Імунологічна композиція, що як ад’юванти містить сульфоліпо-циклодекстрин (sl-cd) та сапонін

Реферат: Заявлений винахід стосується імунологічних композицій, що містять сульфоліпо-циклодекстрин (SL-CD) та сапонін, який є Quil А, та необов'язково принаймні один антиген. Винахід стосується способів та імунологічних композицій, що містять принаймні один антиген, який може бути ветеринарним антигеном. Ветеринарний антиген у способах та імунологічних композиціях винаходу може бути антигеном корів. Винахід стосується способів та імунологічних композицій, що містять рабдовірус корів (BEFV), вірус герпесу 1 корів (IBR) або вірус африканської катаральної лихоманки (BTV). Винахід стосується способу виявлення імунної відповіді проти UA 101385 C2 (12) UA 101385 C2 BEFV, IBR або BTV у тварині, що полягає у введенні тварині композиції винаходу. У винаході, зокрема, імунна відповідь є захисною імунною відповіддю. Винахід стосується способу приготування імунологічної композиції, що полягає у додаванні Quil А до вірусу. UA 101385 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Ця заявка претендує на корисність заявки 35 U.S.C. § 119(a) попередньої австралійської заявки № 2008904261 від 19,08 2008 та попередньої заявки 35 U.S.C. § 119(e) США № 61/092091, від 27,08, 2008. Повний зміст їх включено тут як посилання. Заявлений винахід стосується імунологічних композицій, що містять сульфоліпоциклодекстрин (SL-CD), та сапонін або Quil A, та необов'язково щонайменш один антиген. Винахід також стосується способів приготування імунологічних композицій, що містять SL-CD, сапонін або Quil A, та антиген. Заявлений винахід також стосується способу застосування імуногенних композицій для виявлення імунної відповіді до рабдовірусу корів (BEFV), до вірусу герпесу 1 корів (IBR), або до вірусу африканської катаральної лихоманки (BTV). Заявлений винахід пропонує набори, що містять імунологічну композицію винаходу. Сапонінові ад'юванти є відомим класом ад'ювантів, які комерційно застосовують у вакцинах для тварин. Сапоніни є класом вторинних метаболітів, знайдених у різних видах рослин. Вони є амфіпатичними глюкозидами, феноменологічно згрупованими по милоподібному вспінюванню, яке вони створюють при перемішуванні у водних розчинах. Структурно, сапоніни складаються з одної або декількох гідрофільних глікозидних частин, комбінованих з ліпофільною тритерпеновою похідною. Комерційні сапоніни переважно виділяють з кори південноамериканського дерева Quillaja Saponaria Molina та рослини Mohave Yucca, рослини, що також має назву Yucca schidigera. Сапоніни є в наявності у декількох джерелах, наприклад, у Berghausen Corporation (Cincinnati, OH). Очищена форма сапоніну зазвичай має назву Quil A та наявна у продажу у декількох джерелах, в тому числі у Berghausen Corporation, Sergeant Chemical Company (Clifton, NJ), Superfos a/s (Vedbaek, Denmark), та Brenntag Biosector (Frederikssund, Denmark). Фізичні та хімічні характеристики Quil-A викладені у торгівельній літературі, що є в наявності від Superfos, під назвою "Очищений сапоніновий ад'ювант Quil-A. Quil-A хімічно характеризується вуглеводною частиною у глікозидному зв'язку тритерпенової квілаєвої кислоти. Кілька патентів США стосуються обговорення Quil A у якості ад'юванту. Наприклад, U.S. Patent №№ 6,416,764 та 6,291,228 стосуються вакцин, де застосовано Quil A у якості ад'юванту та які містять нецитопатогенний штам вірусу діареї корів. U.S.patent No, 4,432,969 стосується аероалергенної композиції, що містить аероалерген та сапонін, або ад'ювант Quil A. U.S. Patent № 4,900,549 описує процес приготування імуногенних комплексів, що містять Quil A. U.S. Patent № 6,165,995 стосується приготування похідних SL-CD. U.S. Patent № 6,610,310 присвячений поліоновим полімерам, таким як SL-CD, у якості ад'ювантів. Ефемерна лихоманка великої рогатої худоби (BEF) є виснажливою вірусною хворобою, що уражує молочну та м'ясну худобу, особливо в північній Австралії. BEF також визнаний у більшості країн Азії, де розводять велику рогату худобу. BEF відомий як "трьохденна хвороба" може головним чином впливати на вихід коров'ячого молока та спричинює смертність молочної та м'ясної худоби (Walker, P.J., 2005, Curr. Top. Microbiol. Immunol. 292: 57-80). Агентом-збудником BEF є рабдовірус корів (BEFV). Цей вірус є рабдовірусом, що відносять до роду Ephemerovirus. Віріон BEFV має кулеподібну або конічну форму та містить негативний однонитчастий РНК - геном. Геном BEFV кодує нуклеопротеїн, білок, асоційований з полімеразою, білок матриксу, велику РНК-залежну РНК-полімеразу, та два глікобілка. Модифікована жива вакцина BEF, яка вже багато років є у наявності в Австралії, додається у якості щорічного бустера перед сезоном BEF. Ця вакцина вимагає ветеринарного рецепту та є у наявності в сублімованому вигляді, що потребує відновлення з розчинником, який містить ад'ювант перед введенням. Тварини, що не отримували імуносупресивного лікування, потребують дві дози вакцини після щорічної ревакцинації. PCT Publication No. WO/1994004685 стосується приготування вакцини BEFV, що містить поверхневий глікопротеїн BEFV. Vanselow et al. (1995, Vet. Microbiol. 46:117-130) описує тестування різних вакцин BEF. Hsieh et al. (2006, J. Vet. Med. Sci. 68: 543-548) має відношення до вакцини BEFV, де застосовано вірусні штами Tn88128 та Тn73. Ці вакцини були приготовані інактивацією вірусу шляхом додавання бінарного етиліміну та гідроксиду алюмінію або води: ад'ювантів олія:вода. Рекомбінантна вакцина, що містить структурний глікопротеїн BEFV, клонований у вірусний вектор нодулярного дерматозу (тип SA-Neethling) описана у Wallace, D.B. та Viljoen G.J. (2005, Vaccine 23:3061-3067). Chuang et al. (2007, J. Virol. Meth. 145:84-87) описують застосування інтерференції РНК та подавлення експресії гену поверхневого глікопротеїну BEFV. Герпесвірус 1 корів є також відомий, як вірус інфекційного ринотрахеїту великої рогатої худоби. Він позначається, як BHV або IBR. Герпесвірус 1 корів є вірусом родини Herpesviridae, 1 UA 101385 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 що спричинює хвороби у великої рогатої худобі, які охоплюють ринотрахеїти, вагініти, баланопостити, викидень, кон'юнктивіти, та ентерити. BHV-1 є також впливовим фактором у транспортній лихоманці. Він розповсюджується шляхом статевого контакту, штучного запліднення, повітряно-крапельним шляхом. Подібно іншим герпесвірусам, BHV-1 спричинює довготривалу латентну інфекцію та розповсюдження вірусу. У наявності є вакцина, яка знижує суворість та ступінь хвороби. Респіраторна хвороба, спричинена BHV-1 є звичайно відома як інфекційний ринотрахеїт корів. Вірус африканської катаральної лихоманки (BTV) є прототипом вірусу роду Orbivirus, що належить до родини Reoviridae з двохланцюговою РНК. BTV спричинює серйозні хвороби худоби, як-то овець, кіз, оленів та великої рогатої худоби. Як повідомлено у літературі, 24 серотипа спричинюють проблеми, починаючи від неявної інфекції до гострої швидкоплинної інфекції. Також є наявним хронічне, стійке розповсюдження вірусу великої рогатої худоби. У тваринництві існують вакцини, придатні для лікування африканської катаральної лихоманки. Заявлений винахід стосується імунологічних композицій, що містять сульфоліпоциклодекстрин (SL-CD), сапонін, та необов'язково щонайменш один антиген. У деяких втіленнях винаходу, сапоніном є Quil A. У деяких втіленнях винаходу, щонайменш один антиген є вибраним з бактерій, вірусів, пептидів, поліпептидів, нуклеїнових кислот, їх комбінації. У деяких втіленнях винаходу, щонайменш один антиген є ветеринарним антигеном. У деяких втіленнях винаходу, ветеринарний антиген є антигеном корів. У деяких втіленнях винаходу, антиген є вірусним антигеном. У деяких втіленнях винаходу. вірусний антиген є вірусом герпесу 1 корів (IBR), вірусом африканської катаральної лихоманки (BTV), або рабдовірусом корів (BEFV). Вірусний антиген може бути живим, послабленим, рекомбінантним, вбитим, або інактивованим. У деяких втіленнях, винахід стосується імуногенної композиції, де антиген є живим послабленим вірусом. У деяких втіленнях винаходу, вірус є рабдовірусом корів (BEFV). У різних втіленнях винаходу, вірус є у замороженому стані, у підсушеному стані, у ліофілізованому або свіжому стані. У різних втіленнях сапонін є присутнім у імунологічній композиції винаходу у кінцевій концентрації приблизно 0,5 мг/мл. У різних втіленнях, Quil A є присутнім у імунологічній композиції винаходу у кінцевій концентрації приблизно від 0,1 мг/мл до 0,2 мг/мл. У деяких втіленнях, у імунологічній композиції винаходу, Quil A є присутнім у кінцевій концентрації приблизно 0,158 мг/мл. У різних втіленнях, у імунологічній композиції винаходу SL-CD є присутнім у кінцевій концентрації приблизно 0,2 мл/мл. У деяких втіленнях, імунологічні композиції винаходу, що містять сапонін та SL-CD або містять Quil A та SL-CD, також містять щонайменш один додатковий ад'ювант. У різних втіленнях винаходу, додатковий ад'ювант є вибраним з гідроксиду алюмінію, SP-олії, або карбополу. У деяких втіленнях винаходу, антиген є поліпептидом, який у деяких втіленнях є вірусною субодиницею. У деяких втіленнях винаходу, вірусна субодиниця є вибраною від BEFV, IBR, або BTV. У одному втіленні, заявлений винахід стосується способу виявлення імунної відповіді проти ветеринарного антигену у тварині, що полягає у введенні тварині імуногенної композиції, що містить сапонін, SL-CD, та щонайменш один ветеринарний антиген. У одному втіленні, імунна відповідь є викликаною після введення одиничної дози імуногенної композиції. У одному втіленні, заявлений винахід стосується способу виявлення імунної відповіді проти IBR у тварині, що полягає у введенні тварині імуногенної композиції, що містить сапонін, SL-CD, та принаймні IBR у якості антигену. У одному втіленні, заявлений винахід стосується способу виявлення імунної відповіді проти BTV у тварині, що полягає у введенні тварині імуногенної композиції, що містить сапонін, SL-CD, та принаймні BTV у якості антигену. У одному втіленні, заявлений винахід стосується способу виявлення імунної відповіді проти BEFV у тварині, що полягає у введенні тварині імуногенної композиції, що містить Quil A, SL-CD, та антиген. У одному втіленні, імунна відповідь є викликаною після введення одиничної дози імуногенної композиції. У одному втіленні, заявлений винахід стосується способу виявлення імунної відповіді проти IBR у тварини, що полягає у введенні тварині імуногенної композиції, що містить сапонін, SL-CD, та антиген. У одному втіленні, заявлений винахід стосується способу виявлення імунної відповіді проти BTV у тварині, що полягає у введенні тварині імуногенної композиції, що містить сапонін, SL-CD, та антиген. У деяких втіленнях винаходу, імунна відповідь викликана після введення імуногенної композиції винаходу є захисною імунною відповіддю. У одному втіленні, заявлений винахід стосується імуногенної композиції, приготованої об'єднанням Quil A та вірусу перед додаванням SL-CD. Вірус може бути послабленим живим, рекомбінантним, вбитим, або інактивованим. У деяких втіленнях винаходу, Quil A та вірус є змішаними при кімнатній температурі. У деяких втіленнях винаходу, Quil A та вірус є змішаними 2 UA 101385 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 протягом принаймні 15 хвилин. У деяких втіленнях винаходу, Quil A та вірус є змішаними протягом принаймні 120 хвилин. У одному втіленні, заявлений винахід стосується набору, що містить імуногенну композицію винаходу для виявлення імунної відповіді у тварині. У різних втіленнях, заявлений винахід стосується способу викликання імунної відповіді у великій рогатій худобі проти вірусної інфекції або ефемерної лихоманки великої рогатої худоби, спричиненої BEFV. Спосіб викликання імунної відповіді проти BEFV полягає у введенні великій рогатій худобі композиції, що містить BEFV, SL-CD, та Quil A. У одному втіленні, заявлений винахід стосується імуногенної композиції або вакцини, що містить імунологічно ефективну кількість BEFV, SL-CD, та Quil A. У різних втіленнях, заявлений винахід стосується способу викликання у великій рогатій худобі імунної відповіді проти інфекції вірусу герпеса або ринотрахеїту корів, спричиненої IBR. Спосіб викликання імунної відповідї проти IBR полягає у введенні великій рогатій худобі композиції, що містить IBR, SL-CD, та сапонін. У різних втіленнях, заявлений винахід стосується способу викликання у великій рогатій худобі імунної відповіді проти вірусної інфекції або африканської катаральної лихоманки корів, спричиненої BTV. Спосіб викликання імунної відповіді проти BTV полягає у введенні великій рогатій худобі композиції, що містить BTV, SL-CD, та сапонін. У одному втіленні, заявлений винахід надає імуногенну композицію або вакцина містить імунологічно ефективну кількість IBR, SL-CD, та сапоніну. У одному втіленні, заявлений винахід забезпечує імуногенну композицію або вакцину, що містить імунологічно ефективну кількість BTV, SL-CD, та сапоніну. Заявлений винахід базується, частково, на відкритті того, що імунологічна композиція, яка містить L-CD, та сапонін або Quil A, може підсилювати імуногенність щонайменш одного антигену. У різних втіленнях винаходу, щонайменш один антиген може бути обраним від бактерій, вірусів, пептидів, поліпептидів, нуклеїнових кислот або їх комбінацій. У деяких втіленнях винаходу, щонайменш один антиген є ветеринарним антигеном. У різних втіленнях винаходу, ветеринарний антиген може бути антигеном корів. У одному втіленні винаходу, ветеринарний антиген може бути вірусним антигеном. У деяких втіленнях винаходу, вірусний антиген містить, але без обмеження штам BEFV, IBR, або BTV. BEFV є рабдовірусом, що, як відомо, спричинює ефемерну лихоманку великої рогатої худоби у Австралії, Африці, Близькому Сході та Азії. Багато штамів BEFV є відомими, як-то, BB2271-919 та його батьківській штам (919), TN73, Tn88128, штами 1-11 BEFV2001, або штами 1-3 BEFV2004. Вибір штаму може змінюватись у залежності від країни, де застосовуються імуногенні композиції винаходу. Герпесвірус 1 корів, також позначений як BHV або IBR, є вірусом родини Herpesviridae, що спричинює хвороби у великій рогатій худобі, в тому числі ринотрахеїти, вагініти, баланопостити, викидень, кон'юнктивіти, та ентерити. BHV-1 є також впливовим фактором у транспортній лихоманці. Він розповсюджується шляхом статевого контакту, штучного запліднення, повітряно-крапельним шляхом. Подібно іншим герпесвірусам, BHV-1 спричинює довготривалу латентну інфекцію та розповсюдження вірусу. У наявності є вакцина, яка знижує суворість та ступінь хвороби. Респіраторна хвороба, спричинена BHV-1 є звичайно відома як інфекційний ринотрахеїт корів. Вірус африканської катаральної лихоманки (BTV) є прототипом вірусу роду Orbivirus, що належить до родини Reoviridae з двохланцюговою РНК. BTV спричинює серйозні хвороби худоби, як-то овець, кіз, оленів та великої рогатої худоби. Як повідомлено у літературі, 24 серотипа спричинюють проблеми, починаючи від неявної інфекції до гострої швидкоплинної інфекції. Також є наявним хронічне, стійке розповсюдження вірусу великої рогатої худоби. Африканська катаральна лихоманка спостерігається у Австралії, Північної Америці, Африці, Близькому Сході, Азії та Европі. У різних втіленнях винаходу, вірус у імуногенній композиції може бути послабленим, живим, рекомбінантним, вбитим, або інактивованим. Способ приготування послабленого живого вірусу є добре відомим у літературі. Наприклад, вірус може бути послаблений шляхом його проходження крізь клітини стороннього хазяїна, як-то крізь культури тканин, ембріональні яйця або живі тварини. Послаблений BEFV може бути відібраний для прискореного зростання у некоров'ячих клітинах, та, в процесі відбору, стає менш здатним до росту у клітинах корів. Оскільки ці послаблені штами погано реплікуються у коров'ячому хазяїні, при переносі у велику рогату худобу вони спричинюють імунність, а не хворобу. Вірус, як вказано, є послабленим, якщо він має понижену вірулентність для нативного хазяїна та збільшує свою вірулентність для нового хазяїна. Деякі послаблені вірусні штами можуть траплятися природним шляхом. Для послаблення вірусів у визначеному напрямку може бути застосована генетична інженерія. 3 UA 101385 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Способи приготування вбитих або інактивованих вірусів для застосування у імуногенних композиціях, вакцинах, та інших способах є відомими у цій галузі. У процесі хімічної інактивації, відповідний зразок вірусу, або зразок сироватки, що містить вірус, обробляється протягом є відповідного періоду часу з відповідною кількістю або концентрацією агента інактивації з відповідною високою (або низькою, в залежності від агент інактивації)температурою або pH для інактивації вірусу. Наприклад, вірус може бути оброблений агентами інактивації, як-то формаліном, бінарним етиленіміном (BEI), або гідрофобними розчинниками, кислоти, та ін. Вірус може бути інактивованим ультрафіолетовим випромінюванням або рентгенівськими променями, нагріванням, та ін. Інактивацію нагріванням проводять при температурі та протягом часу, достатнього для інактивації вірусу. Інактивацію випромінюванням проводять з застосуванням світла відповідної довжини або іншого джерела енергії протягом часу, достатнього для інактивації вірусу. У деяких втіленнях винаходу, імуногенна композиція містить живий послаблений вірус. У деяких втіленнях винаходу, імуногенна композиція містить антиген, отриманий з замороженого стану, сухого стану, або є у свіжому стані. Якщо антиген є отриманим з сухого стану, він може бути отриманий з ліофілізованого стану. У деяких втіленнях, імуногенні композиції винаходу містять антиген з замороженого стану. Сапоніни є стероїдними або тритерпеновими глікозидами, широко поширеними у царствах рослин та морських тварин. Сапоніни відрізняються формуванням колоїдних розчинів у воді, що піняться при струшуванні, та осаджуванням холестерину. Коли сапоніни знаходяться близько від клітинних мембран, вони створюють у мембранах структури, подібні порам, які спричинюють розрив мембрани. Сапоніни застосовують у якості ад'ювантів у вакцинах для тварин. Ад'ювантна та гемолітична активність окремих сапонінів широко вивчалася (Lacaille-Dubois and Wagner, 1996, A review of the biological and pharmacological activities of saponins" Phytomedicine vol 2 pp 363-386). Сапоніни є класом вторинних метаболітів, знайдених у різних видах рослин. Вони є амфіпатичними глікозидами, феноменологічно згрупованими по милоподібному вспінюванню, яке вони створюють при перемішуванні у водних розчинах. Структурно, сапоніни складаються з одного або декількох гідрофільних глікозидних частин, комбінованих з ліпофільною тритерпеновою похідною. Комерційні сапоніни переважно видобувають з Quillaja saponaria Molina та Yucca schidigera. "Quil A" відноситься до очищеної форми сапоніну. Сапонін може бути присутнім у імуногенних композиціях винаходу у кінцевій концентрації приблизно 0,4 мг/мл - 0,6 мг/мл. Сапонін може бути присутнім у імуногенних композиціях винаходу у кінцевій концентрації приблизно 0,5 мг/мл. Quil A може бути присутнім у імуногенних композиціях винаходу у кінцевій концентрації приблизно 0,1-0,2 мг/мл. Quil A може бути присутнім у імуногенних композиціях винаходу у кінцевій концентрації приблизно 0,12 мг/мл 0,18 мг/мл. Quil A може бути присутнім у імуногенних композиціях винаходу у кінцевій концентрації приблизно 0,14 мг/мл - 0,16 мг/мл. Quil A може бути присутнім у імуногенних композиціях винаходу у кінцевій концентрації приблизно 0,158 мг/мл. У одному втіленні, Quil A є присутнім у імуногенних композиціях винаходу у кінцевій концентрації приблизно 0,158 мг/мл. Сульфо-ліпо-циклодекстрин у емульсії сквалану у воді (SL-CD/сквалан) був застосований у приготуванні різних вакцин. SL-CD/сквален може бути приготований, як описано у Hilgers et al. (Sulfolipo-cyclodextrin in squalane in-water as a novel and safe vaccine adjuvant. Vaccine 17 (1999), pp. 219-228; Fort Dodge Animal Health Holland, Weesp, The Netherlands). SL-CD може бути присутнім у імуногенній композиції винаходу у кінцевій концентрації приблизно 0,09 мл/мл - приблизно 0,3мл/мл. SL-CD може бути присутнім у імуногенній композиції винаходу у кінцевій концентрації приблизно 0,1 мл/мл, близько 0,15 мл/мл, близько 0,17мл/мл, близько 0,2 мл/мл, або близько 0,25 мл/мл. Імуногенні композиції винаходу можуть, крім того, містити щонайменш один ад'ювант на додаток до Quil A та SL-CD. Подібний додатковий ад'ювант може бути обраним від будь-якого одного з відомих у цій галузі ад'ювантів, як тут більш докладно обговорюється. У деяких втіленнях, винахід стосується способу виявлення імунної відповіді, що полягає у введенні тварині імунологічної композиції, що містить сапонін та SL-CD. У деяких втіленнях, спосіб полягає у введенні тварині імунологічної композиції, що містить сапонін, SL-CD, та щонайменш один антиген. У деяких втіленнях, щонайменш один антиген є ветеринарним антигеном. У деяких втіленнях винаходу, ветеринарний антиген є антигеном корів. У деяких втіленнях винаходу, ветеринарний антиген є вірусним антигеном. У деяких втіленнях, вірусний антиген є BEHV, IBR або BTV. У деяких втіленнях, вірус є послабленим живим, рекомбінантним, вбитим, або інактивованим. У деяких втіленнях, вірус є вбитим. У деяких втіленнях, антиген є отриманий з замороженого стану, сухого стану, або є у свіжому стані. Якщо антиген є 4 UA 101385 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 отриманим з сухого стану, він може бути отриманий з ліофілізованого стану. У деяких втіленнях, імуногенні композиції винаходу містять антиген з замороженого стану. У деяких втіленнях, винахід стосується способу виявлення імунної відповіді, що полягає у введенні тварині імунологічної композиції, що містить Quil A та SL-CD. У деяких втіленнях, спосіб полягає у введенні тварині імунологічної композиції, що містить Quil A, SL-CD, та щонайменш один антиген. У деяких втіленнях, щонайменш один антиген, що є застосованим у способі, є ветеринарним антигеном. У деяких втіленнях, ветеринарний антиген, застосований у способі, є антигеном корів. У деяких втіленнях, антиген є вірусним антигеном. У деяких втіленнях, вірусний антиген є IBR, BEFV, або IBR. У деяких втіленнях, вірусний антиген є послабленим живим, рекомбінантним, вбитим, або інактивованим. У деяких втіленнях, вірус є послабленим живим. У деяких втіленнях, антиген є отриманий з замороженого стану, сухого стану, або є у свіжому стані. Якщо антиген є отриманим з сухого стану, він може бути отриманий з ліофілізованого стану. У деяких втіленнях, імуногенні композиції винаходу містять антиген з замороженого стану. Імуногенні композиції винаходу можуть викликати імунну відповідь після введення декількох доз. У деяких втіленнях, імуногенні композиції винаходу можуть викликати імунну відповідь після введення двох доз. У деяких втіленнях, імуногенні композиції винаходу викликають імунну відповідь після введення одиничної дози. Імунна відповідь, що викликана імуногенними композиціями винаходу може бути захисною імунною відповіддю. Після введення початкової дози імуногенної композиції винаходу, бустерна доза може бути введена після періоду близько чотирьох тижнів для підсилення імуногенної відповіді. Також можуть бути введені додаткові бустерні дози. У одному втіленні, винахід надає набір для виявлення імунної відповіді у тварині. У деяких втіленнях, набір містить імуногенну композицію, що містить сапонін та SL-CD, та, необов'язково, щонайменш один антиген. У деяких втіленнях, сапонін у наборі є Quil A. У деяких втіленнях, щонайменш один антиген у наборі є ветеринарним антигеном. У деяких втіленнях, ветеринарний антиген у наборі є антигеном корів. У деяких втіленнях, ветеринарний антиген у наборі є вірусним антигеном. У деяких втіленнях, вірусний антиген у наборі є BEFV, IBR, або BTV. У деяких втіленнях, антиген у наборі може бути послабленим живим, рекомбінантним, вбитим, або інактивованим. У деяких втіленнях, антиген у наборі є послабленим живим. У деяких втіленнях, антиген у наборі є вбитим. У деяких втіленнях, антиген у наборі може бути отриманим з замороженого стану, сухого стану, або є у свіжому стані. У деяких втіленнях, антиген у наборі є отриманий з замороженого стану. Винахід надає набори, імунологічні композиції, та вакцини, що містять SL-CD та сапонін та/або Quil A, які можуть містити щонайменш один додатковий ад'ювант. Серед ад'ювантів, які можуть бути застосованими, можуть бути згадані у якості приклада гідроксид алюмінію, авридин, бромід диметилдіоктадециламмонію (також відомий як DDAB або DODAB), поліфосфазени, емульсії типу олива-у-воді, що базуються на мінеральній оливі, як-то SPT емульсія (див., наприклад Vaccine Design, The Subunit and Adjuvant Approach, 1995, edited by Michael F. Powel and Mark J. Newman, Plennum Press, New York and London, pages 147-204), емульсії типу олія-у-воді, що базуються на олії, що перетворюється в ході обміну речовин, як описано у U.S. Patent No. 6,368,601, так само як і емульсії, що описані у U.S. Patent No. 5,422,109. Інші приклади прийнятних ад'ювантів охоплюють сквалан та сквален (або інші олії тваринного походження); блок-кополімери, як-то pluronic® (L121) сапонін; детергенти, як-то ® ® ® Tween -80, мінеральні оливи, як-то DRAKEOL , або Marcol ; рослинні олії, як-то арахісова олія; похідні від corynebacterium ад'юванти, як-то corynebacterium parvum; propionibacterium-похідні ад'юванти; Mycobacterium bovis (Bacillus Calmette та Guerinn, або BCG); інтерлейкіни як-то інтерлейкін 2 та інтерлейкін -12; монокіни як-то інтерлейкін 1; фактор некрозу пухлин; інтерферони як-то гамма - інтерферон; ліпосоми; іском - ад'ювант; екстракт клітинної стінки мікобактерій; синтетичні глікопептиди як-то мурамілові дипептиди або інші похідні; Авридин; ліпід A; декстрин сульфат; DEAE-декстран або DEAE-декстран з фосфатом алюмінію; ® ® карбоксиполіметилен, як-то Carbopol ; EMA; акрилові кополімерні емульсії, як-то Neocryl A640 (див. U.S. Patent No. 5,047,238); вакцинні або тваринні білки поксвірусу; субвірусні частинкові ад'юванти як-то орбівірус; холерний токсин; бромід диметидіокледециламонію; або їх суміші. Інші ад'юванти можуть бути вибраним з сурфактантів (напр., гексадециламін, октадециламін, лізолецитин, бромід диметилдіоктадециламонію, N, N-діоктадецил-n'-N-біс(2гідроксіетилпропандіамін), метоксигексадецилгліцерин, та плуронові поліоли); поліаніони (напр., піран, декстран сульфат, полі IC, поліакрилова кислота, карбопол), пептиди (напр., мураміл дипептид, диметилгліцин, туфтсин), олійні емульсії, галун, та їх суміші. Також є можливим обирати комбінації ад'ювантів. 5 UA 101385 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 У одному втіленні, винахід стосується імуногенної композиції, що приготована об'єднанням Quil A та антигену перед додаванням додаткового антигену, як-то SL-CD. Фахівцям буде зрозуміло, що комбінування вірусу з Quil A буде понижувати ефективний титр вірусу (Walker, P.J., 2005, Curr. Top. Microbiol. Immunol. 292: 57-80). Об'єднання Quil A та антигену перед додаванням щонайменш ще одного іншого інгредієнту до імуногенної композиції може бути проведено у будь-який проміжок часу. Фахівцям буде зрозуміло, що імуногенні композиції винаходу можуть бути приготовані об'єднанням Quil A та антигену, перед додаванням щонайменш ще одного іншого інгредієнту до імуногенної композиції у різні проміжки часу. Наприклад, Quil A та антиген можуть бути об'єднаними від принаймні 5 хвилин до принаймні 200 хвилин. У деяких втіленнях, Quil A та антиген є об'єднаними протягом будь-якого проміжку часу, в тому числі від принаймні 10 хвилин до принаймні 190 хвилин. У деяких втіленнях, Quil A та антиген є об'єднаними протягом принаймні 15 хвилин. Фахівцям зрозуміло, що імуногенні композиції винаходу можуть бути приготовані об'єднанням Quil A та антигену при будь-якої однієї з багатьох температур. Комбінації Quil A та антигену можуть бути приготовані при температурі нижче або вище ніж кімнатна температура доки отримана композиція є імуногенною. Quil A та антиген можуть бути об'єднаними при кімнатній температурі. У деяких втіленнях, антиген у імуногенній композиції, що приготована об'єднанням Quil A та антигену перед додаванням SL-CD є вірусом. У деяких втіленнях, вірус є BEFV. У деяких втіленнях, вірус може бути послабленим живим, рекомбінантним, вбитим, або інактивованим. У деяких втіленнях, антиген є послабленим живим. У деяких втіленнях, антиген може бути отриманий з замороженого стану, сухого стану, або бути у свіжому стані. У деяких втіленнях, антиген є отриманим з замороженого стану. У одному втіленні, заявлений винахід надає імуногенну композицію для виявлення імунної відповіді, імуногенна композиція містить сапонін та SL-CD. У деяких втіленнях винаходу, імуногенна композиція для виявлення імунної відповіді містить сапонін та SL-CD; та принаймні один антиген. У деяких втіленнях винаходу, сапонін у імуногенній композиції для виявлення імунної відповіді є Quil A. У деяких втіленнях винаходу щонайменш один антиген у імуногенної композиції для виявлення імунної відповіді може бути вибраним з бактерій, вірусів, пептидів, поліпептидів, нуклеїнових кислот або їх комбінацій. У деяких втіленнях, у імуногенній композиції винаходу, щонайменш один антиген є ветеринарним антигеном. У деяких втіленнях, у імуногенній композиції винаходу, ветеринарний антиген є антигеном корів. У деяких втіленнях, у імуногенній композиції винаходу, антиген є вірусним антигеном. У деяких втіленнях винаходу вірусний антиген є принаймні штамом BEFV, BTV, або IBR. У деяких втіленнях, сапонін або Quil A є доданим до вірусного антигену перед додаванням SL-CD. У деяких втіленнях антиген може бути послабленим живим, рекомбінантним, вбитим, або інактивованим. У деяких втіленнях, антиген є послабленим живим. У деяких втіленнях, антиген є вбитим. У деяких втіленнях, антиген може бути отриманим з замороженого стану, сухого стану, або бути у свіжому стані. У деяких втіленнях, антиген є отриманим з замороженого стану. Імунологічні композиції винаходу можуть бути приготовані з вірусних культур стандартним способом. Наприклад, вірус може бути поширеним у клітинній культурі тканин, наприклад, у клітинах епітелію нирки африканської зеленої мавпи (клітин Vero), диплоїдних фібробластах людини, MDBK (Madin-Darby Bovine Kidney), або інших клітинах корів. Ріст вірусу контролюють стандартними способами (спостереженням цитопатичної дії, імунофлуоресценцією або іншими способами, що полягають у застосуванні антитіл), та вірус збирають при досягненні достатньо 6 високого вірусного титру (як-то 10 TCID50/ мл). Вірусні вихідні розчини можуть бути додатково концентровані або ліофілізовані традиційним способом перед включенням у препарат вакцини. Також можуть бути застосовані інші способи приготування вірусних вихідних розчинів, як описано у Thomas, et al. (1986, Agri-Practice, 7 (5):26-30). Імунологічні композиції винаходу можуть бути застосовані поодинці, або в якості компоненту полівалентної імунологічної композиції, тобто, у комбінації з іншими імунологічними композиціями. Вірус у імуногенному препараті може бути живим або вбитим; як відомо, живий або вбитий вірус може бути ліофілізованим та, необов'язково, відтвореним. Імуногенні композиції можуть бути надані у наборах, які також можуть містити відповідне маркування та інструкції для введення імуногенної композиції до тваринного суб'єкту (наприкл., до свійських тварин, худоби, копитних) або птиці (напр., до свійської птиці). Імуногенні композиції, що містять SL-CD, сапонін або Quil A; та щонайменш один вірусний антиген також можуть містити фармацевтично та ветеринарно прийнятні носії. Подібні носії є добре відомими фахівцям та охоплюють великі макромолекули, які повільно засвоюються, як-то білки, полісахариди, полімолочні кислоти, полігликолеві кислоти, полімерні амінокислоти, амінокислотні кополімери, та частинки інактивного вірусу. Фармацевтично та ветеринарно 6 UA 101385 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 прийнятні солі можуть також бути застосовані у вакцині, наприклад, мінеральні солі як-то хлориди, броміди, фосфати, або сульфати, а також солі органічних кислот, як-то ацетати, пропіонати, малонати, або бензоати. Вакцини також можуть містити рідину, як-то вода, фізіологічний розчин, гліцерин, етанол, а також субстанції, як-то агенти змочування, емульгатори, або pH буферні речовини. Ліпосоми також можуть бути застосовані у якості носіїв вбитого вірусу. (Див., наприклад, U.S. Patent No. 5,422,120, PCT publication No. WO 95/13796, PCT publication No. WO 91/14445, або European Patent No. 524,968 B1.) Імуногенні композиції заявленого винаходу можуть бути введені внутрішньом'язово, підшкірно, інтраназально, внутрішньочеревно, внутрішньовенно, внутрішньошкірно, внутрішньобронхіально, або перорально. Імуногенні композиції винаходу можуть бути введені повітряним шляхом, щепленням у око, або скарифікацією. Іншим прийнятним способом доставки імуногенної композиції винаходу ссавцям (наприкл., до свійських тварин, худоби, копитних) є пероральне введення (напр., з їжею або питною водою або приманкою). Це особливо зручно для підгодовування або змішування їжі з імуногенною композицією. Звичайно, великі тварини (наприкл.,худоба/копитні. як-то велика рогата худоба) дозуються кількістю 6 6, 5 7 приблизно 10 TCID50/ мл - 10 to 10 ,TCID50 на дозу імуногенної композиції. Для однодозового введення, імуногенна композиція повинна містити кількість BEFV 4 7 6 відповідно від 10 до 10 TCID50 /мл, переважно 10 TCID50 /мл. Від 1 до 5 мл імуногенної композиції, переважно 2 мл, може бути введено тварині, внутрішньом'язово, підшкірно, або внутрішньочеревно. Імуногенна композиція повинна містити кількість IBR відповідно до близько 6,8 log/мл. Від 1 до 5 мл імуногенної композиції, що містить IBR, переважно 2 мл, може бути введено тварині, внутрішньом'язово, підшкірно, або внутрішньочеревно. Імуногенна композиція повинна містити кількість BTV відповідно від близько 106,7 TCID50 BTV серотипу 1 та/або близько 107,3 TCID50 BTV серотипу 8. Приблизно 1-5 мл імуногенної композиції, що містить BTV, переважно 2 мл, може бути введена тварині, внутрішньом'язово, підшкірно, або внутрішньочеревно. Приготування імуногенних композицій відомо у літературі, наприклад у "Vaccine Design, The Subunit and Adjuvant Approach", що вказана вище, та "Vaccines" (2008, fifth edition, Plotkin, S.A. et al., editors, Saunders Elsevier). Заявлений винахід стосується імунологічних композицій, що є особливо корисним для профілактики та лікування інфекцій BEF, IBR, або BTV у тварин. Таким чином, ще один аспект заявленого винаходу стосується способу для профілактики та лікування інфекцій BEF, IBR, або BTV у тваринах, який характеризується тим, що імуногенна композиція відповідно до заявленого винаходу є введеною тварині у потребі подібній профілактики або лікування. Імуногенна композиція заявленого винаходу може бути введена внутрішньом'язовою або підшкірною ін'єкцією або інтраназальним, внутрішньотрахеальним, пероральним, нашкірним, крізьшкірним або внутрішношкірним введенням. Переважно, вакцинація для BEFV, IBR, або BTV вакцини є підшкірною або внутрішньом'язовою, де внутрішньом'язова є більш бажаною. Живі вакцини для BEFV, IBR, або BTV переважно вводяться у віці шість місяців. Винахід також забезпечує спосіб імунізації тварини, зокрема великої рогатої худоби, проти одного або різних інфекційних агентів одночасно, що містить пероральне, назальне, підшкірне, внутрішньошкірне, внутрішньочеревне, внутрішньом'язове, або аерозольне введення (або їх комбінації) вакцини, що містить імунологічно ефективну кількість композиції, що надана цім винаходом. Терміни, що тут застосовані, мають значення, що визнане та відоме фахівцям, однак, для зручності та завершеності, окремі терміни та їх значення викладені нижче. Як застосовано у цьому описі та у формулі винаходу, одиничні форми включають посилання на множину, якщо у змісті чітко не вимагається іншого. Отже, наприклад, посилання на "спосіб" включають один або декілька способів, та/або етапів описаного тут типу та/або які стануть очевидними для фахівців при читанні цього повідомлення та надалі. Під терміном "близько" або "приблизно" мається на увазі статистично значущій діапазон оцінювання. Подібний діапазон може бути, як правило, в межах порядку звичайно 50 %, більш типово 20 %, ще більш типово 10 %, та навіть більш 5 % від заданого значення або діапазону. Допустимі варіації охоплюються термінами "близько" або "приблизно ”, що залежать від окремої досліджуваної системи, та можуть бути легко зрозумілими для фахівців. "Інфекційна одиниця" BEFV є визначеною як кількість вірусу, що необхідна для зараження або знищення 50 % клітин культури тканин. Це може бути зображено у вигляді 50 % інфекційної дози культури тканин або TCID50. 7 UA 101385 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Вірус є послабленим, якщо він має понижену вірулентність для нативного хазяїна. Вірус вважається інактивованим, якщо він є нездатним розповсюджуватися у клітині, що є придатною для вірусної інфекції. Термін "антиген" означає молекулу, що іноді стимулює імунну відповідь. Антиген є будьякою субстанцією, що може бути визнаною адаптивною імунною системою. Антигени звичайно є білками або полісахаридами. Антиген може бути частиною бактерії, вірусу, або іншого мікроорганізму, як-то оболонки, капсули, клітинної стінки, джгутика, пилусу, або токсину. Антиген може також бути ліпідом або нуклеїновою кислотою. Антиген, застосований у композиції може бути отриманий від a свіжої культури, замороженого стану, ліофілізованого стану, або від будьякого іншого наявного стану. Якщо антиген є вірусом, він може бути інактивованим живим або послабленим. "Ад'ювант" означає одну або декілька субстанцій, що підсилюють антигенність композиції, звичайно вакцинної композиції. Ад'ювант може служити у якості тканинного депо, що повільно випускає антиген та також як активатор лімфосистеми, що неспецифічно підсилює імунну відповідь (Hood, et al., Immunology, Second Ed., Menlo Park, CA: Benjamin/Cummings, 1984. p. 384). Часто, первинна вакцинація тільки антигеном, у відсутності ад'юванту, не може створити гуморальну або клітинну імунну відповідь. Також, в залежності від обставин, первинне введення в організм речовини, що провокує виділення антитіл тільки з антигеном, у відсутності ад'юванту, не може створити достатньої гуморальної або клітинної імунної відповіді. Група цитокінів або лімфокінів, що, як було показано, мають імуномоделюючу активність, та отже є прийнятними у якості ад'ювантів. охоплює інтерлейкіни 1-α, 1-β, 2, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 12 (див.,наприклад, U.S. Patent No. 5,723,127), 13, 14, 15, 16, 17 та 18 (та їх мутантні форми); інтерферони-α, β та ; гранулоцито-макрофаго-колонієстимулюючий фактор (GM-CSF) (див.,наприклад, U.S. Patent No. 5,078,996); колонієстимулюючий фактор макрофагів (M-CSF); колонієстимулюючий фактор гранулоцитів (G-CSF); та фактори некрозу пухлин α та β. Інші ад'юванти, що є прийнятними з імуногенними композиціями, описаними тут охоплюють хемокіни, в тому числі без обмеження, моноцитарний хемотаксичний фактор -1 (MCP-1), запальні білки макрофагів (MIP) наприклад, MIP-1α та MIP-1β, також відомі, як CCL-3 та CCL-4; та хемокін, що виділяється T-клітинами при активації (RANTES); молекули адгезії, як-то селектин, наприклад, L-селектин, P-селектин та Eселектин; молекули, подібні до муцину, наприклад, CD34 (також відома, як сіалофорин, лейкозіалін, або SPN), GlyCAM-1 та MadCAM-1; члени родини інтегринів, як-то пов'язані з функцією лімфоцитів молекули LFA-1, 2, та 3, VLA-1, Mac-1 та p150,95; члени надродини імуноглобулінів, як-то молекули адгезії тромбоцитів ендотелію (PECAM), молекули адгезії інтерлейкіну, наприклад, ICAM-1, ICAM-2, ICAM-3, ICAM-4, та ICAM-5, CD2 та LFA-3; костимуляторні молекули, як-то CD40 та CD40L; фактори росту, що охоплюють васкулярний фактор росту, фактор росту нервових клітин, фактор росту фібробластів, епідермальний фактор росту, B7,2, PDGF, BL-1, та васкулярний ендотеліальний фактор росту; рецепторні молекули, що охоплюють Fas, TNF рецептор, Flt, Apo-1, p55, WSL-1, DR3, TRAMP, Apo-3, AIR, LARD, NGRF, DR4, DR5, KILLER, TRAIL-R2, TRICK2, DR6; та каспазу (ICE). Прийнятні ад'юванти, що застосовують для підсилення імунної відповіді, крім того охоплюють, але без обмеження, MPL™ (3-O-деацілований монофосфорил ліпід A, Corixa, Hamilton, MT), що описаний у U.S. Patent No. 4,912,094. Також прийнятними для застосування ад'ювантами є синтетичні аналоги ліпіду A або сполуки аміноалкіл глюкозамін фосфату (AGP), або їх похідні або аналоги, що є в наявності у Corixa (Hamilton, MT), та описані у United States Patent No. 6,113,918. Один подібний AGP є 2-[(R)-3-тетрадеканоїлокситетрадеканоїламіно] етил 2-деокси-4-O-фосфоно-3-O-[(R)-3-тетрадеканоїлокситетрадеканоїл]-2-[(R)-3тетрадеканоїлокситетрадеканоїл -аміно]-b-D-глюкопіранозидом, який є також відомий, як 529 (раніше відомий, як RC529). Цей 529 ад'ювант може бути приготованим у водному стані (AF) або у вигляді стійкої емульсії (SE). Ще інші ад'юванти містять мураміл-пептиди, як-то N-ацетил-мураміл-L-треоніл-Dізоглютамін (thr-MDP), N-ацетил-нормураміл-L-аланін-2-(1’-2" дипалмітойл-sn-гліцеро-3гідроксифосфорилоксі)-етиламін (MTP-PE); емульсії "олія у воді", як-то MF59 (International PCT Publication No. WO 90/14837) (містить 5 % сквален, 0,5 % Tween® 80, та 0,5 % Span 85 (необов'язково містить різні кількості MTP-PE), що оформлені у вигляді субмікронних частинок застосуванням мікрофлюідізатора, як-то мікрофлюідізатор Model 110Y (Microfluidics, Newton, MA)), та SAF (містить 10 % сквален, 0,4 % Tween 80, 5 % полімер, що блокує плюрон L121, та thr-MDP, також мікрофлюідовані у субмікронну емульсію або перемішані на вортексі для створення емульсії частинок більшого розміру); неповний ад'ювант Фрейнда (IFA); солі алюмінію (галун), як-то гідроксид алюмінію, фосфат алюмінію, сульфат алюмінію; Aмфіген; Aврідин; L121/сквален; D-лактид-полілактид/глікозид; плюронові поліоли; вбиті Bordetella; 8 UA 101385 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 сапоніни, як-то Stimulon™ QS-21 (Antigenics, Framingham, MA.), описані у U.S. Patent No. 5,057,540, ISCOMATRIX (CSL Limited, Parkville, Australia), описані у U.S. Patent No. 5,254,339, та імуностимуляторні комплекси (ISCOMS); Mycobacterium tuberculosis; бактеріальні ліпополісахариди; синтетичні полінуклеотиди, як-то полінуклеотиди, що містять CpG- мотив, (напр., U.S. Patent No. 6,207,646); IC-31 (Intercell AG, Vienna, Austria), описані у European Patent Nos. 1,296,713 та 1,326,634; токсин коклюшу (PT) або його мутант, токсин холери або його мутант (напр., International PCT Publication Nos. WO00/18434, WO02/098368 та WO02/098369); або термолабільний токсин E. coli (LT), особливо LT-K63, LT-R72, PT-K9/G129; див.,наприклад, International PCT Publication Nos. WO 93/13302 та WO 92/19265. Ад'юванти, що можуть бути доданими до композицій винаходу, можуть містити SL-CD, гідроксид алюмінію, SP-олію,або карбопол, або здатну до метаболізації олію, як-то один або декілька ненасичених терпенових вуглеводнів, наприклад сквален або сквалан, та поліоксоетиленовий-поліпропіленовий блокуючий кополімер, як-то Pluronic® Термін "ссавці" охоплює однопрохідні (напр., качкодзьоб), сумчасті (напр., кенгуру), та плацентарні, що охоплюють живу худобу (домашні тварини, що вирощуються для отримання їжі, молока, або тканин, як-то свині, вівці, велика рогата худоба та коні) та свійські тварини (напр., собаки, коти). " Копитні " охоплюють, але без обмеження, велику рогату худобу (корови), водних буйволів, бізонів, баранів, свиней, оленів, слонів та яків, включаючи дорослі форми, та форми, що розвиваються (напр., телят, поросят, ягнят, та ін.). Імуногенна композиція винаходу може бути введена як дорослим ссавцям, так і ссавцям, що розвиваються, переважно до живої худоби. "Імунологічно ефективна кількість" - це кількість антигену, що буде викликати імунну відповідь. Імунологічно ефективною кількістю рабдовіруса корів (BEFV) є кількість BEFV, що буде викликати імунну відповідь проти вірусу ефемерної лихоманки великої рогатої худоби. Імунологічно ефективною кількістю вірусу герпесу 1 корів (IBR) є кількість IBR, що буде викликати імунну відповідь проти IBR інфекції. Імунологічно ефективною кількістю вірусу африканської катаральної лихоманки (BTV) є кількість BTV, що буде викликати імунну відповідь проти BTV інфекції. "Імунологічно ефективна кількість ” буде залежати від видів, породи, віку, розміру та стану здоров'я тварини-реципієнта. "Імунологічно ефективна кількість ” буде залежати від попередньої обробки тварини одним або декількома штамами антигену де один або декілька штамів є вірулентним штамом або авірулентним штамом вірусу. Як прийнято тут, "імунологічно ефективна кількість" рабдовірусу корів (BEFV), при застосуванні в поєднанні з щонайменш одним прийнятним ад'ювантом, є такою кількістю BEFV, що є достатньою для підсилення імуногенності рабдовірусу корів, та, отже, забезпечує захисну імунність проти ураження вірулентним штамом рабдовірусу корів. У одному втіленні, імунологічно ефективна 6,20 кількість BEFV є близько 10 TCID50 на мл композиції. Як прийнято тут, "імунологічно ефективною кількістю ” вірусу герпесу 1 корів (IBR), при застосуванні в поєднанні з щонайменш одним прийнятним ад'ювантом, є такою кількістю, якої є достатньо для підсилення імуногенності вірусу герпесу корів, та, отже, забезпечує захисну імунність проти ураження вірулентним штамом вірусу герпесу корів. У одному втіленні, імунологічно ефективна кількість IBR є близько 6,8 logs на мл композиції. Як прийнято тут, "імунологічно ефективна кількість" вірусу африканської катаральної лихоманки (BTV), при застосуванні в поєднанні з щонайменш одним прийнятним ад'ювантом, є такою кількістю, якої є достатньо для підсилення імуногенності вірусу африканської катаральної лихоманки та яка, отже, забезпечує захисну імунність проти ураження вірулентним штамом африканської катаральної лихоманки. У одному втіленні, імунологічно ефективна кількість BTV є близько 106,7 TCID50 BTV серотипу 1 та/або близько 107,3 TCID50 BTV серотипу 8 на мл композиції. У деяких втіленнях винаходу, вірусний антиген може бути принаймні штамом інфекційного вірусу герпесу 1 корів (також позначеного як вірус ринотрахеїту корів, або IBR), вірусу парагрипу, респіраторно-синцитіальним вірусом корів, вірусом проносу корів, вірусом ящуру, вірусом африканської катаральної лихоманки, вірусом ефемерної лихоманки великої рогатої худоби, парвовірусом собак, вірусом чуми собак, аденовірусом собак, вірусом парагрипу собак, корона вірусом собак, вірусом сказу, вірусом чуми котів, кальцивірусом котів, вірусом ринотрахеїту котів, вірусом інфекційного перитоніту котів, вірусом лейкемії котів, вірусом котячого імунодефіциту, західнонільськім вірусом, вірусом конячого енцефаломіеліту, вірусом конячого грипу, вірусом конячого герпесу (ринопневмоніту), вірусом конячого артеріїту, парвовірусом свиней, цірковірусом свиней, вірусом свинячого репродуктивно-респираторного синдрому, ротавірусом свиней, вірусом свинячого грипу, вірусом псевдосказу, вірусом інфекційного бурситу, вірусом хвороби Марека, вірусом хвороби Ньюкасла, вірусом 9 UA 101385 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 інфекційного бронхіту, вірусом інфекційного ларинготрахеїту, вірусом пташиного енцефаломіеліту, пташиним реовірусом, вірусом пташиного грипу. Як прийнято тут, термін "вірусна субодиниця ” означає частину віріону. наприклад, субодиниця рабдовірусу корів (BEFV) може бути принаймні частиною віріону BEFV, принаймні частиною геному BEFV, принаймні частиною білку, що кодується BEFV, як-то BEFV ядерний білок, BEFV - пов'язаний з полімеразою білок, BEFV білок матриксу, BEFV РНК – залежна РНК полімераза, або BEFV глікобілок. Як прийнято тут, термін “ імуногенний ” означає те, що композиція є здатною до проявлення гуморальної та/або клітинної імунної відповіді. Імуногенний штам є також антигенним. Імуногенна композиція є такою композицією, що викликає гуморальну та/або клітинну імунну відповідь при введенні тварині. Термін "імуногенна композиція" стосується будь-якої фармацевтичної композиції, що містить антиген, наприклад, мікроорганізм, композиція якого може бути застосована для викликання імунної відповіді у тварини. Імунна відповідь може охоплювати T- клітинну відповідь, B клітинну відповідь, або як T- клітинна, так і B- клітинна відповідь. Композиція може служити для підвищення чутливості ссавців шляхом подання асоціації з молекулами MHC клітинної поверхні. На додаток, антиген -специфічні T- лімфоцити або антитіла можуть бути генеровані для забезпечення майбутнього захисту імунізованого хазяїна. "Імуногенна композиція" може містити живий, послаблений, або інактивований/вбитий антиген. Антиген може бути цілим мікроорганізмом, або імуногенною частиною, що отримана від того, що викликає імунну відповідь. Імуногенна композиція може захищати тварину від одного або декілька симптомів, пов'язаних з інфекцією мікроорганізма, або може захистити тварину від смерті від такої інфекції. Термін "парентеральне введення", як прийнято тут, означає введення іншим шляхом, ніж через шлунково-кишковий тракт, особливо стосовно введення субстанцію до організму внутрішньовенною, підшкірною, внутрішньом'язовою, або інтрамедулярною ін'єкцією, за винятком інших не пероральних та не назальних шляхів введення як-то внутрішньочеревна ін'єкція або місцеве застосування. Терміни "вакцина" або "вакцинна композиція ”, тут застосовують взаємозамінно стосовно фармацевтичних композицій, що містять щонайменш одну імуногенну композицію, яка викликає імунну відповідь у тварині. Вакцина або вакцинна композиція може захистити тварину від хвороби або можливої смерті, спричиненої інфекцією, та може або не може включати один або декілька додаткових компонентів, що підсилюють імунологічну активність активного компоненту. Вакцина або вакцинна композиція може додатково містити додаткові компоненти, які є типовими для фармацевтичних композицій. Додаткові компоненти можуть містити, наприклад, один або декілька ад'ювантів або імуномодуляторів. Імуногенно активний компонент вакцини може містити повні живі організми навіть у їх оригінальному вигляді, або у вигляді послаблених організмів у модифікованій живій вакцині, або організмах, що є інактивованими відповідними способами у вбитій або інактивованій вакцині, або субодиниці вакцини, що містить один або декілька імуногенних компонентів вірусу, або спорудженою способами генетичної інженерії, мутованої або клонованої вакцини, що приготована з застосуванням способів, відомих фахівцям. Вакцина або вакцинна композиція може містити один або одночасно більш ніж з елементів, описаних вище. Відповідно, у цьому доповненні, можуть бути застосовані традиційні способи молекулярної біології, мікробіології та імунології, відомі фахівцям. Подібні способи є більш докладно наведені у літературі. Див.,наприклад, Sambrook, Fritsch & Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition (1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York. ПРИКЛАДИ Приклад 1 Приготування вірусу ефемерної лихоманки великої рогатої худоби /Quil A. Живий вірусний антиген ефемерної лихоманки великої рогатої худоби (BEF) був отриманий у замороженому стані. Після відтаювання при кімнатній температурі, вірус був поєднаний з Quil A перед додаванням інгредієнтів, що залишилися, для вакцини. Порошок Quil A, вироблений Brenntag, був отриманий від APS (A division of Nuplex Industies, Australia), код продукту No. 04307503. Базовий розчин Quil A був приготований розчиненням у воді до 10 мг/мл. 7 Стисло, 149,96 мл живого базового BEF антигену (1,38 × 10 TCID50/мл) було розведено з 36,34 мл 9,643 г/мл NaCl та 20,70 мл 10 мг/мл Quil A було додано до 1 мг/мл. Суміш перемішувалася протягом 2,5 годин при кімнатній температурі. 10 UA 101385 C2 5 10 15 20 25 Приклад 2 Приготування вакцини BEFV. Для приготування вакцини BEFV, наступні інгредієнти були додані у наступному порядку з перемішуванням суміші протягом 5 хвилин між додаваннями. 384,3 мл 8,5 г/мл NaCl 94,87 г суміші BEFV/QUIL A, що приготована як у Прикладі 1 120,00 мл 10 мг/мл базового SL-CD* до отримання 20 % (об%/ об%) 1,36 г Tioмерсал 9,9 % (мас/об%) *SL-CD був приготований, як описано у Hilgers et al. (Sulpholipo-cyclodextrin in squalene-inwater as a novel and safe vaccine adjuvant. Vaccine 17 (1999), pp219-228.) Після додавання всіх інгредієнтів, вакцина перемішувалася протягом 30 хвилин та pH був доведений до 7,18. Вакцину перемішували протягом додаткових 30 хвилин та застосовували для наповнення помічених пакетів. Приклад 3 Перевірка вакцини BEFV на тваринах: Тести безпеки вакцини були проведені у Fort Dodge Australia, Penrith site. Безпека вакцини була проведена на великої рогатої худобу у відповідності з нормативами EP2002:0062. 10 морських свинок та 2 корови були щеплені вакциною, приготованою вище для визначення серологічної відповіді до фракції BEF антигену. Кожна з 10 морських свинок з вагою 250 г - 400 г були щеплені підшкірно 2,0 мл вакцини. У морських свинок були взяті зразки крові через 6 тижнів після щеплення. 2 корови молодше ніж 1 рік були щеплені підшкірно 4 мл вакцини. У корів були взяті зразки крові через 14 діб після щеплення. Сироватка, отримана від цих тварин була перевірена вірусною нейтралізацію (VN) згідно з наступним протоколом Biosecurity Sciences Laboratory, Department of Primary Industries and Fisheries Animal Research Institute, Queensland (Australia). Застосований перевірочний спосіб вірусної нейтралізації є у відповідності з "Australia standard diagnostic procedures.” Результати досліджень для партій вакцини наведені у Таблиці 1, нижче: Таблиця 1 Результати безпечності з застосуванням одиничної дози вакцини. TEСТ Стерильність Водна фаза pH Титр сироватки BEF Корови безпечність Результати 20 % SL-CD СПЕЦИФІКАЦІЯ Грибів або бактерій не Pass виявлено 6,5-7,5 7,25 Морські свинки = 32 N/A Корови = негативні Не виявлено значної Не виявлено значної місцевої реакції після місцевої або системної вакцинації, але є подальше проявлення реакції опухлості у місці ін'єкції на 14 день 30 35 40 Засновуючись на експериментах з застосуванням інактивованої вакцини BEF у дослідженнях на великій рогатій худобі та кролях, є дані, що свідчать про кореляцію між серологією лабораторних тварин та захистом великої рогатої худоби від BEFV. Отже, результати морських свинок, що наведені у таблиці 1 підтверджують, що імуногенні композиції винаходу забезпечують великій рогатій худобі захист від BEFV. Однодозовий препарат вакцини BEF, приготований, як вказано вище, створив стабільну емульсію. Ця вакцина була перевірена на безпечність та спочатку не виявила місцевих реакцій у тесті безпечності великій рогатій худобі. Хоча системних або поведінкових реакцій не було помічено, вакцина створювала деякі місцеві реакції у місці ін'єкції протягом кінця періоду спостереження. Таблиця 2, наведена нижче, зображує симптоми, що виникають у великій рогатій худобі після вакцинації одиничною дозою з 4 мл препаратом вакцини, переліченої вище. 11 UA 101385 C2 Таблиця 2 Системна та місцева реакція Системна реакція Місцева реакція - см Будь-яка значна системна реакція 5 10 Доба після щеплення 1 3 5 7 10 14 1 3 7 14 місцева або 054,6 (20 %SLCD) Корова #1 Корова #2 Nil Nil Nil Nil Nil Nil Nil Nil Nil Nil Nil Nil 0 Не вимірювали 0 2×9 0 Не вимірювали 0 2,5 × 13 Не відмічена В якості підсумку, використання імуногенної композиції, що містить сапонін (Quil A) та SL-CD у якості ад'ювантів у препараті, що містить BEFV створює ефективну вакцину BEFV, що є прийнятною у вигляді однодозової вакцини. Приклад 4 Приготування суміші вакцин IBR. Для відбору належного ад'юванту для майбутній вакцини, вакцина вбитого рекомбінантного вірусу герпесу 1 корів, також відомого, як вірус інфекційного ринотрахеїту корів (IBR) готувалася шляхом змішування з різними ад'ювантами та результати оцінювалися. Вакцини з трьома різними ад'ювантними комбінаціями були приготовані з 1X титром 6,04 log/мл IBR(EU). Вакцина A містила AlOH (15 %) & сапонін; вакцина B містила 5 % SP олію; та вакцина C містила 20 % SLCD & сапонін. Сапонін був отриманий від Berghausen Cat. NO# 603013. Таблиця 3 Mоновалентна вакцина rIBR (EU) A з ALOH (15 %) & сапонін у якості ад'юванту. Компонент Базовий фактор конц. Кількість/Доза Конц./Доза rIBR Lot # rIBREU-02 Стерильний гель Розчин сапоніну (100 мг/мл) 20 % NZ Амін AS 5 % Тіомерсал Змішаний ділюент з гепесом w/o феноловий червоний 20 % HCl 9,8X=7,03 log10/мл 2 %; з тіомерсалом 6,8 log10s 30,00 % 15,00 % Загальн.обсяг на 200 мл 60,000 мл 30,000 мл 100 мг/мл 1 мг 0,50 % 1,000 мл 20 % 5% NA NA 5,00 % 0,19 % 10,000 мл 0,370 мл 49,32 % 98,630 мл мл 15 Таблиця 4 Mоновалентна вакцина rIBR (EU) B з SP-олією при 5 % у якості ад'юванту. Компонент rIBR Lot # rIBREU-02 20 %NZ Амін AS SP - олія Базовий фактор конц. Кількість/Доза Конц./Доза 9,8X=7,03 log10/мл 20 % 6,8 log10s NA 5% 30,00 % 5,00 % 5,00 % 12 Загальн.обсяг на 200 мл 60,000 мл 10,000 мл 10,000 мл UA 101385 C2 Продовження таблиці 4 Компонент Базовий фактор конц. Кількість/Доза Конц./Доза 5 % Тіомерсал Змішаний ділюент з гепесом w/o феноловий червоний 20 % HCl 5% NA 0,19 % Загальн.обсяг на 200 мл 0,375 мл 59,81 % 119,625 мл мл Таблиця 5 Mоновалентна вакцина rIBR (EU) C з SL-CD при 20 % & сапонін у якості ад'ювантів. Компонент Базовий фактор конц. Кількість/Доза Конц./Доза rIBR Lot # rIBREU-02 SL-CD* Розчин сапоніну (100мг/мл) 20 %NZ Амін AS 5 % Тіомерсал Змішаний ділюент з гепесом w/o феноловий червоний 20 % HCl 9,8X=7,03 log10/мл 6,8 log10s 30,00 % 20,00 % Загальн.обсяг на 200 мл 60,000 40,000 100 мг/мл 1 мг 0,50 % 1,000 20 % 5% NA NA 5,00 % 0,20 % 10,000 0,400 44,30 % 88,600 *SL-CD/сквалан був приготований, як описано у Hilgers et al. (Sulpholipo-cyclodextrin in squalene-in-water as a novel and safe vaccine adjuvant. Vaccine 17 (1999), pp219-228.). 5 Приклад 5 Перевірка вакцини IBR на тваринах: Перевірки вакцини проводили в Айові. Взагалі 27 телят, у віці 5-6 місяців, були випадково розподілені по групам, як наведено у таблиці 6, нижче: Таблиця 6 Тварини, перевірені вакциною IBR. Група 1 2 3 4 5 6 10 15 20 # тварин 5 5 5 5 5 2 Вакцина rIBR, Al(OH)2/Сапонін rIBR, SP - олія rIBR, SL-CD/Сапонін rIBR, SL-CD/Сапонін немає немає # вакцинацій 2 2 2 1 немає немає За винятком телят від груп 4-6, телята були вакциновані двічі, підшкірно, з інтервалом 3 тижні. За два тижня після другої вакцинації (або три тижні після вакцинації для групи 4), всі телята (за виключенням двох телят від групи 6) були інфіковані інтраназально вірулентним вірусом IBR. Всі телята щоденно спостерігалися впродовж 14 днів після інфікування для виявлення клінічних ознак хвороби. Клінічні ознаки охоплювали, але без обмежень, слизовогнійні виділення з носу, виділення з очей, задишка, поганий апетит (не споживання нормальної кількості корма), та депресію. Ректальну температуру також щоденно вимірювали протягом 14 днів після інфікування. У тварин періодично протягом досліджень брали зразки крові на сироватку та антитіла проти IBR визначали з застосуванням аналізу нейтралізації сироватки. Назальні мазки для виділення вірусу збирали щоденно, починаючи з двох днів перед інфікуванням, та протягом 14 днів після інфікування. Був визначений титр вірусу, виділеного від 13 UA 101385 C2 5 кожного теляти у кожен день. Одна тварина з групи 2 була відсунута від досліджень перед інфікуванням через поганий стан здоров'я. Спостережені клінічні ознаки, що були пов'язані з інфікуванням IBR підсумовані у Таблиці 7, нижче, та результати розповсюдження вірусу наведені у Таблиці 8. Титри антитіл анті-IBR сивороткової нейтралізації перелічені у Таблиці 9. Таблиця 7 Середня частота виникнення клінічних ознак, які спостерігали у тварин, інфікованих вірулентним IBR. Група rIBR, Al(OH)2/Сапонін rIBR, SP- олія rIBR, SL-CD/Сапонін, дві дози rIBR, SL-CD/Сапонін, одна доза Контроль інфікування Контроль навколишнього середовища b Гарячка 1,81,5 3,02,9 2,83,4 4,03,2 5,21,8 0 Слизово-гнійні виділення з носу 0,40,5 0,50,6 0,60,9 0,80,8 1,01,0 0 Кашель 1,20,8 1,02,0 0,60,9 0,60,5 2,23,3 0 Значення виражено як середнє  стандартне відхилення. Ректальна температура 103,5˚F та 1˚F вище базової. a b 10 Через малі розміри груп, відмінності, спостережені між вакцинованими тваринами та контролями були не статистично різними. Однак, чисельні відмінності вказують на дію вакцинації, особливо для перших трьох груп. Ступінь та титр вірусного виділення наведені у Таблиці 8, нижче: Таблиця 8 Середні титри вірусного виділення та частота виникнення у тварин, інфікованих вірулентним IBR. Група rIBR, Al(OH)2/Сапонін rIBR, SP- олія rIBR, SL-CD/Сапонін, дві дози rIBR, SL-CD/Сапонін, одна доза Контроль інфікування Контроль навколишнього середовища Титр 6,10,6* 5,90,8* 4,22,1 6,10,5* 6,60,4* 0 Частота 7,21,5* 7,30,5* 4,62,7 6,21,1* 8,21,8* 0 Значення виражено як середній log10 TCID50 титр  стандартне відхилення. Значення виражено як середнє  стандартне відхилення. *Вказане значення значно відрізняється від групи, вакцинованій двома дозами rIBR з SL-CD/ сапонін ад'ювантом, p