфічним IL-36α в ще більшому ступені нагадував людський псоріаз, якщо мишей обробляли 12-O-тетрадеканоілфорбол-13-ацетатом, він нагадував хворобу людини на гістологічному, молекулярному рівні і за реакцією на терапевтичні засоби. Крім того, після трансплантації людської шкіри, що має псоріатичні ушкодження, мишам з імунодефіцитом стан нормалізувався, коли мишей обробляли антитілом до IL-36R, підтверджуючи, що IL-36 грає центральну роль у підтриманні фенотипу пошкодження шкіри. Взяті в сукупності зазначені дані свідчать про те, що ліганди IL-36R, включаючи IL-36α, IL36β і IL-36γ, мають прозапальну дію in vitro і in vivo, і що IL-36Ra діє в якості такого, який 1 UA 115540 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 зустрічається в природних умовах антагоніста, імітуючи систему IL-1/IL-1Ra. Таким чином, мається доказ того, що ліганди IL-36R беруть участь в численних хворобливих станах, і існує потреба в нових терапевтичних засобах, що надають спрямований вплив на зазначений шлях, зокрема, призначених для застосування при лікуванні запальних захворювань. Короткий виклад суті винаходу В основу даного винаходу була покладена задача розробити біотерапевтичні засоби, зокрема антитіла, які зв'язуються з IL-36R. Відповідно до одного з об'єктів даного винаходу антитіла, запропоновані в даному винаході, блокують опосередковувану лігандом IL36 (α, β та / або γ) передачу сигналів. Відповідно до одного з об'єктів даного винаходу антитіла, запропоновані в даному винаході, можна застосовувати, наприклад, для лікування опосередковуваного епітелієм запалення / фіброзу при таких захворюваннях як псоріаз, запальне захворювання кишечника, склеродерма, ХОЗЛ і хронічна хвороба нирок. Одним з об'єктів даного винаходу є антитіло до IL-36R, має один або кілька із зазначених нижче властивостей. Відповідно до одного з об'єктів винаходу антитіло до IL-36R, пропоноване в даному винаході, має високу ефективність зв'язування на молекулярному / клітинному рівні. Відповідно до одного з об'єктів винаходу зв'язування антитіла до IL-36R, що пропонується в даному винаході, з людським IL-36R характеризується величиною KD < 0,1нМ. Згідно іншому об'єкту винаходу зв'язування антитіла до IL-36R, що пропонується в даному винаході, зокрема, гуманізованого антитіла до IL-36R, з людським IL-36R характеризується величиною KD 67E7E8 L-CDR1 LASQTIGTWLG (SEQ ID NO: 23) >78C8D1 L-CDR1 RSSQNIVHSNGNTYLQ (SEQ ID NO: 24) 15 >81A1D1 L-CDR1 RASQDIYKYLN (SEQ ID NO: 25) 20 >81B4E11 L-CDR1 TASSSVSSSYFH (SEQ ID NO: 26) >73C5C10 L-CDR1 20 UA 115540 C2 KASQDVGTNVL (SEQ ID NO: 27) >73F6F8 L-CDR1 KASQDVGTNVL (SEQ ID NO: 27) 5 >76E10E8 L-CDR1 KASQNVGRAVA (SEQ ID NO: 28) 10 >89A12B8 L-CDR1 LASQTIGTWLG (SEQ ID NO: 29) Амінокислотні послідовності CDR-2 легкого ланцюга (L-CDR2) >33D10B12 L-CDR2 STSNLAS (SEQ ID NO: 30) 15 >172C8B12 L-CDR2 AATSLAD ( SEQ ID NO: 31) 20 >67E7E8 L-CDR2 RSTTLAD (SEQ ID NO: 32) >78C8D1 L-CDR2 KVSNRFS (SEQ ID NO: 33) 25 >81A1D1 L-CDR2 YTSGLHS (SEQ ID NO: 34) >81B4E11 L-CDR2 RTSNLAS (SEQ ID NO: 35) 30 >73C5C10 L-CDR2 SASYRHS (SEQ ID NO: 36) 35 >73F6F8 L-CDR2 SASYRHS (SEQ ID NO: 36) >76E10E8 L-CDR2 SASNRYT (SEQ ID NO: 37) 40 >89A12B8 L-CDR2 RATSLAD (SEQ ID NO: 38) Амінокислотні послідовності CDR-3 легкого ланцюга (L-CDR3) 45 >33D10B12 L-CDR3 HQHHRSPVT (SEQ ID NO: 39) >172C8B12 L-CDR3 QQVYTTPLT (SEQ ID NO: 40) 50 >67E7E8 L-CDR3 QQLYSAPYT (SEQ ID NO: 41) 55 >78C8D1 L-CDR3 FQGSHVPFT (SEQ ID NO: 42) >81A1D1 L-CDR3 QQDSKFPWT (SEQ ID NO: 43) 60 >81B4E11 L-CDR3 21 UA 115540 C2 HQFHRSPLT (SEQ ID NO: 44) >73C5C10 L-CDR3 QQYSRYPLT (SEQ ID NO: 45) 5 >73F6F8 L-CDR3 QQYSRYPLT (SEQ ID NO: 45) 10 >76E10E8 L-CDR3 QQYSSYPLT (SEQ ID NO: 46) >89A12B8 L-CDR3 QQLYSGPYT (SEQ ID NO: 47) 15 Амінокислотні послідовності CDR-1 важкого ланцюга (H-CDR1) >33D10B12 H-CDR1 GNTVTSYWMH (SEQ ID NO: 48) 20 >172C8B12 H-CDR1 GYTFTDNYMN (SEQ ID NO: 49) >67E7E8 H-CDR1 GFNIKDDYIH (SEQ ID NO: 50) 25 >78C8D1 H-CDR1 GFSLTKFGVH (SEQ ID NO: 51) 30 >81A1D1 H-CDR1 GFSLSSYEIN (SEQ ID NO: 52) >81B4E11 H-CDR1 GYSFTSSWIH (SEQ ID NO: 53) 35 >73C5C10 H-CDR1 GFSLTNYAVH (SEQ ID NO: 54) >73F6F8 H-CDR1 GFSLTNYAVH (SEQ ID NO: 54) 40 >76E10E8 H-CDR1 GFSLTNYGVH (SEQ ID NO: 55) 45 >89A12B8 H-CDR1 GFNIKDDYIH (SEQ ID NO: 56) Амінокислотні послідовності CDR-2 важкого ланцюга (H-CDR2) 50 >33D10B12 H-CDR2 EILPSTGRTNYNENFKG (SEQ ID NO: 57) >172C8B12 H-CDR2 RVNPSNGDTKYNQNFKG (SEQ ID NO: 58) 55 >67E7E8 H-CDR2 RIDPANGNTKYAPKFQD (SEQ ID NO: 59) >78C8D1 H-CDR2 VIWAGGPTNYNSALMS (SEQ ID NO: 60) 60 22 UA 115540 C2 >81A1D1 H-CDR2 VIWTGITTNYNSALIS (SEQ ID NO: 61) 5 >81B4E11 H-CDR2 EINPGNVRTNYNENF (SEQ ID NO: 62) >73C5C10 H-CDR2 VIWSDGSTDFNAPFKS (SEQ ID NO: 63) 10 >73F6F8 H-CDR2 VIWSDGSTDYNAPFKS (SEQ ID NO: 64) >76E10E8 H-CDR2 VIWPVGSTNYNSALMS (SEQ ID NO: 65) 15 >89A12B8 H-CDR2 RIDPANGNTKYDPRFQD (SEQ ID NO: 66) Амінокислотні послідовності CDR-3 важкого ланцюга (H-CDR3) 20 >33D10B12 H-CDR3 VYFGNPWFAY (SEQ ID NO: 67) 25 >172C8B12 H-CDR3 TKNFYSSYSYDDAMDY (SEQ ID NO: 68) >67E7E8 H-CDR3 SFPNNYYSYDDAFAY (SEQ ID NO: 69) 30 >78C8D1 H-CDR3 QIYYSTLVDY (SEQ ID NO: 70) >81A1D1 H-CDR3 GTGTGFYYAMDY (SEQ ID NO: 71) 35 >81B4E11 H-CDR3 VFYGEPYFPY (SEQ ID NO: 72) 40 >73C5C10 H-CDR3 KGGYSGSWFAY (SEQ ID NO: 73) >73F6F8 H-CDR3 KGGYSGSWFAY (SEQ ID NO: 73) 45 >76E10E8 H-CDR3 MDWDDFFDY (SEQ ID NO: 74) >89A12B8 H-CDR3 SFPDNYYSYDDAFAY (SEQ ID NO: 75) 50 Послідовності CDR мишачих антитіл до IL-36R Нижче представлено узагальнення відомостей про послідовності CDR «лідерних» мишачих антитіл: 23 UA 115540 C2 24 UA 115540 C2 5 10 Послідовності гуманізованих антитіл до IL-36R Послідовності людських каркасних ділянок відбирали для кожного мишачого «лідерного» антитіла на основі гомології каркасних ділянок, структури CDR, консервативних канонічних залишків, консервативних залишків, що утворюють поверхню розділу, та інших параметрів з одержанням гуманізованих варіабельних ділянок (див. Приклад 5). Нижче представлені репрезентативні гуманізовані варіабельні ділянки, виведені з антитіл 81B4 і 73C5. Амінокислотні послідовності варіабельної ділянки легкого ланцюга (VK) 25 UA 115540 C2 26 UA 115540 C2 Нижче представлені послідовності CDR з гуманізованих варіабельних ділянок, виведених з антитіл 81B4 і 73C5. 27 UA 115540 C2 Амінокислотні послідовності L-CDR1 >81B4vK32_3 L-CDR1 TASSSVSSSYFH (SEQ ID NO: 26) 5 >81B4vK32_105 L-CDR1 TASSSVSSSYFH (SEQ ID NO: 26) 10 >81B4vK32_116 L-CDR1 TASSSVSSSYFH (SEQ ID NO: 26) >81B4vK32_127 L-CDR1 TASSSVSSSYFH (SEQ ID NO: 26) 15 >81B4vK32_138 L-CDR1 TASSSVSSSYFH (SEQ ID NO: 26) >81B4vK32_140 L-CDR1 TASSSVSSSYFH (SEQ ID NO: 26) 20 >81B4vK32_141 L-CDR1 TASSSVSSSYFH (SEQ ID NO: 26) 25 >81B4vK32_147 L-CDR1 TASSSVSSSYFH (SEQ ID NO: 26) >73C5vK39_2 L-CDR1 KASQDVGTNVL (SEQ ID NO: 27) 30 >73C5vK39_7 L-CDR1 KASQDVGTNVL (SEQ ID NO: 27) >73C5vK39_15 L-CDR1 KASQDVGTNVL (SEQ ID NO: 27) 35 Амінокислотні послідовності L-CDR2 >81B4vK32_3 L-CDR2 (SEQ ID 102) RTSTLAS 40 >81B4vK32_105 L-CDR2 (SEQ ID 103) RTSILAS >81B4vK32_116 L-CDR2 (SEQ ID 104) RTSRLAS 45 >81B4vK32_127 L-CDR2 (SEQ ID 104) RTSRLAS 50 >81B4vK32_138 L-CDR2 (SEQ ID 104) RTSRLAS >81B4vK32_140 L-CDR2 (SEQ ID 105) RTSQLAS 55 >81B4vK32_141 L-CDR2 (SEQ ID 106) RTSKLAS >81B4vK32_147 L-CDR2 (SEQ ID 140) RTSHLAS 60 28