Фармацевтична композиція, засіб для профілактики та лікування метаболічного синдрому та діабетичної нефропатії та спосіб його отримання

Реферат: Винахід належить до медицини і фармацевтичної промисловості та стосується фармацевтичної композиції, засобу для профілактики і лікування метаболічного синдрому та діабетичної нефропатії, способу його отримання, де фармацевтична композиція та засіб містить таурин, екстракт трави собачої кропиви, екстракт плодів глоду і допоміжні речовини. UA 101418 C2 (12) UA 101418 C2 UA 101418 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Винахід належить до медицини і фармацевтичної промисловості і, більш конкретно, до фармацевтичної композиції, засобу і способу його отримання для профілактики і лікування метаболічного синдрому та діабетичної нефропатії, і може бути використаний для виробництва на їх основі препарату в лікарській формі таблеток, таблеток, вкритих плівковою оболонкою або капсул. Відома фармацевтична композиція, що містить активну речовину таурин, екстракт трави собачої кропиви, екстракт плодів глоду і речовини допоміжні, описана в патенті України на засіб Кратал для лікування захворювань серцево-судинної системи (патент України № 39141, МПК: А61КЗ1/195, 35/78, 2001). Відома композиція призначена для отримання гранул, що містять таурин і густі екстракти плодів глоду і трави собачої кропиви, які отримують шляхом вологої грануляції з картопляним крохмалем з подальшим їх сушінням. Склад гранул Краталу підібраний при наступному співвідношенні компонентів, мас. %: таурин 85,0-86,8; екстракт трави собачої 8,3-8,7; кропиви густий екстракт плодів глоду густий 4,1-4,4; допоміжні речовини решта. Комбінований засіб гранули Краталу в силу своїх фармако-терапевтичних властивостей має м'яку кардіотонічну дію, з вираженою антиангінальною, коронаролітичною і антиаритмічною активністю. Механізм фармакотерапевтичної дії препарату пов'язаний з інгібуючим впливом на ренін-ангіотензинову та калікреїн-кінінову системи, з одночасним позитивним впливом на продукцію цАМФ і з інгібуванням процесів перекисного окислення ліпідів. Гранули при пероральному застосуванні, на жаль, мають неприємні органолептичні властивості (надзвичайно виражену гіркоту). Дозування такого лікарського засобу в гранулах також неоднозначне і утруднене не тільки для дорослих, але особливо при призначенні дітям. Досить проблематичною є технологія отримання цієї композиції, оскільки волога грануляція крохмальним клейстером всіх активних компонентів з метою отримання гранул, і наступні операції їх сушіння, потім сухого гранулювання шляхом перетирання через сита і, нарешті, класифікація гранул - досить енергозатратні і довготривалі операції. Крім цього, застосування крохмального клейстеру як агента для гранулювання легкорозчинних у воді активних інгредієнтів - таурину і густих екстрактів рослинних субстанцій плодів глоду (Crataegus janguinca) і трави собачої кропиви (Leonurus cardiaca L.), є технологічно досить важко відтворювальною операцією. Важливою фармацевтичною проблемою для Краталу залишається підбір надійної блістерної упаковки внаслідок значної гігроскопічності цього препарату. Блістер на основі полівінілхлоридної плівки з алюмінієвою підкладкою, що широко застосовується, не завжди є надійним засобом як гідробар'єр для збереження таких лікарських засобів як Кратал протягом тривалого часу їх зберігання (більше 1 року, фармакопейні вимоги) навіть у вузькому діапазоні показників вологості. У такій упаковці Кратал навіть при кімнатній температурі і з вологістю повітря 60-70 % не витримує 2-2,5 місячного терміну зберігання. У результаті таблетки набувають темно-коричневого кольору і стають еластичними, а при легкому механічному впливі при вилученні з блістера піддаються деформації подібно гумі. Гранули Краталу, відповідно до патенту UA 39141, призначаються для лікування серцевосудинної системи, що є досить широким трактуванням можливостей медичного застосування цього лікарського засобу, з неоднозначністю розуміння його терапевтичної ефективності. В Інструкції з медичного застосування препарату Кратал, виробництва НВЦ "Борщагівський хімфармзавод" (реєстрацієя UA / 3866/01/01 до 29.10.2015 p.), показаннями до лікування є "нейро-циркуляторні дистонії, у складі комбінованої терапії при хронічній ІХС, пострадіаційний синдром". В основу винаходу поставлена задача створення такої фармацевтичної композиції, засобів і способів їх отримання, для профілактики і лікування метаболічного синдрому і діабетичної нефропатії, у яких вибором нового кількісного та якісного складу компонентів у композиції і на її основі засобу, і новими умовами виконання операцій в способі, забезпечувалася б корекція складових метаболічного синдрому, а саме мітохондріальних біоенергетичних процесів серцево-судинної системи, профілактика та лікування діабетичної нефропатії. Поставлена задача вирішується тим, що у фармацевтичній композиції для профілактики і лікування метаболічного синдрому та діабетичної нефропатії, що містить активну речовину таурин, екстракт трави собачої кропиви, екстракт плодів глоду і допоміжні речовини, згідно з винаходом, компоненти взяті при такому співвідношенні, мас. %: 55 1 UA 101418 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 плодів глоду екстракт рідкий 2-5 * або густий, * або сухий трави собачої кропиви екстракт рідкий * або густий, 6-10 * або сухий таурин 65-80 допоміжні речовини решта. (* - в перерахунку на суху речовину) Крім того, сухі екстракти глоду і трави собачої кропиви вводяться до складу фармацевтичної композиції у вигляді комплексу з допоміжними речовинами. Доцільно, щоб засіб для профілактики і лікування метаболічного синдрому та діабетичної нефропатії, що містить активні речовини таурин, екстракт трави собачої кропиви, екстракт плодів глоду і допоміжні речовини, згідно з винаходом, містив фармацевтичну композицію при наступному співвідношенні компонентів, мас. %: плодів глоду екстракт рідкий 2-5 * або густий, * або сухий трави собачої кропиви екстракт рідкий * або густий, 6-10 * або сухий таурин 65-80 допоміжні речовини решта. (* в перерахунку на суху речовину). Крім того, як допоміжні речовини вибрані речовини, що виконують функції зв'язуючих матеріалів, агентів, які викликають дезінтеграцію препарату і матеріалів, що сприяють ковзанню і змащенню грануляту при пресуванні, і матеріалів плівкового покриття. Крім того, як речовини, що виконують функції зв'язуючих матеріалів, засіб містить крохмаль картопляний або мікрокристалічну целюлозу для отримання гранулятів для таблетування або капсулювання, та в складі компонентів сухих екстрактів. Крім того, як агенти, що викликають дезінтеграцію, засіб містить кроскармелозу натрію для отримання гранулятів з рідкими, або густими, або сухими рослинними екстрактами. Крім того, як матеріали, що сприяють ковзанню грануляту при пресуванні, засіб містить колоїдний диоксид кремнію. Крім того, як матеріали, що сприяють змащенню при отриманні гранулятів для таблетування і капсулювання засіб містить стеарат магнію, який також вводиться до складу сухих комплексів з рослинними екстрактами. Крім того, засіб містить склад компонентів у вигляді лікарських форм таблеток або таблеток, вкритих плівковою оболонкою, або капсул для профілактики і лікування метаболічного синдрому та діабетичної нефропатії для застосування їх у добовій їх дозі по таурину 100 мг на кг маси тіла. Доцільно, щоб спосіб одержання засобу для профілактики і лікування метаболічного синдрому та діабетичної нефропатії характеризувався тим, що попередньо рідкий, густий або сухий екстракти плодів глоду і трави собачої кропиви отримували екстрагуванням водним або водно-етанольним розчинниками методами мацерації, або перколяції, фільтраційної екстракції, або реперколяції, з наступним вакуумним концентруванням витяжки до густого екстракту і/або подальшим їх сушінням до отримання сухого екстракту, після чого екстракти змішували з таурином і допоміжними речовинами, які виконують функції сполучних матеріалів, агентів, що викликають дезінтеграцію засобу, і матеріалів, що сприяють ковзанню і змащенню грануляту при пресуванні. Фармацевтична розробка лікарських форм ґрунтувалася на застосуванні фармацевтичної композиції з постійним складом фармакологічно активних компонентів при різних співвідношеннях допоміжних речовин, із застосуванням різних технологічних методів. У доклінічних дослідженнях було чітко встановлено виражену антиоксидантну, антигіперглікемічну, гіполіпідемічну, судинорозширювальну, антисклеротичну, антиагрегантну і антитоксичну дію нового препарату. Фармакологічні властивості препарату спрямовані на корекцію метаболічних порушень, індукованих інсулінорезистентністю та інсуліновою недостатністю, реалізуються за рахунок зниження оксидативного стресу і мітохондріальної дисфункції, що грає ключову роль в патогенезі вищевказаних захворювань. Слід зазначити, що нормалізація біоенергетичних процесів унаслідок відновлення мітохондріальної функції та 2 UA 101418 C2 5 10 15 20 25 30 35 оксидантного статусу відбувалася завдяки синергізму фармакологічної дії всіх активних компонентів препарату. Встановлена сукупність фармакотерапевтичних властивостей препарату дозволяє прогнозувати перспективність застосування в профілактиці та лікуванні метаболічного синдрому, цукрового діабету 2 типу, його мікро-і макросудинних ускладнень і діабетичної нефропатії. При виготовленні фармацевтичної композиції в лікарських формах таблеток або капсул використовувався один або декілька фармацевтично прийнятних наповнювачів, що виконують функції зв'язуючих матеріалів, агентів які визивають дезінтеграцію, матеріалів які сприяють ковзанню та змащуванню грануляту при пресуванні. Як зв'язуючі компоненти кращими виявилися картопляний крохмаль і мікрокристалічна целюлоза. Згідно з даним винаходом кількість зв'язуючого матеріалу може змінюватися в діапазоні від 1 до 50 %, переважно від 5 до 25 % в перерахунку на загальну масу таблетки. Склад таблетки або капсули по зв'язуючих компонентах підбирався таким чином, щоб забезпечувалась прийнятна дозована форма для орального прийому і зручна для пацієнта з негайним вивільненням активних інгредієнтів. Перевагу, як агентам що викликають дезінтеграцію, було віддано кроскармелозі натрію і кросповідону. Кількість дезінтегранта може змінюватися в діапазоні від 0,5 до 20 %, переважаючою стала від 1 до 10 %. Агентом для ковзання компонентів гранулята кращими виявився колоїдний діоксид кремнію. Кількість агента для ковзання може змінюватися в діапазоні від 0,1 до 10 %, прийнятною стала від 0,25 до 5 %. Як змащувальний компонент застосовувався стеарат магнію, кількість якого може застосовуватитсь в діапазоні від 0,1 до 5 %, переважним було від 0,5 до 2 %. Як матеріали для покриття таблеток оболонкою були використані такі продукти як Opadry ® фірми Colorcon, Advantia ® фірми ISP, Sepifilm ® фірми Seppic, які виявились фармацевтично прийнятними компонентами. Кількість плівкового покриття може змінюватися в діапазоні від 1 до 10 %, прийнятним виявилося від 1,5 до 5 %. За даними фармацевтичної розробки, через різний ступінь гігроскопічності сухих екстрактів, їх комплексів з допоміжними речовинами і деяких видів таблеток потребувало застосування відповідної упаковки. При випробуванні лікарських форм у різних волого-температурних умовах при тривалому часу зберігання (фармакопейні вимоги) найбільш прийнятними виявилися пластикові контейнери для таблеток і капсул, блістерна упаковка типу полімер/метал, а саме композит PVC / PVDC / Alu (полівінілхлорид-полівінілдихлорид-алюміній) або Alu/Alu. Приклад 1. Отримання сухого комплексу, що містить екстракти глоду або трави кропиви собачої, мікрокристалічної целюлози і кремнію діоксид колоїдний, наступного компонентного складу: Компонент сухого комплексу Вміст, % глоду або трави собачої кропиви екстракт густий (вміст сухої речовини 60 %), у 70,0 перерахунку на сухий екстракт целюлоза мікрокристалічна 25,0 кремнію діоксид колоїдний 5,0 всього: 100. 40 45 Густі екстракти, які містять 60 % сухих речовин, поміщають в реактор з перемішуючим пристроєм. У процесі перемішування додають мікрокристалічну целюлозу і кремнію діоксид колоїдний, потім гомогенну суміш сушать у вакуумній стрічковій сушарці і подрібнюють. Гранулят, отриманий після додавання допоміжних речовин, застосовують для таблетування або капсулювання. Приклад 2. Отримання сухого комплексу відрізняється від Прикладу 1 тим, що в густі екстракти при перемішуванні перед сушінням вводять мікрокристалічну целюлозу до отримання наступного компонентного складу: 3 UA 101418 C2 Компонент сухого комплексу містить Вміст, % глоду або трави собачої кропиви екстракт густий (вміст сухої речовини 60 %), у 70,0 перерахунку на сухий екстракт целюлоза мікрокристалічна 30,0 всього: 100. 5 Приклад 3. Отримання сухого комплексу відрізняється від Прикладів 1 і 2 тим, що в густий екстракт при перемішуванні перед сушінням вводять крохмаль картопляний і кремнію діоксид колоїдний до отримання наступного компонентного складу: Компонент сухого комплексу Вміст, % глоду або трави собачої кропиви екстракт густий (вміст сухої речовини 60 %), у 72,0 перерахунку на сухий екстракт крохмаль картопляний 25,0 кремнію діоксид колоїдний 3,0 всього: 100 10 Приклад 4. відрізняється від Прикладів 1, 2 і 3 тим, що в густий екстракт при перемішуванні перед сушінням вводять крохмаль картопляний до отримання наступного компонентного складу: Компонент сухого комплексу глоду або трави собачої кропиви екстракт (вміст сухої речовини 60 %), у перерахунку на сухий екстракт крохмаль картопляний всього: 15 75,0 25,0 100. Приклад 5. Отримання сухого комплексу відрізняється від Прикладів 1-4 тим, що змішують густі екстракти глоду і трави собачої кропиви в масовому співвідношенні 1:2, далі до отриманої суміші перед сушінням при перемішуванні вводять мікрокристалічну целюлозу і кремнію діоксид колоїдний до отримання наступного компонентного складу: Продукт глоду екстракт густий (вміст сухої речовини 60 %), у перерахунку на сухий екстракт трави собачої кропиви екстракт густий (вміст сухої речовини 60 %), у перерахунку на сухий екстракт целюлоза мікрокристалічна кремнію діоксид колоїдний всього: 20 Вміст, % Вміст, % 23,3 46,7 25,0 5,0 100. Згідно з винаходом, розроблено декілька способів отримання конкретної бажаної лікарської форми - таблетки, таблетки, покриті оболонкою, або капсули. Приклад 6. Фармацевтична композиція у лікарській формі таблеток отримують при змішуванні всіх компонентів у сухому вигляді, пресуванні суміші при складі всіх компонентів у ваговій масі і масових %. 4 UA 101418 C2 Склад лікарської форми в таблетках Компонент № Склад на 1 таблетку (мг) екстракт глоду сухий (6.1) 43 екстракт кропиви собачої сухий (6.1) 87 таурин (6.2) 867 целюлоза мікрокристалічна (6.2) 70 кроскармелоза натрію (6.3) 11 кремнію діоксид колоїдний (6.3) 11 магнію стеарат (6.3) 11 загальна маса 1100 5 % 3,91 7,91 78,82 6,36 1,00 1,00 1,00 100,00. Приклад 7. відрізняється від Прикладу 6 тим, що таблетки одержують при використанні густих екстрактів трави собачої кропиви і глоду з вмістом вологи до 50 % за масою. Шляхом вологого гранулювання суміші компонентів (7.2) з екстрактами (7.1), сушінням отриманого грануляту, калібрування грануляту, змішування з компонентами (7.3), пресування нового грануляту отримані таблетки упаковують в блістерну упаковку. Склад лікарської форми в таблетках Компонент № глоду екстракт густий (вміст сухої речовини 50 %), у перерахунку на сухий екстракт трави собачої кропиви екстракт густий(вміст сухої речовини 50 %), у перерахунку на сухий екстракт таурин целюлоза мікрокристалічна кроскармелоза натрію кремнію діоксид колоїдний магнію стеарат загальна маса 10 Склад на таблетку (мг) 43 3,91 (7.1) 87 7,91 (7.2) (7.2) (7.3) (7.3) (7.3) 867 70 11 11 11 1100 78,82 6,36 1,00 1,00 1,00 100,00. Приклад 8. У цьому способі отримання таблеток для дітей відрізняється від Прикладів 6 і 7 тим, що таблетки мають удвічі менше дозування і покриваються водною дисперсією плівкової суміші (8.4). Компонент екстракт глоду густий екстракт кропиви собачої густий таурин целюлоза мікрокристалічна кроскармелоза натрію кремнію діоксид колоїдний магнію стеарат плівкоутворювальна суміш загальна маса 20 % (7.1) Склад таблеток дитячої лікарської форми Склад на 1 таблетку (мг) 15 1 (8.1) (8.1) (8.2) (8.2) (8.3) (8.3) (8.3) (8.4) 21,5 43,5 433,5 35 5,5 5,5 5,5 25 575 % 3,74 7,56 75,39 6,08 0,96 0,96 0,96 4,35 100,00. Покриття таблеток може здійснюватися в машинах з перфорованим котлом, котлом з витяжною трубою або в апаратах псевдорідинному шару. Приклад 9. Спосіб отримання маси для наповнення капсул відрізняється від описаного в Прикладі 6 тим, що зволоження і гранулювання суміші таурину (9.2) з целюлозою мікрокристалічної (9.2) здійснюють рідкими рослинними екстрактами (50 і більше % за масою) (9.1), а також тим, що висушений гранулят змішують з компонентами (9.3). Отриману масу фасують у тверді желатинові капсули. Даний спосіб відрізняється одночасним проведенням процесу вологої грануляції і сушіння з використанням сушарки-гранулятора в псевдорідинному. 5 UA 101418 C2 Склад лікарської форми в капсулах Компонент № Склад на 1 капсулу (мг) екстракт глоду рідкий (9.1) 43 екстракт кропиви собачої рідкий (9.1) 87 таурин (9.2) 867 целюлоза мікрокристалічна (9.2) 81 кремнію діоксид колоїдний (9.3) 11 магнію стеарат (9.3) 11 загальна маса 1100 5 % 3,91 7,91 78,82 7,36 1,00 1,00 100,00. Приклад 10. Спосіб одержання таблеток відрізняється від описаного в Прикладі 6 тим, що суміш таурину, сухих екстрактів глоду і трави собачої кропиви, кросповідону (компоненти 10.1) гранулюють сухим способом за допомогою компактера або брикетуванням, отриманий гранулят змішують з магнію стеаратом (10.2) і пресують в таблетки. Склад лікарської форми в таблетках Компонент № Склад на 1 таблетку(мг) екстракт глоду сухий (10.1) 43 екстракт кропиви собачої сухий (10.1) 87 таурин (10.1) 867 кросповідон (10.1) 92 магнію стеарат (10.2) 11 загальна маса 1100 10 15 % 3,91 7,91 78,82 8,36 1,00 100,00. Приклад 11. Цей спосіб відрізняється від описаних у прикладах 6-8 і 10 тим, що згаданий раніше отриманий гранулят не пресують в таблетки, а наповнюють ним тверді желатинові капсули. Приклад 12. Спосіб приготування лікарської форми полягає в тому, що сухий комплекс, отриманий упарюванням густих екстрактів трави собачої кропиви, глоду з допоміжними речовинами, отриманий за одним з наведених Прикладів 1-5, змішують з таурином в розрахованому співвідношенні, суміш компактують і гранулятом наповнюють тверді желатинові капсули. Склад лікарської форми в капсулах Компонент № комплекс екстракту глоду і трави кропиви собачої сухий (12.1) (Приклади 1-5) таурин (12.2) загальна маса 20 Склад на 1 капсулу % (мг) 193 18,21 867 1060 81,79 100,00. Приклад 13. відрізняється від Прикладу 12 тим, що сухий комплекс змішують з таурином та іншими допоміжними компонентами і пресують в таблетки. Склад лікарської форми в таблетках Компонент № комплекс екстракту глоду і трави кропиви собачої сухий (13.1) (Приклади 1-5) таурин (13.1) кросповідон (13.1) магнію стеарат (13.2) загальна маса 25 Склад на 1 таблетку (мг) % 193 17,54 867 29 11 1100 78,82 2,64 1,00 100,00. Доклінічні дослідження фармацевтичної композиції наведених складів були спрямовані на вивчення впливу її на основні фактори ризику серцево-судинної патології в умовах метаболічного синдрому (предіабету) і цукрового діабету. З метою встановлення механізмів 6 UA 101418 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 кардіопротекторного ефекту препарату було вивчено його вплив на біоенергетичні процеси та оксидативний статус мітохондрій міокарда у тварин з метаболічним синдромом. Теоретичним обґрунтуванням перспектив використання фармацевтичної композиції, яка містить таурин, екстракти глоду і собачої кропиви для профілактики і лікування метаболічного синдрому та діабетичної нефропатії стали встановлені фармакотерапевтичні властивостей вищевказаних компонентів. При вивченні впливу таурину на більшість ланок патогенезу інсулінорезистентності, передчасного атеросклерозу та діабетичної нефропатії було показано позитивну коригуючу дію цієї аміносульфокислоти [1-3]. Встановлено, що таурин сприяє поліпшенню чутливості периферичних тканин до дії інсуліну і зниження абдомінального ожиріння у щурів з цукровим діабетом 2 типу [1], зменшення концентрації тригліцеридів сироватці крові щурів із стрептозотоцинового діабету [4], підвищенню рівня відновленого глутатіону в ізольованих гепатоцитах [5]. Показано, що споживання високих доз таурину попереджає розвиток функціональних та структурних порушень нирок у тварин зі стрептозоциновим діабетом, знижуючи ступінь протеїнурії внаслідок зниження гіпертрофії клубочків та розвитку гломерулосклерозу [6]. З літературних джерел відомо, що таурин проявляє виражену фармакологічну дію відносно серцево-судинної системи. Регулюючи функціонування ренінангиотензинальдестеронової і калікреїн-кінінової систем, впливаючи на активність ферментів кальцієзалежних і ферментних систем, що виконують каталітичні функції в плазматичних мембранах кардіоміоцитів, саркоплазматичного ретикулуму кардіоміоцитів, ЕПР клітин мозку, в мітохондріях кардіоміоцитів і в тромбоцитах, таурин проявляє ангіо- та кардіопротекторну дію [7-9]. Дуже важливим є гіпоглікемічна дія таурину, що знайшло своє підтвердження в лікарському засобі Дибікор, що застосовується при цукровому діабеті 2 типу [10, 11]. Фармакологічні ефекти таурину свідчать про його специфічну модулюючу дію відносно багатьох біохімічних і фізіологічних процесів клітини в нормі і в умовах патології. Враховуючи фармакологічні властивості екстрактів кропиви собачої і глоду, які зумовлені високою антиоксидантною активністю і здатністю до регуляції біоенергетичних процесів у клітинах міокарда, передбачалося виявити їх достовірно виражену кардіопротекторну дію саме в складі фармацевтичної композиції. Раніше в експерименті було показано, що антиатеросклеротичний ефект екстрактів глоду і кропиви собачої обумовлюється комплексом фармакологічно активних компонентів флавоноїдів, фенольних кислот, тритерпенів, катехінів, сапонінів і ціанідинових похідних [12,13]. Тобто, речовин з високим антиоксидантним потенціалом. Підтвердженням цьому стало те, що кардіотонічні лікарські засоби глоду виявляють ритмогенну дію, яка обумовлює позитивний ізотропний і негативний хронотропний вплив на роботу міокарда. Цей терапевтичний ефект проявлявся у збільшенні амплітуди серцевих скорочень і зменшенні їх частоти [14]. При цьому було показано, що подальший розвиток гіпотензивного ефекту безпосередньо пов'язаний з фармакологічними властивостями сапонінів екстрактів глоду [15]. Слід зазначити, що виявлена гіпохолестеринемічна дія препаратів глоду також зумовлена цими речовинами [16]. Седативні властивості екстракту трави собачої кропиви в залежності від дози в 2-3 рази перевищують препарати валеріани. З цим ефектом пов'язано пригнічуючу дію препаратів кропиви собачої на ЦНС, регуляторний вплив на ССС з обов'язковим зменшенням ритму серцевих скорочень, з подовженням діастоли з наступнимзниженням артеріального тиску [15]. У клініці нейрогенних кардіоміопатій, неускладнених органічними порушеннями препарати екстрактів кропиви собачої виявляли виражений ефект на 5-6 день їх застосування [17]. Наведені приклади фармакологічних ефектів таурину, екстрактів глоду і трави собачої кропиви свідчать про перспективність застосування запропонованої фармацевтичної композиції для профілактики і лікування метаболічного синдрому та діабетичної нефропатії. У способі профілактики і лікування метаболічного синдрому (МС) і діабетичної нефропатії використовували фармацевтичну композицію X (ФК X) як гранулят, отриманий в Прикладі 6. Спосіб розроблявся за участю самців щурів Вістар вагою 290-300 гр. Вивчення впливу ФК X на розвиток метаболічного синдрому та діабетичної нефропатії проводили з використанням експериментальних моделей метаболічного синдрому та цукрового діабету, які за патогенетичними ознаками максимально наближені до відповідних патологій у людини. Метаболічний синдром, індукований високожировою дієтою. Метаболічний синдром індукували 8 тижневим утриманням тварин на високожировій дієті (ВЖД), в якій білки, вуглеводи, жири становили 4,9; 26,4; 68,8 % відповідно від загальних калорій [18]. 7 UA 101418 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 ФК X застосовували перорально за допомогою зонда у вигляді водної суспензії в дозах 100 або 300 мг таурину на кг маси тіла протягом 8 тижнів, починаючи з першого дня експерименту. Метаболічний синдром, індукований високофруктозною дієтою. Модель метаболічного синдрому викликали у щурів хронічним (протягом двох місяців), згодовуючи тваринам фруктозу з питною водою в концентрації 200 г/л [19]. ФК X застосовували перорально за допомогою зонда у вигляді водної суспензії протягом 8 тижнів, починаючи з першого дня експерименту в дозі 100 мг таурину на кг маси тіла. Модель стрептозотоцинового діабету. Діабет викликали одноразовим введенням стрептозотоцину в дозі 60 мг/кг маси тіла [20]. Через тиждень після індукції діабету тварин з базальною глікемією більш ніж 14 ммоль/л включали в експеримент. ФК X застосовували перорально за допомогою зонда у вигляді водної суспензії в дозах 100 і 300 мг за таурином на кг маси тіла, з першого дня експерименту протягом 8 тижнів. Контрольні групи за аналогічною схемою отримували плацебо (склад плацебо: крохмаль картопляний, магнію стеарат; аеросил). Як препарат порівняння використовували масляний розчин вітаміну Ε (токоферолу ацетат, фірми "Словакофарма») в дозі 50 мг / кг маси тіла. В кінці експерименту стан глюкозного гомеостазу оцінювали за показниками базальної глікемії, глюкозурії, під час внутрішньочеревного тесту толерантності до глюкози (ВБТТГ) (3 г / кг маси тіла) і за рівнем фруктозаміну в сироватці крові [21]. Чутливість до інсуліну визначали за допомогою внутрішньочеревного тесту толерантності до інсуліну (ВБТТІ) (інсулін 0,5 Од / кг, глюкоза 2 г / кг маси тіла через 10 хв після введення інсуліну) [22] та короткого інсулінового тесту (0,5 Од / кг маси тіла) [23]. Вісцеральні ожиріння визначали за масою вісцерального жиру, яку розраховували як суму епігонадального, епінефрального і мезентеріального жиру. Рівень неетерифікованих жирних кислот (НЕЖК) у сироватці крові та гомогенаті печінки оцінювали фотоколориметричним методом [24]. Рівень загального холестерину і тригліцеридів у сироватці крові та гомогенатах печінки і серця визначали спектрофотометричними методами [25, 26]. Біохімічні показники в органах визначали відносно 1 мг білка, який оцінювали за методом Бредфорда [27].]. Інтенсивність оксидативного стресу характеризували за концентрацією церулоплазміну [28] і дієнових кон'югатів (ДК) [29] у сироватці крові, в гомогенаті нирок і серця, а також за змістом малонового діальдегіду (МДА) [30] в гомогенаті нирок і печінки. Стан антиоксидантної системи захисту в печінці і серці оцінювали за вмістом відновленого глутатіону (ВГ) [31], а також за активністю супероксиддисмутази (СОД) [32]. Рівень стабільних метаболітів оксиду азоту (NOx) у сироватці крові визначали за допомогою реактиву Грісса [33]. Стан системи згортання крові визначали за ступенем та швидкістю АДФ-індукованої агрегації тромбоцитів [34]. Мітохондрії серця щурів отримували методом диференційного центрифугування. Дихання мітохондрій визначали полярографічним методом за допомогою закритого кисневого електрода Кларка [35]. Вплив препарату на стан антиоксидантного захисту мітохондріальної системи оцінювали за вмістом відновленого глутатіону [31] в суспензії ізольованих мітохондрій. Інтенсивність вільнорадикального окислення в мітохондріях серця оцінювали за рівнем гідропероксидів ліпідів [36]. При аналізі електрокардіограм (ЕКГ) у трьох стандартних відведеннях від кінцівок враховували такі показники: амплітуда зубців R, Р, S і Т, частота серцевих скорочень (ЧСС), тривалість інтервалів RR, T-Q, QT і комплексу QRS [37]. З метою верифікації мікросудинної патології в нирках щурів зі стрептозотоциновим діабетом проводили гістологічне дослідження за допомогою електронної мікроскопії [38]. Товщину гломерулярної базальної мембрани визначали за методом Hirose et al. [39]. Функціональний стан нирок визначали за показниками добового діурезу, рН сечі, вмістом креатиніну [40] і сечовини [41] в сечі і сироватці крові, а також за рівнем мікроальбумінурії, яку визначали за допомогою ІФА-наборів фірми "Гранум". Статистичний аналіз отриманих результатів виконували методами варіаційної статистики. Для визначення характеру розподілу отриманих результатів дослідження використовували критерій Шапіро-Уілкі. У разі нормального розподілу проводили дисперсійний аналіз ANOVA, для множинного порівняння використовували критерій Н'юмена-Кейлса [42]. Вплив ФК X на розвиток метаболічного синдрому, індукованого високожировою дієтою, у щурів. 8 UA 101418 C2 5 У результаті проведених досліджень встановлено, що застосування ФК X значною мірою гальмує розвиток інсулінорезистентності та інтолерантності до вуглеводів у щурів з МС, індукованим ВЖД. Підтвердженням цьому було суттєве підвищення коефіцієнта чутливості до інсуліну та зменшення площі під глікемічними кривими в порівнянні з показниками для групи, яка отримувала плацебо (табл. 1). Слід зазначити, що ефект ФК X відносно глюкозного гомеостазу не поступався препарату порівняння вітаміну Ε і не посилювався при підвищенні дози препарату до 300 мг / кг маси тіла. Таблиця 1 Вплив ФК X на показники глюкозного гомеостазу у щурів з метаболічним синдромом, індукованим високожирову дієтою, (X Sx, n = 6) Базальна глікемія, Площа під глікемічною кривою, Коефіцієнт чутливості до Група . ммоль/л ммоль / л хв. інсуліну, % Інтактний 5,14±0,51 852,4±48,2 39,4±3,6 контроль ВЖД + 1 1 5,37±0,36 1365,1±89,4 14,0±1,84 плацебо ВЖД + ФК X 2 2 5,60±0,47 994,6±36,8 36,5±1,7 (100мг/кг) ВЖД + ФК X 2 2 5,04±0,45 893,0±15,9 35,1±2,7 (300 мг/кг) ВЖД + Вітамін 2 2 5,22±0,15 922,0±17,9 40,1±3,7 Ε Примітки: 1 - Статистично значущі відмінності у порівнянні з показниками для групи "інтактний контроль", ρ