Композиція для пролонгованого і контрольованого вивільнення пептидної лікарської речовини і спосіб її одержання, спосіб приготування суспензії, що призначена для парентерального введення

1. Композиция для пролонгированного и контролируемого высвобождения пептидного лекарственного вещества формулы (1): Ac-D-Nal-D-pCI-Phe-R 3-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-ProD-Ala-NH2, в которой R3 означает D-Pal или D-Trp, отли-чающаяся тем, что она представлена в виде микросфер из полимерного материала, поддающе-гося биологическому разложению, содержащи х нерастворимую в воде соль пептида формулы (1) и указанные микросферы получены в результате процесса, заключающегося в следующих этапах: a) превращение водорастворимой соли пептида формулы (1) в соль пептида, нерастворимую в воде; b) суспендирование указанной нерастворимой в воде соли пептида в органической среде, содержащей биодеградируемый полимерный материал в растворенном состоянии, для получения органической суспензии; c) диспергирование указанной органической суспензии в водной среде, которая образует непрерывную фазу полученной эмульсии; d) перенесение упомянутой эмульсии в избыток водной среды; и e) выделение полученных таким образом микросфер из жидкой фазы, при этом упомянутые микросферы содержат фармацевтически эффективное количество от C2 (54) КОМПОЗИЦІЯ ДЛЯ ПРОЛОНГОВАНОГО І КОНТРОЛЬОВАНОГО ВИВІЛЬНЕННЯ П ЕПТИДНОЇ ЛІКАРСЬКОЇ РЕЧОВИНИ І СПОСІБ ЇЇ ОДЕРЖАННЯ, СПОСІБ ПРИГОТУВАННЯ СУСП ЕНЗІЇ, ЩО ПРИЗНАЧЕНА ДЛЯ ПАРЕНТЕРАЛЬНОГО ВВЕД ЕННЯ 35569 вес.% указаной нерастворимой в воде соли пептида. 7. Способ получения композиции в виде микросфер из полимерного материала, поддающегося биологическому разложению, содержащих нерастворимую в воде соль пептида аналога LHRH, отличающийся тем, что: а) превращают растворимую в воде соль пептида формулы (I): Ac-D-Nal-D-nCI-Phe-R 3-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-ProD-Ala-NH2, в которой R3 означает D-Pal или D-Trp, в нерастворимую в воде соль пептида; b) суспендируют указанную нерастворимую в воде соль пептида в органической среде, содержащей биодеградируемый полимерный материал в растворенном состоянии, для получения органической суспензии; c) диспергируют указанную органическую суспензию в водной среде, которая образует непрерывную фазу полученной эмульсии; d) переносят упомянутую эмульсию в избыток водной среды; и e) выделяют полученные таким образом микросферы из жидкой фазы, при этом упомянутые микросферы содержат фармацевтически эффективное количество от 5 до 20 вес % указаной нерастворимой в воде соли пептида формулы (1). 8. Способ по п. 7, отличающийся тем, что перед перенесением эмульсии масло в воде в избыток водной среды осуществляют частичное выпаривание органического растворителя, входящего в состав масляной фазы. 9 Способ по п. 7, отличающийся тем, что нерастворимая в воде соль пептида представляет собой памоат, таннат, стеарат или пальмитат. 10. Способ по одному из пп. 7-9, отличающийся тем, что биоразлагающийся полимерный материал представляет собой полилактид, полигликолид или сополимер молочной и гликолевой кислоты. 11. Способ по п. 10, отличающийся тем, что сополимер L или 0,1-молочной кислоты содержит от 45 до 90 мол % звеньев молочной кислоты и, соответственно, от 55 до 10 мол % звеньев гликолевой кислоты. Изобретение относится к композиции для пролонгированного высвобождения пептидного лекарственного вещества формулы (1): Ac-D-Nal-D-pCl-Phe-R 3-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-DAla-NH2, (1) в которой R3 означает Р-Раl или D-Тгр. Такие пептиды являются аналогами LHRH и предпочтительно могут применяться для терапевтического лечения гормонально зависимых нарушений. В приведенной выше формуле (1), по крайней мере если нет других указаний; аминокислоты обозначены условно и имеют конфигурацию L; D-NaI означает D-3-(2-нафтил)-аланин и DPaI означает D-3-(3-пиридил)-аланин. Композицию согласно изобретению получают в виде микросфер из поддающегося биологическому разложению полимерного материала, заключающегося в себе нерастворимую в воде соль пептида формулы (1). Такая композиция, содержащая по меньшей мере 5% вес нерастворимой соли от веса биоразлагающегося полимерного материала, может выделять пептид формулы (1), контролируемый образом, в течении нескольких суток, после ее парентерального введения человеку или животному. Другим предметом изобретения является способ получения композиции в том виде, как описано выше. Он заключается в том, что, во-первых, водорастворимую соль пептида формулы (1) превращают в соль пептида, нерастворимую в воде, затем готовят суспензию этой соли в растворе биоразлагающегося полимерного материала, эту суспензию превращают в эм ульсию типа масло в воде и, наконец, выделяют микросферы из биоразлагающегося полимера после переноса эмульсии "масло в воде" в избыток водной среды. К настоящему времени были предложены различные технические решения для получения композиции с пролонгированным контролируемым высвобождением лекарственного вещества, с применением имллантируемых биоразлагающи хся элементов, микрокапсул или пористых биоразлагающихся матриц в виде микросфер или микрочастиц разных размеров. В европейском патенте ЕП-А-0.052.510 описано получение микрокапсул путем разделения водорастворимых фаз ле-карственного вещества и европейском патенте ЕП-А-0-058.481 или американском патенте US-A3.976.071 описано получение биоразлагающихся имплантируемых элементов или пористых матриц на основе полилактида или сополимера лактидгликозида в качестве необходимых основных составляющи х. Э ти те хнологии используют предварительное растворение биоразлагающегося полимера или сополимера, используемого в качестве носителя, в органическом растворителе, а в случае необходимости, растворение самого лекарственного вещества. Другие те хнологии, также ведущие к образованию микрокапсул или микросфер, используют способы эмульгирования, при этом основная фаза этих способов заключается в получении эмульсии типа масло в воде из органического раствора полимерного материала и водного раствора пептида: см. американские патенты US-А-4.384.975, 3.891.570,4.389.330, 3.737.337, 4.652.441 или международную заявку WO-90/13361. Однако, во всех этих случаях специалист вынужден разрабатывать сложные и трудно описываемые технологии, позволяющие максимально уменьшить потери активного пептидного вещества, обладающего исключительно хорошей водорастворимостью, например, предусматривающие двойное эмульгирование. Благодаря образованию в подобном способе эмульсии типа масло в воде и помещению этой последней в водную среду, способ согласно изобретению позволяет, против всяких ожиданий, удачно преодолеть недостатки известных на сегодняшний день технологий. 2 35569 Действительно, осуществляя сначала превращение водорастворимой соли пептида в соль пептида, нерастворимую в воде, в соответствии с изобретением, специалист получает возможность воспользоваться разницей растворимостей используемых ингредиентов, и, в частности, разницей между "растворителями" и "не растворителями", используемыми в способе. Указанный способ отличается тем, что: а) водорастворимую соль пептида формулы (1) превращают в соль пептида, нерастворимую в воде; b) приготавливают суспензию указанной соли пептида, нерастворимой в воде, в органической среде, содержащей растворенный в ней полимерный материал, поддающийся биологическому разложению; с) указанную органическую суспензию диспергируют в водной среде, образующей непрерывную фазу получаемой в результате эмульсии; d) указанную эмульсию переносят в избыток водной среды и, наконец, отделяют от жидкой фазы полученные таким образом микросферы. Первая стадия способа состоит в том, что превращают водорастворимую соль пептида в соль пептида, нераствормую в воде. Под "водорастворимой" солью понимают м соль пептида, обладающую растворимостью в воде, большей, или равной 0,1 мг/мл при 2500, предпочтительно, большей или равной 1,0 мг/мл. Под "нерастворимой в воде" солью понимают соль пептида, обладающую растворимостью в воде более низкой или равной 0,1 мг/мл при 250С. Пептидные соли такие как памоат, таннат, стеарат или пальмитат отвечают этому определению. В качестве биоразлагающегося полимерного материала используют полилактид, полигликолид, сополимер молочной и гликолевой кислот. Предпочтительно использовать в качестве полимерного материала сополимеры молочной и гликолевой кислот (РLGА), в частности, сополимеры кислот L- или D,L-молочной кислоты, содержащие 45-90% (% моль) звеньев молочной кислоты и, соответственно, 55-10% (%моль) звеньев гликолевой кислоты. В качестве растворителя выбранного полимерного материала используют такой органический растворитель, как например, метиленхлорид, во всяком случае это должен быть растворитель, не ведущий себя как "растворитель" по отношению к соли пептида, удерживаемой (во взвешенном состоянии) в полимерном материале. Согласно изобретению, после образования суспензии указанной соли в органическом растворе полимерного материала, эту суспензию соединяют с определенным количеством водной среды, представляющей собой обычно воду с добавкой специального поверхностно активного вещества. Это делается с целью быстрого образования однородной эмульсии типа масло в воде, при этом указанная водная среда служит непрерывной фазой. В приготовлении такой эмульсии участвуют разнообразные факторы, обуславливающие размер илиструктур у микросфер, получаемых в результате этого процесса. Один из факторов, которые следует учитывать - скорость введения органического раствора в водную среду; другим таким фактором может служить температура или также скорость перемешивания или энергия дисперги рования (с помощью ультразвука), последний фактор, в частности, влияет на размер микросфер конечного продукта. Применение методов и условий эмульгирования, соответствующи х преследуемой цели, - в возможностях специалиста в данной области. В способе получения указанной эмульсии может быть также выгодным изменение объемного соотношения составляющих ее фаз, а именно уменьшение начального объема органической фазы по отношению к начальному объему водной фазы. В одном из случаев, благодаря летучести используемых органических растворителей, например метиленхлорида, для этого может оказаться достаточным испарение, спонтанно возникающее при перемешивании; в других случаях, можно ускорить желаемый процесс путем частичного выпаривания при пониженном давлении. После образования стойкой эмульсии, последняя переносится в избыточное количество водной среды, обычно-воды. Целью этой операции является усиление отверждения зародышевых микросфер, образовавшихся в эмульсии, путем извлечения еще присутствующего в указанных микросферах органического растворителя. Эта операция имеет также целью одновременное удаление еще имеющихся следов поверхностноактивного вещества , которое могло остаться в полимерной массе при окончательном затвердевании. Отметим, что вода не является растворителем как для полимерного биоразлагающегося материала, которым может быть, например PLGA, так и для соли пептида, содержащейся в указанных микросферах. Эта ситуация соответствующим образом способствует необходимому извлечению остаточного растворителя полимера, например CH2CI2. После перенесения указанной эмульсии в избыток водной среды, отбирают отвержденные микросферы с помощью известных методов, например, центрифугированием, фильтрацией или декантацией. Осуществляют также промывку, очистку и сушку. Одним из преимуществ способа согласно изобретению является то, что он позволяет получать микросферы с управляемыми с точностью размерами, это управление в основном осуществляется в процессе получения эмульсии (например, скоростью перемешивания). Другим преимуществом является исключительно высокое наполнение пептидами, которое способ позволяет получить: 5,10 или 20 весовых % и более, в различных случаях. Кроме того, вы ход операции введения пептида или соли пептида исключительно велик, что достигается благодаря предварительному превращению водорастворимой соли пептида в соль пептида, нерастворимую в воде. Микросферы, полученные способом согласно изобретению из вышеуказанных ингредиентов, в дальнейшем используются, после соответствующей стерилизации, для приготовления суспензии, предназначенных для парентерального введения, например, путем внутримышечный или подкожных инъекций. Изобретение иллюстрируется примерами. Эти примеры иллюстрируют изобретение, но не ограничивают его. Пример 1. 3 35569 3 г ацетата аналога LHRH формули Ac-D-NalD-pCl-Phe-D-PaI-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2 были превращены в соответствующий памоат с помощью известных методов и обработаны таким образом, что были получены частицы со средними размерами около 19 микрон. Была приготовлена суспензия 0,317 г указанного памоата и 1,683 г PLGA 75:25 (мол%) в 20 мл CH2CI2, содержащая в растворенном виде 1,683 г сополимера кислот молочной-D,L и гликолевой (РLGА) 75:25 (мол % собственная вязкость 0,82 в HFIP). Смешивание осуществлялось при температуре окружающей среды, при перемешивании с целью получения однородной суспензии. Полученную суспензию затем выгружали в один прием в 500 мл 0,075%-ного раствора метоксицеллюлозы в воде, после чего в течение около 90 минут при температуре окружающей среды осуществляли перемешивание смеси (скoрость перемешивания: 900 об/мин). Изменение состояния эмульсии периодически проверялось, в среднем каждые 30 минут, путем отбора проб и исследования появившихся микросфер под микроскопом. После окончания перемешивания (стабилизации уменьшения размеров микросфер), указанная эмульсия была перенесена в один прием в 2 л воды, поддерживаемой при 100С, и полученная смесь перемешивалась до oднородного состояния. Микросферы PLGA были отделены от реакционной смеси и очищены путем многократного центрифугирования, вперемешку с промывкой водой, затем отфильтрованы и просушены при пониженном давлении. Было собрано таким образом 1,61 г(выход 80%) микросфер PLGA, содержащих более 94% частиц диаметром менее 100 микрон (55-85 микрон максимально). Анализ (растворение массы PLGA, извлечение и определение пептида с помощью HPLC) показал, что содержание в микросферах памоата составляет 9,05 вес % (расчетное содержание: 100%). Полученные таким образом микросферы были затем подвергнуты стерилизации гаммаизлучением и из них была образована суспензия в специальном стерильном носителе. Испытания in vivo (определение содержания тестостерона в крови у крыс самцов) подтвердили равномерное выделение активного вещества. Пример 2. Действовали так же, как описано в примере 1, используя 0,634 г памоата аналога LHRH на 1,366 г PLGA 75:25. Микросферы PLGA: 1,70 г (вы ход 85%). Содержание полезного наполнителя: 18,3% (расчетное: 20%). Полученные таким образом микросферы были затем подвергнуты стерилизации гаммаизлучением и из них была приготовлена суспензия в специальном стерильном носителе. Испытания in vi vo (определение содержания аналога в сыворотке крови у крыс самцов) подтверждают равномерное выделение биологически значимого количества активного вещества по меньшей мере в течение 24-х суток Таблица Определение содержания пептида (нг/мл) 47,1 48,9 52,2 46,9 50,4 40,1 42,1 29,8 33,5 33,0 25,6 Срок (количество суток) 0+3 часа 1 2 3 6 8 10 14 16 20 24 Эти результаты были подтверждены также анализами забитых животных через 30 суток: потеря веса тестикулов по меньшей мере на 80%, потеря веса семенных пузырьков по меньшей мере на Пример 3. Был приготовлен по примеру 1 с использованием 3 г ацетата аналога LHRH формулы Ac-D Nal-D-pCl-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-DAla-NH2. После превращения этого ацетата в соответствующий памоат и операций переработки, описанных в примере 1, были получены микросферы из полимерного материала, имеющие те же характеристики, что и предыдущие. 4 35569 __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2001 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 50 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 5