Похідні рапаміцину з стабілізованим кільцем с-22, спосіб індукування імуносупресії

1 Производные рапамицина со стабилизированным кольцом С-22 формулы КІЛЬЦЕМ СПОСІБ ІНДУКУВАННЯ jNR CO2R , карбамилалкил из 2-3 углеродных атомов, гидроксиалкил из 1-4 углеродных атомов, гуанилалкил из 2-4 углеродных атомов, меркаптоалкил из 1-4 углеродных атомов, алкилтиоалкил из 2-6 углеродных атомов, индолилметил, гидроксифенилметил, имидазолилметил или фенил, необязательно моно-, ди- или тризамещенный заместителем, выбранным из алкила из 1-6 углеродных атомов, алкокси из 1-6 углеродных атомов, гидрокси, циано, галоида, нитро, карбалкокси из 2-7 углеродных атомов, трифторметила, амино или карбоновой кислоты, R6 и R9 каждый независимо представляют водород, алкил из 1-6 углеродных атомов или аралкил из 7-10 углеродных атомов, 7 где R означает Сі-Сєалкил, Сг-Суацил, Сбалкилтио, СуСібарилалкил, Сє-Сюарилтио, Сієарилалкилтио, циано, Сі-Сєфторалкил или Сюарил, необязательно замещенный одним или более галогеном, Сі-Сєалкокси, гидрокси, С2Суалканоилом или циано, и R2, R3 и R4 каждый независимо представляют а) водород или в) SiEt3, или С-22, Я 1П R , R и R каждый независимо представляют алкил из 1-6 углеродных атомов, аралкил из 7-10 углеродных атомов, флуоренилметил или фенил, необязательно моно-, ди- или тризамещенный заместителем, выбранным из алкила из 1-6 углеродных атомов, алкокси из 1-6 углеродных атомов, гидрокси, циано, галоида нитро, карбалкокси из 27 углеродных атомов, трифторметила, амино или карбоновой кислоты, а равно 0-4, b равно 0-4, с равно 1-2, d равно 0-4, е равно 0-4, R , R6, а и b - независимы в каждой из субьединиц О C(CH2)CH(CH2)bN с) 0 II -C(CH2)CH(CHAN CO2R' в которой R5 означает водород, алкил из 1-6 углеродных атомов, аминоалкил из 1-4 углеродных атомов, аралкил из 7-10 углеродных атомов, -(CH2)dCO2R8, когда с=2, или a)-CONH(CR 11 R 12 ) fx , где R11 и R12 каждый независимо представляют водород, алкил из 1-6 углеродных атомов, аралкил из 7-10 углеродных атомов, циклоалкил из 3-8 углеродных атомов, галоген или трифторметил, X представляет водород, низший алкил из 1-6 углеродных атомов, циклоалкил из 3-8 углеродных атомов, трифторметил, нитро, алкокси из 1-6 углеродных атомов, карбоалкокси из 2-7 углеродных О 00 ГО ю 45318 4 атомов, аралкил из 7-10 углеродных атомов, галотолуолсульфонатный анион, ид, диалкиламино из 1-6 углеродных атомов на 9=1-6, алкильную группу, тиоалкил из 1-6 углеродных h=1-6, атомов или Y, 1=1-6 ИЛИ Y означает фенилгруппу, которая может быть неg)-CONHSO 2 -Ar 1 , где обязательно моно-, ди- или тризамещенной групАг1 означает фенил, нафтил, пиридил, хинолил, пой, выбранной из алкила из 1-6 углеродных атоизохинолил, хиноксалил, тиенил, тионафтил, фумов, аралкила из 7-10 углеродных атомов, алкокси рил, бензофурил, бензодиоксил, бензоксазолил из 1-6 углеродных атомов, циано, галоида, нитро, бензоизоксазолил или бензодиоксолил, где Аг карбалкокси из 2-7 углеродных атомов, трифторгруппа может быть необязательно моно-, ди- или метила, диалкиламино из 1-6 углеродных атомов тризамещена группой, выбранной из алкила из 1на алкильную группу, алкилтио из 1-6 углеродных 6 углеродных атомов, арилалкила из 7-10 углеатомов, SO 3 H, РОзН или СО 2 Н, родных атомов, алкокси из 1-6 углеродных атомов, f=0-5, циано, галоида нитро, карбалкокси из 2-7 углеродных атомов, трифторметила, амино, диалкиламипри условии, что но из 1-6 углеродных атомов в алкильной группе, когда f=O, X представляет низший алкил из 1-6 алкилтио из 1-6 углеродных атомов, -SO3H, -РОзН углеродных атомов, циклоалкил из 3-8 углеродных или СО 2 Н, атомов, аралкил из 7-10 углеродных атомов или Y, или или их фармацевтически приемлемые соли, когда Аг1-группа содержит основный азот или когда Аг1группа замещена диалкиламино из 1-6 углеродных атомов в алкильной группе, -SO3H, -РОзН или — CR 1 3 , СО 2 Н, і! h) -SO 2 R 1 9 , R означает моно-, ди-, поли- или перфторированную алкильную группу из 1-10 углеродных атоR19 - алкил, алкенил или алкинил, содержащий 1-6 мов, углеродных атомов, или ароматический радикал или выбранный из группы, содержащей фенил или О нафтил, или гетероциклический радикал, выбранО ный из группы, содержащей тиофенил или хиноII лил, или NHCO2R , в котором R20 представляет —С x '-< низший алкил, содержащий от 1 до 6 углеродных атомов, или X означает -(CH2)Q- или -Аг-, г д 14 15 R и R каждый независимо означают водород, алкил из 1-12 углеродных атомов, -(CH2)h-Ar, (CH2),-NR16R17 или -(CH 2 ),N + R 16 R 17 R 18 y , R16 и R17 каждый независимо означают водород, алкил из 1-12 углеродных атомов или -(CH2)h-Ar, Аг является необязательно моно- или дизамещенной группой, выбранной из О II рр о\ C(CHJ,NR R где R 1 и R22 каждый представляют водород или алкил из 1-3 углеродных атомов, или R 1 и R 2 вместе с азотом, к которому они присоединены, образуют насыщенный гетероцикл, имеющий 4-5 углеродных атомов, и j=1-3, или R2 и R3, взятые вместе, также представляют бирадикал формулы і) ИЛИ о О о -C(CH,) k CH(CH 2 ) ( ICNH(CH 2 S n CH(CH 2 ) 0 ] m CNHR 2 3 А в которых необязательные заместители выбирают из группы, содержащей алкил из 1-6 углеродных атомов, аралкил из 7-10 углеродных атомов, алкокси из 1-6 углеродных атомов, циано, галоид, нитро, карбалкокси из 2-7 углеродных атомов или перфторалкил из 1-6 углеродных атомов, R1 означает алкил из 1-6 углеродных атомов, У означает гал ид, сульфат, фосфат или п R24 в которой R24 обозначает водород, алкил из 1-6 углеродных атомов, арилалкил из 7-10 углеродных атомов, (CH 2 ) P NR 2 R26, аминоалкил из 1-4 углеродных атомов, гидроксиалкил из 1-4 углеродных атомов, гуанилалкил из 2-4 углеродных атомов, меркаптоалкил из 1-4 углеродных атомов, алкилтиоалкил из 2-6 углеродных атомов, индолметил, гидроксифенилметил, имидазолилметил или фенил, который необязательно моно-, ди- или тризамещен заместителем, выбранным из алкила из 1-6 углеродных атомов, алкокси из 1-6 углеродных атомов, гидрокси, циано, галоида, нитро, карбалкокси из 2-7 углеродных атомов, трифторметила, амино или кар 45318 ных атомов, гидроксиалкил из 1-4 углеродных боновой кислоты, атомов, гуанилалкил из 2-4 углеродных атомов, R25 означает водород, алкил из 1-6 углеродных меркаптоалкил из 1-4 углеродных атомов, алкилатомов или аралкил из 7-10 углеродных атомов, тиоалкил из 2-6 углеродных атомов, индолилмеR23 и R26 каждый независимо означают водород, тил, гидроксифенилметил, имидазоилметил или формил, алканоил из 2-7 углеродных атомов, арифенил, необязательно моно-, ди- или тризамелалканоил из 8-11 углеродных атомов, арилоил щенный заместителем, выбранным из алкила из или CO2R27, 1-6 углеродных атомов, алкокси из 1-6 углеродных R27 означает алкил из 1-6 углеродных атомов, атомов, гидрокси, циано, галоида, нитро, карбаларилалкил из 7-10 углеродных атомов, алкил, кокси из 2-7 углеродных атомов, трифторметила, флуоренилметил или фенил, который необязаамино или карбоновой кислоты тельно моно-, ди- или тризамещен заместителем, R6 и R9 каждый независимо представляют водовыбранным из алкила из 1-6 углеродных атомов, род, алкил из 1-6 углеродных атомов, аралкил из алкокси из 1-6 углеродных атомов, гидрокси, циа7-10 углеродных атомов, R7, R8 и R10 каждый незано, галоида нитро, карбалкокси из 2-7 углеродных висимо представляют алкил из 1-6 углеродных атомов, трифторметила, амино или карбоновой атомов, аралкил из 7-10 углеродных атомов, кислоты, флуоренилметил или фенил, необязательно монок равно 0-4, , ди- или тризамещенный заместителем, выбран1 равно 0-4, ным из алкила из 1-6 углеродных атомов, алкокси m равно 0-1, из 1-6 углеродных атомов, гидрокси, циано, галоиh равно 0-4, да, нитро, карбалкокси из 2-7 углеродных атомов, о равно 0-4 и трифторметила, амино или карбоновой кислоты, р равно 0-4 а равно 0-4, или их фармацевтически приемлемая соль, или их в равно 0-4, пролиновый аналог, или фармацевтически приемс равно 1-2, лемая соль этого пролинового аналога d равно 0-4, 2 Соединение по п 1, являющееся С-22-метиле равно 0-4, 42-диметил-глицинрапамицином 3 Способ индуцирования иммуносупрессии, который включает введение иммуносупрессивного R , R6, а и b - независимы в каждой из субъединиц количества соединения формулы О C(CHJCH(CHJJSI где R означает С Сбалкилтио, СуСібарилалкил, Сб-Сюарилтио, Сієарилалкилтио, циано, Сі-Сєфторалкил или С-юарил, необязательно замещенный одним или более галогеном, Сі-Сєалкокси, гидрокси, с 2 Суалканоилом или циано, и 2 3 4 R , R и R каждый независимо представляют а) водород или в) SiEts или с) Г 0 •C(CH 2 ) a CH(CH 2 ) b N R5 R в которой R5 означает водород, алкил из 1-6 углеродных атомов, аминоалкил из 1-4 углеродных атомов, аралкил из 7-10 углеродных атомов, -(CbbJdCChR8, -(CH2)eNR9CO2R1 , карбамилалкил из 2-3 углерод когда с=2, или d)-CONH(CR 1 1 R 1 2 ) f X , где R11 и R12 каждый независимо представляют водород, алкил из 1-6 углеродных атомов, аралкил из 7-10 углеродных атомов, циклоалкил из 3-8 углеродных атомов, галоген или трифторметил, X представляет водород, низший алкил из 1-6 углеродных атомов, циклоалкил из 3-8 углеродных атомов, трифторметил, нитро, алкокси из 1-6 углеродных атомов, карбоалкокси из 2-7 углеродных атомов, аралкил из 7-10 углеродных атомов, галоид, диалкиламино из 1-6 углеродных атомов в алкильной группе, тиоалкил из 1-6 углеродных атомов или Y Y означает фенильную группу, которая может быть необязательно моно-, ди- или тризамещенной группой, выбранной из алкила из 1-6 углеродных атомов, аралкила из 710 углеродных атомов, алкокси из 1-6 углеродных атомов, циано, галоида, нитро, карбалкокси из 2-7 углеродных атомов, трифторметила, диалкиламино из 1-6 углеродных атомов на алкильную группу, алкилтио из 1-6 углеродных атомов, SO3H, РОзН или СОгН, f=0-5, при условии, что когда f=0, X представляет низший алкил из 1-6 углеродных атомов, циклоалкил из 3-8 углеродных атомов, аралкил из 7-10 углеродных атомов или Y, или 45318 О II 13 •CR г д і! R означает моно-, ди-, поли- или перфторированную алкильную группу из 1-10 углеродных атомов, или О II С о х —с1 NR U R t S где X означает -(CH2)Q- или -Аг-, 14 15 R и R каждый независимо означают водород, алкил из 1-12 углеродных атомов, -(CH2)h-Ar, (CH2),-NR16R17 или -(CH2),N+R16R1 V , R16 и R17 каждый независимо означают водород, алкил из 1-12 углеродных атомов или -(CH2)h-Ar, Аг является необязательно моно- или дизамещенвыбранной группой, нои из 8 ных атомов, трифторметила, амино, диалкиламино из 1-6 углеродных атомов в алкильной группе, алкилтио из 1-6 углеродных атомов, -SO3H, -РОзН или СО2Н, или их фармацевтически приемлемые соли, когда Аг1-группа содержит основный азот или когда Аг1группа замещена диалкиламино из 1-6 углеродных атомов в алкильной группе, -SO3H, -РОзН или СО2Н, h) -SO 2 R 19 , где R 9 - алкил, алкенил или алкинил, содержащий 1-6 углеродных атомов, или ароматический радикал выбранный из группы, содержащей фенил или нафтил, или гетероциклический радикал, выбранный из группы, содержащей тиофенил или хинолил, или NHCO2R , в котором R20 представляет низший алкил, содержащий от 1 до 6 углеродных атомов, или О [I он С(СН2), NR R где R21 и R22 каждый представляют водород или алкил из 1-3 углеродных атомов, или R 1 и R22 вместе с азотом, к которому они присоединены, образуют насыщенный гетероцикл, имеющий 4-5 углеродных атомов, и j=1-3, или R2 и R3, взятые вместе, также представляют бирадикал формулы R18 О У О [CNH(CH z ) n CH{CH 2 ) a ] m C~ NHR в которых необязательные заместители выбирают из группы, содержащей алкил из 1-6 углеродных атомов, аралкил из 7-10 углеродных атомов, алкокси из 1-6 углеродных атомов, циано, галоид, нитро, карбалкокси из 2-7 углеродных атомов или перфторалкил из 1-6 углеродных атомов, R1 означает алкил из 1-6 углеродных атомов, Y означает гал ид, сульфат, фосфат или птолуолсульфонатный анион, 9=1-6, h=1-6, 1=1-6 ИЛИ g)-CONHSO2-Ar1, где Аг означает фенил, нафтил, пиридил, хинолил, изохинолил, хиноксалил, тиенил, тионафтил, фурил, бензофурил, бензодиоксил, бензоксазолил бензоизоксазолил или бензодиоксолил, где Аг группа может быть необязательно моно-, ди- или тризамещена группой, выбранной из алкила из 16 углеродных атомов, арилалкила из 7-10 углеродных атомов, алкокси из 1-6 углеродных атомов, циано, галоида нитро, карбалкокси из 2-7 углерод 23 в которой R24 обозначает водород, алкил из 1-6 углеродных атомов, арилалкил из 7-10 углеродных атомов, (CH2)PNR2 R26, аминоалкил из 1-4 углеродных атомов, гидроксиалкил из 1-4 углеродных атомов, гуанилалкил из 2-4 углеродных атомов, меркаптоалкил из 1-4 углеродных атомов, алкилтиоалкил из 2-6 углеродных атомов, индолметил, гидроксифенилметил, имидазолилметил или фенил, который необязательно моно-, ди- или тризамещен заместителем, выбранным из алкила из 1-6 углеродных атомов, алкокси из 1-6 углеродных атомов, гидрокси, циано, галоида, нитро, карбалкокси из 2-7 углеродных атомов, трифторметила, амино или карбоновой кислоты, R25 означает водород, алкил из 1-6 углеродных атомов или аралкил из 7-10 углеродных атомов, R23 и R26 каждый независимо означают водород, формил, алканоил из 2-7 углеродных атомов, арилалканоил из 8-11 углеродных атомов, арилоил или CO2R27, R27 означает алкил из 1-6 углеродных атомов, арилалкил из 7-10 углеродных атомов, аллил, флуоренилметил или фенил, который необязательно моно-, ди- или тризамещен заместителем, выбранным из алкила из 1-6 углеродных атомов, алкокси из 1-6 углеродных атомов, гидрокси, циано, галоида нитро, карбалкокси из 2-7 углеродных атомов, трифторметила, амино или карбоновой 45318 10 фармацевтически приемлемую соль кислоты, 11 Соединение по п 1, представляющее собой Ск равно 0-4, 22 этил-С-27-гидроксирапамицин или его фармаI равно 0-4, цевтически приемлемую соль m равно 0-1, 12 Способ индуцирования иммуносупрессии, коh равно 0-4, торый включает введение иммуносупрессивного о равно 0-4 и количества соединения формулы 1а или 1Ь по п р равно 0-4 1, в которой R1 - как определено по п 1, и R2, R3 и или их фармацевтически приемлемая соль, или их R4, каждый независимо, представляют водород пролиновый аналог, или фармацевтически приемили SiEt3, или его фармацевтически приемлемой лемая соль этого пролинового аналога соли, или его пролинового аналога, или фарма4 Способ по п 3, в котором индуцированную имцевтически приемлемой соли этого пролинового муносупрессию используют для профилактики или аналога лечения отторжения при трансплантации или реакции «хозяин против трансплантата» 13 Способ по п 12, в котором соединение представляет собой С-22-метилрапамицин или его 5 Способ по п 3, в котором индуцированную имфармацевтически приемлемую соль муносупрессию используют для лечения аутоиммунных заболеваний, воспалительных заболева14 Способ по п 12, в котором соединение предний или гиперпролиферативных сосудистых ставляет собой С-22-этилрапамицин или его фарнарушений мацевтически приемлемую соль 6 Способ по п 3, где соединение является С-2215 Способ по п 12, в котором соединение предметил-42-диметилглицинрапамицином ставляет собой С-22-метил-С-27гидроксирапамицин или его фармацевтически 7 Соединение формулы 1а или 1Ь по п 1, в котоприемлемую соль ром R - такой, как определено для п 1, и R2, R3 и R4 - каждый независимо представляют водород 16 Способ по п 12, в котором соединение предили SiEt3, или его фармацевтически приемлемая ставляет собой С-22-ЭТИЛ-С-27соль, или его пролиновый аналог, или фармацевгидроксирапамицин или его фармацевтически тически приемлемая соль этого пролинового анаприемлемую соль лога 17 Способ по 12, в котором индуцированную иммуносупрессию используют для предупреждения 8 Соединение по п 7, представляющее собой Сили лечения отторжения при трансплантации или 22-метилрапамицин или его фармацевтически реакции «хозяин против трансплантата» приемлемую соль 9 Соединение по п 7, представляющее собой С18 Способ по п 12, в котором индуцированную 22-этилрапамицин или его фармацевтически прииммуносупрессию используют для лечения аутоемлемую соль иммунных заболеваний, воспалительных заболеваний или гиперпролиферативных сосудистых 10 Соединение по п 7, представляющее собой нарушений С 22-метил-С-27-гидроксирапамицин или его Данное изобретение относится к С-22 циклическим стабилизированным рапамицин производным, или их фармацевтически приемлемым солям, которые полезны для индуцирования иммунодепрессии и для лечения отторжения трансплантанта, гомологичной болезни, аутоаллергических болезней, воспалительных заболеваний, твердых опухолей, лейкоза/лимфом дифференцированных Т-клеток и гиперпролиферативных сосудистых (васкулярных) нарушений Рапамицин является макроциклическим триеновым антибиотиком, производимым Streptomyces hygroseopicus, который, как было найдено, обладает противогрибковой активностью, в частности против Candida albicans, как in vivo [С Vezma et al , J Antibiot, 28, 721 (1975), S N Bengal et al , J Antibiot, 28, 727 (1975), H A Beker et al , J Antibiot, 31, 539 (1978), патент США 3 929 992 и патент США 3 993 749] Показано, что рапамицин сам по себе (патент США 4 885 171) или в комбинации с пицибанилом (патент США, 4 401 653) обладает противоопухолевой активностью R Mattel и др [Can J Physiol Pharmacol , 55, 48(1977)] открыли, что рапамицин эффективен в экспериментальной модели аллергического энцефаломиелита, в модели множественного склероза, в модели адъювантного артрита, модели ревматоидного артрита и эффективно ингибирует образование lgE-подобных антител Иммуносупрессивное действие рапамицина раскрыто в FASEB 3 3411 (1989) Было также показано, что циклоспорин А и FK-506, другие макроциклические молекулы, эффективные в качестве иммуносупрессивных средств, кроме того полезны в предотвращении отторжения трансплантанта [FASEB 3, 3411 (1989), FASEB 3, 5256 (1989), RY Calne et al , Zancet 1183 (1978) и патент США 5, 100, 899] Показано также, что рапамицин полезен в профилактике или лечении системной красной волчанки [патент США 5 078 999], воспаления легкого [патент США 5,080,899], инсулин зависимого сахарного диабета [Fifth Int Cjnf Inflamm Res Assjl 121 (Abstract), (1990)], и пролиферации клеток гладкой мышцы и интимального утолщения после васкулярной травмы [Morns, R J Heart Zung Transplant п (часть2) 197(1992)] Показано, что моно- и диацилированные про 11 45318 12 изводные рапамицина (этерифицированные в положениях 28 и 43), полезны в качестве противогрибковых средств (патент США 4 316 885) и используются для изготовления водорастворимых пролекарств рапамицина (патент США 4 650 803) Недавно была изменена условная нумерация для рапамицина, поэтому, согласно номенклатуре Chemicfl Abstract описанные выше сложноэфирные группы должны соответствовать положениям 31- и 42-, Патент США 5 118 678 раскрывает карбаматы рапамицина, которые полезны в качестве в которой иммуносупрессивных, противовоспалительных, 5 R обозначает водород, алкил из 1-6 углеродпротивогрибковых и противоопухолевых средств ных атомов, аминоалкил из 1-4 углеродных атоПатент США 5 100 883 раскрывает фторированмов, аралкил из 7-10 углеродных атомов, -(Cbbjd ные сложные эфиры рапамицина Патент США 8 9 10 CO2R , -(CH2)2NR CO2R , карбамилалкил из 2-3 5 118 677 раскрывает амидоэфиры (сложные) рауглеродных атомов, гидроксиалкил из 1-4 углепамицина Патент США 5130 307 раскрывает родных атомов, гуанилалкил из 2-4 углеродных сложные аминоэфиры рапамицина Патент США атомов, меркаптоалкил из 1-4 углеродных атомов, 5 117 203 раскрывает сульфонаты и суль-фаматы алкилтиоалкил из 2-6 углеродных атомов, индорапамицина Патент США 5 194 447 описывает лилметил, гидроксифенилметил, имидазоилметил сульфонил-карбаматы рапамицина или фенил необязательно моно-, ди- или три- заДанное изобретение касается С-22 замещенмещенный заместителем выбранным из алкила ных рапамицин производных, которые проявляют из 1-6 углеродных атомов, алкокси из 1-6 углеродиммуносупрессивную и/или противо-грибковую ных атомов, гидрокси, циано, галоида, нитро, кари/или противоопухолевую активность in vivo и/или балкокси из 2-7 углеродных атомов, трифтормеингибируют тимоцитпролиферацию in vivo Кроме тила амино или карбоновой кислоты того, эти соединения полезны для лечения R6 и R9 каждый независимо представляют воCandida albicans инфекций, воспалительных забодород, алкил из 1-6 углеродных атомов или араллеваний и аутоаллергическои болезни отторжения кил из 7-10 углеродных атомов 7 Я 1П трансплантанта, включая волчанку, ревматоидный R , R и R каждый независимо представляют артрит, сахарный диабет, множественный склероз алкил из 1-6 углеродных атомов, аралкил из 7-10 итд углеродных атомов, флуоренил-метил или фенил Более конкретно, данное изобретение канеобязательно моно-, ди- или три- замещенный сается производных рапамицина, стабилизирозаместителем, выбранным из алкила из 1-6 углеванных замещением в С-22 положении, и всех их родных атомов, алкокси из 1-6 углеродных атофармацевтически приемлемых солей Такие промов, гидрокси, циано, галоида, нитро, карбалкокси изводные имеют структуру из 2-7 углеродных атомов, трифторметила амино или карбоновой кислоты, ОМ: а равно 0-4, 0.4= в равно 0-4, с равно 1-2, d равно 0-4, е равно 0-4, R, R , а и b - независимы в каждой из субъединиц о 1 R обозначает С-і-Сє алкил, С2-С7 ацил, С-і-Сє алкилтио, С7-С16 арилалкил, Сб-С-ю арилтио, Су С-іб арилалкилтио, циано, С-і-Сє Фторалкил или СбС-ю арил необязательно замещенный одним или более галогенами, С-і-Сє алкокси гидрокси, С2-С7 алканоил или циано, и R2, R3 и R каждый независимо представляют a) водород, или b) SiEt3, или с) N 1 когда с=2, или d)-CONH (CR11R12)f-x где R11 и R12 каждый независимо представляют водород, алкил из 1-6 углеродных атомов, аралкил из 7-10 углеродных атомов, циклоалкил из 3-8 углеродных атомов, галоген или трифторметил, X представляет водород, низший алкил из 1-6 углеродных атомов, циклоалкил из 3-8 углеродных атомов, трифторметил, нитро, алкокси из 1-6 углеродных атомов, карбоалкокси из 2-7 углеродных 14 13 45318 атомов, аралкил из 7-10 углеродных атомов, галоид, диалкиламино из 1-6 углеродных атомов на алкил группу, тиоалкил из 1-6 углеродных атомов или У, У обозначает фенил группу, которая может быть необязательно моно-, ди- или три- замещенной группой, выбранной из алкила из 1-6 углеродных атомов, аралкила из 7-10 углеродных атомов, алкокси из 1-6 углеродных атомов, циано, галоида нитро, карбалкокси из 2-7 углеродных атомов, трифторметила, диалкиламино из 1-6 углеродных атомов в алкильнои группе, алкилтио из 1-6 углеродных атомов, SO3H, РОзН или СО2Н, F=0-5, 2 3 4 при условии, что R , R и R не все обозначают водород и когда 1=0, х представляет низший алкил из 1-6 углеродных атомов, циклоалкил из 38 углеродных атомов, аралкил из 7-10 углеродных атомов или У, или е) О •С* 13 где R обозначает моно-, ди-, поли- или перфторированную алкил группу из 1-10 углеродных атомов, при условии, что R2, R3 и R4 - не все являются водородом, алкил из 1-10 углеродных атомов или арил в котором арил группа необязательно может быть моно-, ди- или три- замещенной группой, выбранной из алкила из 1-6 углеродных атомов, арилалкила из 7-10 углеродных атомов, ал кокси из 1-6 углеродных атомов, циано, галоида нитро, карбалкокси из 2-7 углеродных атомов, трифторметил, амино, диалкиламино из 1-6 углеродных атомов в алкильнои группе, алкилтио из 1-6 углеродных атомов, -SO3H, РОзН и СОгН, или о где х обозначает -(CH2)Q - или -Аг, 14 15 R и R каждый независимо обозначают водород, алкил из 1-12 углеродных атомов, -(CH2)hAr, (CH 2 )i-NR 16 R 17 или -(СН2), -N+R16R17R1V-, R16 и R17 каждый независимо обозначают водород, алкил из 1-12 углеродных атомов или (CH2)h -Ar, Аг является необязательно моно- или ди- замещенным группой, выбранной из в которых необязательные заместители выбирают из группы содержащей алкил из 1-6 углеродных атомов, аралкил из 7-10 углеродных атомов, алкокси из 1-6 углеродных атомов, циано, галоид, нитро, карбалкокси из 2-7 углеродных атомов или перфторалкил из 1-6 углеродных атомов, R18 обозначает алкил из 1-6 углеродных атомов, У обозначает галид, сульфат, фосфат или птолуолсульфонат анион, 9=1-6, h=1-6, 1=1-6 ИЛИ g) -CONH SO2-Ar где Аг обозначает фенил, нафтил, пиридил, хинолил, изохино-лил, хиноксалил, тиенил, тионафтил, фурил, бензофурил, бензо-диоксил, бензоксазолил, бензоизоксазолил или бензодиоксолил, где Аг группа может быть необязательно моно-, диили тризамещеннои группой выбранной из алкила из 1-6 углеродных атомов, арилалкила из 7-10 углеродных атомов, алкокси из 1-6 углеродных атомов, циано, галоида, нитро, карбалкокси из 2-7 углеродных атомов, трифторметила, амино, диалкиламино из 1-6 углеродных атомов на алкил группу, алкилтио из 1-6 углеродных атомов, 2 3 SO3H, -РОзН или СО2Н, при условии, что R , Р и 4 R не все обозначают водород, или его фармацевтически приемлемая соль, когда Аг группа содержит основной азот или когда Аг группа замещена диалкиламино из 1-6 углеродных атомов на алкил группу, -SO3H, -РО3Н или СО2Н h)-SO 2 R i a где R -алкил, алкенил или алкинил содержащий 1-6 углеродных атомов, или ароматический радикал выбранный из группы, содержащей фенил или нафтил, или гетероциклический радикал выбранный из группы, содержащей тиофенил или хинолил или NHCO2R в котором R20 представляет низший алкил, содержащий от 1 до 6 углеродных атомов, і) 15 45318 О - С(СН2): 4 где 1 22 R и R каждый представляют водород или 1 22 алкил из 1-3 углеродных атомов или R и R вместе с азотом к которому они присоединены образуют насыщенный гетероцикл, имеющий 4-5 2 3 углеродных атомов, и j=1-3, или R и R взятые вместе также представляют бирадикал формулы J) о о ,( о ІІ -1 CW,V СМ (tH,~)*\™ 31 С в которой R24 обозначает водород, алкил из 1-6 углеродных атомов, арилалкил из 7-10 углеродных атомов, (CH2)PNR2 R26, аминоалкил из 1-4 углеродных атомов, гидроксиалкил из 1-4 углеродных атомов, гуанилалкил из 2-4 углеродных атомов, меркаптоалкил из 1-4 углеродных атомов, алкилтиоалкил из 2-6 углеродных атомов, индолметил, гидроксифенилметил, имидазолилметил или фенил, который необязательно моно-, ди- или тризамещен заместителем, выбранным из алкила из 1-6 углеродных атомов, алкокси из 1-6 углеродных атомов, гидрокси, циано, галоида, нитро, карбалкокси из 2-7 углеродных атомов, трифторметила, амино или карбоновой кислоты, R25 обозначает водород, алкил из 1-6 углеродных атомов или аралкил из 7-10 углеродных атомов, R23 и R26 каждый независимо обозначают водород, формил, алканоил из 2-7 углеродных атомов, арилалканоил из 8-11 углеродных атомов, арилоил или C02R27, R27 обозначает алкил из 1-6 углеродных атомов, арилалкил из 7-10 углеродных атомов, аллил, флуоренилметил, или фенил который необязательно моно-, ди- или три- замещен заместителем, выбранным из алкила из 1-6 углеродных атомов, алкокси из 1-6 углеродных атомов, гидрокси, циано, галоида, нитро, карбалкокси из 2-7 углеродных атомов, трифторметила, амино или карбоновой кислоты, к равно 0-4, I равно 0-4, m равно 0-1, п равно 0-4, о равно 0-4 и р равно 0-4 или их фармацевтически приемлемая соль, или их пролиновый аналог, или фармацевтически приемлемая соль этого пролинового аналога Из заместителей перечисленных выше для R1 более предпочтительны С-і-Сб низшие алкильные группы Из них наиболее желательны метил и этил заместители Специалисту в соответствующей технике должно быть ясно, что R1 заместители, перечисленные выше, могут быть линейными или разветвленными и могут включать заместители с дополнительными замещениями Заместители этих R1 групп могут включать, но не ограничи 16 ваются, группами гидрокси, кето, циано и галоид В случае сложных аминоэфиров описанных выше в разделе с), предпочтительными являются те соединения, в которых а = 0, в = 0 и с = 1 , а = 0, в 5 7 = 0 и с = 2, в = 0 и R обозначает -(CH2)d C02R , a = 5 9 10 О, в = 0 и R обозначает -(CH2)i NR C02R , и а = О, 5 в - 0 и R обозначает водород Из С-і-Сє фторал1 кил соединений перечисленных для R , наиболее предпочтительными заместителями являются трифторметил и трифторэтил В рамках данного описания, термин "низший алкил", когда он используется отдельно или в комбинации, относится к радикалам, имеющим 1-6 углеродных атомов в углеродной цепи Термин "ацил" относится к заместителям общей структуры О с- R , где R обозначает углеводород из 16 углеродных атомов, например, ацетил или пропионил Под термином "арил", используемым здесь для обозначения группы или части группы, таким как арилалкил или арилокси, подразумевается (і) любой одновалентный карбоциклический радикал обладающий ароматическим характером и включающий группы, содержащие от 6 до 10 углеродных атомов, такие как фенил или нафтил и (и) гетероциклические группы обладающие ароматическим характером с 5-10 атомами в цикл и одним или более (например, 2 или 3) гетероатомами выбранными из кислорода, азота и серы Примерами последних являются фурил, тиенил, пирролил, пиридинил, пиримидинил, хинолил, бензимидазолил, тиазолил и ими-дазолил Эти группы могут необязательно быть замещены, под чем подразумевается необязательное замещение одним или более заместителями Эти заместители могут быть обычно используемыми в фармацевтической химии, такими как галоген (например, СІ, Br, F), С-і-Сб алкил, С-і-Сє алкокси, галоид ( d Сб)-алкил (например, CF3, СРзСН2-) или галоид (Сі-С6)алкокси (например, CHF20, CF3CH2O-), N02, NH2, CN, С-і-Сб алкиламино, ди(Сі-Сє)алкил) амино, карбокси, (С-і-Сб алкокси) карбон ил, ацил(например (С-і-Сє алкил) карбонил, арилкарбонил), ациламино, например, (С-і-Сє алкил) CONH, арил (например, фенил) или амино ( d Сє)алкил Термин "арилалкил" относится к ароматическим заместителям имеющим приблизительно от 7 до 16 углеродных атомов, с единичной валентностью, локализованной в боковой цепи Примеры таких арилалкил заместителей включают бензил, толил, бензетил, фенетил и стирил группы Термины "алкилтио", "арилтио" и "арилалкилтио" относятся к заместителям, имеющим структуру SR, где R относится соответственно к только что упомянутым "низший алкил", "арил" и "арилалкил" группам Термин "галоид" относится к фтору, хлору, брому или иоду Фармацевтически приемлемые соли этих соединений, которые содержат основные функциональные группы, такие как амино группа, могут быть получены из неорганических катионов, таких как натрий, калий и тому подобных и органических 17 45318 18 кислот, таких как уксусная, молочная, лимонная, опубликованным методикам винная, янтарная, малеиновая, малоновая, глюкоФармацевтически приемлемыми солями этих новая и тому подобные карбамилированных рапамицин соединений являются соли, полученные из таких органических и Такие сложные аминоэфиры могут быть полунеорганических кислот, как уксусная, молочная, чены ацилированием соединения формулы 1а или лимонная, винная, янтарная, малеиновая, мало1в, приведенной выше, где один или более R 24 новая, глюконовая, хлористоводородная, бромипредставляет водород, ацилирующим агентом, стоводородная, фосфорная, азотная, серная меимеющим общую структуру тансульфоновая и аналогичные известные приемлемые кислоты Предпочтительными фторированными сложными эфирами группы, описанной выше в разделе е), являются те, в которых R3 представляет водород, те, в которых R1 представляет моно-, ди-, поли- или пер-фторированную алкил группу из 1-6 углеродных атомов и те, в которых R3 представгде X обозначает ОН в присутствии реагента конляет водород и R1 обозначает моно-, ди-, полиденсации, такого как дициклогексилкарбодиимид или пер-фторированную алкил группу из 1-6 углеСложные аминоэфиры могут также быть получены родных атомов использованием смешанного ангидрида вышеопиКогда другие ацилированные соединения из санной карбоновой кислоты в качестве ацилиразделов с) - j) содержат арил или арилалкил рарующего агента Или же иначе, ацилирующим дикалы, предпочтительно, чтобы арил радикал агентом может быть галоид ангидрид, в котором X представлял фенил, нафтил, пиридил, хинолил, является CI, Вг или I Группы ацилирующих соедиизохинолил, хиноксалил, тиенил, тионафтил, фунений, используемые для получения соединений рил, бензофурил, бен-зодиоксил, бензоксозолил, данного изобретения, выпускаются промышленбензоизоксазолил или бензодиоксолил группу, ностью или могут быть получены способами, опикоторая может быть необязательно моно-, ди- или санными в литературе тризамещенной группой заместителей, выбранных Из карбамилированных соединений, раскрыиз алкил из 1-6 углеродных атомов, арилалкил из тых выше в разделе d), предпочтительными чле7-10 углеродных атомов, алкокси из 1-6 углероднами являются те, в которых R3 представляет воных атомов, циано, галоид, нитро, карбалкокси из дород, те, в которых R2 представляет водород, те, 2-7 углеродных атомов, трифторметил, амино, в которых R4 представляет водород, те, в которых диалкиламино из 1-6 углеродных атомов на алкил f равно 0 и X представляет У, те, в которых R3 группу, алкилтио из 1-6 углеродных атомов, водород, f = 0 и X обозначает У, и те, в которых f SO3H, -РОзН и -СО2Н Более предпочтительно, равно О, X является У и У представляет фенил, 4чтобы арил радикал представлял фенильную фторфенил, 2,4-дифторфенил, 4-нитрофенил или группу, необязательно моно-, ди- или три- заме4-метилфенил щенную группой, выбранной из алкил из 1-6 углеродных атомов, арилалкил из 7-10 углеродных В качестве одного из примеров этих соединеатомов, алкокси из 1-6 углеродных атомов, циано, ний, 31-карбамилированные соединения данного галоид, нитро, карбалкокси из 2-7 углеродных изобретения могут быть получены защитой 42атомов, трифторметил, амино, диалкиламино из спиртовой группы рапамицина защитной группой, 1-6 углеродных атомов на алкил группу, алкилтио такой как трет-бутилдиметилсилил группа, с поиз 1-6 углеродных атомов, -SO3H, -РОзН и -СС^Н следующим карбамилированием 31-положения изоцианатом общей структуры Ацилированные соединения данного изобреn тения могут быть получены ацилированием рапаR12) X мицина с помощью ацилирующего агента имеющего общую структуру Удаление защитной группы дает 310 карбамилированные соединения В случае третбутил диметилсилил защитной группы, снятие XCR 1 3 защиты производится в умеренно кислой среде При использовании соединений с 31в которой X представляет ОН, в присутствии карбамилированным положением и 42реагента сочетания, такого как CMC (1положением со снятой защитой, 42-положение циклогексил-3-(2-морфолиноэтил) карбодиимид может взаимодействовать с иным изоцианатом, мето-пара-толуолсульфонат) Соединения данночем тот, с которым взаимодействовала 31го изобретения могут также быть получены исспиртовая группа, что дает соединения, имеющие пользованием ангидрида вышеописанной карборазличные карбаматы в 31- и 42-положениях Или новой кислоты в качестве ацилирующего агента же иначе, 42-карбамилированные соединения, Вдобавок, ацилирующим агентом может быть гаполученные как описано выше, могут взаимодейлоидангидрид, в котором X может быть CI, Вг или ствовать с другим изоцианатом, что дает соедиI Или же иначе, такие реагенты как Реагент Ishiнения, имеющие различные карбаматы в 31- и 42kawa (N, 1\1-диэтил-1,1-2, З, З, 3положениях гексафторпропиламин), могут быть использованы в качестве ацилирующего агента для получения Изоцианаты, используемые для получения соединений данного изобретения этих карбамилированных соединений, выпускаются промышленностью или могут быть получены по Соединения данного изобретения, ацилиро х 19 45318 20 ванные в каждом из 27-, 31- и 42- положений, модородная, бромистоводородная, фосфорная, гут быть получены способами, описанными выше, азотная, серная, метан сул ьфо новая и подобные путем увеличения таких переменных как реакциизвестные приемлемые кислоты онное время, температура и количество ацилиИз этих соединений предпочтительными яврующего агента ляются те, в которых Аг является необязательно моно-, ди- или три- замещенным фенилом Когда Например, 31-ацилированные соединения Аг замещен арилалкилом из 7-10 углеродных атоданного изобретения могут быть получены защимов, предпочтительно, чтобы эта арил составтой 27- и 42- спиртовых групп рапамицина защитляющая арилалкильного радикала являлась феными группами, такими как трет-бутил диметилсинильной группой лил группа, в присутствии основания, такого как имидазол, с последующим ацилированием 31Соединения данного изобретения, карбамиположения ацилирующим агентом, имеющим вылированные по одному из 27-, 31- или 42шеприведенную общую структуру Удаление заспиртовых положений или по всем этим положещитных групп дает 31-ацилированные соединениям, могут быть получены взаимодействием рания В случае трет-бутилдиметилсилил защитной памимина с изомианатом, имеющим общую струкгруппы удаление защиты выполняется в условиях туру умеренной кислотности, таких как смесь водной уксусной кислоты и ТГФ 0=С=П- 5 О 2 - Аг При использовании 31-эмулированного полов нейтральной среде или в присутствии осножения и 42-положения со снятой защитой, 42вания, такого как пиридин положение может взэимодействовэть с зэдэнным Карбамилированные соединения данного изоэмилирующим эгентом, что дзет соединения, бретения могут быть получены путем защиты имеющие различные амил составляющие в 31- и спиртовых групп, которые не должны взаимодей42-положениях Аналогично, 42-амил соединения, ствовать, защитной группой, такой как трет-бутил полученные как описано выше, могут взаимодейдиметилсилил группа, с последующим карбамиствовать с амилирующим агентом, имеющим разлированием незащищенного положения изомиаличную структуру для введения различных амильнатом, имеющим вышеуказанную общую структуных групп в 31 -положение Амилирующие агенты, ру Удаление защитной группы дает заданные используемые для получения соединений данного карбамилированные соединения В случае третизобретения, выпускаются промышленностью или бутил диметилсилил защитной группы, снятие могут быть получены описанными в литературе защиты может выполняться в умеренно кислой способами среде Предпочтительными амидо эфирами рапамиИмея одно или два положения карбамилироМина из описанных выше эфиров в разделе f), явванных и другое положение со снятой защитой, ляются те, в которых X представляет -(CbbV, те, в можно осуществить взаимодействие незащищенкоторых X представляет -(Cbbjg и R1 и R обоного положения с изомианатом, отличным оттого, значают алкил из 1-6 углеродных атомов, и те, в который взаимодействовал с первой спиртовой которых X обозначает -(СЬЬ)-, R14 обозначает вогруппой, что дает соединения, имеющее различ15 дород и Р обозначает Аг обозначает -(Cbbjh -Аг ные карбаматы в рассматриваемых позимиях Фармамевтически приемлемые соли этих соИзомианаты, используемые для получения единений могут быть получены, когда R14 или R15 соединений данного изобретения выпускаются 16 17 представляют -(СНг), -NR R или когда Аг обопромышленностью или могут быть получены спозначает необязательно моно- или ди- замещенную собами, раскрытыми в литературе March [Adпиридил или хинолил группу Фармамевтически vanced Organic Chemistry, 3d ed P p 391, 452 и приемлемые соли являются производными таких 479 (1985)] раскрывает общий способ получения органических или неорганических кислот, как укарилсульфонил изомианатов, которые могут быть сусная, молочная, лимонная, винная, янтарная, использованы, когда отсутствует промышленный малеиновая, малоновая, глюконовая, хлористовоарилсульфонилизомианат Следующая схема илдородная, бромистоводородная, фосфорная, люстрирует один способ, исходящий из арилазотная, серная, метансульфоновая и тому посоединения Другие способы получения арилдобные сульфонил изомианатов известны по литературе Получение амидо эфиров рапамимина приведено в патенте США № 5 118 677, который приводится здесь в качестве ссылки Фармамевтически приемлемыми солями Аг-Н ** Ar$QzOH сульфонил карбамат рапа-миминовых соединений, описанных выше в разделе д), являются соли, полученные из таких неорганических катионов, как натрий, калий и тому подобные, органических оснований, таких как моно-, ди- итриалкил амины из 1-6 углеродных атомов на алкил группу, и моно, ди- и тригидроксиалкил амины из 1-6 углеродных атомов на алкил группу и тому подобные, и органических и неорганических кислот, таких как уксусная, молочная, лимонная, винная, янтарная, Рапамимин 27-, 31- и 42-сульфонаты данного малеиновая, малоновая, глюконовая, хлористовоизобретения, приведенные выше в разделе h), 21 45318 22 могут быть получены по стандартным литературацилирующих агентов Или же иначе, ацилирующими агентами могут быть галоидангидриды, в ным методикам, как описано в приведенной ниже которых X может быть CI, Вг или F (за исключениобщей реакционной схеме 23 27 ем, когда R или R = т-Bu), азид или имидазол О производное названной кислоты 0 II II II Ацилирующие агенты используемые для по—•-R-O-S-R R-OH + CI-S-R — лучения соединений данного изобретения выпуси І! II каются промышленностью или могут быть получеО 0 ны описанными в литературе способами Аминокислоты, используемые для получения соОбразование сульфоната между спиртом и единений данного изобретения, могут быть либо сульфонил галогенидом описано [Jerry March, AdR, либо S конфигурации, и оптически активный vanced Organic Chemisstry, 3rd edition, published in углерод сохраняет свою конфигурацию при пре1985, P 4447] Специфические условия реакции, вращении в соединение данного изобретения В используемые в данном изобретении, разработаслучаях, когда m равно 1, ацилирующие агенты ны S Rakhit of Ayerst Laboratories и приведены в могут обычно быть получены конденсацией двух патенте США № 4 316 885 (Февр 23, 1982) аминокислот с образованием дипептида, который 27-, 31- и 42-(1\1-карбоалкокси)сульфаматы превращают в приведенный выше ацилирующий данного изобретения могут также быть получены агент по стандартным химическим методикам по реакции рапамицина с внутренней солью гидИз этих аминодиэфирных соединений, предроокиси ал кил (карбоксисульфамопочтительны те, в которых m равно 0, и те, в котоил)триэтиламмония (Соли Бургесса, см рых m равно 0 и I равно 1-2 Одним из наиболее G М Atkins Іг And Е М Burgess, J Am/ Chem Soc , предпочтительных сложных аминодиэфиров на90, 4744, 1968, E M Burgess, HR Penton Jr and стоящего изобретения является С-22-метил-42E/A/ Faylor, J Org Chem , 38, 26, 1978) диметилглицин рапамицин Данные по синтезу этого соединения приведены ниже в примере 7 Каждому специалисту в соответствующей области техники должно быть ясно, что С-22 замещенные рапамицин производные данного изобретения могут включать те, в которых каждый из R2, R3 и R4 представляют водород или в котором один или два из R2, R3 и R4 представляют водород, а другая(ие) группы являются перечисленными выше в разделах в) - j) Данное изобретение включа1 2 где R и R - как определено выше ет также те соединения С-22 замещенного рапаАмино ал кил сложноэфирные соединения мицина, в которых каждый из R2, R3 и R4 раздела і), приведенного выше, могут быть полупредставляют группы, выбранные из разделов а) чены ацилированием заданных положений(ия) j), приведенных выше, включая производные, в подходящим ацилирующим агентом как описано в которых R2, R3 и R4 не являются выбранными из патенте США № 4 650 803, который включен в одних и тех же разделов, представленных выше в описание в качестве ссылки, в то время, как осв) - j) Должно быть также понятно, что настоящее тавшиеся из положений 27-, 31- или 42-защищены изобретение включает все фармацевтически притакой группой, кактриэтилсилил емлемые соли, аналоги, рацематы и индивидуСложные аминодиэфиры включающие соедиальные энантиомеры таких соединений нения данного изобретения, приведенные выше в С-22 замещенные соединения данного изоразделе і), могут быть получены ацилированием бретения могут быть получены сначала защитой рапамицина ацилирующим агентом, имеющим 31- и 42-гидроксил положений и затем выполнениобщую структуру ем замещения по положению С-22 Пример такого замещения демонстрируется С-22 метилированием по схеме 1, приведенной ниже Х NHR :3 в которой R , R , k, I, m, n и 0 - как описано выше, и X обозначает ОН, в присутствии агента сочетания (конденсации), такого как дициклогексилкарбодиимид или водорастворимый карбодиимид Соединения данного изобретения могут также быть получены применением смешанного ангидрида или активированного сложного эфира вышеуказанной карбоновой кислоты (такого как эфир с пнитрофенолом, пентахлор или пентафторфенолом, 2,4,5-нитрофенолом, Nгидроксисукцинимидом, N-гидроксифтальимидом или 1 -гидрокси-1 Н-бензотриазолом) в качестве 23 45318 24 Каждому специалисту в соответствующей области техники должно быть понятно, что данные соединения легко могут быть приготовлены Например, каждый специалист может приготовить С42-ацилированные производные, такие как С-42глицин-С-22-метил-рапамицин Аналогичным образом могут быть введены функциональные группы по С-27 и С-31 положениям Кроме того, поскольку пролиновые аналоги рапамицина известны, можно приготовить соответствующие алкилированные пролиновые аналоги, как иллюстрируется ниже схемой 3 В схеме 1, которая иллюстрирует синтез аметил соединений, положения 31- и 42гидроксильных групп сначала защищают с помощью подходящей защитной группы, такой как триэтилсилил (TES) защитная группа Затем бис-TES рапами-иин обрабатывают литий диизопропил амидом (LDA) с последующим алкилированием метилтрифторметансульфонатом (MeOTf) В соответствии с этой схемой ацилирование протекает исключительно по С-22 положению TES защитные группы могут затем быть удалены обработкой HF-Pyr-комплексом 31- и 42-гидроксил положения могут затем быть замещены как описано выше Или же иначе, С-22 замещенное, TESзащищенное соединение может быть восстановлено L - селектридом (L - selectnde) с получением С-27-гидрокси-С-22-метил защищенного производного После чего могут быть введены функциональные группы по 31 и 42 положениям как описано ранее Аналогичным образом могут быть приготовлены другие продукты алкилирования Приведенная ниже схема 2 иллюстрирует С-22 этилирование рапамицина где заданная алкильная группа иллюстрируется замещенной метил группой Могут быть также получены С-42 и С-31 функциональные производные С-22 алкилированного пролинового аналога Аналогично, может быть получен С-27 восстановленный пролиновый аналог, по способу приведенному в схеме 1 В это положение может также быть введена функциональная группа как описано Любому специалисту в соответствующей технике совершенно очевидно, что алкилирования по С-22 положению могут быть выполнены хорошо известными в литературе способами Такие алкилирования должны включать способы использующие альдегиды типа О или хлорангидриды типа 25 45318 26 траций рапамицина, циклоспорина А или испытуемого соединения Собирают выращенные в культуре клетки и определяют содержащуюся в них радиоактивность Ингибирование лимфопролиферации оценивают в процентах как изменение сі в счете импульсов в минуту по отношению к необили ал кил галоген иды типа работанным лекарственными средствами контролям Результаты выражают в ICso Представленные соединения изобретения оценивают также in vivo испытанием предназнагде X означает СІ, бром или иод в каждой из ченным для определения времени выживания формул альдегида, хлорангидрида и алкилгалогеотщипнутого полнослойного кожного лоскута от 1 нида, R обозначает часть С-22 замещенного R мужских DBA/2 доноров трансплантированного заместителя указанного выше мужским BALB/c реципиентам Способ адаптироПонятно также, что алкилирование положения ван из Bilhngham R Е and Medavar Р В , J Ехр С-22 могут выполняться с использованием сульBiol , 28 385-402, (1951) Кратко, отщипнутый полфонилхлорида, RSCI, такого, в котором R = алкил нослойный кожный лоскут у донора пересаживают или фенил, или тозил цианида (TsCN) Понятно на спину реципиента как гомотрансплантант и аутакже, что предполагаемое тиоалкилирование тотрансплантант используют в качестве контроля может выполняться аналогичными способами в той же области Реципиенты обрабатываются Примером может служить защита гидроксильной внутрибрюшинно либо различными концентрагруппы TES, обработка LDA (лаурилдиэтаноламициями циклоспорина А как контроля для испытадом) и тиоалкилирование диметилсульфидом или ния, либо испытуемых соединений фенил- S -бромидом Необработанные реципиенты служат как конИммуносупрессивные активности представтроль отторжения Трансплантант подвергают ленных соединений данного изобретения оцениежедневно дозиметрическому контролю и записывают in vitro стандартными фармакологическими вают результаты до тех пор, пока трансплантант испытаниями для оценки пролиферации лимфане станет сухим и не образуется почерневшая цитов (LAF) и in vivo стандартными фармакологикорка Это считают днем отторжения Среднее ческими испытаниями для оценки времени выживремя жизни трансплантанта (число дней ± станвания отщипнутого полнослойного кожного дартное отклонение (S D )) группы, обработанной лоскута Для in vitro измерения иммуносупрессивлекарственным препаратом сравнивают с группок ных воздействий представленных соединений контроля используют методику комитогениндуцируемой Кроме того исследуют стабильность предтимоцит пролиферации (LAF) Кратко клетки виставленных соединений путем ВДЖХ в 0,1 М фослочковой железы нормального BALB/c мыши кульфатном буфере (рН 7 4, 37°С) тивируют в течение 72 часов с РНА (ФГА) и IL-1 и Результаты каждого из этих испытаний LAF, вызывают пульсацию тритированным тимидином полнослойного кожного лоскута и стабильности в течение шести часов Клетки культивируют в приведены в следующей таблице присутствии или отсутствии различных концен Г 22-метил-27гидрокси-рапамицин Кожный лоскут (дни) (4мг/кг) 12,01+/-0,26 Стабильность (часы) рН 7,4 буфер 12-13 9,33+/-0,52 9,00+/-0,63 10,17+/-0,55х 38 9,9 nt 21,8 140,0 рапамицин 22-метил-рапамицин LAF (нМ) 1С50 0,4-9,4 23,5 Соединение nt nt 19,95 nt 13,5 22-этил-рапамицин С-22-метил-42диметилглицинрапамицин х испытано при 16мг/кг nt = не испытывали Результаты этих стандартных фармакологических испытаний иллюстрируют как in vivo, так и in vitro иммуносупрессивную активность соединений настоящего изобретения Результаты LAF испытания показывают, что стабилизированные рапамицин производные индуцируют супрессию Т клеточной пролиферации Поскольку трансплантированные отщипнутые полнослойные кожные лоскуты обычно отторгаются на 6-7 дни без использования иммуносупрессивного агента, увеличенное время жизни, наблюдаемое при использовании 22-метил рапамицина дополнительно демонстрирует применимость соединений данного изобретения для иммуносупрессии Поскольку соединения данного изобретения 27 45318 28 структурно аналогичны рапамицину и имеют анатель, смеси того и другого или в фармацевтически логичный рапамицину профиль активности, они приемлемых маслах и жирах Жидкий носитель также должны обладать противоопухолевой, проможет содержать другие подходящие фармацевтивогрибковой и антипролиферативной активнотические добавки, такие как солюбилизаторы, стями В качестве таковых, соединения данного эмульгаторы, буферы, консерванты, вкусовые изобретения полезны при лечении отторжения добавки, корригенты, суспендирующие вещества, трансплантанта, такого как сердце, почки, печень, загустители, красители, регуляторы вязкости или костный мозг и кожные трансплантанты, аутоимосмо-регуляторы Подходящие примеры жидких мунных заболеваний, таких как волчанка, ревманосителей для перорального или парентерального тоидный артрит, сахарный диабет, миастения введения включают воду (частично содержащие gravis и рассеянный склероз, воспалительных завышеуказанные добавки, например, производные болеваний, таких как псориаз, дерматит, экзема, целлюлозы, предпочтительно, раствор натрий себоррея, воспалительных заболеваний желудочкарбоксиметил целлюлозы), спирты (включая одно-кишечного тракта и увеита, твердых опухолей, ноатомные спирты и многоатомные спирты, нагрибковых инфекций и гиперпролиферативных пример, гликоли) и их производные, и масла (насосудистых заболеваний, таких как рестеноз Кропример, фракционированные кокосовое масло и ме того, данное изобретение дает также способ арахисовое масло) Для парентерального введеиндуцирования иммуносупрессии у нуждающихся ния, носитель может быть также жирным сложным в этом млекопитающих, включающий введение эфиром, таким как этил олеат и изопропил мириназванному млекопитающему иммуносупрессивстат Стерильные жидкие носители полезны для ного количества одного или более описанных стерильных композиций в жидкой форме для паздесь соединений рентерального введения Жидкие носители для прессованных композиций могут быть галогенизиРезультаты испытания стабильности в О 1М рованными углеводородами или другими фармафосфатном буфере показывают, что соединения цевтически приемлемыми обеспечивающими педанного изобретения обладают повышенной старедвижение веществами бильностью по сравнению с рапамицином Как показано выше, найдено, что 22-метил-рапамицин Жидкие фармацевтические композиции, преди 22-метил-27-гидроксирапамицин, соответственставляющие стерильные растворы или суспензии, но, имеют периоды полураспада 38 и 21,8 часа могут применяться, например, путем внутримыЭти результаты сопоставляются с 12-13 часами шечной, внутрибрюшинной или подкожной инъекпериода полураспада, определенного для рапации Стерильные растворы могут также вводиться мицина в тех же условиях внутривенно Соединения данного изобретения могут также вводиться перорально либо в жидкой, Соединения данного изобретения могут быть либо в твердой композиционной форме составлены и назначаться неразбавленными или с фармацевтическими носителями для нуждаюСоединения данного изобретения могут ввощихся в них млекопитающих Фармацевтический диться ректально, например, в форме обычного носитель может быть твердым или жидким суппозитория или мази Твердый носитель может включать одно или Для введения путем внутриносовой или внутболее веществ, которые могут действовать как рибронхиальной ингаляции или инсуффляции, корригенты, смазывающие вещества, растворитесоединения данного изобретения могут быть соли, суспендирующие средства, наполнители, веставлены в водных частично водных растворах, щества обеспечивающие скольжение, уплотняюкоторые могут быть затем переведены в форму щие добавки, связывающие вещества или аэрозоля Соединения данного изобретения могут разъединяющие вещества, это может быть также также вводиться трансдермально путем использоматериал, образующий желатиновую капсулу В вания трансдермального пластыря, содержащего порошках, носитель представляет собой тонко активное соединение и носитель, являющийся измельченное твердое вещество, смешанное с инертным по отношению к активному соединению, тонко измельченным активным ингредиентом В не токсичным по отношению к коже и обеспечиватаблетках, активный ингредиент смешан с носитеет доставку лекарственного средства для системлем, обладающим необходимыми уплотняющими ной абсорбции через кожу в кровоток Носитель свойствами в подходящих пропорциях и сжат в может принимать любые формы, такие как кремы заданную форму с заданным размером Порошки и мази, пасты, гели, используются также обтурии таблетки обычно содержат до 99% активного рующие устройства Кремы и мази могут быть вязингредиента Подходящие твердые носители кими жидкостями или полутвердыми эмульсиями включают, например, фосфат кальция, стеарат либо типа масло-в-воде, либо типа вода-в-масле магния, тальк, сахар, лактозу, декстрин, крахмал, Пасты включают абсорбирующие порошки, дисжелатин, целлюлозу, метил целлюлозу, натрий пергированные в нефти или гидрофильной нефти, карбоксиметил целлюлозу, поливинилпирролидин, содержащей активный ингредиент, который также низко плавящиеся парафины и ионообменные должен быть подходящим Для высвобождения смолы активного ингредиента в кровоток могут использоваться различные обтурирующие устройства, таЖидкие носители используются в приготовлекие как полупроницаемое мембранное покрытие нии растворов, суспензий, эмульсий, сиропов, резервуара, содержащего активный ингредиент с эликсиров и прессованных композиций Активный носителем или без носителя, или матрица содерингредиент может быть растворен или суспендижащая активный ингредиент Другие обтурируюрован в фармацевтически приемлемом жидком щие устройства известны из литературы носителе, таком как вода, органический раствори 29 45318 30 Кроме того, соединения настоящего изобретения могут применяться в виде раствора, крема ОМе или лосьона при составлении с фармацевтически 2' приемлемым растворителем, содержащим 0,1-5 процентов, предпочтительно 2%, активного соединения, которое должно быть нанесено на пораженную грибком поверхность Требуемые дозы изменяются в зависимости от конкретных используемых композиций, способа введения, тяжести симптомов и конкретного пациента, нуждающегося в лечении Основанные на результатах, полученных в стандартных фармакологических испытаниях для других соединений рапамицина, предполагаемые ежедневные дозы для внутривенного введения соединений данного изобретения должны составлять 0,001-25мг/кг, предпочтительно между 0,005-5мг/кг, и наиболее желательно между 0,01-0,5мг/кг Предполагаемые ежедневные пероральные дозы соединений данного изобретения должны составлять 0,00575мг/кг, предпочтительно между 0,01-50мг/кг и или его пролинового аналога, наиболее желательно между 0,05-1 Омг/кг где R2 и R3 каждый обозначают триэтилсилил, с Лечение обычно начинается с минимальных ацилирующим агентом формулы RaCHO или доз, меньших чем оптимальная доза соединения RBCOhal или Rc-hal или RdS-hal или тозил цианид После чего доза увеличивается до достижения или ReS-SRe, где Ra обозначает алкил из 1-5 углеоптимального эффекта при данных обстоятельстродных атомов, арил или фторарил из 1-5 углевах, точная доза для перорального, парентеральродных атомов, R B - алкил из 1-6 углеродных атоного, интраназального, внутрибронхиального, мов, Rc - алкил из 1-6 углеродных атомов трансдермального или ректального введения буарилалкил из 7-16 углеродных атомов или фтодет определяться лечащим врачом опытным пуралкил из 1-6 углеродных атомов, Rd - алкил из 1тем для конкретного больного В основном, со6 углеродных атомов, арилалкил или арил, Re единения данного изобретения наиболее алкил из 1-6 углеродных атомов арил, или арижелательно вводить в концентрациях, которые лалкил и галоид (паї) является хлором или бродают наиболее эффективные результаты, не окамом, что дает соединение приведенной выше зывая никаких пагубных или разрушительных поформулы, где R2 3 обозначают триэтилсил или, бочных действий при желании, удаление одной или более защитПредполагается, что когда соединения данноных групп, го изобретения используются как иммуносупрес(м) восстановление соединения формулы сорные и противогрибковые средства, они могут вводиться в сочетании с одним или более другими им-мунорегуляторами Такие другие препятствующие отторжению хе-миотерапевтические средства включают, но не ограничиваются азатиоприн, кортикостероиды, такие как преднизон и метилпред-низолон, циклофосфамид, рапамицин, циклоспорин A, FK-506, ОКТ-3 и АТЄ (антитимоцитарный глобулин) При объединении одного или более лекарственных средств данного изобретения с такими другими лекарственными средствами или агентами для ин-дуцирования иммуносупрессии или лечения воспалительных заболеваний, меньшее количество каждого из веществ требуется для достижения заданного эффекта Основы такой объединенной терапии разработаны Stepkowski, чьи результаты показывают, что применение комбинации рапамицина и циклоспорина А при меньших терапевтических дозах существенно увеличивает время жизни сердечного аллотрансплантанта [Iransplantation Proc 23 507 или его пролинового аналога, где R2 и R3 - как (1991)] описано здесь выше, до получения соединения формулы 1а, в которой R2 и R3 обозначают триДанное изобретение дает также способы поэтилсилил и R4 является водородом и, при желалучения соединений изобретения, которые вклюнии, удаление одной или более защитных групп, чают один из следующих или (і) алкилирование или ацилирование по С-22 (ш) ацилирование соединения вышеприведенположению соединения формулы ной формулы, в которой R2 3 - такие, как опреде 31 45318 лено ранее, при условии, что по крайней мере один из R 2 3 является водородом, соединением формулы НСА или его реакционноспособным производным, где А - одно из определений с), е), f), і) ИЛИ, J), как определено выше для R24, что дает соответствующее соединение формулы 1а или 1в, в котором один или более заместителей имеют значение от с) до j) приведенное выше, и, при желании, удаление любой из присутствующих триэтилсилил защитной группы, или (iv) карбамилирование соединения приведенной выше формулы, в которой R 24 - как определено выше при условии, что по крайней мере один из R 4 является водородом, соединением формулы OCN- SO2Ar или OCN-(CR11-R12)nX что дает соответствующее соединение формулы 1а или 1в и, при желании, удаление любой присутствующей триэтилсилил группы, или (v) сульфирование соединения формулы, приведенной выше, в которой R 24 -такие, как определено выше, при условии, что по крайней мере один из R 24 является водородом, соединением формулы R19 SO2hal или (R SO2)2O или R20OCON ЗО2І\І+(алкил)з, где паї является галогеном, таким как хлор или бром, и алкил обозначает алкил группу, например, алкил из 1-6 углеродных атомов и R19 и R20 - такие, как определено выше, и при желании, удаление присутствующей триэтилсилил группы, или (vi) превращение основного соединения приведенной выше формулы в фармацевтически приемлемую соль и наоборот Относительно способа і), алкилирование (включая тиоалкилирование) или ацилирование может обычно выполняться в присутствии сильного основания, например литий диизопропиламида (LDA) Когда агент имеет формулу R2CHO, продукт формулы 1с имеет R1 обозначающую алкил или фторалкил из 1-6 углеродных атомов, замещенный гидрокси в положении - 1 Относительно способа и) продукт имеет алкил заместитель из 16 углеродных атомов, замещенный кето в положении - 1, продукт способа ш) обычно замещен алкилом из 1-6 углеродных атомов, арилалкилом или фторалкилом из 1-6 углеродных атомов, продукты способов iv) и v) имеют алкил заместители из 1-6 углеродных атомов, арилалкил или арил с положением 1 представляющим "S" Следующие синтетические методики приведены для демонстрации способов получения, полезных для получения соединений данного изобретения Эти примеры исключительно иллюстративного характера и не ограничивают рамки объема данного соединения В приведенных далее ПМРэкспериментальных данных приняты следующие обозначения m - мультиплет, S - син глет, d - дублет, t-триплет, dd - двойной дублет Пример 1 32 С-22-метил-бис-ТЕЗ-рапамицин ОМе Бис-TES рапамицин (0,50г, 0,483ммоль) растворяют в ТГФ (4,4мл, 0,1 М) и охлаждают до 78°С Раствор перемешивают 10 мин Добавляют по каплям к раствору LDA * ТГФ комплекс (1,5М в циклогексане, 0,73мл, 1,1ммоль) и перемешивают 45 мин К реакционной смеси добавляют метил трифторметансульфонат (0,18г, 1,1ммоль) и перемешивают 1,5ч при -78°С Реакцию прерывают добавляя охлажденный до -78°С ЫаНСОз (5мл) Затем реакционной смеси дают нагреться до комнатной температуры Смесь экстрагируют этилацетатом, промывают раствором соли, сушат над Na2SO4 и концентрируют в вакууме, получая желтый пенообразный продукт Остаток хроматографируют, используя гексан-этил ацетат (9 1 затем 4 1) в качестве элюента, что дает 22метилированный Bil-TES рапамицин (0,138г, 27% выход) в виде белой пены ПНР (400 MHZ, CDCI3) 5 0 50 (соед т , 9Н), 0 71 (т, 1Н), 0 82-1 59 (соед т , 38Н), 1 65 (S, ЗН),1 69 (S, ЗН), 1 78 ( т , 2Н), 1 81 (S, ЗН), 1 85-1 95 (соед т , 4Н), 2 05 (т, 2Н), 2 32 ( т , ЗН), 2 36 (S, 1Н), 2 39 (S, 1Н), 2 61 ( т , 2Н), 2 89 ( т , 1Н), 3 14 (S, наложен на т , 1Н), 3 14 ( т , 1Н), 3 28 (S, ЗН), 3 38 ( т , 1Н), 3 40 (S, наложен на т , ЗН), 3 40 (т, 2Н), 3 51 (т, 1Н), 3 53 (т, 1Н), 3 67 (dd, J = 5 71, 9 47 Hz, 1Н), 3 79 (d, J = 5 57 Hz, 1H), 3 82 (m, 1H), 4 17 (d, J = 5 35 Hz, 1H), 4 84 (m, 1H), 5 15 (d, J = 10 2 Hz, 1H), 5 42 (dd, J = 9 01, 14 2 Hz, 1H), 6 08 (d, J = 10 9 Hz, 1H), 6 20 (m, 1H), 6 23 (m, 1H), 6 42 (dd, J = 11 01, 14 01 Hz, 1H), масс спектр высокого разрешения (отрицательный ион FAB) m/z 1155 7 [(М-Н), рассчитано для C64Hio8NOi3Si2 1155 7] Пример 2 С-22-метил-рапамицин 45318 OTES О С-22-метил-бис-ТЕЗ-рапамицин (0,489г, 0,42ммоль) растворяют в ТГФ (4мл) и переносят в nalgene пробирку, содержащую некоторое количество 4А молекулярных сит В разделительную пробирку nalgene добавляют HF/пиридин комплекс (1 мл) к сухому пиридину (1 мл) при 0°С К субстрату при 0°С добавляют 1,8мл вышеупомянутого раствора Реакционную смесь выдерживают 15 мин при 0°С, затем дают нагреться до комнатной температуры и перемешивают 2 ч Затем реакционную смесь охлаждают до 0°С и реакцию прерывают медленным добавлением N2HCO3 Затем смесь экстрагируют ЕЮ Ас, после чего промывают 0,1 н НС1, ЫаНСОз и раствором соли Органическую фазу сушат над Na2SO4 и упаривают в вакууме Смесь хроматографируют, используя 2 5%, затем 5% МеОН/СНгСЬ в качестве элюента, что дает С-22-метил-рапамицин (0,36г, 93%) ИК(КВг) 3440 (S), 2940 (S), 1725 (S), 1650 (ш), 1455 (w), 1380 (w), 1240 (w), 1195 (w), 1090 (S), 995 (m), 915 (w), 735 (w), ПМР (400 MNZ, CDCI3)5 0 67 (m,1H), 0 90 (d, J = 6 38 Hz, 3H), 0 92 (d, J = 6 32 Hz, 3H), 1 01 (d, J = 6 56 Hz, 3H), 1 05 d, J = 7 24 Hz, 3H), 1 07 (d, J = 6 95 Hz, 3H), 1 11-1 48 (соед m, 15H), 1 63 (S, 3H), 1 65 (S, 3H), 1 75 (S, 3H), 1 58-2 06 (соед m, 10H), 2 63 (S, 1H), 2 65 (m, 3H), 3 00 (m, 2H0, 3 14 (S, 3H), 3 34 (m, 1H), 3 36 (S, 3H), 3 38 (S, 3H), 3 50 (m, 2H0, 3 63 (m, 1H0, 3 76 (m,3H), 4 21 (d, J = 4 47 Hz, 1H), 4 52 (S, 1H), 5 04 (m, 1 HO, 5 43 (m, 2H), 6 05 (d, J = 10 1 Hz, 1H), 6 13 (m,1H), 6 25 (m, 1H), 6 41 (m, 1H), масс спектр высокого разрешения (отрицательн ион FAB) m/z 927 [(М-Н), рассчитано для C52H80NO13 927] Пример 3 С-22-метил-С-27-гидрокси-бис-ТЕЗ-рапамицин С-22-метил-бис-ТЕЗ-рапамицин (0,27г, 0,23ммоль) растворяют в ТГФ (1 5мл) и охлаждают до-78 °С Добавляют быстро L -селектрид (1,0М в ТГФ, 0,17мл) Реакционную смесь перемешивают 30 мин, затем добавляют 0,5 эквивалента L -селектрида (0,05мл) Реакционную смесь медленно нагревают до комнатной температуры, около 2 ч Реакцию прерывают смешением с холодной водой, экстрагируют ЕЮ Ас, промывают раствором соли, сушат над Na2SO4 и упаривают в вакууме Смесь хроматографируют, используя 20%, затем 40% ЕЮ Ас, гексан в качестве элюента Затем продукт чистят ВДЖХ, 20% ЕЮ Ас, гексан, 21мм - силикагелевая колонка, получая С-22-метил-С-27-гидрокси-бисTES-рапамицин (0,08г, 30% выход) ПНР (400 MHZ, CDCI3)5 0 0-0 3 (соед m, 18H), 0 40 (m, 1H), 0 890 94 (соед m, 36Н), 1 55 (S, ЗН), 1,62(S, ЗН), 1 102 10 (соед m, 13H), 1 93-2 02 (соед m, 6H), 2 65 ( т , ЗН), 2 88 (m, 1H), 3 12 (S, ЗН), 3 24 (m, 1H), 3 26 (S, наложен на ш, ЗН), 3 26 (m, 1H), 3,40 (S, наложен на ш, ЗН), 3,40 (ш, 1Н), 3 51 (ш, 1Н), 3 53 ( т , 2Н), 3 63 (кажущийся t , J = 7 16 Hz, 1H), 3 77 (d, J = 5 19 Hz, 1H), 4 17 (d, J = 0 62 Hz, 1H), 4 82 (m, 2H), 5 37(m, 1H), 5 48 (m, 1H), 5 98 (кажущийся t, J = 0 62 Hz, 1H), 6 15 (m, 2H), 6 38 (m, 1H), масс спектр высокого разрешения (отрицательный ион FAB) m/z 1157 [(М-Н), рассчитано для C 6 4HiioN0 13 Si 2 1157] Пример 4 С-22-метил-С-27-гидрокси-рапамицин 35 45318 36 OMe Восстановленный метилированный BiS-TES рапамицин (0,055г, 0 047ммоль) растворяют в ТГФ (О 5мл) и переносят в nalgene пробирку, содержащую некоторое количество 4А молекулярных сит В отдельную nalgene пробирку к пиридину (1мл) при 0°С добавляют HF/пиридин комплекс (1мл) К субстрату при 0°С добавляют 1мл вышеуказанного раствора Реакционную смесь перемешивают 15 мин при 0°С, затем оставляют перемешиваться при комнатной температуре в течение 2 ч Затем реакционную смесь охлаждают до 0°С и реакцию прерывают медленным добавлением ЫаНСОз Смесь экстрагируют ЕЮ Ас, промывают 0 1н HCI, ЫаНСОз и раствором соли Органическую фазу сушат над ЫагЭСч и упаривают в вакууме Смесь хроматографируют на флэш силнкагеле и элюируют 2,5%, затем 5% MeOH/CH2CI2, получая С-22метил-С-27-гидрокси-рапамицин (0,016г, 36% выход) ИК(КВг) 3440 (S), 2920 (S), 1720 (S), 1645 (т), 1455 (т), 1375 (w), 1235 (w), 1190 (w), 1085 (S), 995 (m), 915 (wO, 735 (w), ПМР (400 MHZ, CDCI3) 5 0 77 (m, 1H), 0 87 (d, J = 6 64 Hz, 3H), 0 90(d, J = 6 85 Hz, 3H), 0 93 (d, J = 6 64 Hz, 3H), 0 97 (d, J = 6 64 Hz, 3H), 1 02 (d, J = 6 423 Hz, 3H), 1 04 (m, 1H), 1 18-1 42 (соед m, 15H), 1 61 (S, 3H), 1 63 (S, 3H), 1 65 (S, 3H), 1 53-2 06 (соед m, 10H), 2 28 (m, 2H), 2 65 (m, 2H), 2 92 (m, 2H), 3 10 (m, 1H), 3 13 (S, 3H), 3 32 (S, 3H), 3 36 (m, 2H), 3 38 (S, 3H), 3 51 (m, 2H), 3 61 (кажущийся t, J = 1 31 Hz, 1H), 3 78 (d, J = 5 19 Hz, 1H), 3 87(m, 1H), 4 29 (m, 1H), 4 30 (S, 1H), 4 81 (m, 1H), 5 40 (m, 2H), 6 00 (d, J = 10 2, 1H), 6 09 (m, 1H), 6 22 (dd, J = 10 4, 14 7 Hz, 1H), 6 37 (dd, J = 11 0, 14 73 Hz, 1H), масс спектр высокого разрешения (отрицательный ион FAB) m/z 929 [(МН), рассчитано для C52H82NO13, 929] Пример 5 С-22-этил-бис-ТЕЗ-рапамицин Бис-ТЕБ-рапамицин (2,0г, 1,75ммоль) растворяют в ТГФ (17 6мл) и охлаждают до -78°С LDA ТГФ комплекс (1,5М в циклогексане, 2,9мл, 4 38моль) добавляют по каплям к раствору и перемешивают 45 мин К реакционной смеси добавляют этил трифториетансульфонат (0,78г, 4,38ммоль) и перемешивают 2 ч при -78°С Реакцию обрывают при -78°С насыщенным ЫаНСОз (5мл) и дают нагреться реакционной смеси до комнатной температуры Смесь экстрагируют этилацетатом, промывают раствором соли, сушат над Na2SO4 и упаривают в вакууме, получая желтый пенообразный продукт Смесь хроматографируют, используя 10% и 20% этилацетат/гексан, на 44мм колонке с двуокисью кремния, получая С-22этил-бис-ТЕБ-рапамицин (0 25г, 13%) ПМР (400 MHZ, CDCI3) 5 0 0-0 64 (соед т , 18Н), 0 73 (т, 1Н), 0 85-1 50 (соед т , 46Н), 1 54-1 78 (соед т , ЗН), 1 67 (S, ЗН), 1 80 (S.3H), 1 85-2 05 (соед т , 4Н), 2 32 ( т , ЗН), 2 37 (S, 1Н), 2 41 (S, 1Н), 2 56 ( т , 2Н), 2 8 9 ( т , 1Н), 3 1 4 ( т , 1Н), 3 15 (S, ЗН), 3 26 (S, ЗН), 3 40 (S, ЗН), 3 42 (т, 1Н), 3 48 (S, 1Н), 3 50 (S, 1Н), 374 ( т , 1Н), 389 (т, 1Н), 414 (т, 1Н), 4 88 (т, 2Н), 516 (d, J = 103 Hz, 1H), 540 (dd, J = 9 28, 14 21 Hz, 1H), 6 05 (d, J= 11 1 Hz, 1H), 6 16 (m, 1H), 6 25 (m, 1H), 6 43 (dd, J = 11 1, 13 9 Hz, 1H), 13C ЯМР (100 MHz, CDCI3) 5 3 74, 4 37, 4 50, 4 76, 6,31, 6 42, 6 50, 8 33, 9 98, 12 79, 1318, 13 83, 14 80, 15 25, 15 49, 16 39, 2071 , 21. , 26 26, 26 71 ,81. 29 83, 30 61, 31 31 , 31 37, 3300. 3394, 34 64 , 35 99, 39 23, 39 47, 3975, 41 34. 41 75, 42 52 , 46 06, 48 37, 49 22, 5556, 5641. 5778, 60 40 , 64 02, 66 76, 73 62, 7553, 7556. 7885, 83 37 , 83 99. 84 16. 85 60. 98 77. 126 54. 126!Э4. 128 63 13087, 13261, 13650, 13714, 13955, 16770, 171 56, 172 01, 207 99, 211 38, масс спектр высокого разрешения (отрицательный ион FAB) m/z 1169 7 [(М-Н), рассчитано для C65H111NO13S12 1169 7] Пример 6 С-22-этил-рапамицин 45318 С-22-этил-бис-ТЕЗ-рапамицин (0 25г, О 21ммоль) растворяют в ТГФ (2мл) и переносят в nalgene пробирку, содержащую некоторое количество 4А молекулярных сит В отдельной пробирке к сухому пиридину (1 мл) при 0°С добавляют HF/пиридин комплекс (1мл) К субстрату при 0°С добавляют вышеупомянутый раствор (1,8мл) Реакционную смесь перемешивают 15 мин при 0°С, затем оставляют перемешиваться при комнатной температуре 2 ч После чего реакционную смесь охлаждают до 0°С и медленно добавляют ЫаНСОз для того, чтобы прервать реакцию Смесь экстрагируют EtAc, промывают 0,1 н HCI, ЫаНСОз и раствором соли Органическую фазу сушат над Na2SO4 и упаривают в вакууме Смесь хроматографируют, используя 2,5%, затем 5% МеOH/CH2CI2 в качестве элюента, что дает С-22этил-рапамицин (0,1 Зг, 64% выход) ИК(КВг) 3440 (S), 2940 (S), 1725 (S), 1650 (т), 1460 (w), 1380 (w), 1235 (w), 1190 (w), 1090 (S), 995 (m), 915 (w), 735 (w), ПМР (400 MHZ, CDCI3) 5 0 68(m, 1H), 0 87-1 06 (соед m, 15H), 1 06-1 45 (соед т , 15Н), 1 57 (m, 3H), 1 66 (S, 3H), 1 75 (S, 3H), 1 90-2 08 (соед т , 10H), 2 31 (m, 3H), 2 64 (m, 3H), 2 89 (S, 1H), 2 90 (m, 2H), 3 13(S, 3H), 3 33(m, 1H), 3 38 (S, 3H), 3 47 (m, 2H), 3 66 (кажущийся t, J = 7 24 Hz, 1H), 3 82 (d, J = 5,47 Hz, 1H), 3,95 (m, 1H), 4 21 (d, J = 5,54 Hz, 1H), 4 43 (S, 1H), 5 09 (m, 1H), 5 37 (d, J =9 62 Hz, 1H), 5 42 (d, J = 9 49 Hz, 1H), 6 05 (d, J = 10 93 Hz, J = 10 5, 14 8 HZl 1H), 6 24 (m, 1H), 1H), 6 13 (did, 6 39 (m, 1H), IOC ЯМР (100 MHZ, CDCI3) 5 8 53, 10 19, 13 44, 1398, 1566, 1591, 1596, 1653, 21 83, 21 97, 26 47, 26 93, 29 74, 30 79, 31 23, 31 44, 32 79, 33 27, 34 10, 34 59, 35 97, 3912, 39 89, 40 04, 40 66, 41 36, 42 76, 46 20, 55 85, 56 58, 58 94, 64 17, 67 41, 73 97, 74 97, 74 96, 76 81, 83 37, 84 42, 85 16, 98 82, 126 84, 127 03, 12866, 13078, 13282, 13561, 13699, 13966, 167 40, 172 03, 194 05, 207 88,213 99, масс спектр высокого разрешения (отрицательный ион FAB) m/z 941 [(М-Н), рассчитано для C53H82NO13 941] Пример 7 Синтез С-22-метил-42-д и метил глицин рапамицин 38 а) снятие одной зашиты в 22-метилированном бис-TES Метилированный бис-TES рапамицин (0,42г, О.Збммоль) растворяют в 3 11 растворе НОАс ТГФ НгО Реакция по данным ТСХ проходит за 10 минут, ее прерывают добавлением ЫаНСОз и перемешивают 10 мин Смесь экстрагируют ЕЮ Ас, сушат над ЫагЗСч, фильтруют и упаривают в вакууме Остаток хроматографируют на силикагеле, элюируя 2,5% МеОН/СНгСЬ, что дает моноTES метилированный гар (рапамицин) (0 37г, 99% выход) ПНР (300 MHZ, CDCI3) 5 0 47 (m, 6H), 0 68 (m, 1H), 0 79-1 0 (соед ш, ЗОН), 1 01-1 83 (соед m, 13H), 1 60 (S, ЗН), 1 63 (S, ЗН), 1 75 (S, ЗН), 1 92 (m, 2H), 2 10 (ш, ЗН), 2 31 (m, 2H), 2 65 (m, 2H), 2 91 (m, 1H), 3 16(S, ЗН), 3 21 (m, 2H), 3 29 (S, ЗН), 3 36 (S, ЗН), 3 53 (m, 2H), 3 64 (m, 1H), 3 78 (ш, 1Н), 3 81 (m, 1H), 4 14(d, 1H), 4 75(S, 1H), 4 85 (ш, 1Н), 5 13 (m, 1H), 5 4 (m, 1H), 6 07 (m, 1H), 6 2 (ш, 2Н), 6 4(m, 1H) Ь) ацилирование 22-метилированного моноTES 39 40 42-глицинат моно-TES рапамицин (011 г, 0 1ммоль) растворяют в ТГФ (2мл) и переносят в nalgene пробирку, содержащую некоторое количество молекулярных сит В отдельной nalgene пробирке к 1мл сухого пиридина при 0°С добавляют HF/пиридин комплекс (1мл) 1мл этого раствора добавляют в пробирку, содержащую субстрат при 0°С Реакционную смесь перемешивают 15 мин, затем убирают ледяную баню и реакционную смесь оставляют перемешиваться при комнатной температуре 2 ч Затем реакционную смесь охлаждают до 0°С и медленно добавляют ЫаНСОз, чтобы прервать реакцию Смесь экстрагируют ЕЮ Ас, промывают 0,1 н HCI, ЫаНСОз и раствором соли, последовательно Органическую фазу сушат над Na2SO4 и упаривают в вакууме Смесь хроматографируют на силикагеле, элюируя 2,5%, затем 5% MeOH/CH2CI2, что дает С-22-метил-42глицинат гар (0,043г, 44% выход) ИК(КВг) 3440 (S), 2940 (S), 1730 (S), 1650 (т), 1460 (т), 1375 (w), 1290 (w), 1240 (w),1190 (w), 1135 (w), 1100 (w), 990 (w), 730 (w), ПМР (400 MHZ, CDCI3) 5 0 84 (dd, J = 12 1, 12 2 Hz, 1H), 0 89 (d, J = 5 26 Hz, 3H), 0 91 (d, J = 5 32 Hz, 3H), 1 00 (d, J = 6 56 Hz, 3H), 1 05 (d, J = 1 7 Hz, 3H), 1 07 (d, J = 1 73 Hz, 3H), 0 87-1 45 (соед m, 15H), 1 46-2 08 (соед m, 10H), 1 61 (S, 3H), 1,65 (S, 3H), 1 75 (S, 3H), 2 35 (S, 6H), 2 65 (m, 2H), 2 95 (S, 1H), 3 14(S, 3H), 3 15 (m, 1H), 3 17(S, 2H), 3 32 (m, 1H), 3 34 (S, ЗН), З 36 (S, ЗН), З 37 (m, 1H), 3 50 (m, 2H), 3 64 (кажущийся t, J = 7 4 Hz, 1H), 3 79 (m, 2H), 4 22 (d, J = 5 7 Hz, 1H), 4 46 (S, 1H), 4 59 (m, 1H), 5 04 (m, 1H), 5 41 (d, J = 9 92 Hz, 1H), 5 44 (dd, J = 4 2, 7 1 Hz, 1H), 6 05 (d, J = 10 4 Hz, 1H), 6 13 (dd, J = 10 4, 12 6 Hz, 1H), 6 26 (dd, J = 12 6, 12 7 Hz, 1H), 6 38 (dd, J = 7 2, 7 3 Hz, 1H), 13C ЯМР (100 MHz, CDCI3) 5 10 15, 13 31, 14 02, 15 72, 1601, 1608, 1717 1967, 2181, 22 50, 26 96, 29 77, 30 91, 3110, 32 88, 32 96, 33 71, 33 77, 35 80, 36 28, 38 84, 39 66, 39 98, 40 64, 41 32, 42 44, 45 21, 46 25, 55 93, 57 21, 59 09, 60 85, 67 32, 75 14, 76 33, 76 69, 77 00, 77 21, 77 32, 80 79, 83 68, 85 43, 98 66, 126 85, 128 93 130 59, 133 03, 135 75, 136 49, 139 94, 167 86, 17019, 172 36, 194 84, 207 97, 214 39, масс спектр высокого разрешения (отрицательный ион FAB) m/z 1012 6 [(М-Н), рассчитано для C62H102NO14S1 1012 6] 45318 \ Метилированный моно-TES рапамицин (0,36г, 0 35ммоль) растворяют в метиленхлориде (8мл) К реакционной смеси добавляют последовательно диметилглицин (Зэкв, 011 г), (3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимид гидрохлорид (4эквивал , 0,27г) и DMAP на кончике шпателя, после чего реакционную смесь оставляют перемешиваться в течение ночи Затем реакционную смесь разбавляют метиленхлоридом и промывают водой Водную фазу экстрагируют метиленхлоридом Объединенные органические фазы промывают еще раз водой и сушат над Na2SO4, фильтруют и упаривают в вакууме Смесь хроматографируют на силикагеле, элюируя 1%, затем 2,5% MeOH/CH2CI2, что дает 42-глицинат моно-TES гар (0,12г, 30% выход) ПМР (400 MHZ, CDCI3) 5 0 73-1 06 (соед т , ЗОН), 1 18-1 81 (соед т , 23Н), 1 62 (S, ЗН), 1 67 (S, ЗН), 1 82 (S, ЗН), 1 87-2 1 (соед т , 4Н), 2 41 (S, 6Н), 2 63 ( т , 2Н), 3 16 (т, 2Н), 3 29 (S, ЗН), 3 35 (S, ЗН), 3,36 (S, 2H), 3 21-3 37 (соед т , 2Н), 3 53 ( т , 2Н), 3 68 (кажущийся!, J = 7 41 Hz, 1Н), 3 89 (т, 2Н), 4 18 (d, J = 4 1 Hz, 1Н), 4 74 ( т , 1Н), 4 80 (S, 1Н), 4 92 ( т , 1Н), 5 20 (d, J = 10 4 Hz, 1Н), 5 40 (dd, J = 7 0, 7 1 Hz, 1H), 6 09 (d, J = 10 7 Hz, 1H), 6 22 (m, 2H), 6 42 (dd, J =7 1, 7 2 Hz, 1H), масс спектр высокого разрешения (отрицательный ион FAB) m/z 1126 5 [(М-Н), рассчитано для C62H102NO14S12 1126 5] с) Снятие защиты 42-глицинат моно-TES N— 41 45318 ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044)456-20- 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71 42