Тверда композиція колагенового носія з твердим фібриногеном і твердим тромбіном, матеріал для припинення кровотечі, склеювання і закриття тканин, спосіб закриття тканини, спосіб припинення кровотечі, спосіб скл

Винахід відноситься до готової до застосування композиції, що абсорбується, для склеювання тканин, закриття тканин і зупинки кровотечі (гемостазу), що складається, переважно, з носія, покритого твердими фіксованими компонентами людського походження фібринового клею: фібриногену людини і тромбіну людини. Цю фіксовану композицію можна наносити безпосередньо, наприклад, на поверхню рани. При контакті даної композиції з кров'ю, загальною водою організму або фізіологічним розчином механізм цієї системи імітує остаточну стадію системи згортання (коагуляційних процесів), на якій тромбін каталізує перетворення фібриногену на фібрин і активацію фактора XIII у фактор ХІІІа. Утворений фактор ХІІІа стабілізує фібриновий згусток утворенням ковалентного зв'язку. Як і у випадку будь-якого двокомпонентного клею, поверхня рани і носій склеюються шляхом полімеризації. Під час цього процесу, що триває приблизно 3-5 хвилин, пропоновану композицію переважно притискають до поверхні рани. Компоненти пропонованої композиції ферментативно розкладаються приблизно протягом 4-6 місяців після нанесення. На ринку присутні фібринові клеї, що імітують остаточну стадію коагуляційних процесів, що складаються з висококонцентрованого розчину фібриногену, який перед нанесенням на хірургічну рану змішують з розчином тромбіну. Ці суміші містять інгібітори фібринолізу, наприклад, апротинін або ε-амінокапронову кислоту, для запобігання передчасного розчинення фібринового згустку фібролізином (плазміном). Ці двокомпонентні клеї мають низку переваг у різних хірургічних процедурах, однак, при сильній кровотечі можуть вимиватися до зупинки кровотечі. Далі, ці двокомпонентні клеї вимагають здійснення деяких підготовчих операції, включаючи відтавання або розчинення. Тому вони дуже непрактичні, працювати з ними обтяжливо, і для успішного застосування цих фібринових клеїв треба мати досвід. За останнє десятиліття хір урги одержали можливість вибирати з великого числа фібринових клеїв, що загоюють рани, для ряду показань. Однак, у більшості клінічних іспитів із застосуванням фібринових клеїв для поліпшення кровоспинних (гемостатичних) властивостей і властивостей склеювання додатково використовувався колагенове волокно, що свідчило про їх недоліки й обмежені можливості застосування в хірургії. Колаген використовували в якості кровоспинного засобу з кінця шістдесятих років. Колаген є структурним білком, що найбільш часто зустрічається у всіх ссавців. Мономірна форма білку масою приблизно 300 кілодальтонів (тропоколаген) ковалентно зшитий у специфічних ділянках. Внаслідок цього зрілий білок є нерозчинним і утворює характерні фібрили з високою міцністю на розтягання. Відомі численні підкласи колагену, найбільш розповсюдженим з яких є колаген типу І - основний тип колагену, що є присутнім у шкірі, кістковій тканині, сухожиллях і роговиці. Колаген - це фібрилярний білок , що складається з потрійної спіралі довжиною приблизно 290нм. П'ять таких потрійних спіралей (молекул тропоколагену) розташовані в шаховому порядку й утворюють мікрофібрилу діаметром приблизно 3,6нм. Ці мікрофібрили мають полярні і неполярні сегменти, що легкодоступні для специфічних між- і внутрішньофібрилярних взаємодій. Мікрофібрили упаковані в тетрагональні ґрати й утворюють субфібрили діаметром приблизно 30нм. Ці субфібрили потім збираються в колагенову фібрилу, основну одиницю сполучної тканини, що має діаметр кілька сотень нм і тому спостерігаються в оптичний мікроскоп у вигляді тонкої лінії. Колаген може застосовуватися в якості матеріалу для закриття ран, можливо з покриттям, що містить фібриновий клей. Фібринові клеї, тобто, комбінації фібриногену, тромбіну та апротиніну, протягом багатьох літ знаходять успішне терапевтичне застосування для склеювання тканин і нервових волокон і для закриття поверхонь при слабкій кровотечі. Одним з недоліків фібринових клеїв є те, що у випадку сильної кровотечі клей зазвичай змивається до того, як відбудеться достатня полімеризація фібрину. Для усунення цього недоліку хірурги почали вручну наносити рідкі фібринові клеї на носії, що абсорбують, наприклад, пучок колагенових волокон. Незважаючи на вражаючий успіх такого спільного застосування, цей метод дотепер у широких масштабах не застосовується, що обумовлено деякими його недоліками. Так, готування препарату відносно складне, метод вимагає досвіду і кваліфікації персоналу, і в екстрених випадках застосувати препарат негайно не можна - дляйого готування потрібно 10-15 хвилин. Зазначені фактори стимулювали розробку фіксованої комбінації колагенового носія з покриттям із твердого фібриногену, твердого тромбіну і твердого апротиніну, відомої з ЕР 0 059 265. Функція колагенового носія, описана в ЕР 0 059 265, полягає, головним чином, в абсорбуванні препарату, що коагулює, яким він покритий, і в доданні йому механічної стійкості. Продукт, що поєднує в собі кровоспинні властивості фібринового клею з перевагами колагену в якості носія, розроблений і випускається під товарним знаком TachoComb®. TachoComb® - це готова до користування і легка в застосуванні комбінація колагенової латки, що покрита такими активними компонентами фібринового клею як фібриноген людини, бичачий тромбін і бичачий апротинін. TachoComb® продається з початку 1990-х років компанією Nycomed Pharma і пройшов клінічні іспити в Європі на більш ніж 2500 хворих. Крім того, продукт пройшов програму клінічних іспитів у Японії на більш ніж 700 хворих з самими різними показаннями, наприклад, резекція печінки і легенів, операція жовчного тракту, хірургія селезінки, нирок і панкреатична хірургія, отоларингологічна хірургія, оперативна гінекологія і серцевосудинна хірургія. TachoComb® був визнаний ефективним і безпечним. У ході проведених клінічних іспитів ніяких клінічних ускладнень, зв'язаних із застосуванням TachoComb®, не відзначено. Разом з тим, при дослідженнях у Японії були відзначені антитіла проти апротиніну. За роки клінічного застосування латок TachoComb® відомо всього лише 37 спонтанних побічних реакцій на цей лікарський засіб. Шістнадцять з цих реакцій теоретично можна віднести до реакцій проти компонентів TachoComb® (пропасний стан, підвищення температури, гіпертермія, еозинофільний лейкоцитоз, тривалий протромбіновий час, підвищена чутливість, імунні або алергійні реакції). Одна з їх побічних реакцій на лікарський засіб (імунна реакція) була явно зв'язаної з лікуванням TachoComb®. У WO 97/37694 (компанія Immuno France S.A.) описаний приклад 4, коли при використанні колагенового продукту TachoComb® не вдалося зупинити кровотечу, що призвело до смерті від втрати крові, на відміну від зупинки кровотечі протягом 5 хвилин, коли використовувався колагеновий продукт, що не містив тромбіну і був приготовлений відповідно до WO 97/37694. У WO 94/40033 підкреслюються недоліки бичачого тромбіну, який використовують в TachoComb®. Вони полягають у тім, що використання тромбіну корів і інших видів тварин може привести до занесення небезпечної вірусної інфекції і можливому переносу хвороб корів, наприклад, губчатої енцефалопатії корів. Винахід відноситься до твердої композиції, що складається з носія, який має, принаймні, одну з таких фізичних властивостей: модуль пружності: 5-100 Н/см 2, наприклад, 10-50 Н/см 2; щільність: 1-10 мг/см 3, наприклад, 2-7 мг/см 3; діаметр камери: більше 0,75мм і менше 4мм та (або) діаметр камери в середньому менше 3мм, і рівномірно розподілених і зафіксованих на зазначеному носії б) твердого фібриногену і в) твердого тромбіну. Композиція може мати дві, три або всі з вищезгаданих властивостей. У переважних варіантах здійснення матеріал носія готують, як описано в DKPA2001 00135 і, далі, у заявці за назвою "Спосіб готування колагенової губки, пристрій для витягування частини колагенової піни і протяжна колагенова губка", поданою компанією Nycomed Pharma 25 січня 2002 p., що має пріоритет за цією заявкою. У даному контексті термін "діаметр камери" слід розуміти як найбільша відстань по прямій між стінками камери, тобто, найбільша діагональна відстань камери по прямій. Камери можуть бути багатокутної форми, наприклад, восьмикутної. Таким чином, якщо носій розрізати, камери поділяються і виходять розрізаними на порожнині. Твердий фібриноген і твердий тромбін зафіксовані на носії, і їх основна частина знаходиться в порожнинах, що забезпечує практично рівномірний розподіл твердого тромбіну і твердого фібриногену. Завдяки цьому, а також фіксації, на носій можна нанести значні кількості фібриногену і тромбіну - на відміну від ситуації, коли на матеріал наносять рідкі композиції тромбіну і фібриногену, наприклад, краплями або напилюванням. Готування покритого носія Готування покритого носія складається переважно з: - готування суспензії активних інгредієнтів; - рівномірний розподіл суспензії на носій; - висушування покритого носія до твердої композиції/фіксації активних інгредієнтів на носії. Готування суспензії з фібриногеном і тромбіном включає: - готування суміші фібриногену і спирту, наприклад, етилового спирту; - готування суміші тромбіну і спирту, наприклад, етилового спирту; - змішування суміші фібриногену і суміші тромбіну для одержання зазначеної суспензії. На стадії готування сумішей їх можна гомогенізувати або пропустити через сито з одержанням суспензії, що містить частки із середнім діаметром за Folk Ward 25-100 мкм. При цьому температуру підтримують у межах 0-12°С. Носієм може бути колагеновий носій, наприклад, колагенова губка. Колагенова губка може відповідати, принаймні, одному, а переважно кільком з таких критеріїв: - значення рН: 5,0 - 6.0; - вміст молочної кислоти: не більше 0,5%; - вміст амонію: не більше 0,5%; - вміст розчинного білка, розрахований як зміст альбуміну: не більше 0,5 %; - вміст зол сульфатів: не більше 1,0 %; - вміст важких металів: не більше 20 млн.-1; - мікробіологічна чистота: не більше 103 КУО/г; - вміст колагену: 75-100 %; - щільність: 1-10 мг/см 3; - модуль пружності: 5-100 Н/см 2. У переважному варіанті здійснення колагеновий носій готують, як описано в DKPA2001 00135. Фізичні властивості трьох зразків колагенових носіїв приведені в таблиці нижче: Зразок Значення рН Вміст молочної кислоти Вміст амонію Вміст розчинного білка Вміст зол сульфатів Мікробіологічна чистота (КУО/г) Вміст колагену, розрахований на основі сухої речовини Вологість Модуль пружності І 5,3 2,3 % II 5,1 2,8 % 0,1 % 0,2 % 0,04 % 0,05 % 0,3 % 0,3 % < 12- < 18345 124 95% 95% 14% 10,442,1 Н/см 2 III 5,4 2% 0,1 % 0,08 % 0,3 %