Препарат пролонгованого вивільнення та спосіб його одержання

1 Препарат пролонгированного высвобождения, содержащий физиологически активный пептид общей формулы 1 R6 - группа формулы -(Cbbjn-Re , где п равно 2 или 1 3, R6 - аминогруппа, которая при необходимости может быть замещена, R7 - остаток D-аминокислоты или остаток азаглицила и Q - водород или низшая алькильная группа, или его соль и биологически разлагающийся полимер, имеющий концевую карбоксильную группу 2 Препарат пролонгированного высвобождения по п 1, где X - С2 7-алканоильная группа, которая может быть произвольно замещена 5- или 6тичленной гетероциклической карбоксамидной группой 3 Препарат пролонгированного высвобождения по п 2, где X - С2 4-алканоильная группа, которая может быть произвольно замещена тетрагидрофурилкарбоксамидной группой 4 Препарат пролонгированного высвобождения по п 1, где X - ацетил 5 Препарат пролонгированного высвобождения по п 1, где биологически разлагающийся полимер представляет смесь (А) сополимера гликолевой кислоты и оксикарбоновой кислоты общей формулы R СН(СН ) ОН, R, ОН, R, X NH СН СО NH СН СО R, NH СН СО N СН СО NH СН СО NH СН СО NH СН СО N — О Н СО R, NH, (D) (D) ' (D) где X - ацильная группа, R-i, F 2 и R4 - ароматическая циклическая группа, ? F 3 - остаток D-аминокислоты или группа формулы ? СЩ -Rg ' I -NH-CH-CO носнсоон где R - алкильная группа из 2 - 8 атомов углерода, и (В) полимолочной кислоты 6 Препарат пролонгированного высвобождения по п 1, где X - ацетил, а биологически разлагающийся полимер представляет смесь (А) сополимера гликолевой и оксикарбоновой кислоты общей формулы R (D) 1 где R3 - гетероциклическая группа, Rs - группа формулы -(Cbbjn-Rs1, где п равно 2 или 3, a R51 - аминогруппа, которая при необходимости может быть замещена ароматической циклической группой или О-гликозильной группой, носнсоон где R - алкильная группа из 2 - 8 атомов углерода, и (В) полимолочной кислоты 7 Препарат пролонгированного высвобождения по п 5, в котором сополимер имеет средневзвешенный молекулярный вес, определенный мето о (О ^ о (О 61046 дом гель-проникающей хроматографии, от приСН2 мерно 2000 до примерно 50000 8 Препарат пролонгированного высвобождения по п 5, в котором показатель дисперсности сопо-МН-СН-COлимера составляет от примерно 1,2 до примерно 4,0 CD) 9 Препарат пролонгированного высвобождения где R3' - гетероциклическая группа, по п 5, в котором средневзвешенный молекулярRs - группа формулы -(Cbbjn-Rs', где п равно 2 или 1 ный вес полимолочной кислоты, определенный 3, a R5 - аминогруппа, которая произвольно может методом гель-проникающей хроматографии, событь замещена ароматической циклической групставляет от примерно 1500 до примерно 30000 пой или О-гликозильной группой, 10 Препарат пролонгированного высвобождения R6 - группа формулы -(Cbbjn-Re', где п равно 2 или 1 по п 5, в котором показатель дисперсности поли3, a R6 - аминогруппа, которая может быть произмолочной кислоты составляет от примерно 1,2 до вольно замещена, примерно 4,0 R7 - остаток D-аминокислоты или остаток азагли11 Препарат пролонгированного высвобождения цила и по п 1, в котором биологически разлагающийся Q - водород или низшая алкильная группа, полимер является сополимером молочной и глиили его соль и биологически разлагающийся поколевой кислот лимер с концевой карбоксильной группой раство12 Препарат пролонгированного высвобождения ряют в растворителе, в основном не смешиваюпо п 11, в котором средневзвешенный молекущемся с водой, а затем удаляют указанный лярный вес сополимера, определенный методом растворитель гель-проникающей хроматографии, составляет от 20 Способ по п 19, в соответствии с которым примерно 5000 до примерно 25000 биологически разлагающийся полимер представ13 Препарат пролонгированного высвобождения ляет смесь (А) сополимера гликолевой кислоты и по п 11, в котором показатель дисперсности сооксикарбоновой кислоты общей формулы полимера составляет от примерно 1,2 до примерR но 4,0 14 Препарат пролонгированного высвобождения по п 1, в котором содержание физиологически активного пептида составляет от примерно 0,01 ноенсоон до примерно 50% мае по отношению к биологичегде R - алкильная группа с числом атомов углероски разлагающемуся полимеру да от 2 до 8, и (В) полимолочной кислоты 15 Препарат пролонгированного высвобождения 21 Способ по п 19, в соответствии с которым X по п 1, в котором физиологически активный пепацетил, а биологически разлагающийся полимер тид является антагонистом LH-RH (рилизингсмесь (А) сополимера гликолевой кислоты и оксифактора лютеинизирующего гормона) карбоновой кислоты общей формулы 16 Препарат пролонгированного высвобождения по п 1, в котором в качестве физиологически акR тивного пептида используют соединение k J— C N C J O 2 3 D C h D P l S r N ey D_ sN )L u L sN p Po D I N 2 O H HC DNI 4 P e 3 a e MTr I y ( c- e y ( i ) r A H I i s a или его ацетат 17 Препарат пролонгированного высвобождения по п 1, в котором в качестве физиологически активного пептида используют соединение NAcD2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-DI_ys(Nic)Leu-l_ys(Nisp)-Pro-DAIaNH2 или его ацетат 18 Препарат пролонгированного высвобождения по п 1, в котором в качестве физиологически активного пептида используют соединение NAcD2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-Tyr-DhArg(Et2)-l_euhArg(Et2)-Pro-DAIaNH2 или его ацетат 19 Способ получения препарата пролонгированного высвобождения, в соответствии с которым физиологически активный пептид общей формулы НОСНСООН где R - алкильная группа с числом атомов углерода от 2 до 8, и (В) полимолочной кислоты 22 Способ по п 19, в соответствии с которым биологически разлагающийся полимер является сополимером молочной и гликолевой кислот 23 Способ по п 19, в соответствии с которым биологически разлагающийся полимер и в основном нерастворимый в воде физиологически активный пептид растворяют в растворителе, в основном несмешивающемся с водой, и вводят полученный раствор в водную среду, чтобы получить масляно-водную эмульсию 24 Способ получения препарата пролонгированСН(СН,) ного высвобождения, в соответствии с которым биологически разлагающийся полимер, представCH,R CH,R СИ, C , , C , , CO HR HR H H г 6 2 ляющий смесь (А) сополимера гликолевой кислоX N C CN J,HHCH RI N C C N CГ C N I C CI N C C N— CH-COR, H H OH CN I O C ' -H | H H O H H O I H H NH, ты и оксикарбоновой кислоты общей формулы C O O O () D 2 S A R () D где X - ацильная группа, каждый из R|, R2 и R4 - ароматическая циклическая группа, R3 - остаток D-аминокислоты или группа формулы R НОСНСООН где R - алкильная группа с числом атомов углерода от 2 до 8, и (В) полимолочной кислоты, и в основном нерастворимый в воде физиологически активный пептид или его соль растворяют в растворителе, в основном несмешивающимся с водой, а затем удаляют указанный растворитель 25 Способ по п 24, в соответствии с которым после растворения биологически разлагающегося полимера и в основном нерастворимого в воде физиологически активного пептида или его соли в растворителе, в основном несмешивающемся с водой, дополнительно вводят этот раствор в водную среду, получая масляно-водную эмульсию 26 Способ получения микрокапсул, являющихся препаратом пролонгированного высвобождения лейпрорелина, включающий Настоящее изобретение относится к препаратам пролонгированного высвобождения, содержащим активный пептид, и способам их получения Известный уровень техники представлен, например, препаратом пролонгированного высвобождения, раскрытом в описании к европейскому патенту ЕР-А-481732 и содержащем лекарственное средство, полимолочную кислоту и сополимер гликолевой и гидроксикарбоновой кислот [НОСН (Сг 8 алкил) СООН] Приведенный способ предусматривает приготовление эмульсии типа "вода/масло", состоящей из внутренней водной фазы, содержащей водный раствор физиологически активного пептида, и внешней масляной фазы, содержащей раствор биологически разлагаемого полимера в органическом растворителе, введение указанной эмульсии типа "вода/масло" в воду или водную среду и переработку полученной эмульсии "вода/масло/вода" в микрокапсулы пролонгированного высвобождения (способ сушки в воде) В японской выложенной заявке на патент 118512/1982 описывается микрокапсула, содержащая гормонально активный полипептид, биологически разлагаемый полимер и агент регулирования гидролиза полимера Способ предложенный для ее получения предусматривает использование процесса коацервации, а именно введение агента коацервации в эмульсию типа "вода/масло", содержащую водный раствор полипептида в качестве внутренней водной фазы и галоидзамещенный органический растворитель в качестве масляной фазы, что позволяет получить микрокапсулы В японской выложенной заявке на патент 121222/1989 описывается фармацевтический состав, содержащий полиактид, полигликолид, сополимер молочной и гликолевой кислот или смесь этих полимеров и нерастворимый в воде пептид Также приведен способ его получения, в соответствии с которым соль нерастворимого в воде пептида диспергируют в растворе вышеупомянутых полилактида, полигликолида, сополимера молочной и гликолевой кислот или смеси этих полимеров, удаляют растворитель путем испарения и формуют из полученной смеси твердые частицы 61046 (а) растворение или суспендирование лейпрорелина в растворе органического растворителя биологически разлагающегося полимера, содержащего сополимер молочной кислоты и гликолевой кислоты, (б) добавление этой смеси в водную среду для получения масляно-водной эмульсии, (в) преобразование этой эмульсии в микрокапсулы путем удаления органического растворителя 27 Способ по п 26, в котором лейпрорелин представлен в виде ацетата лейпрорелина 28 Способ по п 26, в котором водная среда на этапе (б) является раствором поливинилового спирта в воде 29 Микрокапсула, полученная по способу в соответствии с п 26 В японской выложенной заявке на патент 1506091/1982 описывается способ получения фармацевтического состава, содержащего полилактид и кислостойкий полипептид, который, например предусматривает растворение хлористоводородного тетрагастрина и полилактида в водном растворе диоксана, отливку из полученного раствора пленки и испарение растворителя В описании к европейскому патенту ЕР-А0467389 излагается технология обеспечения системы доставки белков и полипептидов с использованием метода осаждения или метода микросфер Однако в вышеуказанных источниках не описывается система, относящаяся именно к производным LH-RH (рилизинг-фактора лютеинизирующего гормона) Рилизинг-фактор лютеинизирующего гормона, также обозначаемый сокращением LH-RH (или GnRH), вырабатывается гипоталамусом и воздействует на рецепторы гипофиза Лютеинизирующий гормон (LH) и фолликулостимулин (FSH), которые высвобождаются в результате указанного воздействия, воздействуют, в свою очередь, на половую железу, заставляя ее синтезировать стероидные гормоны Известны производные LH-RH, являющиеся агонистическими или антагонистическими пептидами При многократном применении пептида с ярко выраженным агонистическим действием уменьшается число имеющихся рецепторов, так что подавляется синтезирование половой железой стероидных гормонов Поэтому предполагается, что производные рилизинг-фактора лютеинизирующего гормона LH-RH являются ценными терапевтическими средствами лечения гормонально зависимых болезней таких, как рак простаты, доброкачественная простатомегалия, миома матки, метрофиброма, преждевременное половое созревание, рак молочной железы и т п , а также противозачаточными средствами В этой связи, для антагонистов LH-RH так называемых первого и второго поколений отмечают проблему выброса гистамина (ж Pharmaceuticals Monthly 32, стр 1599-1605, 1990 г), однако в настоящее время синтезировано множество новых соединений и 61046 8 ния по вышеприведенному пункту 2, в котором X представляет алканоиловую группу С24, которая при желании может быть замещена тетрагидрофурилкарбоксамидной группой 4) Препарат пролонгированного высвобождения по вышеприведенному пункту 1, в котором X представляет ацетил 5) Препарат пролонгированного высвобождения по вышеприведенному пункту 1, в котором биологически разлагающийся полимер представляет смесь (А) сополимера гликолевой и оксикарбоновой кислоты общей формулы R I (II) ноенсоон где R представляет алкильную группу из 2 - 8 В особенности, когда мы имеем дело с препаатомов углерода, и (В) полимолочной кислоты ратом пролонгированного высвобождения (напри6) Препарат пролонгированного высвобождемер, в течение 1-3 месяцев), процесс высвобожния по вышеприведенному пункту 1, в котором X дения пептида должен быть постоянным и ярко является ацетилом, а биологически разлагающийвыраженным, так чтобы можно было добиться ся полимер представляет смесь (А) сополимера требуемой эффективности при большей предскагликолевой и оксикарбоновой кислоты общей фозуемости и безопасности рмулы Одновременно давно существует потребность R в способе получения препарата пролонгированно(II) го высвобождения с высоким уровнем улавливания физиологически активного пептида, в частноноенсоон сти пептидов-антагонистов LH-RH где R - алкильная группа из 2 - 8 атомов углерода, и (В) полимолочной кислоты В соответствии с настоящим изобретением предлагается 7) Препарат пролонгированного высвобождения по вышеописанному пункту 5, где сополимер 1) Препарат пролонгированного высвобождеимеет средневзвешенный молекулярный вес, опния, содержащий физиологически активный пепределенный методом гель-проникающей хроматотид с обобщенной формулой графии, порядка 2000 - 50000 ds, 8) Препарат пролонгированного высвобождесн,-ов (I) x sa-сн со Ni-ceco-i NcB ния по вышеприведенному пункту 5, в котором iici( С) Й (!) (В) показатель дисперсности сополимера составляет где X представляет ацильную группу, порядка 1,2 - 4,0 R-i, R2 и R4 представляют ароматическую цик9) Препарат пролонгированного высвобожделическую группу, ния по вышеприведенному пункту 5, в котором R3 представляет остаток D-аминокислоты или средневзвешенный молекулярный вес полимогруппу с формулой лочной кислоты, определенный с использованием метода гель-проникающей хроматографии, составляет порядка 1500 - 30000 10) Препарат пролонгированного высвобож-NH-CH-COдения по вышеприведенному пункту 5, в котором C) D показатель дисперсности полимолочной кислоты где R31 - это гетероциклическая группа, составляет порядка 1,2 - 4,0 Rs представляет группу формулы -( 11) Препарат пролонгированного высвобожгде п равняется 2 или 3, a Rs' является аминодения по вышеприведенному пункту 1, в котором группой, которая при необходимости может быть биологически разлагающийся полимер является замещена ароматической циклической группой сополимером молочной и гликолевой кислот или О-гликозиловой группой, R6 представляет группу с формулой -(Cbbjn12) Препарат пролонгированного высвобожR61, где п составляет 2 или 3, R61 - аминогруппа, дения по вышеприведенному пункту 11, в котором которая при необходимости может быть замещесредневзвешенный молекулярный вес сополимена, R7 представляет остаток D-аминокислоты или ра, определенный методом гель-проникающей остаток азаглицила, и Q представляет водород, хроматографии, составляет порядка 5000 - 25000 или алкильную группу низшего порядка, или ее 13) Препарат пролонгированного высвобожсоль и биологически разлагающийся полимер с дения по вышеприведенному пункту 11, в котором концевой карбоксильной группой показатель дисперсности сополимера составляет 2) Препарат пролонгированного высвобождепорядка 1,2 - 4,0 ния по вышеприведенному пункту 1, в котором X 14) Препарат пролонгированного высвобожэто алканоиловая группа C-z 7, которая может быть дения по вышеприведенному пункту 1, в котором произвольно замещена 5-ти- или 6-ти-членной содержание физиологически активного пептида гетероциклической карбоксамидной группой (по весу) составляет порядка 0,01 - 50%, по отношению к биологически разлагающемуся полимеру 3) Препарат пролонгированного высвобождеполучены антагонистические пептиды LH-RH, не обладающие заметным эффектом выброса гистамина (например, см патент США №5110904) Для того, чтобы упомянутый антагонистический пептид LH-RH смог оказать свое фармакологическое воздействие, требуется обеспечить систему его контролируемого высвобождения, так чтобы добиться длительного эффективного подавления воздействия эндогенного рилизинг-фактора лютеинизирующего гормона Более того, из-за эффекта высвобождения гистамина, которое может быть мало, но все же существует для таких пептидов, существует потребность в препарате с пролонгированным его высвобождением, характеризующемся подавлением первоначального резкого выброса вслед за введением препарата : J 61046 15) Препарат пролонгированного высвобождения по вышеприведенному пункту 1, в котором физиологически активный пептид является антагонистом LH-RH (рилизинг-фактора лютеинизирующего гормона) 16) Препарат пролонгированного высвобождения по вышеприведенному пункту 1, в котором в качестве физиологически активного пептида используется соединение CONHCH2COD2Nal-D4CIPhe-D3Pal SerNMeTyr-DLys(Nic)-Leu-Lys(Nisp)-Pro-DAIaNH2 или его ацетат 17) Препарат пролонгированного высвобождения по вышеприведенному пункту 1, в котором в качестве физиологически активного пептида используется соединение NAcD2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMeTyrDLys(Nic)-Leu-Lys(Nisp)-Pro-DAIaNH2 или его ацетат 18) Препарат пролонгированного высвобождения по вышеприведенному пункту 1, в котором в качестве физиологически активного пептида используется соединение NAcD2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-Tyr-DhArg(Et2)Leu-hArg(Et2)-Pro-DAIaNH2 или его ацетат 19) Способ получения препарата пролонгированного высвобождения, в соответствии с которым физиологически активный пептид с обобщенной формулой CSr-h Cfij-8: CVS, I < w сз, (І) где X представляет ацильную группу, каждое из соединений Ri, R2, и R4 представляют ароматическую циклическую группу, R3 представляет остаток D-аминокислоты или группу с формулой сн г -щ • -NH-CH-CO(0) где R3' - гетероциклическая группа, Rs представляет группу с формулой -(СН2)ПR5', где п равняется 2 или 3, a Rs' является аминогруппой, которая произвольно может быть замещена, ароматической циклической группой или 0гликозиловой группой, R6 представляет группу с формулой -(СН2)ПR61, где п равняется 2 или 3, a R61 - аминогруппа, которая может быть произвольно замещена, R7 представляет остаток D-аминокислоты или остаток азаглицила, и Q представляет водород, или алкильную группу низшего порядка, или ее соль, и биологически разлагающийся полимер с концевой карбоксильной группой растворяют в растворителе, в основном не смешивающемся с водой, а затем удаляют указанный растворитель 20) Способ по вышеприведенному пункту 19, в соответствии с которым биологически разлагающийся полимер является смесью (А) сополимера гликолевой и оксикарбоновой кислоты общей формулы R (II) носнсоон 10 где R представляет алкильную группу с числом атомов углерода от 2 до 8, и (В) полимолочной кислоты 21) Способ по вышеприведенному пункту 19, в соответствии с которым X является ацетилом, а биологически разлагающийся полимер - смесью (А) сополимера гликолевой и оксикарбоновой кислоты общей формулы R I (И) НОСНСООН где R представляет алкильную группу с числом атомов углерода от 2 до 8, и (В) полимолочной кислоты 22) Способ по вышеприведенному пункту 19, в соответствии с которым биологически разлагающийся полимер является сополимером молочной и гликолевой кислот 23) Способ по вышеприведенному пункту 19, в соответствии с которым биологически разлагающийся полимер и в основном нерастворимый в воде физиологически активный пептид растворяют в растворителе, в основном не перемешивающемся с водой, и вводят полученный раствор в водную среду, получая масляно-водяную эмульсию (М/В) 24) Способ получения препарата пролонгированного высвобождения, в соответствии с которым биологически разлагающийся полимер, представляющий смесь (А) сополимера гликолевой и оксикарбоновой кислоты общей формулы R ! (И) носнсоон где R представляет алкильную группу с числом атомов углерода от 2 до 8 и (В) полимолочной кислоты, и в основном нерастворимый в воде физиологически активный пептид или его соль растворяют в растворителе, в основном не перемешивающемся с водой, а затем удаляют указанный растворитель 25) Способ по вышеприведенному пункту 24, в соответствии с которым после растворения биологически разлагающегося полимера и в основном нерастворимого в воде физиологически активного пептида или его соли в растворителе, в основном не перемешивающемся с водой, дополнительно вводят полученный раствор в водную среду, получая эмульсию типа "масло/вода" Сокращения, используемые в описании имеют следующие значения NAcD2Nal І\І-ацетил-О-3-(2-нафтил)аланил D4CIPhe О-3-(4-хлорфенил)аланил D3Pal О-3-(3-пиридил)аланил NmeTyr N-метилтиросил DLys(Nic) О-(ипсилон-І\І-никотиноил)лизил Lys(Ni sp) (ипсилон-І\І-изопропил)лизил DLys(AzaglyNic) О-[І-аза-(І\І-никотиноил)глицил]лизил DLys(AzaglyFur) О-[І-аза-(ІЧ-2-фуроил)глицил]лизил В тех случаях, когда какие-либо другие аминокислоты обозначаются сокращениями, используются сокращения, рекомендуемые Комитетом Международного биохимического союза - Между 12 11 61046 народного союза чистой и прикладной химии группы Предпочтительно использовать аромати(IUPAC-IUB) по биохимическим обозначениям ческие циклические группы с числом атомов угле(European Journal of Biochem (Европейский журнал рода от 6 до 10 такие, как фенил и нафтил У этих биохимии) 138, стр 9 - 37, 1984 г), или общеупотароматических циклических групп может быть от 1 ребимые в данной области сокращения Если для до 5, а предпочтительно от 1 до 3, подходящих какого-либо соединения существуют оптические замещающих групп для соответствующих позиций изомеры, подразумеваются L-изомеры, если не в кольце К таким замещающим группам относятся указано иное гидроксил, галоген, аминотриазолил-замещенная аминогруппа, алкокси и т п Предпочтительными Пептид (I), соответствующий настоящему изоявляются гидроксил, галоген и аминотриазолилбретению, характеризуется антагонистическим замещенная аминогруппа действием по отношению к рилизинг-фактору лютеинизирующего гормона (LH-RH) и эффективен в К вышеупомянутым галогенам относятся качестве лекарства для лечения гормонально зафтор, хлор, бром и йод висимых болезней таких, как рак простаты, прос Аминотриазолиловую часть указанной амитатомегалия, эндометриоз, миома матки, метронотриазолил-замещенной аминогруппы представфиброма, преждевременное половое созревание, ляют, например, 3-амин-1Н-1,2,4-триазол-5-ил, 5рак молочной железы и т д , а также в качестве амин-1 Н-1,3,4-триазол-2-ил, 5-амин-1 Н-1,2,4противозачаточного средства триазол-3-ил, 3-амин-2Н-1,2,4-триазол-5-ил, 4амин-1 Н-1,2,3-триазол-5-ил, 4-амин-2Н-1,2, 3Обратимся к обобщенной формуле (I) Ацилотриазол-5-ил и т п вую группу X предпочтительно получают из карбоновой кислоты В числе примеров ациловой групАлкокси-группой предпочтительно является пы можно привести алканоил C-z 7,циклоалкеноил алкокси-группа с числом атомов углерода от 1 до Cj is (например, циклогексеноил), алкилкарбамоил 6 (например, метокси, этокси, пропокси, изопроСі є (например, этилкарбамоил), пяти или шестипокси, бутокси, изобутокси и т п ) членный гетероциклический карбонил (например, В наиболее предпочтительном варианте Ri пиперидинокарбонил) и карбамоиловую группу, нафтил или галофенил В наиболее предпочтикоторая при желании может быть замещена В тельном варианте R2 - галофенил В наиболее качестве ациловой группы предпочтительно испредпочтительном варианте R4 - гидроксифенил пользовать алканоиловую группу C-z і (например, или аминотриазолиламино-замещенный фенил ацетил, пропионил, бутирил, изобутирил, пентаОстаток D-аминокислоты R3 предпочтительно ноил, гексаноил, гептаноил), которая может быть является остатком а-Оаминокислоты с числом по желанию замещена, и более предпочтительно атомов углерода от 3 до 12 Примерами таких алканоиловую группу С24 (например, ацетил, проаминокислот служат лейцин, изолейцин, норлейпионил, бутирил, изобутирил), которая по желацин, валин, норвалин, 2-аминомасляная кислота, нию может быть замещена В качестве замещаюфенилалин, серии, треонин, метионин, ала-нин, щих групп могут, например, использоваться триптофан и аминоизомасляная кислота Эти алкиламиногруппа Сі є (например, метил-амино, аминокислоты могут включать подходящие заэтиламино, диэтиламино, пропиламино), алканоищитные группы (в данной области используются ламиногруппа Сі з (например, формиламино, ацетакие защитные группы, как t-бутил, t-бутокси, tтиламино, пропиониламино), циклоалкеноиламибутоксикарбонил и т п ) ногруппа Cj is (например, циклогексеноиламино), Гетероциклическая группа R31 охватывает пяарилкарбониламиног-руппа С7 is (например, бенти- или шестичленные гетероциклические группы, зоиламино), пяти- или шестичленная гетероциккаждая из которых содержит от 1 до 2 атомов азолическая карбоксамидогруппа (например, тетрата или серы в качестве гетероатомов, которые при гидрофурилкарбоксамидо, пиридилкарбоксамидо, желании могут быть введены в бензольное кольфурилкарбоксамидо), гидроксильная группа, карцо В частности, здесь можно указать тиенил, пирбамоиловая группа, формиловая группа, карбокролил, тиазолил, изотиазолил, имидазолил, пирасильная группа, пяти- или шестичленная гетерозол ил, пиридил, 3-пиридил, пиридазинил, циклическая карбоксамидогруппа (например, пиримидинил, пиразинил, 3-бенз/Ь/-тиенил, 3тетрагидрофурилкарбоксамидо, пиридилкарбокбенз/Ь/3-тиенил, индолил, 2-индолил, изоиндолил, самидо, фурилкарбоксамидо) 1Н-инда-золил, бензоимидазолил, бензотиазолил, хинолил, изохинолил и другие группы Особенно X -предпочтительно алканоиловая группа C-z 7, предпочтительными для R3' являются пиридил и которая по желанию может быть замещена пятиЗ-бенз/Ьл^енил или шестичленной карбоксамидогруппой Более предпочтительно, X - алканоиловая В качестве ароматической циклической группы группа С2 4, которая по желанию может быть заRs можно использовать ароматическую цикличемещена тетрагидрофурилкарбоксамидо группой В скую группу, аналогичную Ri, R2 или R4 Указанная качестве конкретных примеров X можно привести ароматическая циклическая группа может иметь в ацетил, соответствующих позициях кольца от 1 до 5, предпочтительно от 1 до 3, подходящих замеCONHCH2CO- (тетрагидрофурилкарбоксамищающих групп Замещающие группы могут быть доацетил) и т п те же, что и замещающие группы, указанные для Ароматическая циклическая группа Ri, R2 или R-і, R2, и R4 Особенно предпочтительным варианR4 может быть, например, ароматической циклитом замещающей группы является аминотриазоческой группой с числом атомов углерода от 6 до лил-замещенная аминогруппа 12 Примерами ароматической циклической группы являются фенил, нафтил, антрил и другие Гликозиловая группа, применяемая в качестве 13 61046 О-гликозила Rs, предпочтительно является гексозой или ее производной Гексоза охватывает Dглюкозу, D-фруктозу, D-маннозу, D-галактозу, Lгалактозу и т п В качестве указанной производной можно использовать дезоксиса-хара (L- и Dфукозу, D-хиновозу, L-рамнозу и т п) и аминосахара (D-глюкозамин, D-галактозамин и т д ) Все же наиболее предпочтительным вариантом является L-рамноза В качестве заместителя аминогруппы, которая по желанию может быть замещена, Rs', можно, например, использовать ацил, карбамоил, карбазоил, который может быть замещен ацилом или амидиногруппой, которая, в свою очередь, может быть моно- и дизамещена алкилом Вышеупомянутый ацил и ацил, замещающий вышеупомянутый карбазоил, охватывает никотиноил, фуроил, теноил и т п Алкильную часть моно- или диалкиламидиногруппы, упомянутой выше, представляют алкильные группы с прямой и разветвленной цепью с числом атомов углерода от 1 до 4, то есть метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, вторбутил, трет-бутил и т п Здесь предпочтительным алкилом является метил или этил В качестве заместителя аминогруппы, которая по желанию может быть замещена, R61, используют, например, алкил и амидиногруппу, которая может быть моно- и дизамещена алкилом Вышеупомянутый алкил и алкил моно- и диалкиламидиногруппы, упомянутой выше, охватывает алкильные группы, указанные для Rs' Остаток D-аминокислоты R7 предпочтительно является остатком D-аминокислоты с числом атомов углерода от 3 до 9 таким, как D-аланил, Dлейцил, D-валил, D-изолейцил, D-фениланил и т п Предпочтительным вариантом являются остатки D-аминокислоты с числом атомов углерода от 3 до 6 такие, как D-аланил, D-валил и т п Наиболее предпочтительным вариантом для R7 является D-аланил В качестве алкильной группы низшего порядка можно использовать алкильную группу Rs' Наиболее предпочтительным вариантом Q является метил Конкретными примерами Ri являются и аналогичные группы Конкретными примерами R2 являются и аналогичные группы. Конкретными примерами R3 являются СЙ-Сб" • і -НЯ-СН-СО и аналогичные группы. C) D Конкретными примерами R4 являются и аналогичные группы. Конкретными примерами Rs являются 14 - , В -NH-K-CGи аналогичные группы. Если пептид (I) включает 1 или большее число асимметрических атомов углерода, существует два или большее число стереоизомеров Любой из таких стереоизомеров, а также их смесь охватываются настоящим изобретением Пептид с обобщенной формулой (I) можно получить одним из известных способов Типичные упомянутые способы описаны в патенте США №5110904 Пептид (I) можно использовать в форме соли, предпочтительно соли, приемлемой с точки зрения фармакологии Если пептид включает основные группы, например, аминогруппы, такой солью могут быть соли неорганических кислот (например, хлористоводородной кислоты, серной кислоты, азотной кислоты и т п) или органических кислот (например, угольной кислоты, угол ьноводород ной кислоты, янтарной кислоты, уксусной кислоты, пропионовой кислоты, трифторуксусной кислоты и т п) Если пептид включает кислотные группы, например карбоксил, такой солью могут быть соли неорганических оснований (например, щелочных металлов таких, как натрий, калий и т п , и щелочно-земельных металлов таких, как кальций, магний и т п ) или органических оснований (например, органических аминов таких, как триэтиламин, и основных аминокислот таких, как аргинин) Пептид (I) может быть в виде комплексного соединения металла (например, комплекса меди, комплекса цинка и т п ) Предпочтительными солями пептида (I) являются соли органических кислот (например, угольной кислоты, угол ьноводород ной кислоты, янтарной кислоты, уксусной кислоты, пропионовой кислоты, трифторуксусной кислоты и т п) Наиболее предпочтительной солью является ацетат Особенно предпочтительными вариантами 16 15 61046 пептида (I) или его соли являются следующие канием кольца, среднечисловой молекулярный (1) NAcD2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMeTyrвес, полученный методом концевых групп, значиDI_ys(Nic)-l_eu-l_ys(Nisp)-Pro-DalaNH2 или его ацетельно превышает среднечисловой молекулярный тат, вес, полученный с использованием метода гель(2) NAcD2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMeTyrпроникающей хроматографии Благодаря указанDLys(AzaglyNic)-Leu-Lys(Nisp)-Pro-DAIaNH2 или его ной разнице полимер с концевой карбоксильной ацетат, группой можно легко отличить от полимера, у которого нет концевой карбоксильной группы Таким (3) NAcD2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMeTyrобразом, термин "биологически разлагающийся DI_ys(AzaglyFur)-l_eu-l_ys(Nisp)-Pro-DalaNH2 или его полимер, имеющий концевую карбоксильную ацетат, группу" здесь означает биологически разлагаю(4) CONHCH2COD2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Serщийся полимер, характеризующийся практическим NMeTyr-DLys(Nic)-Leu-Lys(Nisp)-Pro-DAIaNH2 или совпадением значений среднечислового молекуего ацетат, лярного веса, определенного методом гельпрони(5) NAcD2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-Tyrкающей хроматографии, и среднечислового молеDhArg(Et2)-Leu-hArg(Et2)-Pro-DalaNH2 или его ацекулярного веса, определенного методом концевых тат групп В препарате пролонгированного высвобождения содержание пептида (I) может варьировать в В то время как среднечисловой молекулярный зависимости от типа пептида, ожидаемого фармавес, определенный методом концевых групп, явкологического действия и продолжительности этоляется абсолютной величиной, среднечисловой го действия и некоторых других факторов Оно молекулярный вес, определенный методом гельможет быть в диапазоне от 0,01 до 50% (по весу), проникающей хроматографии является относипо отношению к биологически разлагающемуся тельной величиной, которая варьирует в зависиполимеру Предпочтительный диапазон составлямости от условий осуществления анализа и проет где-то от 0,1 до 40% (по весу), а наиболее цедур (например, от типов подвижной фазыи предпочтительный диапазон составляет где-то от колонки, эталонного вещества, выбранной шири1 до 30% (по весу) ны среза, выбранной базовой линии и т п) Поэтому в общем случае указанные две величины Ниже будет описан биологически разлагаемый численно не коррелируются Когда мы говорим о полимерс концевой карбоксильной группой "практическом совпадении" величин среднечислоБиологически разлагающийся полимер, в кового молекулярного веса, определенного методом личестве от 1 до Зг, был растворен в смеси ацегель-проникающей хроматографии, и среднетона (25мл) и метилового спирта (5мл), а затем с числового молекулярного веса, определенного использованием фенолфталеина в качестве индиметодом концевых групп, мы имеем в виду, что катора в растворе были быстро протитрованы среднечисловой молекулярный вес, определенкарбоксильные группы посредством 0,05 норный методом концевых групп, составляет где-то от мального спиртового раствора гидроокиси калия в 0,4 до 2, более предпочтительно от 0,5 до 2 и условиях перемешивания при комнатной темперанаиболее предпочтительно от 0,8 до 1,5 среднетуре (20°С) Затем с применением ниже привечислового молекулярного веса, определенного денного уравнения был подсчитан среднечислометодом гель-проникающей хроматографии Когда вой молекулярный вес, найденный по методу мы выше говорим "значительно больше", мы имеконцевых групп ем в виду, что среднечисловой молекулярный вес, Среднечисловой молекулярный вес, найденопределенный методом концевых групп, где-то в 2 ный по методу или большее число раз больше молекулярного концевых групп = 20000*А/В веса, определенного методом гель-проникающей где А - масса биологически разлагающегося хроматографии полимера (г), а В - количество 0,05 нормального спиртового Предпочтительным полимером для целей нараствора гидроокиси калия (мл), добавленного до стоящего изобретения является полимер, харакмомента завершения титрования теризующийся практическим совпадением значений среднечислового молекулярного веса, Результат вышеописанного расчета называопределенного методом гель-проникающей хроется среднечисловым молекулярным весом, опматографии, и среднечислового молекулярного ределенным по методу концевых групп веса, определенного методом концевых групп Для иллюстрации рассмотрим полимер с концевой карбоксильной группой, полученный из одВ качестве конкретных примеров биологиченой или большего числа а-оксикислот, например, ски разлагающегося полимера, имеющего концес использованием некаталитического безводного вую карбоксильную группу, можно упомянуть попроцесса поликонденсации Его среднечисловой лимеры и сополимеры, а также их смеси, молекулярный вес, определенный методом консинтезированные из одной или большего числа ацевых групп, приблизительно равен его среднечиоксикислот (например, гликолевой кислоты, мословому молекулярному весу, найденному с ислочной кислоты, оксимасляной кислоты и т д), пользованием метода гель-проникающей оксикарбоновых кислот (например, яблочной кихроматографии В отличие от этого, в случае послоты и т п ), окситрикарбоновых кислот (наприлимера, практически не включающего свободных мер, лимонной кислоты и т п ) и других аналогичконцевых карбоксильных групп и, например, синных кислот с использованием некаталитической тезированного из циклического димера с испольдегидратационной реакции поликонденсации, из зованием полимеризационного процесса с размысложных эфиров поли-а-цианакриловой кислоты, 18 17 61046 Оксикарбоновые кислоты общей формулы (II) из полиаминокислот (например, поли-у-бензил-Lможно использовать как в отдельности, так и вмеглутаминовой кислоты и т п ) из сополимеров масте леиновых ангидридов (например, сополимера стирола и малеиновой кислоты и т п ) и из других Предпочтительны следующие соотношения соединений гликолевои кислоты и оксикарбоновои кислоты (II) в указанном сополимере (А) гликолевои кислоты Полимеризация может быть статистической, где-то от 10 до 75 моль % (% молярного веса) глиблочной или привитой В том случае, если любая колевои кислоты, остальное - оксикарбоновая кииз вышеупомянутых а-оксикислот, оксикарбонослота В более предпочтительном варианте соповых кислот и окситрикарбоновых кислот имеет в лимер состоит из 20 - 75 моль % гликолевои молекуле центр оптической активности, можно кислоты, а остальная его часть - оксикарбоновая использовать любую из полученных D-, L-, и DLкислота В наиболее предпочтительном варианте форм сополимер включает порядка от 40 до 70 моль % Биологически разлагающийся полимер, имегликолевои кислоты, остальное - оксикарбоновая ющий концевую карбоксильную группу, - это предкислота Средневзешенный молекулярный вес почтительно биологически разлагающийся полиуказанного сополимера гликолевои кислоты может мер, представляющий смесь (А) сополимера варьировать от 2000 до 50000 Предпочтительный гликолевои и оксикарбоновои кислот с общей фодиапазон порядка от 3000 до 40000 Более предрмулой почтительный диапазон где-то от 8000 до 30000 R Показатель дисперсности (средневзвешенный молекулярный вес / среднечисловой молекулярі (II) ный вес) предпочтительно находится в диапазоне НОСНСООН где-то от 1,2 до 4,0 Особенно предпочтительны где R - алкильная группа с числом атомов угсополимеры с показателями дисперсности где-то лерода от 2 до 8, и (В) полимолочной кислоты или от 1,5 до 3,5 сополимера молочной и гликолевои кислот Обратимся к общей формуле (II) ОбозначаеСополимер гликолевои кислоты (А) может мая R, алкильная группа с прямой или разветвбыть синтезирован одним из известных способов, ленной цепью и числом атомов углерода от 2 до 8, например с использованием способа, изложенного в том числе, включая этил, пропил, изопропил, в описании японской выложенной заявки на пабутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, тент № 28521/1986 изопентил, неопентил, трет-пентил, 1-этилпропил, Полимолочная кислота, используемая в нагексил, изогексил, 1,1-диметилбутил, 2,2стоящем изобретении может быть любым из L- и диметилбутил, 3,3-д и метил бутил и 2-этилбутил D-соединений или их смесью Предпочтительны Среди них предпочтительными являются алкилы с соединения с отношением D-/L- (в моль %) в диапрямой или разветвленной цепью с числом атопазоне порядка где-то 75/25- 20/80 В более предмов углерода от 2 до 5 В частности, предпочтипочтительном варианте отношение D-/L- для потельными алкильными группами являются этил, лимолочной кислоты (в моль %) находится в пропил, изопропил, бутил и изобутил Наиболее диапазоне от где-то 60/40 до 25/75 В самом предпредпочтительным вариантом для R является почтительном варианте отношение О-/І_-для поэтил лимолочной кислоты (в моль %) составляет где-то от 55/45 до 25/75 Средневзвешенный молекулярОксикарбоновая кислота общей формулы (II), ный вес полимолочной кислоты предпочтительно в том числе, охватывает 2-оксимасляную кислоту, находится в диапазоне от где-то 1500 до где-то 2-оксивалериановую кислоту, 2-окси-З30000 и более предпочтительно - в диапазоне от метилмасляную кислоту, 2-оксикапроновую кислогде-то 3000 до где-то 15000 Показатель дисперсту, 2-оксиизокапроновую кислоту и 2ности полимолочной кислоты предпочтительно оксикапроновую кислоту Наиболее предпочтинаходится в диапазоне от где-то 1,2 до где-то 4,0 тельным вариантом оксикарбоновои кислоты оби более предпочтительно - в диапазоне от где-то щей формулы (II) является 2-о кс и масляная кисло1,5 до где-то 3,5 та Поскольку указанные оксикарбоновые кислоты могут быть любыми D-, L- и D.L-соединениями, Полимолочная кислота может быть синтезиотношение D-/L- (моль %) предпочтительно нахорована двумя известными альтернативными сподится в диапазоне где-то от 75/25 до 25/75 собами, а именно способом, предусматривающим Более предпочтительно используется оксиполимеризацию лактида с размыканием кольца, карбоновая кислота с отношением D-/L (моль %), который (лактид) является димером молочной находящимся в диапазоне где-то от 60/40 до кислоты, и способом, предусматривающим дегид40/60 Наиболее предпочтительным вариантом рационную поликонденсацию молочной кислоты является оксикарбоновая кислота с отношением Для производства полимолочной кислоты со D-/L- (моль %), находящимся в диапазоне где-то сравнительно небольшим молекулярным весом, от 55/45 до 45/55 подходящей для целей настоящего изобретения, предпочтителен способ, предусматривающий, Рассмотрим сополимер гликолевои и вышепрямую дегидратационную поликонденсацию моуказанной оксикарбоновои кислоты с общей форлочной кислоты Этот способ, например, описан в мулой (II) (ниже называемой сополимером гликояпонской выложенной заявке на патент левои кислоты) Сополимеризация может быть №28521/1986 статистической, блочной или привитого типа Предпочтительными являются статистические В фармацевтике для осуществления настоясополимеры щего изобретения сополимер гликолевои кислоты 20 19 61046 (А) и полимолочная кислота (В) используются при молекулярный вес Для обеспечения препарата отношении (А)/(В) (по весу) от где-то 10/90 до гдепролонгированного высвобождения (например, от то 90/10 Предпочтительное отношение ингреди1 до 4 месяцев) предпочтительно использовать ентов смеси от где-то 20/80 до где-то 80/20 В сополимер молочной и гликолевой кислот с отнонаиболее предпочтительном варианте это отношением полимеризации, находящимся в указаншение составляет от где-то 30/70 до где-то 70/30 ном диапазоне, и со средневзвешенным молекуЕсли содержание либо (А), либо (В) слишком велярным весом, находящимся в указанном лико, полученный конечный препарат будет хадиапазоне В случае сополимера молочной и глирактеризоваться картиной высвобождения лекарколевой кислот со скоростью разложения, превосственного средства, не слишком отличающейся от ходящей скорость, характерную для вышеуказанкартины, получаемой при использовании только ных диапазонов отношений полимеризации и одного соединения (А) или (В), то есть не удастся средневзвешенных молекулярных весов, трудно обеспечить линейный характер высвобождения на контролировать первоначальный резкий выброс последней его стадии, обеспечиваемый смесью С другой стороны, в случае сополимера молочной Скорости разложения и удаления сополимера и гликолевой кислот, имеющего меньшую скорость гликолевой кислоты и полимолочной кислоты разразложения, чем скорость, характерная для укаличаются в значительной степени ввиду разницы занных диапазонов отношений полимеризации и в их молекулярных весах и составах, однако слесредневзвешенных молекулярных весов, могут дует указать, что, поскольку скорости разложения быть периоды времени, в течение которых лекари удаления сополимера гликолевой кислоты сравство не выделяется в эффективном количестве нительно высоки, период высвобождения можно В настоящем описании средневзвешенный увеличить, увеличив молекулярный вес полимомолекулярный вес и степень дисперсности - это лочной кислоты или увеличив значение отношемолекулярный вес и степень дисперсности, опрения ингредиентов смеси (А)/(В) И, напротив, проделенные в терминах полистирола методом гельдолжительность высвобождения можно проникающей хроматографии Здесь в качестве уменьшить, уменьшив вес полимолочной кислоты эталонных соединений использовались 9 полиили значение отношения ингредиентов (А)/(В) стиролов со средневзвешенными молекулярными Кроме того, продолжительность высвобождения весами 120000, 52000, 22000, 9200, 5050, 2950, можно регулировать, меняя вид и относительное 1050, 580, 162 Показатель дисперсности подсчисодержание оксикарбоновой кислоты формулы тывался соответственно для одного и того же молекулярного веса Указанный анализ был прове(II) ден с использованием колонки для гельЕсли в качестве биологически разлагающегопроникающей хроматографии KF804LX2 (ф ШОся полимера используется сополимер молочной и ВА ДЕНКО), Rl-монитора L-3300 (ф ХИТАЧИ) и гликолевой кислот, его отношение полимеризации хлороформа в качестве подвижной фазы (молочная кислота/гликолевая кислота) (моль %) предпочтительно находится в диапазоне от где-то 100/0 до где-то 40/60 Более предпочтительно, чтобы это отношение составляло от где-то 90/10 до где-то 50/50 Средневзвешенный молекулярный вес указанного сополимера предпочтительно составляет от где-то 5000 до где-то 25000 Более предпочтительный диапазон от где-то 7000 до где-то 20000 Степень дисперсности (средневзвешенный молекулярный вес/среднечисловой молекулярный вес) указанного сополимера предпочтительно находится в диапазоне от где-то 1,2 до где-то 4,0 Более предпочтительный диапазон составляет от где-то 1,5 до где-то 3,5 Вышеупомянутый сополимер молочной и гликолевой кислот можно синтезировать известными способами, например, с использованием способа, описанного в японской выложенной заявке на патент 28521/1986 Скорость разложения и удаления сополимера молочной и гликолевой кислот варьирует в большей степени в зависимости от состава и молекулярного веса, и в общем случае можно утверждать, что чем меньше содержание гликолевой кислоты, тем ниже скорость разложения и удаления Следовательно, продолжительность высвобождения лекарства можно увеличить, уменьшив содержание гликолевой кислоты или увеличив молекулярный вес И, напротив, продолжительность высвобождения можно уменьшить, увеличив содержание гликолевой кислоты или уменьшив Препарат пролонгированного высвобождения, соответствующий настоящему изобретению, получают путем растворения пептида (I) и биологически разлагающегося полимера с концевой карбоксильной группой в растворителе, а в основном не перемешивающемся с водой, а затем удаления указанного растворителя Растворитель, который в основном не перемешивается с водой, это растворитель, который не только практически не перемешивается с водой и который может обеспечить растворение биологически разлагающегося полимера, но это растворитель, который обеспечивает раствор полимера, способный растворить пептид (I) Предпочтительно, чтобы растворимость этого растворителя в воде была не более 3% (по весу) при комнатной температуре (20°С) Точка кипения такого растворителя предпочтительно не превышает 120°С Соответственно, в качестве такого растворителя могут использоваться галоидированные углеводороды (например, дихлорметан, хлороформ, хлорэтан, трихлорэтан, четыреххлористый углерод и ттт), простые алкиловые эфиры с числом атомов углерода 3 и более (например, простой изопропиловый эфир и т п), алкиловые простые эфиры жирных кислот с числом атомов углерода 4 и более (например, бутиловый эфир уксусной кислоты и т п ), ароматические углеводороды (например, бензол, толуол, ксилол и т п) и другие соединения Можно использовать смеси двух или большего числа этих растворителей в подходящем соот 22 21 61046 ношении Наиболее предпочтительными раствосинтетические пептиды Предпочтительными яврителями являются галоидированные углеводоляются пептиды, содержащие одну или большее роды (такие, как дихлорметан, хлороформ, хлорэчисло ароматических групп (например, групп, потан, трихлорэтан, четыреххлористый углеводород лученных из бензола, нафталина, фенантрена, и т п ) Наиболее предпочтителен дихлорметан антрацена, пиридина, пирола, индола и т п) в своих боковых цепях Более предпочтительным Удаление растворителя может быть осуществариантом физиологически активных пептидов влено с использованием одной из известных проявляются соединения с 2 или большим числом цедур Например, можно использовать способ, ароматических групп в боковых цепях Особенно предусматривающий выпаривание растворителя предпочтительным вариантом физиологически при атмосферном давлении или при постепенном активных пептидов являются пептиды с 3 или боего понижении в условиях постоянного перемешильшим числом ароматических групп в боковых вания смесителем с пропеллерной мешалкой или цепях Эти ароматические группы могут быть в магнитным смесителем, или способ, состоящий в дальнейшем замещены выпаривании растворителя в ротационном выпарном аппарате в условиях контролируемого вакууВ основном нерастворимый в воде физиолома гически активный пептид, соответствующий настоящему изобретению, предпочтительно являетРассмотрим способ получения препарата ся пептидом с растворимостью в воде не более пролонгированного высвобождения, соответст1%, содержащий одну или большее число аминовующий изобретению Растворение пептида (I) и кислот и имеющий молекулярный вес в диапазоне биологически разлагающегося полимера с концеот где-то 200 до 30000 Более предпочтителен вой карбоксильной группой означает достижение диапазон молекулярного веса от где-то 30 до гдетакого условия, когда в полученном растворе вито 20000 и еще более предпочтителен диапазон зуально не обнаруживается остаток нерастворивот где-то 500 до где-то 10000 шегося пептида при комнатной температуре (20°С) В этой тройной системе, состоящей из пепВ качестве примеров указанного физиологитида (I), биологически разлагающегося полимера чески активного пептида можно привести антагои растворителя, количество пептида, могущего нистические производные рилизинг-фактора любыть растворенным, зависит от числа концевых теинизирующего гормона (LH-RH) (см патенты карбоксильных групп на единицу веса биологичеСША №№ 4086219, 4124577, 4253997, 4317815 и ски разлагающегося полимера Теоретически, есдругие), инсулин, соматостатин, производные соли пептид и концевая карбоксильная группа взаиматостатина (см патенты США №№ 4087390, модействуют в соотношении 1 к 1, может быть 4093574, 4100117, 4253998 и т п ), гормон роста, растворено одинаковое молярное количество пеппролактин, адренокортикотропный гормон (АСТН), тида и концевой карбоксильной группы Поэтому меланоцитстмулирующий гормон (MSH), соли и трудно прийти к обобщению с учетом растворитепроизводные рилизинг-фактора тиреоидного горля и молекулярного веса пептида и биологически мона (см JP Kokai S-50-121273 и S-52-116465), растворяющегося полимера Однако при осущесттиреоидстимулирующий гормон (TSN), лютеинивлении способа получения препаратов пролонгизирующий гормон (LH), фол-ликулстимулирующий рованного высвобождения пептид может быть гормон (FSH), вазопрессин, производные вазорастворен в диапазоне от где-то 0,1 до где-то прессина, окситоцин, кальцитонин, гастрин, секре100% (по весу), предпочтительно в диапазоне от тин, панкреозимин, холецистокинин, ангиотензин, где-то 1 до где-то 70% (по весу) и наиболее предчеловеческий плацентарный лактоген, человечепочтительно в диапазоне от где-то 2 до 50% (по ский хориогонический гонадотропин (HCG), энкевесу), по отношению к биологически разлагающефарин, производные энкефалина (см патент США муся полимеру, растворенному в растворителе № 4277394, европейский патент ЕР-А № 31567), эндорфин, киотрфин, туфтсин, тимопоиэтин, тиДалее, настоящее изобретение связано со мозин, тимостимулин, гуморальный фактор виспособом получения препарата пролонгированнолочной железы (THF), сывороточный фактор виго высвобождения, в соответствии с которым биолочной железы (FTS) и его производные (см логически разлагающийся полимер, состоящий из патент США № 4229438), другие факторы вилочсмеси (А) сополимера гликолевой кислоты и оксиной железы, фактор туморального некроза (TNF), карбоновой кислоты общей формулы колониестимулирующий фактор (CSF), мотилин, R динорфин, бомбезин, нейротензин, церулеин, брадикинин, атриальный натруретический фактор, I (II) фактор роста нервов, фактор роста клеток, нейроноснсоон тропный фактор, пептиды, характеризующиеся где R представляет алкильную группу с чисантагонистической активностью по отношению к лом атомов углерода от 2 до 8, и (В) полимолочэндотелину (см европейские патенты ЕР-А №№ ной кислоты, и в основном нерастворимый в воде 436189, 457195 и 496452, JP Kokai H-3-94-692 и физиологически активный пептид или его соль 03-130299) и фрагменты и производные указанных растворяют в растворителе, который в основном физиологически активных пептидов не перемешивается с водой, а затем удаляют указанный растворитель Конкретными примерами физиологически акВ способе производства в соответствии с изотивных пептидов являются физиологически активбретением, в основном нерастворимый в воде ные пептиды и их соли, характеризующиеся антафизиологически активный пептид не ограничен и гонистическим действием по отношению к охватывает естественные, синтетические и полурилизинг-фактору лютеинизирующего гормона 24 23 61046 (LH-RH), которые можно использовать для лечеПредпочтительный способ получения препания гормональнозависимых болезней таких, как рата пролонгированного действия, соответствуюрак простаты, гипертрофия простаты, эндометрищего изобретению, представляет способ микрооз, миома матки, преждевременное созревание, капсул ирования, в соответствии с которым исрак груди и других болезней, а также в качестве пользуется метод сушки в воде или метод раздепротивозачаточных средств ления фаз, описанные ниже, или любой другой аналогичный им способ Физиологически активный пептид, используемый в соответствии с настоящим изобретением, Способ, описанный ниже, может быть осущеможет быть в форме соли, предпочтительно в ствлен с использованием пептида (I) или в основформе фармацевтически приемлемой соли Если ном нерастворимого в воде физиологически акпептид включает основную группу, например амитивного пептида, содержащего пептид (I) ногруппу, вышеупомянутая соль может, например, Таким образом, пептид (I) добавляют в расбыть солью, образованной неорганической кислотвор биологически разлагающегося полимера в той (например, хлористоводородной кислотой, органическом растворителе с конечным весовым серной кислотой, азотной кислотой и т п ) или орсоотношением, указанным выше для такого пепганической кислотой (например, уксусной кислотида, и получают раствор в органическом раствотой, угольной кислотой, углеводородной кислотой, рителе, содержащий пептид (I) и биологически янтарной кислотой, пропионовой кислотой, трифразлагающийся полимер В этом случае конценторуксусной кислотой и т п ) Если пептид включатрация биологически разлагающегося полимера в ет кислотную группу, например, карбоксил, соль, органическом растворителе варьирует в зависинапример, может быть солью, образованной неормости от молекулярного веса биологически разлаганическим основанием (например, щелочными гающегося полимера и типа органического расметаллами такими, как натрий, калий и т п , и щетворителя, но обычно находится в диапазоне от лочноземельными металлами такими, как кальгде-то 0,01 до где-то 80% (по весу) В более предций, магний и т п) или органическим основанием почтительном варианте этот диапазон составляет (например, органическими аминами такими, как от где-то 0,1 до где-то 70% (по весу) В еще более триэтиламин и т п , основными аминокислотами предпочтительном варианте указанный диапазон такими, как аргинин и т п) Пептид также может составляет от где-то 1 до где-то 60% (по весу) быть в форме комплексных металлических соедиЗатем раствор органического растворителя, нений (например, медного комплекса, цинкового содержащий пептид (I) и биологически разлагаюкомплекса и т п ) щийся полимер (масляная фаза), добавляют в водную фазу с получением эмульсии типа "масляКонкретные примеры физиологически активная фаза/водная фаза" Растворитель масляной ного пептида или его соли можно найти в патенте фазы затем выпаривают, обеспечивая микрокапСША № 5110904, 'Журнале медицинской химии" сулы Объем водной фазы, требуемый для осу34, стр 2395-2402, 1991 г, ж "Последние резульществления этой процедуры, обычно выбирается таты в исследованиях рака" (Recent Results in в диапазоне от где-то 1 до где-то 10000 раз преCancer Research) 124, стр 113-136, 1992 г и друвышения объема масляной фазы Более предпочгих источниках тительный диапазон составляет от где-то 2 до гдеДалее, среди других пептидов следует также то 5000 раз превышении наиболее предпочтиупомянуть физиологически активные пептиды с тельный диапазон составляет от где-то 5 до где-то обобщенной формулой (I) и их соли 2000 раз превышения Следует заметить, что, даже в том случае, когда физиологически активный пептид растворим в В вышеупомянутую водную фазу можно ввеводе, из него можно получить производное нерассти эмульгатор В качестве эмульгатора, как пратворимое соединение или же его можно превравило, можно использовать любое вещество, кототить в нерастворимую в воде соль нерастворимой рое способствует образованию устойчивой в воде кислоты (например, памоиновой кислоты, эмульсии типа "масло/вода" В частности, можно дубильной кислоты, стеариновой кислоты, пальупомянуть анионные поверхностно-активные вемитиновой кислоты и т п) и использовать в осущества (олеиновокислый натрий, стеариновокисществлении способа по настоящему изобретению лый натрий, лаурилсульфат натрия и т п ), неионные поверхностно-активные вещества (сложные Количество физиологически активного пептиэфиры полиоксиэтиленсорбитановой жирной кида в препаратах, соответствующих изобретению, слоты "Твин 80" и "Твин 60", "Атлас Паудер", прозависит от вида пептида, желаемого фармаколоизводные полиоксиэтиленкасторового масла гического эффекта, необходимой продолжитель"НСО-60" и "НСО-50", "Никко Кемикэлз" и т п , поности действия этого эффекта и других факторов ливинил пиррол идон, поливиниловый спирт, карТем не менее, в общем случае можно отметить, боксиметилцеллюлозу, лецитин, желатин, гиалучто он используется в количестве от где-то 0,001 роновую кислоту и другие соединения Эти до где-то 50% (по весу), предпочтительно от гдеэмульгаторы можно использовать по отдельности то 0,01 до где-то 40% (по весу) и более предпочили в сочетании Концентрацию можно выбирать тительно от где-то 0,1 до где-то 30% (по весу) отгде-то в диапазоне от 0,001 до 20% (по весу) носительно биологически разлагающегося полиПредпочтительный диапазон от где-то 0,01 до гдемера, являющегося основой то 10% (по весу) и наиболее предпочтительный Используемый в данном способе растворидиапазон где-то от 0,05 до 5% (по весу) тель тот же, что упомянут выше Удаление растворителя может быть осущестПолученные микрокапсулы отделяют центривлено так, как это описано выше фугированием или фильтрацией и промывают 25 61046 26 несколькими порциями дистилированнои воды с растворителе впрыскивается в виде тумана через целью удаления свободного пептида, раствора и сопло в сушильную камеру, где из тонко распыэмульгатора с поверхности, а затем повторно дисленных капель жидкости очень быстро выпаривапергируют в дистилированнои воде или аналогичется растворитель с получением крохотных микной среде и лиофилизируют Затеи при необхорокапсул Здесь можно применить двухпоточное димости микрокапсулы нагревают при сопло, сопло давления, сопло с поворотным диспониженном давлении для дальнейшего удаления ком и т п При реализации данного способа целеиз внутренней части микрокапсул оставшихся восообразно впрыскивать водный раствор упомянуды и органического растворителя того ингибитора агрегации через второе сопло для предотвращения межкапсульной агрегации во Предпочтительно эта процедура осуществлявременной корреляции с указанной разбрызгиется при нагревании до температуры, несколько ваемой струей раствора пептида (I) и биологиче(на 5°С или больше) превышающей среднюю темски разлагающегося полимера в органическом пературу стеклования биологически разлагающерастворителе гося полимера, определенную с использованием дифференциального сканирующего калориметра При необходимости оставшиеся воду и оргапри приращениях температуры от 10°до 20°С/мин, нический растворитель удаляют путем нагревания и поддержании этой температуры в течение пеполученных микрокапсул при пониженном давлериода времени обычно не более 1 недели или 2-3 нии точно так же, как это было описано выше дней, а предпочтительно не более 24 часов после Микрокапсулы могут применяться такими, как ее достижения микрокапсулами они есть, или перерабатываться в различные фармацевтические препараты для введения не При получении микрокапсул методом раздепероральным способом (внутримышечные и подления фаз в раствор указанных физиологически кожные инъекции, инъекции вовнутрь органов, активного пептида и биологически разлагающегоимплантации, назальные, ректальные, маточные ся полимера в органическом растворителе постетрансмукозальные системы доставки и т п) или пенно вводят агент коацервации при постоянном для приема пероральным способом (например, перемешивании, так что биологически разлагаютвердые препараты такие, как капсулы (твердые щийся полимер выделяется и затвердевает Этот капсулы, мягкие капсулы и т п ), гранулы, порошки агент коацервации вводят в объеме, составляюи т п и жидкие препараты такие, как сиропы, эмущем от где-то 0,01 до где-то 1000 раз объема расльсии, суспензии и другие) твора в органическом растворителе пептида (I) и биологически разлагающегося полимера ПредДля переработки микрокапсул в форму, припочтительный диапазон составляет где-то от 0,05 годную для инъекций, они, например, могут объедо 500 раз, а наиболее предпочтительный диападиняться с диспергирующим агентом (например, зон составляет где-то от 0,1 до 200 раз поверхностно-активным веществом таким, как "Твин 80", "НСО-60" и т п , карбоксиметилцеллюАгент коацервации может быть соединением лозой, полисахаридом таким, как альгинат натрия типа полимера, минерального или растительного и т п , антикоагулятором (например, метилпараамасла, которое перемешивается с растворителем минобензойной кислотой, пропилпарааминобенбиологически разлагающегося полимера, однако зойной кислотой и т п) или изотонизирующим при этом не растворяет полимер В частности, агентом (например, хлористым натрием, манниздесь можно указать силиконовое масло, кунжуттом, сорбитом, глюкозой и т п), обеспечивая водное масло, соевое масло, кукурузное масло, хлопную суспензию, или микрокапсулы могут дисперковое масло, кокосовое масло, льняное масло, гировать в растительном масле, например, минеральное масло, п-гексан, n-гептан и другие кунжутном масле и т п, обеспечивая масляную соединения Эти вещества можно использовать суспензию, используемую для инъекций с контросовместно лируемым высвобождением препарата Полученные микрокапсулы отделяют методом фильтрации и несколько раз промывают гептаном Размер частиц-микрокапсул таких суспензий или аналогичным соединением с целью удаления для инъекций должен быть в диапазоне, удовлеагента коацервации Затем удаляют свободный творяющем требованиям диспергируемое™ и пептид и растворитель с использованием той же прохождения через иглу, и может, например, процедуры, которая была описана для метода варьировать от где-то 0,1 до где-то 500мкм Предсушки в воде почтительные размеры частиц находятся в диапазоне от где-то 1 до где-то ЗООмкм и наиболее Как в случае метода сушки в воде, так и в слупредпочтительные размеры частиц находятся в чае метода коацервации можно ввести ингибитор диапазоне от где-то 2 до где-то 200мкм агрегации, чтобы предотвратить агрегацию частиц В качестве ингибитора агрегации, в частноДля обеспечения стерильности микрокапсул в сти, можно использовать растворимые в воде потечение всего производственного цикла проводитлисахариды такие, как маннит, лактол, глюкоза, ся контроль стерильности, микрокапсулы стериликрахмал (например, кукурузный крахмал) и т п , зуются путем облучения гамма-лучами или введеглицин, белки такие, как фибрин, коллаген и т п , и ния какого-либо консервирующего средства, не органические соли такие, как хлористый наоднако могут быть и другие процедуры трий, вторичный кислый фосфорнокислый натрий Изобретение позволяет получать не только ит п микрокапсулы Состав биологически разлагающегося полимера, содержащего пептид в качестве При получении микрокапсул методом сушки в активного ингредиента, хорошо диспергированный струе указанный раствор пептида (I) и биологичеподходящим способом, может быть расплавлен и ски разлагающегося полимера в органическом 28 27 61046 отформован в шарик, стерженьки, иглы или пленОптимальный способ осуществления изобреку, обеспечивая препарат пролонгированного дейтения ствия, соответствующий настоящему изобретеСледующие справочные рабочие примеры нию Упомянутый состав биологически приведены лишь с целью более подробного опиразлагающегося полимера можно получить спососания изобретения и ни в коем случае не огранибом, описанным в японской патентной публикации чивают объема изобретения (Если не указано JP S-50-17525 В частности, лекарственный пепиное, % означают % по весу) тид и полимер растворяют в растворителе, а заСокращения, используемые ниже, имеют слетем растворитель удаляют подходящим способом дующие значения (например, с использованием сушки распылениВОС трет-бутоксикабонил ем, мгновенного испарения и т п), получая треFMOC 9-флуоренилметоксикарбонил буемый состав биологически разлагающегося поCbz бензилоксикарбонил лимера Справочный пример 1 Препарат пролонгированного высвобождения, Бутыль с четырьмя горловинами емкостью соответствующий настоящему изобретению, мо1000мл, снабженная трубой подвода азота и конжет быть введен в организм с использованием денсатором, была заправлена ЗООг 90% водного внутримышечных, подкожных и внутриоргановых раствора D, L-молочной кислоты и ЮОг 90% водинъекций или имплантаций, трансмукозальной ного раствора L-молочной кислоты, а затем сосистемы доставки с введением через носовую держимое бутыли нагревалось в потоке газообполость, прямую кишку или матку, или же в виде разного азота при сниженном давлении от перорального препарата (например, твердого 100°С/500 мм рт ст до 150° С/30 мм рт ст в течепрепарата такого, как капсулы (твердые или мягние 4 часов при постоянном отводе водного диские), гранулы, порошок и т п , или жидкого препатиллята Затем реакционная смесь была подверграта, например, в виде сиропа, эмульсии, суспеннута дальнейшему нагреванию при пониженном зии и т п) давлении 3 - 5 мм рт ст от 150 до 180 С в течение 7 часов, после чего она была охлаждена с полуПрепарат пролонгированного высвобождения, чением полимолочной кислоты янтарного цвета соответствующий настоящему изобретению, характеризуется малой токсичностью и его с полной Этот полимер был растворен в 1000мл дибезопасностью можно давать млекопитающим хлорметана, и раствор был залит в теплую воду (например, человеку, корове, свинье, собаке, котемпературой 60°С при постоянном перемешивапытным, крысе и кролику) нии Полученный пастообразный полимерный осадок был собран высушен в вакууме при 30°С Дозировка препарата пролонгированного высвобождения зависит от типа и содержания активСредневзвешенный и среднечисловой моленого лекарственного пептида, конечной формы кулярные веса указанной полимолочной кислоты, препарата, продолжительности высвобождения определенные методом гель-проникающей хромапептида, цели введения препарата (гормонозавитографии, и ее среднечисловой молекулярный симые болезни такие, как рак простаты, простатовес, определенный методом концевых групп, сомегалия, эндометриоз, метрофиброма, преждеответственно составляет 3000, 1790 и 1297 временное половое созревание , рак молочной Эти данные показали, что полимер содержит железы и т п , предотвращение беременности) и концевые карбоксильные группы вида организма, который подвергается воздейстСправочный пример 2 вию препарата, однако в любом случае необходиБутыль с четырьмя горловинами емкостью мо, чтобы в организм успешно поставлялось эф1000мл, снабженная трубой для подвода азота и фективное количество пептида Единичная доза конденсатором была заправлена 500г 90% водноактивного лекарственного пептида, если, наприго раствора D,L- молочной кислоты, а затем сомер, имеется в виду система доставки лекарства, держимое бутыли нагревалось в потоке газообработающая в течение 1 месяца, предпочтительразного азота при пониженном давлении от 100°С/ но выбирается где-то 0,01 до 100мг/кг веса тела 500 мм рт ст до 150°С/30 мм рт ст в течение 4 для взрослого человека Более предпочтительный часов при постоянном отводе водного дистиллята диапазон составляет где-то от 0,05 до 50мг/кг веса Затем реакционная смесь была подвергнута тела Наиболее предпочтительный диапазон содальнейшему нагреванию при пониженном давлеставляет где-то от 0,1 до 10мг/кг веса тела нии 3 - 5 мм рт ст до 180°С в течение 12 часов, после чего она была охлаждена с получением Соответственно, единичная дозировка препаполимолочной кислоты янтарного цвета рата пролонгированного высвобождения выбирается для взрослого человека в диапазоне где-то Этот полимер был растворен в 1000мл диот 0,1 до 500мг/кг веса тела Более предпочтихлорметана и раствор был влит в теплую воду тельно этот диапазон составляет где-то от 0,2 до температурой 60°С при постоянном перемешива300мг/кг веса тела Препарат может вводится с нии Полученный пастообразный полимерный частотой, например, от 1 раза в несколько недель осадок был собран и высушен при 30°С в вакууме и 1 раза в месяц до 1 раза в несколько месяцев, Средневзвешенный и среднечисловой молепри этом указанная частота определяется типом и кулярные веса указанной полимолочной кислоты, содержанием активного лекарственного пептида, определенные методом гель-проникающей хромаконечной формой дозы, необходимой продолжитографии, и ее среднечисловой молекулярный тельностью высвобождения пептида, болезнь, вес, определенный методом концевых групп, сокоторую требуется лечить, и типом организма, ответственно составляли 5000, 2561 и 1830 требующего лечение Эти данные показали, что полимер содержит 30 29 61046 концевые карбоксильные группы 500 мм рт ст до 150°С/30 мм рт ст в течение 3,5 часов при постоянном удалении водного дистилСправочный пример 3 лята Затем реакционная смесь была подвергнута Бутыль с четырьмя горловинами емкостью дальнейшему нагреванию при пониженном давле1000мл, снабженная трубой для подвода азота и нии 5-7 мм рт ст от 150°С до 180°С в течение 26, конденсатором, была залита ЗООг 90% водного часов после чего она была охлаждена с образораствора D,L- молочной кислоты и ЮОг 90% водванием сополимера гликолевой кислоты и 2ного раствора L-молочной кислоты, а затем сооксимас-ляной кислоты янтарного цвета держимое бутыли нагревалось в потоке газообразного азота при пониженном давлении от Этот полимер был растворен в 1000мл ди100°С/500 мм рт ст до 150°С/30 мм рт ст в течехлорметана и раствор влит в теплую воду темпение 5 часов при постоянном удалении водного ратурой 60°С при постоянной перемешивании дистиллята Затем реакционная смесь была подПолученный пастообразный полимерный осадок вергнута дальнейшему нагреванию при пониженбыл собран и высушен в вакууме при 25°С ном давлении 5-7 мм рт ст от 150° до 180°С в Средневзвешенный молекулярный вес полутечение 18 часов, после чего она была охлаждена ченного полимера гликолевой кислоты и 2с получением полимолочной кислоты янтарного оксимасляной кислоты, полученный методом гельцвета проникающей хроматографии, составляет 13000 Этот полимер был растворен в 1000мл диСправочный пример 6 хлорметана и раствор влит в теплую воду темпеВ бутыль с четырьмя горловинами емкостью ратурой 60°С при постоянном перемешивании 1000мл, снабженную трубой для подвода азота и Полученный пастообразный полимерный осадок конденсатором, было введено 197,7г гликолевой был собран высушен в вакууме при 30°С кислоты и 145,8г D.L-2-оксимасляной кислоты и содержимое бутыли нагревалось в потоке газообСредневзвешенный и среднечисловой молеразного азота от 100°С/500 мм рт ст до 155°С/30 кулярные веса вышеуказанной полимолочной кимм рт ст в течение 4 часов при постоянном удаслоты, определенные методом гель-проникающей лении водного дистиллята Реакционная смесь хроматографии, и ее среднечисловой молекулярзатем была подвергнута дальнейшему нагреваный вес, определенный методом концевых групп, нию при пониженном давлении 3-6мм рт ст от соответственно составляют 7500, 3563 и 2301 150 С до 185°С в течение 27 часов, после чего она Эти данные показали, что полимер содержит была охлаждена с образованием сополимера гликонцевые карбоксильные группы колевой кислоты и 2-оксимасляной кислоты, хаСправочный пример 4 рактеризующегося янтарным цветом Бутыль с четырьмя горловинами емкостью 1000мл, снабженная трубой для подачи азота и этот полимер был растворен в 1000мл диконденсатором, была заправлена ЗООг 90% воднохлорметана, а раствор влит в теплую воду темпего раствора D,L- молочной кислоты и ЮОг 90% ратурой 60°С при постоянном перемешивании водного раствора L-молочной кислоты, а затем Полученный пастообразный полимерный осадок содержимое бутыли нагревалось в потоке газооббыл собран и высушен в вакууме при 25°С разного азота при пониженном давлении от Средневзвешенный молекулярный вес полу100°С/500 мм рт ст до 150°С/30 мм рт ст в течеченного сополимера гликолевой и 2-оксимасляной ние 5 часов при постоянном удалении водного кислот, определенный методом гельдистиллята Затем реакционная смесь была подпроникающей хроматографии, составляет 13000 вергнута дальнейшему нагреванию при пониженСправочный пример 7 ном давлении 5-7 мм рт ст от 150° до 180°С в В бутыль с четырьмя горловинами емкостью течение 26 часов, после чего она была охлаждена 1000мл, снабженную трубой для подвода азота и с получением полимолочной кислоты янтарного конденсатором, было введено 212,9г гликолевой цвета кислоты и 124,9г D.L-2-оксимасляной кислоты и содержимое бутыли нагревалось в потоке газообЭтот полимер был растворен в 1000мл диразного азота от 100°С/500 мм рт ст до 160°С/30 хлорметана и раствор влит в теплую воду темпемм рт ст в течение 3,5 часов с постоянным ударатурой 60 С при постоянном перемешивании лением водного дистиллята Реакционная смесь Полученный пастообразный полимерный осадок затем подвергнута дальнейшему нагреванию при был собран и высушен в вакууме при 30°С пониженном давлении 3-6 мм рт ст от 160°С до Средневзвешенный и среднечисловой моле180°С в течение 27 часов, после чего она была кулярные веса вышеуказанной полимолочной киохлаждена с образованием сополимера гликолеслоты, определенные методом гель-проникающей вой и 2-оксимасляной кислот, имеющего янтарный хроматографии, и ее среднечисловой молекулярцвет ный вес, определенный методом концевых групп, соответственно составляют 9000, 3803 и 2800 Этот полимер был растворен в 1000мл дихлорметана, а раствор влит в теплую воду темпеЭти данные показали, что полимер содержит ратурой 60°С при постоянном перемешивании концевые карбоксильные группы Полученный пастообразный полимерный осадок Справочный пример 5 был собран и высушен в вакууме при 25°С Бутыль с четырьмя горловинами емкостью 1000мл, снабженная трубой для подачи азота и Средневесовой молекулярный вес сополимеконденсатором, была залита 182,5г гликолевой ра гликолевой и 2-оксимасляной кислот, опредекислоты и 166,6г D.L-2-оксимасляной кислоты и ленный методом гель-проникающей хроматограсодержимое бутыли нагревалось в потоке газообфии, составляет 11000 разного азота при пониженном давлении от 100°С/ Справочный пример 8 32 31 61046 В бутыль с четырьмя горловинами емкостью вышеназванного пептида добавлялись аминокис1000мл, снабженную трубой для подвода азота и лоты в соответствии с нижеприведенной последоконденсатором, было введено ЗООг 90% водного вательностью синтезирования раствора D.L-молочной кислоты и ЮОг 90% вод1 Реакция снятия защиты ного раствора L-молочной кислоты и содержимое Для устранения защитных групп ВОС из альбутыли в течение 4 часов нагревалось в потоке фа-аминокислоты пептида использовался расгазообразного азота при пониженном давлении от твор, содержащий 45% трифторуксусной кислоты, 100°С/500 мм ртст до 150°С/30 мм рт ст при 2,5% диметилфосфита и 50,5% дихлорметана постоянном удалении водного дистиллята РеакПосле предварительной промывки смолы указанционная смесь затем была подвергнута дальнейным раствором в течение 1 минуты, 20 минут прошему нагреванию при пониженном давлении 3-5 водилась реакция снятия защиты мм рт ст от 150°С до 180°С в течение 10 часов, 2 Промывка основным раствором после чего она была охлаждена с образованием Для удаления и нейтрализации трифторуксусполимолочной кислоты янтарного цвета ной кислоты, которая применялась при проведении реакции снятия защиты, использовался расЭтот полимер был растворен в 1000мл дитвор дихлорметана, содержащий 10% N,N'хлорметана и раствор был влит в теплую воду дизопропилэтиламина При каждом проведении температурой 60°С при постоянном перемешивареакции снятия защиты смола промывалась три нии Полученный пастообразный осадок был собраза за 1 минуту ран и высушен в вакууме при 30°С Средневесовой и среднечисловой молекуляр3 Реакция присоединения ные веса указанной полимолочной кислоты, опреБыла проведена реакция присоединения с исделенные методом гель-проникающей хроматопользованием в качестве активаторов трехмолярграфии, и ее среднечисловой молекулярный вес, ного количества 0,3 мольного раствора диизопронайденный методом концевых групп, соответстпилкарбодиимида/дихлорметана и трехмолярное венно составляют 4200, 2192, и 1572 количество 0,3 мольного раствора производной ВОС-аминокислотьі/М.ІЧ'-диметилформамида АкЭти данные показали, что полимер содержит тивированная аминокислота была присоединена к концевые карбоксильные группы свободной альфа-аминогруппы пептида смолы Справочный пример 9 Время проведения реакции приведено ниже В бутыль с четырьмя горловинами емкостью 1000мл, снабженную трубой для подвода азота и 4 Промывка конденсатором, было введено 182,5г гликолевой После завершения всех реакций смола была кислоты и 166,6г D.L-2-оксимасляной кислоты и промыта дихлорметаном, дихлорметаном/N.N'содержимое бутыли в течение 3,5 часов нагревадиметилформамидом и N.N'-диметилформамидом лось в потоке газообразного азота при понижен- каждым составом по 1 минуте ном давлении от 100°С/500 мм рт ст до 150°С/30 Протокол синтеза мм рт ст при постоянном отводе водного дистилАминокислоты с защищенными аминогруппалята Реакционная смесь затем была подвергнута ми сочетались со смолой в порядке с кратностью нагреванию при пониженном давлении 5-7 мм рт и временем проведения реакции, приведенными ст от 150°до 180°С в течение 32 часов, после чего ниже смесь была охлаждена с образованием сополимера гликолевой и 2-оксимасляной кислот, имеюЧисло Порядок Аминокислота щего янтарный цвет раз время Полимер был растворен в 1000мл дихлорме1 ВОС-Рго 2 раза 1 час тана и раствор был залит в теплую воду темпераBOC-Lys(N-epsilon-Cbz, 2 2 раза 1 час турой 60°С при постоянном перемешивании Поisopropyl) лученный пастообразный полимерный осадок был 3 BOC-Leu 2 раза 1 час собран и высушен в вакууме при 25°С BOC-D-Lys(N-epsilon4 2 раза 1 час Средневесовой и среднечисловой молекулярFMOC) ные веса полученного сополимера гликолевой и 2BOC-NMeTyr (0-2, 6-diCI5 2 раза 1 час оксимасляной кислот, определенные методом Bzl) гель - проникающей хроматографии, и среднечи6 BOC-Ser(OBzl) 2 раза 1 час словой молекулярный вес указанного сополимера, 6 чаопределенный методом концевых групп, состав7 BOC-D-3Pal 2 раза сов ляют соответственно 16300, 5620 и 2904 2 ча8 BOC-D-4CIPhe 2 раза Эти данные показали, что у полимера есть са концевые карбоксильные группы 2 ча9 BOC-D2Nal 2 раза Справочный пример 10 са Синтез NAcD2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NmeTyr2 чаDLys(AzaglyFur)-Leu-Lys(Nisp)-Pro-DAIaNH2 10 Угольная кислота 2 раза са Синтез по справочным примерам 10 и 11 был осуществлен в соответствии с описанием патента После завершения реакции синтеза смола обСША № 5110904 и заявкой на патент США № рабатывалась 30% раствором пиперидина в N,N'07/987921 диметилформамиде в течение промежутка времеВ реактор установки для синтеза пептида был ни от 4 до 24 часов с целью удаления защитной введен 1г смолы DA-la-NH (смолы 4-метилгруппы FMOC Смола несколько раз была промыбензгидриламина), после чего для синтезирования 34 33 61046 та дихлорметаном, а затем вступила в реакцию с Вышеназванный пептид был синтезирован карбонилдиимидазолом (0,9г), растворенным в тем же способом, что и пептид справочного приN.N'-диметилформамиде (18мл), которая (реакмера 10, за исключением того, что вместо 2-фуция) длилась 15 минут, после чего 3 раза была ранкарбонового гидразита использовался 2промыта дихлорметаном и вступила в реакцию с никотиновый гидразит (0,575г) Время удержания 2-фуранкарбоновым гидразидом (0,53г), раствов системе высококачественной жидкостной хромаренным в N.N'-диметилформамиде (18мл), кототографии для таким образом полученного очирая проводилась в течение всего ночного времещенного продукта составляло 16,0 минут Ниже ни Полученная смола-пептид была три раза приводятся данные по физическим свойствам промыта дихлорметаном, а затем на все ночное очищенного продукта + время подвергнута сушке в присутствии пятиокиси FAB масс-спектрометрия т/е 1592 (М+Н) фосфора и после этого обработке в течение часа Анализ аминокислот 1,02 Ala, 1,01 Pro, 1,61 сухим фтористым водородом при 0°С в присутстLys, 0,99 Leu, 1,12NMeTyr, 0,48 Ser вии анизола, чтобы отделить пептид от смолы Вышеуказанный трифторацетат пептида был Избыточный реагент удалялся с использованием превращен в ацетат таким же способом, как и в вакуума Полученная таким образом смола сначаслучае справочного примера 10 ла была промыта эфиром, затем перемешивалась Справочный пример 12 в течение 15 минут при комнатной температуре в В бутыль с четырьмя горловинами емкостью 50мл смеси воды, ацетонитрила и уксусной кисло1000мл, снабженную трубой для подвода азота и ты (1 1 0,1), после чего была профильтрована конденсатором, было введено 322г 90% водного Фильтрат лиофилизировался с образованием нераствора D.L-молочной кислоты и 133г гликолевой очищенного пептида в виде рыхлого порошка кислоты, и содержимое бутыли нагревалось с исЭтот пептид был очищен с использованием высопользованием нагревателя в кожухе (ф "Со-го кокачественной жидкостной хроматографии Рикагаку Гласе Ко") в потоке газообразного азота (HPLC) при следующих условиях при пониженном давлении от 100°С/500 мм рт ст до 150°С/30 мм рт ст в течение 4 часов при по(1) Колонка Дайнамакс С-18 (25x2,5см, 8мкм) стоянном отводе водного дистиллята Затем ре(2) Растворитель Возрастающий градиент акционная смесь была подвергнута дальнейшему ацетонитрила за период времени 20 минут, по нагреванию при пониженном давление 3 - 30 мм отношению к исходному раствору из 89% воды, рт ст от 150° до 185°С на период времени 23 ча11% ацетонитрила и 0,1% TFA са, после чего смесь была охлаждена с образова(3) Определение длины волны 260нм (ультнием сополимера молочной и гликолевой кислот рафиолетовый метод) Пептид, характеризующийся, как показал анаЭтот полимер был растворен в 1000мл дилиз, одним пиком для времени удержания 25,7 хлорметана и раствор влит в теплую воду с темминуты, был собран и лиофилизироаван с обрапературой 60°С при постоянном перемешивании зованием очищенного продукта NAcD2NalПолученный пастообразный полимерный осадок D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-DI_ys(AzaglyFur)-l_euбыл собран и высушен в вакууме при 30°С Lys(Nisp)-Pro-DAIaNH2 в форме трифторацетата Средневзвешенный и среднечисловой молеНиже приведены физические характеристики кулярные веса полученного сополимера и гликоочищенного продукта левой кислот, определенные методом гельпроникающей хромаиографии, и его среднечислоМасе-спектрометрия с использованием бомвой молекулярный вес, найденный методом конбардировки быстрыми атомами (FAB массцевых групп, соответственно составляют 10000, спектрометрия) т/е1591 (М+Н)+ 4000 и 4000 Эти данные говорят о том, что сопоАнализ аминокислот 0,98 Ala, 1,02 Pro, 1,58 лимер является полимером, содержащим концеLys, 1,00 Leu, 1,12NMeTyr, 0,52 Ser вые карбоксильные группы Указанный трифторацетат пептида был превращен в ацетат с использованием гель- фильтСправочный пример 13 рационной колонки, предварительно уравновешеВ бутыль с четырьмя горловинами емкостью на 1 N-раствором уксусной кислоты 1000мл, снабженную трубой для подвода азота и Использовались следующие условия гельфильтконденсатором, было введено 347г 90% водного рации раствора D.L-молочной кислоты и 266г гликолевой кислоты, и содержимое бутыли нагревалось с ис(1) Набивка Sephadex G-25 (диаметр внутпользованием нагревателя в кожухе (ф "Со-го реннего отверстия колонки 16мм, высота слоя Гикагаку Гласе Ко") при пониженном давлении в набивки 40мм) потоке газообразного азота от 100°С/500 мм рт (2) Растворитель 1N раствор уксусной кислост до 150°С/30 мм рт ст в течение 5 часов при ты постоянном отводе водного дистиллята Затем (3) Длина волны, используемая для анализа реакционная смесь была подвергнута дальней254нм (ультрафиолетовый метод) шему нагреванию при пониженном давлении 3 Фракция первого пика элюирования была соб30 мм рт ст от 150°до 185°С на период времени рана и лиофилизирована с образованием очи23 часа, после чего смесь была охлаждена с общенного продукта NAcD2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Serразованием молочной и гликолевой кислот NMe-TyrDLys(AzaglyFur)-Leu-Lys(Nisp)-ProDAIaNH2 в форме ацетата Этот полимер был растворен в 1000мл диСправочный пример 11 хлорметана и раствор влит в теплую воду температурой 60°С при постоянном перемешивании Синтез NAcD2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMeTyrПолученный пастообразный полимерный осадок DLys(AzaglyNic)-Leu-Lys (Nisp)-Pro-DAIaNH2 36 35 61046 был собран и высушен в вакууме при 30°С сулах соответственно составляло 5-65мкм и 0,5% (по весу) Средневзвешенный и среднечисловой молекулярные веса полученного сополимера молочной Пример 3 и гликолевой кислот, определенные методом гель200мг ацетата физиологически активного пеппроникающей хроматографии, и его среднечислотида А было растворено в растворе смеси 50 50 вой молекулярный вес, найденный методом кон(3,8г) сополимера гликолевой и 2-оксимасляной цевых групп, соответственно составляют 10000, кислот, полученного в соответствии со справоч3700 и 3900 Эти данные свидетельствуют о том, ным примером 5, и полимолочной кислоты, получто сополимер является полимером, содержащим ченной в соответствии со справочным примером концевые карбоксильные группы 3, в 6,7г (5,0мл) дихлорметана Этот раствор был охлажден до 17°С и залит в 1000мл 0,1% водного Пример 1 раствора поливинилового спирта, предварительно 200мг ацетата пептида NAcD2Nal-D4CIPheдоведенного до 17°С, и смесь была подвергнута D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys(Nic)-Leu-Lys(Nisp)-Proобработке, приведенной в примере 1, благодаря DAIaNbb (производства ф "ТАП" и ниже кратко чему были получены микрокапсулы Распределеназываемого физиологически активным пептидом ние размеров частиц и содержание в них физиоА) было растворено в растворе смеси 50 50 (3,8г) логически активного пептида А соответственно сополимера гликолевой и 2-оксимасляной кислот, составляли 10 - бОмкм и 4,8% (по весу) полученного в соответствии со справочным примером 5, в 5,3г (4,0мл) дихлорметана ПолученПример 4 ный раствор был охлажден до 17°С и влит в 200мг ацетата физиологически активного пеп1000мл 0,1% (по весу) водного раствора поливитида А было растворено в растворе смеси 50 50 нилового спирта (EG-40, ф "Ниппон Синтетик Ке(3,8г) сополимера гликолевой и 2-оксимасляной микэл Индастри Ко Лтд"), предварительно охлажкислот, полученного в соответствии со справочденного до 10°С, и смесь эмультировалось с ным примером 5, и полимолочной кислоты, полуиспользованием турбинной мешалки, работающей ченной в соответствии со справочным примером со скоростью 7000 об/мин, и таким образом была 4, в 6,7г (5,0мл) дихлорметана Этот раствор был получена эмульсия типа "масло/вода" Эта эмульохлажден до 17°С и залит в 1000 мл 0,1% водного сия перемешивалась при комнатной температуре раствора поливинилового спирта, доведенного до в течение 3 часов, чтобы обеспечить испарение температуры 17°С заранее, и смесь была поддихлорметана Масляная фаза была отверждена вергнута обработке в соответствии с примером 1, и собрана с использованием центрифуги (05PR-22 так что были получены микрокапсулы Распредеф "Хитачи, Лтд"), работающей со скоростью ление размеров частиц и содержание в них фи2000об/мин Эти твердые частицы были диспергизиологически активного пептида А соответственно рованы в дистиллированной воде и подвергнуты составляли 10 - 75мкм и 4,6% (по весу) дополнительному центрифугированию для вымыПример 5 вания свободного лекарственного агента и других 200мг ацетата физиологически активного пепвеществ Собранные микрокапсулы были повтотида А было растворено в растворе смеси 50 50 рено диспергированы в небольшом количестве (3,8г) сополимера гликолевой и 2-оксимасляной дистиллированной воды, после чего было введено кислот, полученного в соответствии со справоч0,Зг D-маннита и проведена сушка при температуным примером 6, и полимолочной кислоты, полуре ниже точки замерзания с образованием порошченной в соответствии со справочным примером ка Распределение частиц по размерам и содер2, в 6,0г (4,5мл) дихлорметана Этот раствор был жание физиологически активного пептида А были охлажден до 17°С и залит в 1000мл 0,1% водного соответственно 5-бОмкм и 4,7% (по весу) раствора поливинилового спирта, предварительно доведенного до 10°С, после чего смесь была обТаким же образом получали препараты нижеработана так же, как и в примере 1, так что были приведенных физиологически активных пептидов получены микрокапсулы Распределение разме(1) и (2) ров частиц и содержание физиологически актив(1) NAcD2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMeTyrного пептида А в микрокапсулах соответственно DLys(AzaglyNic)-Leu-Lys(Nisp)-Pro-DAIaNH2 составляли 5-60мкм и 4,9% (по весу) (2) NAcD2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr DLys(AzaglyFur)-Leu-Lys(Nisp)-Pro-DAIaNH2 Пример 2 200мг ацетата физиологически активного пептида А было растворено в растворе смеси 50 50 (3,8г) сополимера гликолевой и 2-оксимасляной кислот, полученного в соответствии со справочным примером 5, и полимолочной кислоты, полученной в соответствии со справочным примером 2, в 6,7г (5,0мл) дихлорметана Этот раствор был охлажден до 17°С и влит в 1000 мл 0,1% водного раствора поливинилового спирта, предварительно доведенного до температуры 17°С, и смесь была подвергнута той же обработке, что и в примере 1, благодаря чему были получены микрокапсулы Распределение размеров частиц и содержание физиологически активного пептида А в микрокап Пример 6 200мг ацетата физиологически активного пептида А было растворено в растворе смеси 50 50 (3,8г) сополимера гликолевой и 2-оксимас-ляной кислот, полученного в соответствии со справочным примером 7, и полимолочной кислоты, полученной в соответствии со справочным примером 2, в 6,0г (4,5мл) дихлорметана Этот раствор был охлажден до 17°С и залит в 1000мл 0,1% водного раствора поливинилового спирта, предварительно охлажденного до 17°С, после чего смесь была обработана так же, как и в примере 1, так что были получены микрокапсулы Распределение размеров частиц и содержание физиологически активного пептида в микрокапсулах соответственно составляло 10-65мкм и 4,9% (по весу) 38 37 61046 Пример 7 слоты, полученной в соответствии со справочным примером 8, в 3,2г (2,4мл) дихлорметана Полу400мг ацетата физиологически активного пепченный раствор был охлажден до 18°С и влит в тида А было растворено в растворе смеси 50 50 400мл 0,1% водного раствора поливинилового (3,6г) сополимера гликолевой и 2-оксимасляной спирта, предварительно доведенного до темперакислот, полученного в соответствии со справочтуры 16°С, а смесь была подвергнута обработке в ным примером 9, и полимолочной кислоты, полусоответствии примером 1, так что были получены ченной в соответствии со справочным примером микрокапсулы Распределение размеров частиц и 8, в 7,0г (5,3мл) дихлорметана Этот раствор был содержание физиологически активного пептида в охлажден до 17°С и залит в 1000 мл 0,1% водного микрокапсулах соответственно составляло 5 раствора поливинилового спирта, предварительно 70мкм и 10,5% (по весу) доведенного до температуры 17°С, после чего смесь была подвергнута такой же обработке, как и Пример 11 в примере 1, так что были получены микрокапсу200мг ацетата физиологически активного пеплы Распределение размеров частиц и содержатида А было введено и растворено в растворе ние физиологически активного пептида А в микросополимера молочной и гликолевой кислот (мокапсулах соответственно составляли 5-65мкм и лочная кислота/гликолевая кислота = 75/25 (моль 7,2% (по весу) %), средневзвешенный молекулярный вес, определенный методом гель-проникающей хроматоПример 8 графии= 5000, сред нечисловой молекулярный 240мг ацетата пептида NAcD2Nal-D4CIPheвес, определенный методом гель-проникающей D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys (AzaglyNic)-Leu-Lys(Nisp)хроматографии = 2000, среднечисловой молекуPro-DAIaNH2 (ниже кратко называемого физилололярный вес, определенный методом концевых гически активным пептидом В), полученного в согрупп - 2200, изготовитель ф "Ваш Пьюр Кемиответствии со справочным примером 2, было раскэл" (партия 920729)) в 5,3г (4,0мл) дихлорметана творено в растворе смеси 50 50 (1,76г) Полученный раствор был охлажден до 17°С и сополимера гликолевой и 2-оксимасляной кислот, влит в 1000мл 0,1% водного раствора поливиниполученного в соответствии со справочным прилового спирта (EG-40, "Ниппон Синтетик Кемикэл мером 8, в 3,2г (2,4мл) дихлорметана ПолученКо , Лтд "), предварительно доведенного до темный раствор был охлажден до 18°С и залит в пературы 16°С, а смесь эмульгировалась с ис400мл 0,1% раствора поливинилового спирта, пользованием турбинной мешалки со скоростью предварительно доведенного до температуры вращения 7000об/мин с получением эмульсии 16°С, а затем смесь была подвергнута обработке типа "масло/вода" Эта эмульсия "масло/ вода" в соответствии с примером 1, так что были полуперемешивалась при комнатной температуре в чены микрокапсулы Распределение размеров течение 3 часов, чтобы обеспечить испарение частиц и содержание физиологически активного дихлорметана Масляная фаза была отверждена пептида В в микрокапсулах соответственно сои собрана с использованием центрифуги (05PRставляло 5-70мкм и 10,3% (по весу) 22, ф "Хитачи"), работающей со скоростью 2000 Пример 9 об/мин Эти твердые частицы были повторно дис240мг ацетата пептида NAcD2Nal-D4CIPheпергированы в дистиллированной воде и еще раз D3Pal-Ser-NMeTyr-Dlys(AzaglyFur)-Leu-Lys(Nisp)центрифугированы с целью вымывания свободноPro-DAIaNH2 (ниже кратко называемого физиолого лекарственного агента и т п Собранные микрогически активным пептидом С), полученного в сокапсулы были еще раз диспергированы в небольответствии со справочным примером 10, было шом количестве дистиллированной воды, после растворено в растворе смеси 50 50 (1,76 г) сопочего было введено 0,Зг D-маннита и агент сушки лимера гликолевой и 2-оксимасляной кислот, попри температуре ниже точки замерзания, в релученного в соответствии со справочным примезультате чего был получен порошок Распределером 9, и полимолочной кислоты, полученной в ние размеров частиц физиологически активного соответствии со справочным примером 8, в 3,2г пептида А и его содержание в микрокапсулах со(2,4мл) дихлорметана Полученный раствор был ответственно составляли 5-60 мкм и 4,7% (по веохлажден до 18°С и влит в 400мл 0,1% водного су) раствора поливинилового спирта, предварительно доведенного до температуры 16°С, и смесь была Препарат пролонгированного высвобождения обработана в соответствии с примером 1, благонижеприведенных пептидов (1) и (2) приготавлидаря чему получили микрокапсулы Распределевается таким же образом, как это описано выше ние размеров частиц и содержание физиологиче(1) Ацетат физиологически активного пептида ски активного пептида С составляло 5-65 мкм и В 10,9% (по весу) (2) Ацетат физиологически активного пептида С Пример 10 240мг ацетата пептида N-Tetrahydrofur-2-oylПример 12 Gly-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-Dlys(Nic)200мг ацетата физиологически активного пепLeu-l_ys(Nisp)-Pro-DAIaNH2 (производство ф тида А было добавлено и растворено в растворе "ТАП", ниже кратко называемого физиологически 3,8г сополимера молочной и гликолевой кислот активным пептидом D, FAB масс-спектрометрия (молочная кислота/гликолевая кислота = 75/25 т/е 1647 (М+Н)) было растворено в растворе сме(моль %), средневзвешенный молекулярный вес, си 50 50 (1,76г) сополимера гликолевой и 2определенный методом гель-проникающей хромаоксимасляной кислот, полученного в соответствии тографии = 10000, среднечисловой молекулярный со справочным примером 9, и полимолочной кивес, определенный методом гель-проникающей 40 39 61046 хроматографии = 4400, среднечисловой молекулись остатки микрокапсул и определялось количелярный вес, определенный методом концевых ство физиологически активного пептида А в микгрупп = 4300, производство ф "Ваш Пьюр Кемирокапсулах Результаты приведены в таблице 1 кэл" (партия 880530)) в 6,7г (5,0мл) дихлорметана Примеры экспериментальной проверки 2-6 Полученный раствор был охлажден до 17°С и Аналогично примеру экспериментальной провлит в 1000мл 0,1% водного раствора поливиниверки 1, определялось остаточное количество лового спирта, предварительно доведенного до физиологически активного пептида А с использотемпературы 11 °С После этого с целью получеванием микрокапсул, полученных в соответствии с ния микрокапсул была повторена процедура припримерами 2-6 Результаты также приведены в мера 11 Распределение размеров частиц и сотаблице 1 держание физиологически активного пептида А в микрокапсулах соответственно составляли 5Таблица 1 65мкм и 4,5% (по весу) Пример 13 Остаток физиологически активного пеп400мг ацетата физиологически активного пептида А % тида А было растворено в растворе сополимера Не- Не- Не- Не- Не- Не- Немолочной и гликолевой кислот, полученного в соДень 1 де- де- де- де- де- де- деответствии со справочным примером 12, 3,6г в ля 1 ля 2 ля 3 ля 4 ля 5 ля 6 ля 8 8,0г (6,0мл) дихлорметана Полученный раствор Экспебыл охлажден до 15°С и влит в 1000мл 0,1% водрименного раствора поливинилового спирта, предваритальный 88,0 66,5 42,3 15,2 тельно доведенного до температуры 14°С После пример этого с целью получения микрокапсул повторя1 лась процедура, приведенная в примере 11 РасЭкспепределение размеров частиц и содержание фиримензиологически активного пептида А в тальный 92,8 76,5 62,6 48,7 38,6 26,5 микрокапсулах соответственно составляли 5пример 65мкм и 8,2% (по весу) 2 Пример 14 Экспе400мг ацетата физиологически активного пеприментида А было растворено в растворе сополимера тальный 96,5 90,5 77,5 64,9 59,2 46,9 38,7 20,3 молочной и гликолевой кислот, полученного в сопример ответствии со справочным примером 13, всего 3 3,6г, в 8,0г (6,0мл) дихлорметана Полученный Экспераствор был охлажден до 15°С и залит в 1000мл римен0,1% водного раствора поливинилового спирта, тальный 99,4 94,5 87,2 76,3 66,0 - 46,6 30,7 предварительно доведенного до температуры пример 15°С После этого была осуществлена процедура, 4 приведенная в примере 11, что позволило полуЭкспечить микрокапсулы Распределение размеров часриментиц и содержание физиологически активного пептальный 92,9 75,0 45,7 - 17,5 тида А соответственно составляли 5-65 мкм и пример 8,4% (по весу) 5 Пример 15 ЭкспеАцетат лейпрорелина в количестве 400мг (изрименготовитель ф "Такеда Кемикэл Индастриз") был тальный 92,3 61,3 33,5 6,4 добавлен в раствор 3,6г вышеупомянутого сопопример лимера молочной и гликолевой кислот, исполь6 зуемого в примере 12, в 8,0г (6,0мл) дихлорметана, так что был получен прозрачный однородный Как видно из таблицы 1, все микрокапсулы, раствор Указанный раствор был охлажден до соответствующие настоящему изобретению, ха15°С и влит в 1000мл 0,1% водного раствора порактеризуются в основном постоянной скоростью ливинилового спирта, предварительно доведенновысвобождения физиологически активного пептиго до температуры 15°С После этого с целью пода и, кроме того, практически полным отсутствием лучения микрокапсул была осуществлена первоначального всплеска процедура, описанная в примере 11 В таблице 2 приведены модели линейной регПример экспериментальной проверки 1 рессии, коэффициенты корреляции и периоды Около 30мг микрокапсул, полученных в соотпротекания высвобождения, подсчитанные метоветствии с примером 1, было диспергировано в дом отсечения отрезков на оси Х-ов Для их опредисперсной среде (раствор 2,5мг карбоксиметилделения использовались процедуры, описанные в целлюлозы, 0,5мг полисорбата 80 и 25мг маннита "Методах биологических испытаний" (автор Акира в дистиллированной воде) и дисперсия была ввеСакума, "Токио Юниверсити Пресс", 5 июня 1978 дена подкожно в спину крыс-самцов SD в возрасте г,стр 111) 10 недель с использованием иглы 22G (дозировка микрокапсул бОмг/кг) После введения препарата крысы умерщвлялись, из зоны инъекций извлека 41 Таблица 2 перисреднеод взвешенкоэффи- высво ный моле- модель божкулярный линейной циент корреля- дения вес поли- регрессии (неции молочной дели) кислоты Экспериментальный пример 1 3000 Экспериментальный пример 2 5000 Экспериментальный пример 3 7500 Экспериментальный пример 4 9000 42 61046 остаток % 95,4(26,9 х на число недель остаток % 94,4(14,2 х на число недель остаток % 98,4(10,0 х на число недель остаток % -102,1-(8,9 х на число недель 2 (R = 0,992) 3,5 (R2 = 0,975) 6,6 (R2 = 0,996) 9,8 (R2 = 0,995) 11,5 Из таблицы 2 видно, что путем изменения средневзвешенного молекулярного веса полимолочной кислоты, которая смешивается с сополимером гликолевой и 2-оксимасляной кислот, можно точно регулировать интервалы высвобождения в диапазоне где-то от 3,5 до 11,5 недель В таблице 3 приведены модели линейной регрессии, коэффициенты корреляции и интервалы высвобождения, подсчитанные как отсеченные отрезки на оси Х-ов Эти характеристики определялись на основании данных, приведенных в таблице 1, с использованием тех же процедур, которые использовались при заполнении таблицы 2 Из таблицы 3 видно, что путем изменения содержания в молях гликолевой кислоты в сополимере гликолевой и 2-оксимасляной кислот, который необходимо смешать с полимолочной кислотой, можно довольно тонко регулировать продолжительность высвобождения в диапазоне от где-то 3,1 недели до 6,6 недель Примеры экспериментальной проверки от 7 до 9 Точно так же, как в примере экспериментальной проверки 1, определялось остаточное количество физиологически активного пептида в микрокапсулах, полученных в соответствии с примерами 7 - 9, за исключением того, что доза составляла 30мг/кг Результаты приведены в таблице 4 В таблице 5 приведены модели линейной регрессии, коэффициенты корреляции и периоды высвобождения, подсчитанные как отсеченные отрезки на оси Х-ов Эти характеристики определялись на основании данных, приведенных в таблице 4, с использованием тех же процедур, которые использовались в случае таблицы 2 Таблица 4 Остаток физиологического пептида (%) 1 2 Физиоло1 не- не- не- негическая день де- де- де- деактивность ля ля ля ля пример экспе99,374,551,433,224,1 риментальной проверки 7 пример экспе87,4 75,052,332,825,1 риментальной проверки 8 пример экспеС 89,4 73,654,937,723,4 риментальной проверки 9 Таблица 5 Таблица 3 со" содержание в мопериоды коэфлях гликолевой модель протекания фициент кислоты в сополи- линейной высвобожкорремере гликолевой регрессии дения (неделяции кислоты ли) остаток % пример экспе94,4- (R2 = 60 риментальной 6,6 (14,2 х на 0,975) % проверки 2 число недель остаток % пример экспе95,72 65 риментальной 4,6 (20,6 х на (R = % проверки 5 число не- 0,996) дель остаток % пример экспе96,62 70 риментальной (30,9 х на (R = % проверки 6 число не- 0,994) дель период коэффи- высвоциент бождекорреля- ния ции (недели) физиолог активный пептид пример экспериментальной проверки 7 пример экспериментальной проверки 8 пример экспериментальной проверки 9 модель линейной регрессии А остаток % = 97,8-(20,1 хна число недель (R2 = 0,975) 4,9 В остаток % = 93,5-(18,6хна число недель (R2 = 0,971) 5,0 С остаток % = 94,4-(18,5хна число недель (R2 = 0,987) 4,9 43 61046 Из таблиц 4 и 5 видно, что соответствующие изобретению микрокапсулы характеризуются в основном постоянной скоростью высвобождения и фактически полным отсутствием первоначального выброса Пример экспериментальной проверки 10 Как и в примере экспериментальной проверки 7, определялось остаточное количество физиологически активного пептида в микрокапсулах с использованием микрокапсул, полученных в соответствии с примером 10 Результаты приведены в таблице 6 В таблице 7 приведены модели линейной регрессии, коэффициенты корреляции и периоды длительности высвобождения, подсчитанные как отсеченные отрезки на оси Х-ов Эти характеристики определялись на основаниях данных, приведенных в таблице 6 с использованием той же процедуры, что и в случае таблицы 2 44 ного пептида А Результаты приведены в таблице 8 Пример экспериментальной проверки 13 Процедура, примененная в примере экспериментальной проверки 11, была в несколько измененном виде повторена с использованием микрокапсул, полученных в соответствии с примером 13, и был проведен анализ физиологически активного пептида А Результаты приведены в таблице 8 Пример экспериментальной проверки 14 Процедура, примененная в примере экспериментальной проверки 11, была повторена в несколько измененном виде с использованием микрокапсул, полученных в соответствии с примером 14, и был проведен анализ физиологически активного пептида А Результаты приведены в таблице 8 Таблица 8 Таблица 6 остаток физиологически активного пептида D (%) неде- неде- неде- неде1 день ля 1 ляг ля 3 ля 4 пример экспериментальной 93,5 + 69,9 + 37,3 + 17,0 + 7,9 + проверки 10 0,5 3,6 1,6 1,4 0,5 Таблица 7 периоды модель коэффиципротекания линейной ент корревысвобождерегрессии ляции ния (недели) остаток % пример экс= 95,0перимен(24,1 хна (R2= 0,969) 3,9 тальной прочисло неверки 10 дель Из таблиц 6 и 7 видно, что соответствующие изобретению микрокапсулы характеризуются в основном постоянной скоростью высвобождения физиологически активного пептида и практически полным отсутствием первоначального выброса Пример экспериментальной проверки 11 Около 30мг микрокапсул, полученных в соответствии с примером 11, было диспергировано в 0,5мл дисперсной среды (приготовлена путем растворения карбоксиметил целлюлозы (2,5мг), полисорбата 80 (0,5мг) и маннита (25мг) в дистиллированной воде), затем была осуществлена подкожная инъекция этой дисперсии в спину крыс SD в возрасте 10 недель с использованием иглы 22G (дозировка микрокапсул бОмг/кг) После введения микрокапсул и определялось количество физиологически активного пептида А в микрокапсулах Результаты приведены в таблице 8 Пример экспериментальной проверки 12 Процедура, примененная в примере экспериментальной проверки 11, была в несколько измененном виде повторена с использованием микрокапсул, полученных в соответствии с примером 12, и был проведен анализ физиологически актив Остаток физиологически активного пептида А % Не- Не- Не- Не- Не- НеДень деля деля деля деля деля деля 1 1 2 3 4 6 8 Эксперименталь82,8 ный пример 11 Эксперименталь96,7 ный пример 12 Эксперименталь100,0 ный пример 13 Эксперименталь96,3 ный пример 14 21,8 91,7 79,5 69,2 59,2 22,8 84,3 43,9 31,9 67,5 38,0 23,5 (- не определяется) В таблице 9 приведены модели линейной регрессии, коэффициенты корреляции и периоды высвобождения, подсчитанные как отсеченные отрезки на оси Х-ов Эти характеристики определялись на основании данных, приведенных в таблице 8, с использованием той же процедуры, которая использовалась в случае таблицы 2 Таблица 9 содержание в молях периоды гликолевой модель ли- коэффи- протекания кислоты в нейной рег- циент кор- высвобожсополимере рессииі реляции дения (негликолевой дели) кислоты пример остаток % = экспери97,1-(75,7 х (R2 = 1,3 ментальна число 0,994) ной пронедель верки 11 45 61046 Продолжение таблицы 9 содержание в молях гликолевои кислоты в сополимере гликолевои кислоты пример экспериментальной проверки 12 пример экспериментальной проверки 13 пример экспериментальной проверки 14 периоды модель ли- коэффи- протекания нейной рег- циент кор- высвобождения (нерессииі реляции дели) остаток % = 92,2-(9,7 х на число недель (R = 0,998) 10,3 остаток % = 102,4-(24,8 х на число недель (R2 = 0,982) 4,1 остаток % = 97,7-(26,5 х на число недель (R2 = 0,989) 3,7 2 Из таблиц 8 и 9 видно, что препарат пролонгированного высвобождения, соответствующий настоящему изобретению, неизменно обеспечивает в основном постоянную скорость высвобождения пептида в самые разные периоды времени Пример для сравнения 1 400мг ацетата физиологически активного пептида А было введено в раствор 3,6г сополимера молочной и гликолевои кислот (молочная кислота / гликолевая кислота = 75/25 (моль %), средневзвешенный молекулярный вес, определенный методом концевых групп = 45000,(изготовитель ф "Берингер-Ингельхайм" (партия RG505-05077)) в 33,2г (25,0мл) дихлорметана, однако ацетат физиологически активного пептида А невозможно было эффективно растворить Пример для сравнения 2 400мг ацетата физиологически активного пептида А было введено в раствор 3,6г сополимера молочной и гликолевои кислот (молочная кислота/ гликолевая кислота = 75/25 (моль %), средневзвешенный молекулярный вес, определенный методом гель-проникающей хроматографии = 18000, среднечисловой молекулярный вес, определенный методом гель-проникающей хроматографии = 8400, среднечисловой молекулярный вес, определенный методом концевых групп = 30000, (ф "Берингер-Ингельхайм" (партия RG75215057)), в 8,0г (6,0мл) дихлорметана, однако физиологически активный пептид А невозможно было эффективно растворить Эта дисперсия была охлаждена до 17°С и залита в 1000мл 0,1% водного раствора поливинилового спирта, предварительно доведенного до температуры 15°С, с получением микрокапсул точно таким же способом, как и в случае примера 11 Распределение размеров частиц и содержание физиологически активного пептида А в микрокапсулах соответственно составляли 10-ЭОмкм и 2,5% (по весу) 46 Пример для сравнения 3 400мг ацетата физиологически активного пептида А было введено в раствор 3,6г сополимера молочной и гликолевои кислот (молочная кислота / гликолевая кислота = 75/25 (моль %), средневзвешенный молекулярный вес, определенный методом гель-проникающей хроматографии = 58000, среднечисловой молекулярный вес, определенный методом гель-проникающей хроматографии = 15000, среднечисловой молекулярный вес, определенный методом концевых групп = 53000, (ф "Берингер-Ингельхайм" (партия RG75505019)), в 21,2г (16,0мл) дихлорметана, однако физиологически активный пептид А невозможно было эффективно растворить Эта дисперсия была охлаждена до 17°С и залита в 1000мл 0,1% водного раствора поливинилового спирта, предварительно доведенного до температуры 16°С, с получением микрокапсул точно таким же способом, как и в случае примера 2 Распределение размеров частиц и содержание физиологически активного пептида А в микрокапсулах соответственно составляли 10 - 90мкм и 3,6% (по весу) Как видно из примеров для сравнения 1-3, в случае использования сополимера молочной и гликолевои кислот, у которого практически нет концевых карбоксильных групп, пептид (I), соответствующий настоящему изобретению, не может быть эффективно растворен Пример для сравнения 4 400мг ацетата лейпрорелина (изготовитель ф "Такеда Кемикэл Индастриз") было введено в раствор 3,6г того же самого сополимера молочной и гликолевои кислот, что использовался в примере для сравнения 2, в 8,0г (6,0мл) дихлорметана, однако ацетат лейпролерина было невозможно эффективно растворить Препарат пролонгированного высвобождения, соответствующий настоящему изобретению, характеризуется постоянной скоростью высвобождения лекарственного агента, в частности пептида (І) в течение продолжительного периода времени и таким образом способствует длительному и устойчивому эффекту Более того, высвобождение лекарственного средства можно легко контролировать, подавляя его чрезмерный выброс сразу же после введения препарата В частности, подавляется эффект высвобождения гистамина сразу же вслед за введением пептида (І) в указанном препарате пролонгированного высвобождения Данный препарат пролонгированного высвобождения характеризуется превосходной диспергируемостыо Более того, препарат устойчив (например, к воздействию света, тепла, влажности, краски) и малотоксичен, поэтому его применение вполне безопасно В соответствии со способом получения по настоящему изобретению препарат пролонгированного высвобождения можно легко получить при хорошей производительности Полученный таким образом препарат пролонгированного высвобождения имеет гладкую поверхность и характеризуется превосходной подвижностью 47 Комп'ютерна верстка М Клюкш 61046 48 Підписне Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119