Фармацевтична композиція та набір для лікування бактеріальних інфекцій

Реферат: Винахід належить до фармакології та медицини, і стосується фармацевтичної композиції, що містить рифалазил та індуктор інтерферону циклоферон у фармакологічно ефективній кількості, та фармацевтичного набору, що містить у фармакологічно ефективній кількості рифалазил у вигляді таблетки, капсули або розчину для ін'єкцій, індуктор інтерферону циклоферон у вигляді таблетки, капсули або розчину для ін'єкцій та інструкцію, для лікування захворювання, обумовленого Mycobacterium tuberculosis; способу лікування захворювання, обумовленого Mycobacterium tuberculosis. UA 115539 C2 (12) UA 115539 C2 UA 115539 C2 5 10 15 Область техніки Даний винахід стосується області фармакології та медицини, а саме нових фармацевтичних композицій фармацевтичних наборів для лікування бактеріальних інфекцій і нового способу лікування захворювань, пов'язаних із бактеріальними інфекціями, у тому числі туберкульозу. Попередній рівень техніки До останнього часу дослідження в області терапії туберкульозу йшли у напрямі пошуку нових діючих речовин та їх комбінацій з відомими лікарськими засобами (WO 1995/13807, публ. 26.05.1995; ЕР 0650728А1, публ.03.05.1995; ЕР 0398165А1, публ. 22.11.1990; US 5399558, публ. 21.03.1995), або створення нових лікарських форм для таких відомих лікарських засобів, як ізоніазид, рифампіцин, етамбутол (WO88/006038, публ. 25.08.1988; US 5811088, публ. 22.091998; RU 2143900C1, публ. 10.01.2000; RU 2087146С1, публ. 20.081997; RU2125451С1, публ.27.01.1999). Відома ефективна група антибіотиків рифаміцинів, які мають антибактеріальну дію широкого спектру [Рифапентин (US4002752), Рифаксимін (US4341785), Рифабутин (GB1603127), Рифампіцин та Рифалазил], що відносяться до класу ансаміцинів, які утворюються при біосинтезі одним з видів актиноміцетів, а також їх напівсинтетичні похідні. Найбільш широкий спектр антимікробної дії та гарну усмоктуваність мають наприклад, Рифампіцин і Рифалазил напівсинтетичні похідні Рифаміцину SV. 20 25 30 35 40 45 50 До Рифампіцину чутливо багато грампозитивних мікроорганізмів (мінімальна пригнічувальна концентрація 0,001-0,1 мкг/мл) и велике число грамнегативних бактерій (мінімальна пригнічувальна концентрація 1-10 мкг/мл). У низьких концентраціях діє на Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium complex, Chlamydia pneumoniae, Chlamydiu trachomatis, Helicobacter pylori, Clostridium difficile, Bructlla spp., Legionella pntumophila, Rickeltsia typhi, Mycobacterium leprae, Staphylococcus aureus, у т.ч. на метицилінрезистентні штами, Staphylococcus epidermidis, стрептококи; у високих концентраціях - на деякі грамнегативні мікроорганізми (Escherichia coli, Klebsiella, Proteus, Neisseria meningitides, Neisseria gonorrhoeae, у т.ч. бета-лактамазоутворюючі). Активний щодо Haemophilus influenza (у т.ч. стійких до ампіциліну та хлорамфеніколу), Haemophilus ducreyi та інших грампозитивних анаеробів. Унікальною властивістю рифампіцину є висока активність проти мікобактерій туберкульозу (мінімальна пригнічувальна концентрація 0,005-0,5 мкг/мл), що визначає провідне місце цього антибіотика в основних схемах лікування туберкульозу. Рифампіцин має високу активність проти грампозитивних коків, у т.ч. множинно стійких, включаючи так звані метицилінрезистентні. Більш 95 % піогенних стрептококів стійкі до пеніциліну та інших антибіотиків, а також пневмококи чутливі до рифампіцину. До рифампіцину високочутливі збудники сибірської виразки і патогенні клостридії. Рифампіцин активний проти багатьох штамів бактероїдів, протеїв, провіденсій, збудників хвороби легіонерів, бруцельозу. Рифампіцин є одним з найбільш активних препаратів у лікуванні лепри. Він перевершує тетрациклін по активності щодо хламідій - збудників трахоми, пситакозу, лімфогранулеми. Рифампіцин с високоефективний проти рикетсій Провачека. Механізм антимікробної дії Рифампіцину відрізняється від усіх інших антибіотиків. Він пригнічує синтез РНК шляхом утворення комплексу з ДНК-залежною РНК-полімеразою. Цей ефект досить вибірковий. Рифампіцин діє бактерицидно на бактерії, що знаходяться в стадії проліферації, проникає усередину клітини, пригнічуючи збудника, що знаходиться там. Стійкість до рифампіцину швидко розвивається, в процесі лікування. Для подолання розвитку стійкості до рифампіцину препарат призначають у поєднанні з іншими антибіотиками. Встановлено синергізм рифампіцину з еритроміцином (щодостосовно стафілококів), з тетрацикліном (щодо сальмонел, ешерихій, шигел), з новобіоцином (щодо сальмонел). Щодо багатьох мікроорганізмів виявлено синергічний або адитивний ефект з триметопримом. Тому 1 UA 115539 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 застосовують фіксовані поєднання рифампіципу з триметопримом (препарат Рифаприм). При лікуванні туберкульозу рифампіцин призначають лише з іншими туберкулостатиками (стрептоміцином, стамбутолом, ізоніазидом). Рифампіцин має високу ефективність при прийомі внутрішньо: у деяких тканинах виявляється у концентраціях, що перевищують спостережувану в сироватці крові. Він проникає через гематоенцефалічний бар'єр, плацентарний бар'єр, клітинні мембрани; виводиться головним чином з жовчю. Рифалазил, також відомий як КРМ-1648 або benzoxazinorifamycin [US 4690919 публ.01.09.1987; US 4983602, публ. 08.01.1991; US 6316433, 13.11.2001; US 6566354, публ. 20.05.2003], має антибактеріальну активність щодо широкого спектра патогепів (включаючи Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium complex, Chlamydia pneumoniae, Chlamydia trachomatis, Helicobacter pylori Clostridium difficile, мікобактерії, метицилінрезистентні штами Staphylococcus aureus та інші грампозитивні полірезистентні бактерії та внутрішньошпиталеві інфекції), тривалий період напіввиведення (більше 100 годин), а також високе проникнення в клітини (>300:1). Все вищевикладене свідчить про більш високу ефективність рифалазилу порівняно зі стандартними схемами терапії при цілому ряді захворювань, у тому числі при туберкульозі та негонококових уретритах. Рифалазил використовують також для комбінованого лікування бактеріальних інфекцій, наприклад, спільно з бета-лактамними інгібіторами, аміногліказидами, тетрациклінами, ліпопептидами, макролідами, кетолідами, лінкозамидами, стрептогамінами, сульфаніламидами, оксазолідинонами, хінолонами, ципрофлоксацином та ін. [US 20110117154, публ. 19.05.20111. Рифабутин також, як і вищеописані препарати має широкий спектр антибактеріальної дії [http://www.rlsnet.ru/mnn index id 2345.htm]. Селективно інгібує ДНК-залежну РНК-полімеразу у чутливих штамів. Високоефективний стосовно поза- і внутрішньоклітинно розташованих Mycobacterium spp., у т.ч. Mycobacterium tuberculosis, комплекса Mycobacterium aviumintracellulare, Mycobacterium fortuitum, Mycobacterium xenopi. Більш активний, ніж рифампіцин, щодо внутрішньоклітинних мікобактерій туберкульозу (при концентраціях, в 2,5 рази менших). Для лікування активного туберкульозу застосовується у комбінації з іншими протитуберкульозними засобами. Надає дію, що імуностимулює. Рифаксимін [http://www.rlsnet.ru/tn index id 36028.htm#opisaniе-lеkarstvennoj-formy] с антибактеріальним препаратом широкого спектру дії. Необоротно зв'язується з бета субодиницею ферменту бактерій, ДНК-залежною РИК полімеразою і, отже, інгібує синтез РНК і білків бактерій. В результаті необоротного зв'язування з ферментом. Рифаксимін проявляє бактерицидні властивості щодо чутливих бактерій. Препарат має широкий спектр протимікробної активності, що включає більшість грамнегативних і грампозитивних, аеробних та анаеробних бактерій, що викликають шлунково-кишкові інфекції, включаючи діарею мандрівників. Високоефективний щодо аеробів Staphylococcus spp., Enterococcus spp. та анаеробів Peptostreptococcus spp. та ін. Препарат застосовується для лікування шлунковокишкових інфекцій, що викликаються бактеріями, чутливими до Рифаксиміну, у т.ч. гострих шлунково-кишкових інфекцій, діареї мандрівників, синдрому надлишкового росту мікроорганізмів у кишечнику, печінкової енцефалопатії, неускладненого дивертикулезного захворювання ободової кишки і хронічного запалення кишечника. Всесвітня Організація Охорони Здоров'я (ВОЗ) вказує на необхідність створення нових комбінованих протитуберкульозних препаратів, що містять спеціально підібраний набір лікарських речовин з фіксованими дозам в одній таблетці, що забезпечують оптимальний терапевтичний ефект (Consilium Medicum 1999, т.2, с.170-171. Ремедиум, 2000, 7,8). Автори даного винаходу несподівано виявили, що рифаміцин, у тому числі Рифампіцин і Рифалазил, у комбінації з індукторами інтерферону, порівняно з одним рифаміцином або одним індуктором інтерферону, проявляють високий синергізм - більш ніж на порядок вище антиінфекційну активність. Розкриття винаходу Предметом даного винаходу є фармацевтична композиція у вигляді таблеток капсул або ін'єкцій, поміщених у прийнятну упаковку, для лікування захворювань, обумовлених бактеріальними та внутрішньошпиталевими інфекціями, чутливими до рифаміцинів, що включає рифаміцин та індуктор інтерферону у фармакологічно ефективному дозуванні. Кращим є використання Рифампіцину, Рифалазилу, Рифапентину, Рифаксиміну або Рифабутину як рифаміцину, а як індуктору інтерферону - Циклоферону, Ларифану, Аміксину, Гіпораміну, Бропіриміну, Іміквімоду, Резикуїмоду або ІМО-2125. Індуктор інтерферону Бропіримін описаний у заявці WO 2007133800, публ. 22.11.2007; Резикуїмод описаний у заявці US 20050239733, публ. 27.10.2005; ІМО-2125 описаний у "ІМО2125, an agonist of TLR9, that induces endogenous IFN-alpha up-regulatcs broader range of gene 2 UA 115539 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 expression profiles compared to exogenously added IFN-alpha in human PBMCS". J Hepatol 2010, 52(Suppl. 1): Abst 692. Найкращою є фармацевтична композиція, що містить як рифаміцин Рифаміцин та як індуктор інтерферону - Циклоферон. Також найкращою є фармацевтична композиція, що містить як рифаміцин Рифалазил та як індуктор інтерферону - Циклоферон. Стосовно даного винаходу фармацевтична композиція призначена для лікування захворювань, обумовлених Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium complex, Chlamydia pneumoniae, Chlamydia trachomatis або Helicobacter pylori. Фармацевтична композиція також може містити як допоміжні компоненти стабілізатори, носії, розріджувачі та інші добавки, які зазвичай використовуються для утворення лікарських форм. Предметом даного винаходу є фармацевтичний набір, поміщений у прийняту упаковку, для лікування захворювань обумовлених бактеріальними та внутрішньошпиталевими інфекціями, чутливими до рифаміцинів, що включає в фармакологічно ефективному дозуванні рифаміцин у вигляді таблеток капсул або ін'єкцій, індуктор інтерферону у вигляді таблеток капсул або ін'єкцій та інструкцію для одночасного адміністрування компонентів цього фармацевтичного набору. Кращим є фармацевтичний набір, призначений для лікування захворювань обумовлених Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium complex, Chlamydia pneumoniae, Chlamydia trachomatis або Helicobacter pylori. Переважно фармацевтичний набір містить як рифаміцин Рифампіцин, Рифалазил, Рифапентин, Рифаксимін або Рифабутин, а як індуктор інтерферону - Циклоферон, Ларифан, Аміксин, Гіпорамін, Бропіримін, Іміквімод, Резикуїмод або ІМО-2125. Найкращим є фармацевтичний набір, що включає у фармакологічно ефективному дозуванні Рифампіцин у вигляді таблеток капсул або ін'єкцій, Циклоферон у вигляді таблеток капсул або ін'єкцій та інструкцію для одночасного адміністрування компонентів цього фармацевтичного набору. Також найкращим є фармацевтичний набір, що містить у фармакологічно ефективному дозуванні Рифалазил у вигляді таблеток капсул або ін'єкцій. Циклоферон у вигляді таблеток капсул або ін'єкцій та інструкцію для одночасного адміністрування компонентів цього фармацевтичного набору. Предметом даного винаходу є також спосіб лікування захворювань, пов'язаних з бактеріальними або внутрішньошпиталевими інфекціями, чутливими до рифаміцинів, за яким суб'єктові вводять фармакологічно ефективну кількість нової фармацевтичної композиції або ефективну кількість комбінації рифаміцину та індуктора інтерферону з нового фармацевтичного набору. Предметом даного винаходу є також спосіб лікування туберкульозу, туберкульозу, ускладненого СНІДом, або інших захворювань, обумовлених Mycobaclerium tuberculosis, Mycobacterium avium complex, Chlamydia pneumoniae, Chlamydia trachomatis або Helicobacter pylori. Винахід пояснюється кресленням. На фіг. 1 наведено результати випробувань протитуберкульозної активності препаратів, що тестують, на моделі мишей, інфікованих Mycobacterium tuberculosis (гостра туберкульозна інфекція). Позначення на фіг. 1: ТЗ - титри мікобактерій на день 3 (момент інфікування): Т10 - титри мікобактерій на день 10 (початок введення препаратів); Т31 - (CMC)- титри мікобактерій у контролі (CMC) на день 31 (закінчення введення препаратів); RMP - Рифампіцин; R Рифалазил; С - Циклоферон, CFU - (colonie-forming units) -інфекційні (колонія-утворюючі) одиниці в легенях миші. Винахід ілюструється, але не обмежується наступними прикладами. Приклад 1. Фармацевтичний набір. Фармацевтичний набір включає 7 таблеток Рифампіцину, що містять по 250 мг активної субстанції, 7-16 таблеток Циклоферону, що містять по 300 мг активної субстанції, та інструкцію щодо застосування. Приклад 2. Фармацевтичний набір. Фармацевтичний набір включає 7 таблеток Рифалазилу, що містять по 25 мг активної субстанції, 7-16 таблеток Циклоферону, що містять по 150 мг активної субстанції, та інструкцію щодо застосування. Приклад 3. Одержання фармацевтичних композицій. Змішують один з рифаміцинів та один з індукторів інтерферону у співвідношенні зі значеннями, що наведені у таблиці, з відповідними компонентами. Одержують, фармацевтичні композиції. 60 3 UA 115539 C2 Таблиця 3а 3б 3в 3і 3д 3е 3ж 3з 3и 3к Рифаміцин, мг Рифампіцин -150-500 (300)* Рифампіцин - 150-500 (300)* Рифалазил – 5-50 (25*) 5-50(25*) 5 50(25*) 5-50(25*) 5-50(25*) 5-50(25*) 5 50(25*) 5-50(25*) Індуктор інтерферону, мг Циклоферон – 50-450 (300*) Іміквімод - 50-100 (25*) Циклоферон - 50-450 (150*) Аміксин- 100-500(150*) Гіпорамін-20-200(100*) Бропіримін – 500-3000 (750*) Резикуїмод - 0.05-5.0(1*) ІМО-2125-5.0-50(15*) Іміквімод 50-100(25*) Ларифан - 0,05-5.0(0.1*) * Кращий склад 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Приклад 4. Одержання лікарською засобу у формі таблеток. "Змішують 11200 мг крохмалю, 11200 мг подрібненої лактози, 2800 мг тальку, 1000 мг. Рифалазилу та 6000 мг Циклоферону. Одержаний брусок подрібнюють у гранули і просіюють через сита, збираючи гранули розміром 14-16 меш. Одержані гранули таблетують у відповідну форму таблетки вагою 370 мг кожна. Приклад 5. Одержання лікарського засобу у формі капсул. Ретельно змішують Рифалазил і Циклоферон з порошком лактози у співвідношенні 1:6:4. Одержану порошкувату суміш упаковують по 275 мг у желатинові капсули придатного розміру. Приклад 6. Одержання лікарського засобу в ін'єкційній формі. Розчиняють 0,15 г Рифампіцину і 0,15 г Циклоферону в 2, 5 мл стерильної води для ін'єкцій, енергійно струшують ампулу з порошком до повного розчинення, одержаний розчин розводять у 125 мл 5 % розчину глюкози. Одержують ін'єкційний розчин для внутрішньовенного введення. Приклад 7. Визначення протитуберкульозної активності препаратів, що тестують, на моделі мишей, інфікованих Mycobacterium tuberculosis (гocтpa туберкульозна інфекція). Самки мишей лінії BALB / с вагою 19-20 р. інфікують Mycobacterium tuberculosis Erdman (каталог АТСС 35801) в камері для аерозольної інфекції (Glas-Col, Terra Haute, IN). У розпилювач вводили 10 мл суспензії мікобактерій, що містить 5 млн/мл інфекційних (колоніяутворюючих) одиниць. Через 3, 10 і 31 дні після інфекції, миші, які не отримують препарати, що тестують, піддаютть евтаназії за допомогою асфіксії вуглекислим газом, обидві половини легких видаляють і гомогенизують у стерильних умовах у 3 мл стерильного розчину Хенкса (Hanks Balanced Salt Solution, HBSS). Серійні 10-кратні розведення суспензій в розчині Хенкса висівають на 6-ямкові планшети з агаром (Middlebrook 7H11). Планшети інкубують при 37 °C протягом 18-21 дні, після чого визначають титри інфекційних (колонія-утворюючих) одиниць. Речовини, що тестують (Рифампіцин, Рифалазил, Циклоферон, Рифампіцин+Циклоферон, Рифалазил+Циклоферон), розчиняють у 0,5 % карбоксиметилцелюлози, і 200 мкл вводять мишам (8 мишей у дозової групі) внуірішньошлунково щодня на 10-14, 17-21 і 24-28-й день після інфекції. Всіх мишей, що отримали речовини, що тестують, або плацебо (0,5 % карбоксиметилцелюлозу), піддають евтаназії на 31-й день після інфекції, і визначають титри інфекційних одиниць в гомогенатах легенів. Евтаназія. Поміщають мишей в камеру з вуглекислим газом. Переконуються в тому, що всі тварини піддалися евтаназії. Поміщають мишей у 70 % розчин етилового спирту на 10 хвилин. Отримання легеневих тканий. Поміщають 2-3 стерильні серветки на операційний столик. Витягують мишу з розчину спирту, розпластують на столику. Фіксують за допомогою шпильок. Роблять розріз уздовж діафрагми і через ребра. Розкривають грудну клітку, фіксують ребра по обидві сторони за допомогою голок (змінюють голки для кожної тварини, щоб уникнути контамінації). Акуратно витягують легені і вміщують їх в пробірку з розчином Хенкса, яку поміщають на лід. Загортають частини, що залишаються, в серветку і поміщають в контейнер для біологічних відходів. Обробка тканин. Обробляють гомогенізатор 70 % етанолом, потім стерильним фізіологічним розчином, протирають стерильною серветкою. Гомогенізують зразки легенів 10-20 секунд, або до того часу, поки не будуть спостерігатися маленькі шматочки тканин. Перед кожним новим зразком обробляють гомогенізатор 70 % етанолом, потім стерильним фізіологічним розчином і протирають стерильною серветкою. Обробляють пробірку з гомогенатом ультразвуком протягом 15 секунд за допомогою сонікатора. Вносять 100 мкл гомогенату в лунку 24-ямкового планшету та перемішують. Готують серійні 10-кратні розведення. Вносять по 100 мкл 4 UA 115539 C2 5 10 15 20 розбавлень в 6-ямкові планшети з агаром. Розподіляють розбавлення рівномірно по поверхні агару та висушують на повітрі. Перевертають планшети з агаром і поміщають в інкубатор при 37 °C. Інкубують принаймні 18 днів, після чого підраховують колонії мікобактерій. Зниження титрів мікобактерій в легенях мишей після 3 х-тижневої адміністрації препаратів у порівнянні з контролем (CMC) на день 31: Рифалазил, 2.5 мг/кг/день 87 раз; Циклоферон, 30 мг/кг/день 1.08 раз; Рифалазил, 2.5 мг/кг/день + Циклоферон, 30 мг/кг/день 1222 раза; Рифампіцин, 20 мг/кг/день + Циклоферон, 30 мг/кг/день 561 раз. Як видно з даних, що наведені, Циклоферон у дозуванні 30 мг/кг/день не активний, Рифалазил (2,5 мг/кг/день) в 87 разів знижує титри мікобактерій у легенях мишей після 3-х тижневої адміністрації препаратів у порівнянні з контролем (CMC) на день 31, а комбінація Рифалазилу (2,5 мг/кг/день) з Циклофероном (30 мг/кг/день) надає синергізму і в 1222 рази знизила титри мікобактерій у легенях мишей після 3-х тижневої адміністрації препаратів у порівнянні з контролем (CMC) на день 31, таким чином ця комбінація в 14 разів (1222:87 = 14,04) активніше за чистий Рифалазил. Визначення активності препаратів, що тестують, на моделі мишей, інфікованих Mycobacterium avium complex (мікобактеріоз) або Chlamydia pneumonia, (пневмонія) проводять аналогічно описаному вище. Фармацевтичні композиції Рифалазил і Циклоферон і Рифампіцин + Циклоферон виявляють синергітичиий ефект. Промислова придатнсть Винахід може бути використано в медицині і в ветеринарії. ФОРМУЛА ВИНАХОДУ 25 30 35 1. Фармацевтична композиція у вигляді таблетки, капсули або розчину для ін'єкцій, для лікування захворювання, обумовленого Mycobacterium tuberculosis, що містить рифалазил та індуктор інтерферону циклоферон у фармакологічно ефективній кількості. 2. Фармацевтичний набір, поміщений у фармацевтично прийнятну упаковку, для лікування захворювання, обумовленого Mycobacterium tuberculosis, що містить у фармакологічно ефективній кількості рифалазил у вигляді таблетки, капсули або розчину для ін'єкцій, індуктор інтерферону циклоферон у вигляді таблетки, капсули або розчину для ін'єкцій та інструкцію для одночасного введення компонентів цього фармацевтичного набору. 3. Спосіб лікування захворювання, пов'язаного з Mycobacterium tuberculosis, за яким суб'єктові вводять ефективну кількість фармацевтичної композиції за пунктом 1 або ефективну кількість фармацевтичного набору за пунктом 2. 5 UA 115539 C2 Комп’ютерна верстка В. Мацело Міністерство економічного розвитку і торгівлі України, вул. М. Грушевського, 12/2, м. Київ, 01008, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 6