Рідкі фармацевтичні композиції fsh і lh

1. Рідка фармацевтична композиція, яка містить фолікулостимулюючий гормон (FSH) або його варіант та поверхнево-активну речовину плуронік F68 (Рluronic® F68), а також метіонін та бактеріостатичний агент, вибраний з групи, яку складають фенол і м-крезол. 2. Рідка фармацевтична композиція, яка містить фолікулостимулюючий гормон (FSH) або його варіант та лютеїнізуючий гормон (LH) або його варіант, а також поверхнево-активну речовину плуронік F68 (Рluronic® F68), метіонін та бактеріостатичний агент, вибраний з групи, яку складають фенол і м-крезол. 3. Рідка фармацевтична композиція за будь-яким із попередніх пунктів, яка відрізняється тим, що концентрація фолікулостимулюючого гормону (FSH) становить від приблизно 150 МОд/мл до приблизно 1200 МОд/мл. 4. Рідка фармацевтична композиція за п. 3, яка відрізняється тим, що концентрація фолікулостимулюючого гормону (FSH) становить від приблизно 300 МОд/мл до приблизно 900 МОд/мл. 5. Рідка фармацевтична композиція за п. 4, яка відрізняється тим, що концентрація фолікулостимулюючого гормону (FSH) становить приблизно 600 МОд/мл. 2 (19) 1 3 91960 4 14. Набір за п. 13, який відрізняється тим, що фосфатний буфер з рН у межах від приблизно 6,0 концентрація лютеїнізуючого гормону (LH) станодо приблизно 8,0. вить від приблизно 0,1 мкг/мг до 1 мкг/мг загальної 27. Фармацевтична композиція або набір за п. 26, маси композиції. що додатково містить фосфатний буфер, рН якого 15. Набір за п. 14, який відрізняється тим, що дорівнює приблизно 7,0. концентрація лютеїнізуючого гормону (LH) стано28. Фармацевтична композиція або набір за п. 27, вить від приблизно 0,1 мкг/мг до 0,6 мкг/мг загальщо містить такі інгредієнти: rFSH, плуронік F68, ної маси композиції. цукрозу, метіонін, м-крезол і водний фосфатний 16. Фармацевтична композиція або набір за будьбуфер, рН якого дорівнює приблизно 7,0. яким із попередніх пунктів, яка/який відрізняється 29. Фармацевтична композиція або набір за п. 28, яка відрізняється тим, що концентрація rFSH тим, що фолікулостимулюючим гормоном (FSH) є людський фолікулостимулюючий гормон (hFSH), становить приблизно 600 МОд/мл, концентрація та/або лютеїнізуючим гормоном (LH) є людський плуронік F68 становить приблизно 0,1 мг/мл, конлютеїнізуючий гормон (hLH). центрація цукрози становить приблизно 60 мг/мл, 17. Фармацевтична композиція або набір за п. 16, концентрація метіоніну становить приблизно 0,1 яка/який відрізняється тим, що фолікулостимумг/мл, концентрація м-крезолу становить приблизлюючим гормоном (FSH) є сечовий людський фоно 3 мг/мл, і концентрація фосфатного буфера лікулостимулюючий гормон (uFSH), та/або лютеїдорівнює приблизно 10 мМ у фосфаті. 30. Набір за п. 9, який відрізняється тим, що міснізуючим гормоном (LH) є сечовий людський лютеїнізуючий гормон (uLH). тить 32,75 мкг рекомбінантного FSH, 9,0 мкг реко18. Фармацевтична композиція або набір за п. 16, мбінантного LH, 15,0 мг цукрози, 0,052 мг NaH2PO4 яка/який відрізняється тим, що фолікулостимуН2О, 0,825 мг Na2HPO4 2Н2О, 0,05 мг плуронік F68 люючим гормоном (FSH) є рекомбінантний людсьі 0,05 мг L-метіоніну. 31. Набір за п. 9, який відрізняється тим, що міский фолікулостимулюючий гормон (rFSH), та/або лютеїнізуючим гормоном (LH) є рекомбінантний тить 65,5 мкг рекомбінантного FSH, 18,0 мкг реколюдський лютеїнізуючий гормон (rLH). мбінантного LH, 30,0 мг цукрози, 0,104 мг NaH2P04 19. Фармацевтична композиція або набір за будьН2О, 1,65 мг Na2HP04 2Н2О, 0,10 мг плуронік F68 і яким із попередніх пунктів, яка/який відрізняється 0,10 мг L-метіоніну. тим, що відношення FSH до LH знаходиться у ме32. Спосіб виготовлення фармацевтичної компожах від приблизно 6:1 до приблизно 1:6. зиції, який включає стадію одержання розчину 20. Фармацевтична композиція або набір за п. 19, FSH, поверхнево-активної речовини плуронік F68 яка/який відрізняється тим, що відношення FSH (Рluronic® F68) і рідкого розріджувача, з подальдо LH знаходиться у межах від приблизно 4:1 до шим додаванням метіоніну та бактеріостатичного приблизно 1:2. агента, вибраного з групи, яку складають фенол і 21. Фармацевтична композиція або набір за п. 20, м-крезол. яка/який відрізняється тим, що відношення FSH 33. Спосіб виготовлення фасованої фармацевтичдо LH знаходиться у межах від приблизно 3:1 до ної композиції, який включає вміщення розчину, приблизно 1:1. що містить FSH і поверхнево-активну речовину 22. Фармацевтична композиція або набір за п. 21, плуронік F68 (Рluronic® F68), а також метіонін та яка/який відрізняється тим, що відношення FSH до бактеріостатичний агент, вибраний з групи, яку LH знаходиться у межах від приблизно 2:1 до 1:1. складають фенол і м-крезол, у флакон, ампулу 23. Фармацевтична композиція або набір за будьабо капсулу. яким із попередніх пунктів, яка/якийвідрізняється 34. Спосіб виготовлення набору за будь-яким із п. тим, що бактеріостатичним агентом є м-крезол. 8 або п. 9, що включає стадію одержання суміші 24. Фармацевтична композиція або набір за п. 23, FSH з/без LH, а також з поверхнево-активною рещо містить м-крезол з концентрацією, що дорівнює човиною плуронік F68, додавання метіоніну і підприблизно 0,3 % (маса/маса розчинника). дання згаданої суміші ліофілізації, а також надан25. Фармацевтична композиція або набір за будьня розчинника для відновлення, що містить яким із попередніх пунктів, що додатково містить бактеріостатичний агент, вибраний з групи, яку цукрозу. складають фенол і м-крезол. 26. Фармацевтична композиція або набір за будьяким із попередніх пунктів, що додатково містить Цей винахід стосується галузі фармацевтичних композицій фолікулостимулюючого гормону (FSH), композицій лютеїнізуючого гормону (LH), сумішей FSH і лютеїнізуючого гормону (LH), а також способів одержання таких композицій. Фолікулостимулюючий гормон (FSH), лютеїнізуючий гормон (LH) та хоріонічний гонадотропін (CG) є білками для ін'єкцій, що належать до класу гонадотропних гормонів. FSH, LH і CG застосовуються самостійно та у комбінації при лікуванні безплідності та репродуктивних розладів як у хворих жіночої статі, так і у хворих чоловічої статі. Природні FSH і LH продукуються гіпофізом. Для фармацевтичного застосування FSH, LH та їхні варіанти можуть продукуватись методами генної інженерії (rFSH і rLH) або їх можна одержувати із сечі постклімактеричних жінок (uFSH і uLH) У хворих жіночої статі FSH застосовують для індукції овуляції (01) та регульованої гіперстимуляції яєчників (СОН) у методиках допоміжної репродукції (ART). Для індукції овуляції, за типовою 5 91960 6 схемою лікування, хвора щоденно одержує ін'єкції зі 112 амінокислот і є специфічною для LH3. АльFSH або варіанта (від приблизно 75 МОд FSH на фа- і бета-субодиниці згаданих глікопротеїнів модобу до 300 МОд FSH на добу) впродовж періоду жуть бути схильними до дисоціації у композиціях часу тривалістю від приблизно 6 днів до приблизунаслідок взаємодії з консервантом, поверхневоно 12 днів. Для регульованої гіперстимуляції яєчактивною речовиною та іншими наповнювачами. ників, за типовою схемою лікування, хвора щоденНаслідком дисоціації субодиниць є втрата біологіно одержує ін'єкції FSH або варіанта (приблизно чної активності4. 150-600 МОд FSH на добу) впродовж періоду часу FSH вводять до складу композиції для внутрітривалістю від приблизно 6 днів до приблизно 12 шньом'язових (ІМ) або підшкірних (SC) ін'єкцій. днів. FSH надається у ліофілізованій (твердій) формі у FSH застосовують також для індукції спермафлаконах або ампулах (75 МОд/флакон і 150 тогенезу у чоловіків, що страждають на олігосперМОд/флакон) зі строком придатності у півтора-два мію. Схема із застосуванням 150 МОд FSH тричі роки за умови збереження при температурі 2-25°С. на тиждень у комбінації з 2500 МОд hCG двічі на Розчин для ін'єкцій одержують шляхом відновлентиждень виявилась успішною щодо досягнення ня ліофілізованого продукту за допомогою води поліпшення якості сперми (зростання кількості для ін'єкцій (WFI). Для індукції овуляції або регужиттєздатних сперматозоїдів) у чоловіків, що льованої гіперстимуляції яєчників рекомендуються страждають на вторинний гіпогонадизм1. щоденні ін'єкції з початковими дозами від 75 МОд LH застосовують у хворих жіночої статі у комдо 600 МОд впродовж приблизно десяти днів. У бінації з FSH у разі ОІ та СОН, зокрема, у хворих, залежності від реакції хворого, можуть здійснюващо мають дуже низькі рівні ендогенного LH або є тись до трьох циклів лікування зі зростаючими стійкими до LH, наприклад, у жінок, що страждадозами FSH. У разі ліофілізованих композицій, ють на вторинний гіпогонадизм (НН, група І за клахворий повинен відновити новий флакон ліофілісифікацією Всесвітньої організації охорони здорозованого матеріалу розріджувачем і вводити відв'я (WHO)) або хворих старішого віку (тобто, 35 новлену композицію кожного дня негайно після або більше років) та хворих, проблемою у яких є відновлення (Листівка-вкладка в упаковці, що місімплантація зародка або ранній мимовільний тить інформацію про лікарський засіб №1700101 аборт. LH у комбінації з FSH є традиційно доступА, опублікована у лютому 1996 року для фертінекними у вигляді препарату, який називають людсьсу (Fertinex™) (очищений урофолітропін для ін'єккими клімактеричними гонадотропними гормонами цій) для підшкірних ін'єкцій фірмою Serono (hMG), що екстрагується із сечі постклімактеричLaboratories, Inc., Randloph, штат Массачусетс). них жінок. Співвідношення активності FSH:LH у FSH також ввели до складу лікарських форм препараті hMG дорівнює 1:1. як однодозового, так і багатодозового рідких форCG діє на той самий рецептор, що і LH і виклиматів у флаконах або ампулах. Однодозові форкає такі самі реакції. CG має триваліший період мати повинні залишатись стійкими і активними при напіввиведення з кровообігу, аніж LH і, завдяки збереженні перед застосуванням. Багатодозові цьому, застосовується як джерело активності LH формати повинні не тільки залишатись стійкими і пролонгованої дії. CG застосовують у разі режимів активними при збереженні перед застосуванням, ОІ та СОН для імітації піка природного LH та ініціале повинні також залишатись стійкими, активниювання овуляції. Ін'єкція людського хоріонічного ми і відносно вільними від бактерій впродовж перігонадотропіну (hCG) застосовується для ініціюоду введення у режими багатодозового застосування овуляції у кінці стадії стимулювання за довання після порушення герметичності ампули. З помогою FSH або суміші FSH і LH. CG може також цієї причини багатодозові формати часто містять застосовуватись разом із FSH на стимулювальній бактеріостатичний препарат. стадії у разі ОІ та СОН для забезпечення активноLH вводять до складу композиції для внутрішсті LH під час стимулювання хворих, у яких бажаньом'язових (ІМ) або підшкірних (SC) ін'єкцій. LH ною є активність LH, наприклад, таких, які згадунадається у ліофілізованій (твердій) формі у флавались вище. конах або ампулах (75 МОд/флакон) зі строком FSH, LH і CG є членами сімейства гетеродипридатності у півтора-два роки за умови зберемерних глікопротеїнових гормонів, яке включає ження при температурі 2-25°С. Розчин для ін'єкцій також тиреотропний гормон (TSH). Члени цього одержують шляхом відновлення ліофілізованого сімейства є гетеродимерами, що складаються з αпродукту за допомогою води для ін'єкцій (WFI). та β-субодиниць. Згадані субодиниці утримуються Для індукції овуляції або регульованої гіперстимуразом завдяки нековалентним взаємодіям. До ляції яєчників рекомендуються щоденні ін'єкції, у складу гетеродимерного людського FSH (hFSH) поєднанні з FSH, з початковими дозами від 75 входять (і) зріла глікопротеїнова альфаМОд до 600 МОд LH впродовж приблизно десяти субодиниця, що складається з 92 амінокислот, яка днів. є також спільною для інших членів сімейства людЕР 0618808 (фірма Applied Research Systems ських гормонів (тобто хоріонічного гонадотропного ARS Holding N.V.) розкриває фармацевтичну комгормону ("CG"), лютеїнізуючого гормону ("LH") та позицію, до складу якої входить тверда гомогенна тиреотропного гормону ("TSH")); та (іі) зріла бетасуміш гонадотропіну і стабілізувальної кількості субодиниця, що складається із 111 амінокислот і є цукрози самостійно або у поєднанні з гліцином. специфічною для FSH2. До складу гетеродимерноЕР 0814841 (фірма Applied Research Systems го людського LH входять (і) зріла глікопротеїнова ARS Holding N.V.) розкриває стійку, рідку фармаальфа-субодиниця, що складається з 92 амінокисцевтичну композицію, до складу якої входять релот; та (іі) зріла бета-субодиниця, що складається 7 91960 8 комбінантний людський хоріонічний гонадотропний варіанта FSH і поверхнево-активної речовини, гормон (hCG) і стабілізувальна кількість маніту. вибраної з-посеред блокспівполімерів етиленокЕР 0448146 (фірма AKZO N.V.) розкриває стасиду і пропіленоксиду, за варіантом, якому віддабілізований гонадотропін, який являє собою ліофіють перевагу, з групи, яку складають плуронік F77, лізований препарат, що містить одну масову часплуронік F87, плуронік F88 і плуронік F68, і письтину гонадотропіну і від 200 масових частин до мову інформацію, у якій стверджується, що такий 10000 масових частин стабілізатора (сіль дикаррозчин після першого застосування може зберігабонової кислоти) у поєднанні з гонадотропіном. тись впродовж періоду часу, що приблизно дорівЕР 0853945 (фірма Akzo Nobel N.V.) розкриває нює 24год. або більше. рідку гонадотропінвмісну композицію, яка відрізняЗа п'ятим аспектом, цей винахід пропонує ліється тим, що згадана композиція містить гонадотофілізовану і рідку фармацевтичну композицію, що ропін та стабілізувальні кількості полікарбонової включає FSH, LH і поверхнево-активну речовину, кислоти або її солі і тіоефірної сполуки. вибрану з-посеред блокспівполімерів етиленоксиWO 00/04913 (фірма Eli Lilly and Co.) розкриду і пропіленоксиду, за варіантом, якому віддають ває композицію, що містить FSH або варіант FSH, перевагу, з групи, яку складають плуронік F77, до складу якого входять альфа- і бета-субодиниці, плуронік F87, плуронік F88 і плуронік F68. та консервант, вибраний з групи, до якої входять За шостим аспектом, цей винахід пропонує фенол, м-крезол, п-крезол, о-крезол, хлоркрезол, спосіб виготовлення ліофілізованої і рідкої фармабензиловий спирт, алкілпарабен (метил, етил, цевтичної композиції, що включає одержання розпропіл, бутил тощо), бензалконію хлорид, бензечину FSH, LH і поверхнево-активної речовини, тонію хлорид, натрію дигідроацетат і тимеросал вибраної з-посеред блокспівполімерів етиленокабо їх суміші у водному розріджувачі. сиду і пропіленоксиду, за варіантом, якому віддаЗалишається потреба у стійких рідких компоють перевагу, з групи, яку складають плуронік F77, зиціях FSH або варіантів FSH і сумішах FSH і LH плуронік F87, плуронік F88 і плуронік F68. для однодозового або багатодозового введення. За сьомим аспектом, цей винахід пропонує Мета цього винаходу полягає у наданні нових спосіб виготовлення фасованої фармацевтичної ліофілізованих, а також рідких композицій FSH або композиції, що включає фасування у контейнер варіантів FSH, LH або варіантів LH, наданні спосорозчину, що містить FSH, LH і поверхнево-активну бів їх одержання та способів їх фармацевтичного речовину, вибрану з-посеред блокспівполімерів або ветеринарного застосування при лікуванні етиленоксиду і пропіленоксиду, за варіантом, якорозладів плодючості. му віддають перевагу, з групи, яку складають плуДодаткова мета цього винаходу полягає у наронік F77, плуронік F87, плуронік F88 і плуронік данні нових ліофілізованих і рідких композицій F68. сумішей FSH і LH, наданні способів їх одержання За восьмим аспектом, цей винахід пропонує та способів їх фармацевтичного або ветеринарноготовий виріб для фармацевтичного застосування, го застосування при лікуванні розладів плодючосякий включає флакон, що містить розчин FSH, LH і ті. поверхнево-активної речовини, вибраної зЗа першим аспектом, цей винахід пропонує ліпосеред блокспівполімерів етиленоксиду і пропіофілізовану і рідку фармацевтичну композицію, що леноксиду, за варіантом, якому віддають перевагу, включає FSH або його варіант, і поверхневоз групи, яку складають плуронік F77, плуронік F87, активну речовину, вибрану з-посеред блокспівпоплуронік F88, плуронік F68, і письмову інформалімерів етиленоксиду і пропіленоксиду, за варіанцію, у якій стверджується, що такий розчин після том, якому віддають перевагу, з групи, яку склапершого застосування може зберігатись впродовж дають Pluronic® F77 (плуронік F77), Pluronic F87 періоду часу, що приблизно дорівнює 24год. або (плуронік F87), Pluronic F88 (плуронік F88) і більше. Pluronic F68 (плуронік F68). За дев'ятим аспектом, цей винахід пропонує За другим аспектом, цей винахід пропонує готовий виріб для фармацевтичного застосування, спосіб виготовлення рідкої фармацевтичної комякий включає перший контейнер, що містить ліопозиції, що включає одержання розчину FSH або філізований FSH або варіант FSH і поверхневойого варіанта, поверхнево-активної речовини, виактивну речовину, вибрану з-посеред блокспівпобраної з-посеред блокспівполімерів етиленоксиду і лімерів етиленоксиду і пропіленоксиду, за варіанпропіленоксиду, за варіантом, якому віддають петом, якому віддають перевагу, з групи, яку скларевагу, з групи, яку складають плуронік F77, плудають плуронік F77, плуронік F87, плуронік F88 і ронік F87, плуронік F88, плуронік F68, і WFI. плуронік F68, та другий контейнер, що містить роЗа третім аспектом, цей винахід пропонує спозчинник для відновлення, за варіантом, якому відсіб виготовлення фасованої фармацевтичної комдають перевагу, водний розчин, що містить бактепозиції, що включає фасування у контейнер розріостатичний препарат, за варіантом, якому чину, що містить FSH і поверхнево-активну віддають перевагу, м-крезол. речовину, вибрану з-посеред блокспівполімерів За десятим аспектом, цей винахід пропонує етиленоксиду і пропіленоксиду, за варіантом, якоготовий виріб для фармацевтичного застосування, му віддають перевагу, з групи, яку складають плуякий включає перший контейнер, що містить ліоронік F77, плуронік F87, плуронік F88 і плуронік філізований LH або варіант LH і поверхневоF68. активну речовину, вибрану з-посеред блокспівпоЗа четвертим аспектом, цей винахід пропонує лімерів етиленоксиду і пропіленоксиду, за варіанготовий виріб для фармацевтичного застосування, том, якому віддають перевагу, з групи, яку склаякий включає флакон, що містить розчин FSH або дають плуронік F77, плуронік F87, плуронік F88 і 9 91960 10 плуронік F68, та другий контейнер, що містить роють CTP-FSH, модифікований рекомбінантний зчин для відновлення, за варіантом, якому віддаFSH пролонгованої дії, що складається з αють перевагу, водний розчин, що містить бактеріосубодиниці дикого типу та гібридної β-субодиниці, статичний препарат, за варіантом, якому віддають у якої карбоксикінцевий пептид hCG був злитим із перевагу, м-крезол. С-кінцем β-субодиниці FSH, як описано у Лаполт За одинадцятим аспектом, цей винахід пропо(LaPolt) та інші, Endocrinology, 1992, 131, 2514нує готовий виріб для фармацевтичного застосу2520 або у Клейн (Klein) та інші, Development and вання, який включає перший контейнер, що місcharacterization of a long-acting recombinant hFSH тить ліофілізований FSH, а також LH, або варіант agonist; Human Reprod. 2003, 18, 50-56. Сюди вхоFSH чи LH, і поверхнево-активну речовину, вибрадить також одноланцюговий CTP-FSH, одноланну з-посеред блокспівполімерів етиленоксиду і цюгова молекула, що складається з наведених пропіленоксиду, за варіантом, якому віддають пенижче послідовностей (від N-кінця до С-кінця): ревагу, з групи, яку складають плуронік F77, плуронік F87, плуронік F88 і плуронік F68, та другий βFSH βhCG-CTP(113-145) αFSH контейнер, що містить розчинник для відновлення, за варіантом, якому віддають перевагу, водний де βFSH означає β-субодиницю FSH, βhCG розчин з м-крезолом. CTP (113-145) означає карбоксикінцевий пептид На кресленні (Фіг.) показано відсоток окиснеhCG і α-FSH означає α-субодиницю FSH, як опиних α-субодиниць у композиціях FSH, що містять сано Клейн (Klein) та іншими5. Іншими прикладами плуронік F68, метіонін із концентрацією 10мкг/мл варіантів FSH є молекули FSH, що мають додат("метіонін 10мкг/мл") і 100мкг/мл ("метіонін кові ділянки глікозилування, включені до α- та/або 100мкг/мл"), порівняно з композицією, що не місβ-субодиниці, як розкривається у WO 01/58493 тить метіоніну ("Метіонін відсутній"), у час 0, 1 ти(фірма Maxygen), зокрема, як розкривається у пунждень і 2 тижні. кті 10 і пункті 11 формули винаходу WO 01/58493, і Рідкі і ліофілізовані композиції FSH або FSH і молекули FSH із міжсубодиничними S-S зв'язками, LH за цим винаходом мають поліпшені або більш як розкривається у WO 98/58957. придатні властивості чи стійкість і є придатними Варіанти FSH, на які посилаються у цьому для лікування безплідності у жінок та/або чоловіописі, включають також карбоксикінцеві делеції ків. Ці композиції і готові вироби є додатково прибета-субодиниці, що є коротшими за непроцесодатними для застосування у системах ін'єкційної ваний зрілий білок, представлений ПОСЛІДОВНІдоставки або системах альтернативної доставки, СТЮ №2. Карбоксикінцеві делеції людської бетанаприклад (але без обмеження), назальної, легесубодиниці представлені ПОСЛІДОВНОСТЯМИ невої, трансмукозної, черезшкірної, пероральної, №3, 4 і 5. Зрозуміло, що карбоксикінцеві варіанти підшкірної, внутрішньом'язової або парентеральбета-ланцюга утворюють димери з відомою альної пролонгованої доставки. За варіантом здійсфа-субодиницею з одержанням гетеродимерного нення цього винаходу, якому віддають особливу варіанта FSH. перевагу, композиції за цим винаходом призначені Гетеродимери FSH або гетеродимери варіандля підшкірної та/або внутрішньом'язової ін'єкції. та FSH можна одержати за допомогою будь-якого Запропоновані розчини FSH або FSH і варіанта LH придатного способу, наприклад, методами генної та композиції можуть також мати підвищену проінженерії, шляхом виділення або очищення з прилонговану активність in vivo, порівняно з відомими родних джерел, як один із варіантів, або шляхом комерційними продуктами, завдяки запобіганню чи хімічного синтезу чи будь-якою комбінацією навезниженню втрати активності або стійкості, або задених вище способів. вдяки поліпшенню будь-якого аспекту ефективносЗастосування терміну "рекомбінантний" ознаті чи бажаності введення, наприклад, завдяки почає одержання FSH, LH або варіантів FSH і LH за ліпшенню принаймні одного з таких аспектів, як методами рекомбінантних ДНК (дивись, наприрежим введення, частота, доза, зручність, легкість клад, WO 85/01958). Послідовності геномних клозастосування, біологічна активність in vitro або in нів і клонів кДНК FSH є відомими для альфа- і беvivo тощо. та-субодиниць декількох видів6. Одним із Термін "фолікулостимулюючий гормон" або прикладів способу експресії FSH або LH із застоFSH, що застосовується у цьому описі, означає суванням методу рекомбінантних ДНК є трансфеFSH, що продукується як непроцесований зрілий кція еукаріотних клітин послідовностями ДНК, що білок, який включає (але ним не обмежується) кодують альфа- і бета-субодиницю FSH або LH, людський FSH чи "hFSH", який одержують метоякі надаються для кожної субодиниці на одному дами генної інженерії або виділяють із людських векторі або на двох векторах з окремим промотоджерел, наприклад, із сечі постклімактеричних ром, як описано у Європатентах ЕР 0211894 і ЕР жінок. Амінокислотна послідовність альфа0487512. Іншим прикладом застосування методу субодиниці людського глікопротеїну представлена рекомбінантних ДНК для одержання FSH або LH є ПОСЛІДОВНІСТЮ №1; амінокислотна послідовзастосування гомологічної рекомбінації для ввеність бета-субодиниці людського FSH представледення гетерологічного регуляторного сегменту з на ПОСЛІДОВНІСТЮ №2. функціональним зв'язком у ендогенні послідовносСловосполучення "варіант FSH" означає ті ті, що кодують субодиниці FSH або LH, як описано молекули, що відрізняються від людського FSH за у Європатенті ЕР 0505500 (фірма Applied Research амінокислотною послідовністю, характером глікоSystems ARS Holding NV). зилування чи міжсубодиничним зв'язком, однак FSH або варіант FSH, що застосовується за демонструють активність FSH. Приклади включацим винаходом, може бути одержаним не лише 11 91960 12 методами генної інженерії, у тому числі з клітин Термін "водний розріджувач" означає рідкий ссавців, але може також бути очищеним з інших розчинник, що містить воду. Композиції водних біологічних джерел, наприклад, із сечових джерел. розчинників можуть складатись виключно з води До прийнятних методів належать описані у робоабо можуть включати воду плюс один або декілька тах Хакола К. (Hakola К.) Molecular and Cellular змішуваних розчинників, і можуть містити розчинеEndocrinology, 127:59-69, 1997; Кін (Кееnе) та інші, ні речовини, наприклад, цукри, буфери, солі або J. Вiol. Chem., 264: 4769-4775, 1989; Церпа-Поляк інші наповнювачі. Найчастіше застосовуваними (Cerpa-Poljak) та інші, Endocrinology, 132: 351-356, неводними розчинниками є органічні спирти з ко1993; Діас (Dias) та інші, J. Вiol. Chem., 269: 25289ротким ланцюгом, наприклад, метанол, етанол, 25294, 1994; Флек (Flack) та інші, J. Вiol. Chem., пропанол, кетони з коротким ланцюгом, напри269: 14015-14020, 1994; і Валов (Valove) та інші, клад, ацетон, і багатоатомні спирти, наприклад, Endocrinology, 135: 2657-2661, 1994, у патенті гліцерин. США №3,119,740 і патенті США №5,767,067. "Ізотонічний агент" являє собою сполуку, що є Термін "лютеїнізуючий гормон" або LH, що зафізіологічно стерпною і яка наділяє композицію стосовується у цьому описі, означає LH, що продуприйнятною ізотонічністю для запобігання резулькується як непроцесований зрілий білок, який туючого току води через клітинні мембрани, що включає (але ним не обмежується) людський LH контактують зі згаданою композицією. З цією мечи "hLH", який одержують методами генної інжетою, як правило, застосовуються такі сполуки, як нерії або виділяють із людських джерел, напригліцерин із відомими концентраціями. Іншими приклад, із сечі постклімактеричних жінок. Амінокисдатними ізотонічними агентами є (але ними не лотна послідовність альфа-субодиниці людського обмежуються) амінокислоти або білки (наприклад, глікопротеїну представлена ПОСЛІДОВНІСТЮ гліцин або альбумін), солі (наприклад, хлорид на№1; амінокислотна послідовність бета-субодиниці трію) і цукри (наприклад, декстроза, цукроза і лаклюдського LH7 представлена ПОСЛІДОВНІСТЮ тоза). №6. За варіантом здійснення цього винаходу, якоТермін "бактеріостатичний препарат" або "бакму віддають перевагу, LH є рекомбінантним гортеріостатичний агент" означає сполуку або компомоном. зиції, що додаються до лікарської форми для відігСловосполучення "варіант LH" означає ті морання ролі протибактеріального агента. лекули, що відрізняються від людського LH за аміКонсервований FSH чи варіант FSH або композинокислотною послідовністю, характером глікозиція за цим винаходом, що містить FSH і LH, за валування чи міжсубодиничним зв'язком, однак ріантом, якому віддають перевагу, відповідає педемонструють активність LH. редбачуваним законом інструктивним Гетеродимери LH або гетеродимери варіанта рекомендаціям щодо ефективності консерванта, LH можна одержати за допомогою будь-якого приякий повинен бути комерційно життєздатним унідатного способу, наприклад, методами генної інверсальним продуктом, за варіантом, якому відженерії, шляхом виділення або очищення з природають перевагу, для людей. Прикладами бактеріодних джерел, як один із варіантів, або шляхом статичних препаратів є фенол, м-крезол, п-крезол, хімічного синтезу чи будь-якою комбінацією навео-крезол, хлоркрезол, бензиловий спирт, алкілпадених вище способів. рабен (метил, етил, пропіл, бутил тощо), бензалТермін "вводити" або "введення" означає ввеконію хлорид, бензетонію хлорид, натрію дигідродення композиції за цим винаходом у організм ацетат і тимеросал. хворого, який цього потребує, для лікування заТермін "буфер" або "фізіологічно прийнятний хворювання або стану. буфер" означає розчини сполук, які, як відомо, є Термін "хворий" означає ссавця, якого піддабезпечними для фармацевтичного або ветеринарють лікуванню з приводу захворювання або стану. ного застосування у композиціях і які мають ефект Хворими є, однак ними не обмежуються, людина, підтримування або регулювання рівня рН комповівця, свиня, кінь, велика рогата худоба, кролик зиції у діапазоні рН, бажаному для згаданої компотощо. зиції. Прийнятними буферами для регулювання Термін "активність", відносно активності FSH, рівня рН у межах від помірно кислого рН до помірозначає здатність композиції FSH або змішаної но основного рН є (але ними не обмежуються) такі композиції викликати біологічні реакції, що пов'ясполуки, як фосфат, ацетат, цитрат, аргінін, трис і зуються з FSH, наприклад, приріст маси яєчників гістидин. "Трис" означає 2-аміно-2-гідроксиметилза результатами аналізу Стілмена-Полі (Steelman1,3-пропандіол і будь-яку його фармацевтично Pohley)8 або ріст фолікулів у хворої жінки. Ріст фоприйнятну сіль. Буферами, яким віддають перевалікулів у хворої жінки може оцінюватись засобами гу, є фосфатні буфери з фізіологічним розчином ультразвукової ехографії, наприклад, у вигляді або прийнятною сіллю. кількості фолікулів, що мають середній діаметр, Термін "фосфатний буфер" означає розчини, який приблизно дорівнює 16мм на 8 день стимущо містять фосфорну кислоту або її солі, з рН баляції. Біологічну активність оцінюють за стандаржаного рівня. Фосфатні буфери, взагалі, одержутом, прийнятим для FSH. ють за допомогою фосфорної кислоти або солі Термін "активність", відносно активності LH, фосфорної кислоти, у тому числі (але без обмеозначає здатність композиції LH або змішаної комження) солей натрію та калію. У цій галузі відомипозиції викликати біологічні реакції, що пов'язуми є декілька солей фосфорної кислоти, наприються з LH, наприклад, приріст маси сім'яних пуклад, одноосновні, двохосновні і трьохосновні солі хирців9. Біологічну активність LH оцінюють за натрію і калію. Відомо, що солі фосфорної кислоти стандартом, прийнятим для LH. існують у формі гідратів відповідної солі. Фосфатні 13 91960 14 буфери можуть охоплювати діапазон рівнів рН, якому віддають перевагу, здійснюють впродовж наприклад, від приблизно рН4 до приблизно рН10, періоду часу, що щонайменше дорівнює приблиздіапазон рівнів, якому віддають перевагу, від прино 12год., 24год., 48год. тощо, за варіантом, якому близно рН5 до приблизно рН9, діапазон рівнів, віддають перевагу, впродовж періоду часу, що якому віддають найбільшу перевагу, від приблизно дорівнює приблизно 12 дням. Ін'єкції можуть бути 6,0 до приблизно 8,0, рівнем рН, якому віддають розділені проміжком часу, наприклад, часовим найбільшу перевагу, що приблизно дорівнює 7,0. періодом тривалістю 6год., 12год., 24год., 48год. Термін "флакон" означає, у широкому значенабо 72 год. ні, резервуар, придатний для утримування FSH у "Сіллю" білка є сіль з кислотою або основою. твердій або рідкій формі у фасованому стерильТакі солі, за варіантом, якому віддають перевагу, ному стані. Прикладами флакона, за цим описом, утворюються між будь-якою однією або декількома є ампули, капсули, блістерні упаковки або інший зарядженими групами білка та будь-яким одним подібний резервуар, придатний для спрямованої або декількома фізіологічно прийнятними, нетокдоставки FSH хворому за допомогою шприца, насичними катіонами або аніонами. До органічних і соса (у тому числі осмотичного), катетера, черезнеорганічних солей належать, наприклад, солі, шкірного пластиру, легеневого або трансмукозного одержані за допомогою кислот, наприклад, хлориспрею. Флакони, придатні для фасування продукстоводневої, сірчаної, сульфонової, винної, фуматів для парентерального, легеневого, трансмукозрової, бромистоводневої, гліколевої, лимонної, ного або черезшкірного введення є добре відомималеїнової, фосфорної, бурштинової, оцтової, ми і загальновизнаними у цій галузі. азотної, бензойної, аскорбінової, иТермін "стійкість" означає фізичну, хімічну і толуолсульфонової, бензолсульфонової, нафталіструктурну стійкість FSH і LH у композиціях за цим нсульфонової, пропіонової, вугільної тощо або, винаходом (у тому числі зі збереженням біологічнаприклад, амонію, натрію, калію, кальцію або ної активності). Нестійкість білкової композиції магнію. може спричинюватись хімічним розкладом або Винахідники встановили, що завдяки об'єдагрегуванням білкових молекул з утворенням понанню FSH і сумішей FSH і LH з поверхневолімерів вищого порядку, дисоціацією гетеродимеактивною речовиною, вибраною з-посеред блоксрів на мономери, дегліколізацією, модифікацією півполімерів етиленоксиду і пропіленоксиду, за гліколізації, окисненням (зокрема, α-субодиниці) варіантом, якому віддають перевагу, з групи, яку або будь-якою іншою структурною модифікацією, складають плуронік F77, плуронік F87, плуронік що знижує щонайменше одну біологічну активність F88 і плуронік F68, за варіантом, якому віддають поліпептидного FSH, включену до цього винаходу. особливу перевагу, з плуронік F68 (фірма BASF, "Стійким" розчином або композицією є такий плуронік F68 є також відомим під назвою полоксарозчин або композиція, де ступінь розкладу, момер 188 (Poloxamer 188)), одержують стійкі комподифікації, агрегації, втрати біологічної активності і зиції, які зводять до мінімального рівня втрату акт.ін. білків цього розчину або композиції є прийнятивного компонента (FSH або FSH і LH), що тно контрольованим і з часом не підвищується до спричинюється адсорбцією на поверхнях флакона неприйнятного рівня. За варіантом, якому віддата/або засобу для спрямованої доставки (наприють перевагу, зазначена активність FSH зберігаклад, шприца, насоса, катетера тощо.). ється щонайменше на рівні приблизно 80% і заВинахідники додатково встановили, що завдязначена активність LH зберігається щонайменше ки об'єднанню FSH і сумішей FSH і LH із поверхна рівні приблизно 80% впродовж 6 місяців при нево-активною речовиною, вибраною з-посеред температурі на рівні приблизно 2-8°С, за варіанблокспівполімерів етиленоксиду і пропіленоксиду, том, якому віддають більшу перевагу, на рівні приза варіантом, якому віддають перевагу, з групи, близно 4-5°С. Активність FSH може визначатись яку складають плуронік F77, плуронік F87, плуроза допомогою біологічного аналізу приросту маси нік F88 і плуронік F68, за варіантом, якому віддаяєчників Стілмена-Полі5. Активність LH може виють особливу перевагу, з плуронік F68 (фірма значатись за допомогою біологічного аналізу приBASF, плуронік F68 є також відомим під назвою росту маси сім'яних пухирців10. полоксамер 188), одержують стійку композицію, Термін "лікування" означає введення, подальпозбавлену проблеми осадження у присутності ший лікарський нагляд, лікування і/або спостеребактеріостатичного агента, наприклад м-крезолу і ження за хворим, для якого введення FSH та/або фенолу. Осадження, наслідком якого є одержання LH є бажаним із метою здійснення фолікулярної каламутних або білястих розчинів, відбувається у або тестикулярної стимуляції або одержання будьразі застосування твін-20 з м-крезолом або феноякої іншої фізіологічної реакції, що регулюється лом. FSH та/або LH. Лікування, таким чином, може Поверхнево-активні речовини типу плуронік є включати (але ним не обмежуватись) введення блокспівполімерами етиленоксиду (ЕО) і пропілеFSH та/або LH для індукції або поліпшення якості ноксиду (РО). Блок пропіленоксиду (РО) знахосперми, стимуляції виділення тестостерону у хводиться між двома блоками етиленоксиду (ЕО). рого чоловіка або розвитку фолікулів чи індукції овуляції у хворої жінки. Словосполучення "багатодозове застосування" включає застосування одного флакона, ампули або капсули композиції FSH або композиції FSH і LH для більше ніж однієї ін'єкції, наприклад, для 2, 3, 4, 5, 6 або більше ін'єкцій. Ін'єкції, за варіантом, 15 91960 16 Поверхнево-активні речовини типу плуронік - в'язкість (за Брукфілдом): 700сП (0,70Па·с) синтезують двостадійним способом: [рідини при температурі 25°С, пасти при темпера1. Гідрофобну речовину бажаної молекулярної турі 60°С і тверді речовини при температурі 77°С]; маси одержують шляхом контрольованого додан- поверхневий натяг при температурі 25°С: ня пропіленоксиду до двох гідроксильних груп 0,1% концентрація: 44,0дин/см (0,044Н/м); пропіленгліколю; і 0,01% концентрація: 47,0дин/см (0,047Н/м); 2. Етиленоксид додають для того, щоб гідро0,001% концентрація: 50,2дин/см (0,0502Н/м); фобна речовина опинилась між гідрофільними - міжфазний натяг при температурі 25°С порігрупами. вняно з вазелиновим маслом: У разі плуронік F77, відсотковий вміст поліок0,1% концентрація: 17,4дин/см (0,0174Н/м); сіетилену (гідрофільна речовина) дорівнює 70%, а 0,01% концентрація: 20,3дин/см (0,0203Н/м); молекулярна маса гідрофобної речовини (поліок0,001% концентрація: 23,3дин/см (0,0233Н/м); сипропілену) досягає приблизно 2306Да. - змочування (за Дрейвсом) при температурі У разі плуронік F87, відсотковий вміст поліок25°С: сіетилену (гідрофільна речовина) дорівнює 70%, а 1,0% концентрація: >360с; молекулярна маса гідрофобної речовини (поліок0,1% концентрація: >360с; сипропілену) досягає приблизно 2644Да. - висота піни: У разі плуронік F88, відсотковий вміст поліок(за методикою фірми Ross Miles) 0,1% при тесіетилену (гідрофільна речовина) дорівнює 80%, а мпературі 50°С: 80мм; молекулярна маса гідрофобної речовини (поліок(за методикою фірми Ross Miles) 0,1% при тесипропілену) досягає приблизно 2644Да. мпературі 26°С: 37мм; У разі плуронік F68, відсотковий вміст поліок(за результатами динамічних випробувань) сіетилену (гідрофільна речовина) дорівнює 80%, а 0,1%, при 400мл/хв.: >600мм; молекулярна маса гідрофобної речовини (поліок- температура помутніння у водному розчині: сипропілену) досягає приблизно 1967Да. 1,0% концентрація: >100°С; Нижче наведені типові властивості плуронік 10% концентрація: >100°С; F77: - HLB (гідрофільно-ліпофільний баланс): 24. - середня молекулярна маса: 6600; Нижче наведені типові властивості плуронік - точка плавлення/плинності: 48°С; F88: - фізична форма при температурі 20°С: тверде - середня молекулярна маса: 11400; тіло; - точка плавлення/плинності: 54°С; - в'язкість (за Брукфілдом): 480сП (0,48Па·с) - фізична форма при температурі 20°С: тверде [рідини при температурі 25°С, пасти при температіло; турі 60°С і тверді речовини при температурі 77°С]; - в'язкість (за Брукфілдом): 2300сП (2,30Па·с) - поверхневий натяг при температурі 25°С: [рідини при температурі 25°С, пасти при темпера0,1% концентрація: 47,0дин/см (0,047Н/м); турі 60°С і тверді речовини при температурі 77°С]; 0,01% концентрація: 49,3дин/см (0,0493Н/м); - поверхневий натяг при температурі 25°С: 0,001% концентрація: 52,8дин/см (0,0528Н/м); 0,1% концентрація: 48,5дин/см (0,0485Н/м); - міжфазний натяг при температурі 25°С порі0,01% концентрація: 52,6дин/см (0,0526Н/м); вняно з вазелиновим маслом: 0,001% концентрація: 55,7дин/см (0,0557Н/м); 0,1% концентрація: 17,7дин/см (0,0177Н/м); - міжфазний натяг при температурі 25°С порі0,01% концентрація: 20,8дин/см (0,0208Н/м); вняно з вазелиновим маслом: 0,001% концентрація: 25,5дин/см (0,0255Н/м); 0,1% концентрація: 20,5дин/см (0,0205Н/м); - змочування (за Дрейвсом) при температурі 0,01% концентрація: 23,3дин/см (0,0233Н/м); 25°С: 0,001% концентрація: 27,0дин/см (0,027Н/м); 1,0% концентрація: >360с; - змочування (за Дрейвсом) при температурі 0,1% концентрація: >360с; 25°С: - висота піни: 1,0% концентрація: >360с; (за методикою фірми Ross Miles) 0,1%, при 0,1% концентрація: >360с; температурі 50°С: 100мм; - висота піни: (за методикою фірми Ross Miles) 0,1%, при (за методикою фірми Ross Miles) 0,1%, при температурі 26°С: 47мм; температурі 50°С: 80мм; (за результатами динамічних випробувань) (за методикою фірми Ross Miles) 0,1%, при 0,1%, при 400мл/хв.: >600мм; температурі 26°С: 37мм; - температура помутніння у водному розчині: (за результатами динамічних випробувань) 1,0% концентрація: >100°С; 0,1%, при 400мл/хв.: >600мм; 10% концентрація: >100°С; - температура помутніння у водному розчині: - HLB (гідрофільно-ліпофільний баланс): 25. 1,0% концентрація: >100°С; Нижче наведені типові властивості плуронік 10% концентрація: >100°С; F87: - HLB (гідрофільно-ліпофільний баланс): 28. - середня молекулярна маса: 7700; Нижче наведені типові властивості плуронік - точка плавлення/плинності: 49°С; F68: - фізична форма при температурі 20°С: тверде - середня молекулярна маса: 8400; тіло; - точка плавлення/плинності: 52°С; - фізична форма при температурі 20°С: тверде тіло; 17 91960 18 - в'язкість (за Брукфілдом): 1000сП (1,0Па·с) дають перевагу, становить від приблизно 0,1мкг/мг [рідини при температурі 25°С, пасти при темперадо 3мкг/мг загальної маси композиції. За одним із турі 60°С і тверді речовини при температурі 77°С]; варіантш здійснення цього винаходу, концентрація - поверхневий натяг при температурі 25°С: лютеїнізуючого гормону (LH) становить від приб0,1% концентрація: 50,3дин/см (0,0503Н/м); лизно 0,1мкг/мг до 1мкг/мг загальної маси компо0,01% концентрація: 51,2дин/см (0,0512Н/м); зиції. За додатковим варіантом здійснення цього 0,001% концентрація: 53,6дин/см (0,0536Н/м); винаходу, концентрація лютеїнізуючого гормону - міжфазний натяг при температурі 25°С порі(LH) становить від приблизно 0,1мкг/мг до вняно з вазелиновим маслом: 0,6мкг/мг загальної маси композиції. 0,1% концентрація: 19,8дин/см (0,0198Н/м); Концентрація FSH у рідких композиціях (у тому 0,01% концентрація: 24,0дин/см (0,024Н/м); числі відновлених композиціях), що включають 0,001% концентрація: 26,0дин/см (0,026Н/м); FSH, за варіантом, якому віддають перевагу, ста- змочування (за Дрейвсом) при температурі новить від приблизно 150 МОд/мл до приблизно 25°С: 2000 МОд/мл, за варіантом, якому віддають біль1,0% концентрація: >360с; шу перевагу, від приблизно 300 МОд/мл до приб0,1% концентрація: >360с; лизно 1500 МОд/мл, за варіантом, якому віддають - висота піни: значно більшу перевагу, від приблизно 450 (за методикою фірми Ross Miles) 0,1%, при МОд/мл до приблизно 750 МОд/мл, за варіантом, температурі 50°С: 35мм; якому віддають найбільшу перевагу, вона дорів(за методикою фірми Ross Miles) 0,1%, при нює приблизно 600 МОд/мл. температурі 26°С: 40мм; Концентрація LH у рідких композиціях (у тому (за результатами динамічних випробувань) числі відновлених композиціях), що включають LH, 0,1%, при 400мл/хв.: >600мм; за варіантом, якому віддають перевагу, становить - температура помутніння у водному розчині: від приблизно 50 МОд/мл до приблизно 2000 1,0% концентрація: >100°С; МОд/мл, за варіантом, якому віддають більшу пе10% концентрація: >100°С; ревагу, від приблизно 150 МОд/мл до приблизно - HLB (гідрофільно-ліпофільний баланс): 29. 1500 МОд/мл, за варіантом, якому віддають значУ композиціях за цим винаходом можуть зано більшу перевагу, від приблизно 300 МОд/мл до стосовуватись також інші полімери, що мають влаприблизно 750 МОд/мл, за варіантом, якому відстивості, подібні до наведених вище. Поверхневодають найбільшу перевагу, вона дорівнює 625 активною речовиною, якій віддають перевагу, є МОд/мл. плуронік F68 і поверхнево-активні речовини, що У композиціях, що містять як FSH, так і LH, вімають подібні властивості. дношення FSH до LH (FSH:LH, МОд:МОд, вміст Плуронік, зокрема плуронік F68, за варіантом, FSH визначено за результатами аналізу приросту якому віддають перевагу, є присутнім у композиції маси яєчників, вміст LH визначено за результатау концентрації, яка є достатньою для підтримки ми аналізу приросту маси сім'яних пухирців), за стійкості FSH та/або LH впродовж необхідного певаріантом, якому віддають перевагу, знаходиться ріоду зберігання (наприклад, 6-12-24 місяців), а у діапазоні від приблизно 6:1 до приблизно 1:6, за також у концентрації, яка є достатньою для запобіваріантом, якому віддають більшу перевагу, від гання втратам білка унаслідок адсорбції на поверприблизно 4:1 до приблизно 1:2, за варіантом, хнях, наприклад, флакона, ампули, капсули або якому віддають значно більшу перевагу, від прибшприца. лизно 3:1 до приблизно 1:1. Особливу перевагу За варіантом, якому віддають перевагу, конвіддають співвідношенням 1:1 і 2:1. центрація плуронік, зокрема плуронік F68, у рідких За варіантом, якому віддають перевагу, конкомпозиціях становить від приблизно 0,01мг/мл до центрація поверхнево-активної речовини, наприприблизно 1мг/мл, за варіантом, якому віддають клад, плуронік F68, у ліофілізованих композиціях більшу перевагу, від приблизно 0,05мг/мл до пристановить від приблизно 0,001мг/мг до приблизно близно 0,5мг/мл, за варіантом, якому віддають 0,1мг/мг загальної маси композиції, за варіантом, значно більшу перевагу, від приблизно 0,2мг/мл до якому віддають більшу перевагу, від приблизно приблизно 0,4мг/мл, за варіантом, якому віддають 0,01мг/мг до приблизно 0,075мг/мг. найбільшу перевагу, вона дорівнює приблизно За варіантом, якому віддають перевагу, кон0,1мг/мл. центрація плуронік, зокрема плуронік F68, у відноКонцентрація (у масовому відношенні) фолікувлених композиціях становить від приблизно лостимулюючого гормону (FSH) у ліофілізованій 0,01мг/мл до приблизно 1мг/мл, за варіантом, якокомпозиції за варіантом, якому віддають перевагу, му віддають більшу перевагу, від приблизно становить від приблизно 0,1мкг/мг до 10мкг/мг за0,05мг/мл до приблизно 0,5мг/мл, за варіантом, гальної маси композиції. За одним із варіантів якому віддають значно більшу перевагу, від прибздійснення цього винаходу, концентрація фолікулизно 0,2мг/мл до приблизно 0,4мг/мл, за варіанлостимулюючого гормону (FSH) становить від том, якому віддають найбільшу перевагу, вона приблизно 0,3мкг/мг до 5мкг/мг загальної маси дорівнює приблизно 0,1мг/мл. композиції. За додатковим варіантом здійснення За варіантом, якому віддають перевагу, FSH і цього винаходу, концентрація фолікулостимулююLH одержують за допомогою методів генної інжечого гормону (FSH) становить від приблизно нерії, за варіантом, якому віддають особливу пе0,37мкг/мг до 2мкг/мг загальної маси композиції. ревагу, вони продукуються клітинами яєчника киКонцентрація лютеїнізуючого гормону (LH) у тайського хом'ячка, трансфікованими вектором ліофілізованій композиції за варіантом, якому відабо векторами, які несуть ДНК, що кодує людські 19 91960 20 глікопротеїнові альфа- і бета-субодиниці FSH і LH. концентрацію, що є ефективною для підтримання ДНК, що кодує альфа- і бета-субодиниці, може згаданої композиції по суті вільною від бактерій переноситись одним або різними векторами. (придатною для ін'єкцій) впродовж періоду ввеРекомбінантні FSH і LH мають декілька передення багатодозових ін'єкцій тривалістю від прибваг над своїми сечовими аналогами. Методи кульлизно 12год. або 24год. до приблизно 12 днів або тивування і виділення із застосуванням рекомбі14 днів, за варіантом, якому віддають перевагу, від нантних клітин забезпечують постійність приблизно 6 днів до приблизно 12 днів. Концентхарактеристик партій. У протилежність до цього, рація бактеріостатичного агента, за варіантом, різні партії сечових FSH і LH значно різняться між якому віддають перевагу, становить від приблизно собою за такими характеристиками, як чистота, 0,1% (маса бактеріостатичного агента/маса розхарактер глікозилування, сіалілування і окиснення чинника) до приблизно 2,0%, за варіантом, якому субодиниць. Завдяки більшій постійності характевіддають більшу перевагу, від приблизно 0,2% до ристик різних партій і ступеню чистоти рекомбінанприблизно 1,0%. У разі бензилового спирту, особтних FSH і LH, згадані гормони можуть бути легко ливу перевагу віддають концентрації 0,9%. У разі ідентифіковані і кількісно визначені із застосуванфенолу, концентрація, якій віддають особливу ням такого методу, як ізоелектричне фокусування перевагу, дорівнює приблизно 0,5%. У разі м(IEF). Легкість ідентифікування та кількісного викрезолу, особливо перевагу віддають концентразначення FSH і LH надає можливість заповнення ції, що дорівнює приблизно 0,3% (наприклад, доріфлаконів за масою гормону (заповнення за мавнює приблизно 3мг/мл у WFI). сою), а не за результатами біологічного аналізу. За варіантом здійснення, якому віддають перН композицій FSH за цим винаходом, за варіревагу, цей винахід пропонує рідку фармацевтичантом, якому віддають перевагу, знаходиться у ну композицію, за варіантом, якому віддають пемежах від приблизно 6,0 до приблизно 8,0, за варевагу, для багатодозового застосування, що ріантом, якому віддають більшу перевагу, від примістить FSH або його варіант, поверхнево-активну близно 6,8 до приблизно 7,8, в тому числі приблиречовину, вибрану з групи, яку складають плуронік зно рН7,0, рН7,2 і рН7,4. Перевагу віддають F77, плуронік F87, плуронік F88 та плуронік F68, і фосфатному буферу, протиіонами, яким відають бактеріостатичний агент, вибраний з групи, яку перевагу, є іони натрію або калію. Фосфатноскладають .м-крезол і фенол, за варіантом, якому солові буфери є добре відомими у цій галузі, навіддають перевагу, м-крезол. приклад, фізіологічний розчин, забуферений фосЗа додатковим варіантом здійснення, якому фатом Дульбекко. Концентрація буфера у загальвіддають перевагу, цей винахід пропонує рідку ному об'ємі розчину може змінюватись і фармацевтичну композицію, за варіантом, якому дорівнювати або приблизно дорівнювати 5мМ, віддають перевагу, для багатодозового застосу9,5мМ, 10мМ, 50мМ, 100мМ, 150мМ, 200мМ, вання, що містить LH, поверхнево-активну речо250мМ і 500мМ. За варіантом, якому віддають певину, вибрану з групи, яку складають плуронік F77, ревагу, концентрація буфера дорівнює приблизно плуронік F87, плуронік F88 та плуронік F68, і бак10мМ. За варіантом, якому віддають особливу теріостатичний агент, вибраний з групи, яку склаперевагу, концентрація буфера становить 10мМ у дають м-крезол і фенол, за варіантом, якому відфосфатних іонах при рН7,0. дають перевагу, м-крезол. рН композицій сумішей FSH і LH за цим винаЗа додатковим варіантом здійснення, якому ходом, за варіантом, якому віддають перевагу, віддають перевагу, цей винахід пропонує рідку знаходиться у межах від приблизно 6,0 до приблифармацевтичну композицію, за варіантом, якому зно 9,0, за варіантом, якому віддають більшу певіддають перевагу, для багатодозового застосуревагу, від приблизно 6,8 до приблизно 8,5, в тому вання, що містить FSH і LH, поверхнево-активну числі приблизно рН7,0, рН8,0 і рН8,2, за варіанречовину, вибрану з групи, яку складають плуронік том, якому віддають найбільшу перевагу, рН доріF77, плуронік F87, плуронік F88 та плуронік F68, і внює приблизно 8,0. бактеріостатичний агент, вибраний з групи, яку Цей винахід спрямовано на рідкі композиції, а складають м-крезол і фенол, за варіантом, якому також на висушені виморожуванням (ліофілізовані) віддають перевагу, м-крезол. За варіантом, якому композиції, що можуть бути відновлені, в яких розвіддають перевагу, співвідношення FSH і LH, причинником (також для відновлення) є вода для ін'єсутніх у композиції (FSH:LH), становить від прибкцій. Рідкі композиції можуть бути однодозовими лизно 2:1 до приблизно 1:1. або багатодозовими. Згадані рідкі, а також висуЗа додатковим варіантом здійснення, якому шені виморожуванням композиції FSH та/або LH віддають перевагу, цей винахід пропонує спосіб за цим винаходом, призначені для багатодозового виготовлення рідкої фармацевтичної композиції, застосування, за варіантом, якому віддають переза варіантом, якому віддають перевагу, для багавагу, містять бактеріостатичний агент, наприклад, тодозового застосування, що включає одержання фенол, м-крезол, п-крезол, о-крезол, хлоркрезол, водного розчину FSH або його варіанта, поверхбензиловий спирт, алкілпарабен (метил, етил, нево-активної речовини, вибраної з групи, яку пропіл, бутил тощо), тимол, бензалконію хлорид, складають плуронік F77, плуронік F87, плуронік бензетонію хлорид, натрію дигідроацетат і тимеF88 та плуронік F68, бактеріостатичного агента, росал. Особливу перевагу віддають фенолу, бенвибраного з групи, яку складають м-крезол і фезиловому спирту і м-крезолу, більшу перевагу віднол, за варіантом, якому віддають перевагу, mдають фенолу і м-крезолу, найбільшу перевагу крезол, і WFI. віддають м-крезолу. Згаданий бактеріостатичний За додатковим варіантом здійснення, якому агент застосовують у кількості, яка забезпечує віддають перевагу, цей винахід пропонує спосіб 21 91960 22 виготовлення рідкої фармацевтичної композиції, крезол, і письмову інформацію, у якій стверджуза варіантом, якому віддають перевагу, для багається, що такий розчин після першого застосувантодозового застосування, що включає одержання ня може зберігатись впродовж періоду часу, що водного розчину LH, поверхнево-активної речовидорівнює приблизно 24год. або більше. За варіанни, вибраної з групи, яку складають плуронік F77, том, якому віддають перевагу, у письмовій інфорплуронік F87, плуронік F88 та плуронік F68, бактемації стверджується, що такий розчин може зберіріостатичного агента, вибраного з групи, яку склагатись після першого застосування впродовж дають m-крезол і фенол, за варіантом, якому відперіоду часу, що дорівнює приблизно 12 дням або дають перевагу, м-крезолу, і WFI. 14 дням. За додатковим варіантом здійснення, якому За варіантом здійснення, якому віддають осовіддають перевагу, цей винахід пропонує спосіб бливу перевагу, композиція містить м-крезол і виготовлення рідкої фармацевтичної композиції, плуронік F68. Винахідники несподівано встановиза варіантом, якому віддають перевагу, для багали, що композиція, що містить плуронік F68, не тодозового застосування, що включає одержання осаджується у присутності м-крезолу, що спостеріводного розчину FSH і LH, поверхнево-активної гається у разі інших поверхнево-активних речовин. речовини, вибраної з групи, яку складають плуроПеред першим застосуванням, тобто перед нік F77, плуронік F87, плуронік F88 та плуронік тим, як порушується герметичність флакона, амF68, бактеріостатичного агента, вибраного з групи, пули або капсули, композиції за цим винаходом яку складають м-крезол і фенол, за варіантом, можуть зберігатись впродовж приблизно 6 місяців, якому віддають перевагу, м-крезол, і WFI. 12 місяців або 24 місяців. За умов зберігання, яким За ще одним варіантом здійснення, якому відвіддають перевагу, перед першим застосуванням, дають перевагу, цей винахід пропонує спосіб вигокомпозиції захищають від яскравого світла (за ватовлення фасованої фармацевтичної композиції, ріантом, якому віддають перевагу, їх зберігають у що включає фасування розчину, що містить FSH, темряві) і зберігають при температурі, що дорівповерхнево-активну речовину, вибрану з групи, яку нює приблизно 2-8°С, за варіантом, якому віддаскладають плуронік F77, плуронік F87, плуронік ють більшу перевагу, при температурі, що дорівF88 та плуронік F68, і бактеріостатичний агент, нює приблизно 4-5°С. вибраний з групи, яку складають м-крезол і фенол, За конкретним варіантом здійснення, цей виза варіантом, якому віддають перевагу, м-крезол. нахід пропонує ліофілізовану композицію для відЗа ще одним варіантом здійснення, якому відновлення, за варіантом, якому віддають перевагу, дають перевагу, цей винахід пропонує спосіб вигодля багатодозового застосування, яка містить FSH товлення фасованої фармацевтичної композиції, або варіант FSH і поверхнево-активну речовину, що включає фасування розчину, що містить FSH і вибрану з групи, яку складають плуронік F77, плуLH, поверхнево-активну речовину, вибрану з груронік F87, плуронік F88 та плуронік F68, за варіанпи, яку складають плуронік F77, плуронік F87, плутом, якому віддають перевагу, плуронік F68. ронік F88 та плуронік F68, і бактеріостатичний За конкретним варіантом здійснення, цей виагент, вибраний з групи, яку складають м-крезол і нахід пропонує ліофілізовану композицію для відфенол, за варіантом, якому віддають перевагу, мновлення, за варіантом, якому віддають перевагу, крезол. для багатодозового застосування, яка містить LH і За ще одним варіантом здійснення, якому відповерхнево-активну речовину, вибрану з групи, яку дають перевагу, цей винахід пропонує готовий складають плуронік F77, плуронік F87, плуронік виріб для фармацевтичного застосування, що F88 та плуронік F68, за варіантом, якому віддають включає флакон, що містить розчин FSH або варіперевагу, плуронік F68. анта FSH, поверхнево-активної речовини, вибраЗа конкретним варіантом здійснення, цей виної з групи, яку складають плуронік F77, плуронік нахід пропонує ліофілізовану композицію, за варіF87, плуронік F88 та плуронік F68, і бактеріостатиантом, якому віддають перевагу, для багатодозочного агента, вибраного з групи, яку складають мвого застосування, яка містить FSH та LH і крезол і фенол, за варіантом, якому віддають пеповерхнево-активну речовину, вибрану з групи, яку ревагу, м-крезол, і письмову інформацію, у якій складають плуронік F77, плуронік F87, плуронік стверджується, що такий розчин може зберігатись F88 та плуронік F68, за варіантом, якому віддають після першого застосування впродовж періоду перевагу, плуронік F68. За варіантом, якому відчасу, що дорівнює приблизно 24год. або більше. дають перевагу, співвідношення FSH і LH, присутЗа варіантом, якому віддають перевагу, письмова ніх у композиції (FSH:LH), становить від приблизно інформація стверджує, що такий розчин може збе2:1 до приблизно 1:1. рігатись після першого застосування впродовж За додатковим конкретним варіантом здійсперіоду часу, що дорівнює приблизно 12 дням або нення, цей винахід пропонує спосіб виготовлення 14 дням. ліофілізованої композиції, за варіантом, якому відЗа ще одним варіантом здійснення, якому віддають перевагу, для багатодозового застосування дають перевагу, цей винахід пропонує готовий після відновлення, що включає одержання суміші виріб для фармацевтичного застосування, що FSH або його варіанта з поверхнево-активною включає флакон, що містить розчин FSH і LH, поречовиною, вибраною з групи, яку складають плуверхнево-активної речовини, вибраної з групи, яку ронік F77, плуронік F87, плуронік F88 та плуронік складають плуронік F77, плуронік F87, плуронік F68, і підданий згаданої суміші ліофілізації. F88 та плуронік F68, і бактеріостатичного агента, За додатковим конкретним варіантом здійсвибраного з групи, яку складають м-крезол і фенення, цей винахід пропонує спосіб виготовлення нол, за варіантом, якому віддають перевагу, мліофілізованої композиції, за варіантом, якому від 23 91960 24 дають перевагу, для багатодозового застосування тить ліофілізований FSH або варіант FSH, а також після відновлення, що включає одержання суміші LH або варіант LH, і поверхнево-активну речовину, LH із поверхнево-активною речовиною, вибраною вибрану з групи, яку складають плуронік F77, плуз групи, яку складають плуронік F77, плуронік F87, ронік F87, плуронік F88 та плуронік F68. Другий плуронік F88 та плуронік F68, і піддання згаданої контейнер або флакон містить розріджувач для суміші ліофілізації. відновлення, за варіантом, якому віддають переЗа додатковим конкретним варіантом здійсвагу, воду і бактеріостатичний агент, вибраний з нення, цей винахід пропонує спосіб виготовлення групи, яку складають м-крезол і фенол, за варіанліофілізованої композиції, за варіантом, якому відтом, якому віддають перевагу, м-крезол. дають перевагу, для багатодозового застосування За варіантом здійснення, якому віддають осопісля відновлення, що включає одержання суміші бливу перевагу, розчинник для відновлення місFSH, LH і поверхнево-активної речовини, вибраної тить м-крезол. Винахідники встановили, що ліофіз групи, яку складають плуронік F77, плуронік F87, лізовані композиції, що містять плуронік F68, не плуронік F88 та плуронік F68, і піддання згаданої осаджуються у разі відновлення розріджувачем, суміші ліофілізації. що містить м-крезол, що спостерігається у разі За ще одним варіантом здійснення, якому відінших поверхнево-активних речовин, наприклад, дають перевагу, цей винахід пропонує спосіб виготвін. товлення фасованої фармацевтичної композиції, Ліофілізовані композиції за цим винаходом що включає фасування ліофілізованої суміші, що можуть зберігатись щонайменше впродовж прибмістить FSH і поверхнево-активну речовину, виблизно 6 місяців, 12 місяців або 24 місяців. За умов рану з групи, яку складають плуронік F77, плуронік зберігання, яким віддають перевагу, перед перF87, плуронік F88 та плуронік F68. шим застосуванням, композиції захищають від За ще одним варіантом здійснення, якому відяскравого світла (за варіантом, якому віддають дають перевагу, цей винахід пропонує спосіб вигоперевагу, їх зберігають у темряві) і зберігають при товлення фасованої фармацевтичної композиції, температурі, що дорівнює приблизно 2-5°С, за що включає фасування у контейнер ліофілізованої варіантом, якому віддають перевагу, при темперасуміші, що містить LH і поверхнево-активну речотурі, що дорівнює приблизно 2-8°С, за варіантом, вину, вибрану з групи, яку складають плуронік F77, якому віддаютьбільшу перевагу, при температурі, плуронік F87, плуронік F88 та плуронік F68. що дорівнює приблизно 4-5°С. За ще одним варіантом здійснення, якому відПісля першого застосування рідини або віднодають перевагу, цей винахід пропонує спосіб виговленої багатодозової композиції, вона може зберітовлення фасованої фармацевтичної композиції, гатись і застосовуватись щонайменше впродовж що включає фасування у контейнер ліофілізованої приблизно 24год., за варіантом, якому віддають суміші, що містить FSH, LH і поверхнево-активну перевагу, щонайменше впродовж приблизно 4 речовину, вибрану з групи, яку складають плуронік днів, 5 днів або 6 днів, за варіантом, якому віддаF77, плуронік F87, плуронік F88 та плуронік F68. ють більшу перевагу, впродовж періоду часу, що За ще одним варіантом здійснення, якому віддорівнює приблизно 12 дням або 14 дням. Після дають перевагу, цей винахід пропонує готовий першого застосування композицію, за варіантом, виріб для фармацевтичного застосування, який якому віддають перевагу, зберігають при темперавключає перший контейнер або флакон, що містурі нижче кімнатної (тобто нижче приблизно тить ліофілізований FSH або варіант FSH, і повер25°С), за варіантом, якому віддають більшу перехнево-активну речовину, вибрану з групи, яку вагу, нижче приблизно 10°С, за варіантом, якому складають плуронік F77, плуронік F87, плуронік віддають більшу перевагу, нижче приблизно 2-8°С, F88 та плуронік F68. Другий контейнер або флакон за варіантом, якому віддають найбільшу перевагу, містить розріджувач для відновлення, за варіаннижче приблизно 5-0°С том, якому віддають перевагу, воду і бактеріостаЗа варіантом, якому віддають перевагу, комтичний агент, вибраний з групи, яку складають мпозиції за цим винаходом містять антиоксидант, крезол і фенол, за варіантом, якому віддають пенаприклад, метіонін, натрію бісульфіт, солі етилеревагу, м-крезол. ндіамінтетраоцтової кислоти (EDTA), бутилований За ще одним варіантом здійснення, якому відгідрокситолуол (ВНТ) і бутилований гідроксіанізол дають перевагу, цей винахід пропонує готовий (ВНА). Найбільшу перевагу віддають метіоніну. виріб для фармацевтичного застосування, який Антиоксидант запобігає окисненню FSH і LH (зоквключає перший контейнер або флакон, що місрема, α-субодиниці). тить ліофілізований LH або варіант LH, і поверхКонцентрація метіоніну у рідкій та/або відновнево-активну речовину, вибрану з групи, яку склаленій композиції, за варіантом, якому віддають дають плуронік F77, плуронік F87, плуронік F88 та перевагу, становить від приблизно 0,01мг/мл до плуронік F68. Другий контейнер або флакон місприблизно 1,0мг/мл, за варіантом, якому віддають тить розріджувач для відновлення, за варіантом, більшу перевагу, від приблизно 0,05мг/мл до приякому віддають перевагу, воду і бактеріостатичний близно 0,5мг/мл, за варіантом, якому віддають агент, вибраний з групи, яку складають м-крезол і найбільшу перевагу, вона дорівнює приблизно фенол, за варіантом, якому віддають перевагу, m0,1мг/мл. крезол. За варіантом, якому віддають перевагу, комЗа ще одним варіантом здійснення, якому відпозиції за цим винаходом містять моно- або дисадають перевагу, цей винахід пропонує готовий харид чи спирт з цукру, як стабілізатор, і агент ревиріб для фармацевтичного застосування, який гулювання ізотонічності, наприклад, цукрозу, включає перший контейнер або флакон, що місдекстрозу, лактозу, маніт та/або гліцерин. Найбі 25 91960 26 льшу перевагу віддають цукрозі, за варіантом, FSH може визначатись за допомогою біологічного якому віддають перевагу, з концентрацією, що аналізу приросту маси яєчників Стілмена-Полі дорівнює приблизно 60мг/мл. (Steelman-Pohley)5. Активність LH може визначаЯк вказувалось вище, цей винахід пропонує тись за допомогою біологічного аналізу приросту рідкі композиції для однодозового та багатодозомаси сім'яних пухирців. вого застосування, що містять бактеріостатичний Рідкі композиції за цим винаходом можна одеагент, або до яких бактеріостатичний агент додаржати за допомогою способу, що включає змішують під час відновлення композиції. Композиції за вання FSH або варіанта FSH, LH або суміші FSH, цим винаходом є придатними для фармацевтичLH, плуронік F68 і бактеріостатичного агента, вибного або ветеринарного застосування. раного з групи, яку складають фенол і м-крезол, у Як вказувалось вище, за варіантом здійсненвигляді твердих речовин або розчинення FSH чи ня, якому віддають перевагу, цей винахід пропонує варіанта FSH або суміші FSH і LH ("білок"), плуроготовий виріб, що включає пакувальний матеріал і нік F68 і бактеріостатичного агента, вибраного з флакон, що містить розчин FSH або варіанта FSH, групи, яку складають фенол і м-крезол, у водному LH або FSH і LH, плуронік F68 і бактеріостатичний розріджувачі. Змішування компонентів та їх розчиагент, вибраний з групи, яку складають фенол і мнення у водному розріджувачі здійснюють за тракрезол, факультативно з буфером та/або іншими диційними методами розчинення і змішування. наповнювачами, у водному розріджувачі, де згаДля одержання придатної композиції, наприклад, даний пакувальний матеріал включає письмову визначена кількість FSH або варіанта FSH, LH або інформацію, у якій стверджується, що такий розсуміші FSH і LH у забуференому розчині об'єднучин після першого застосування може зберігатись ється з плуронік F68 і бактеріостатичним агентом, впродовж періоду часу, що дорівнює 24год. або вибраним із групи, яку складають фенол і мбільше. Цей винахід додатково пропонує готовий крезол, у забуференому розчині у кількостях, досвиріб, що включає пакувальний матеріал і флакон, татніх для одержання бажаних концентрацій білка, що містить композицію FSH або варіанта FSH за плуронік F68 і бактеріостатичного агента. Одержацим винаходом, де згаданий пакувальний матеріний розчин після цього фасують у флакони, ампуал включає письмову інформацію, у якій хворому ли або капсули. Пересічним фахівцем у цій галузі надається інструкція щодо відновлення FSH або можуть бути визначені варіанти цього процесу. варіанта FSH у водному розріджувачі з одержанНаприклад, порядок, у якому додаються компоненям розчину, який може зберігатись впродовж пенти, чи застосовуються додаткові домішки, темперіоду часу, що дорівнює 24год. або більше. ратура і рН, при яких одержують композицію, усе Як вказувалось вище, за варіантом здійсненце є факторами, які можуть оптимізуватись відноня, якому віддають перевагу, цей винахід пропонує сно концентрації та застосованих засобів введенготовий виріб, що включає пакувальний матеріал і ня. флакон, що містить ліофілізований FSH або варіЗа варіантом здійснення, якому віддають пеант FSH, LH або варіант LH, або FSH і LH, плуроревагу, рідкі композиції за цим винаходом виготонік F68. Бактеріостатичний агент у другому конвляють шляхом одержання індивідуальних концетейнері, що містить розріджувач, вибраний з групи, нтрованих розчинів відомої концентрації усіх яку складають фенол і м-крезол, факультативно з компонентів композиції (наприклад, натрійфосфадодатковими наповнювачами, де згаданий пакутного буфера, цукрози, твій, метіоніну, FSH та/або вальний матеріал включає письмову інформацію, LH) і відбирання аліквоти титрованих розчинів з у якій стверджується, що такий розчин після перодержанням "маточного розчину" такого самого шого застосування може зберігатись впродовж складу, що і кінцева композиція. "Маточний розперіоду часу, що дорівнює 24год. або більше. чин", за варіантом, якому віддають перевагу, фільКількість білкового гормону у композиціях за трують через мембрану PDF Duropore® (22мкм, цим винаходом забезпечує після відновлення одефірма Міlliроrе) для видалення мікроорганізмів, ржання концентрацій від приблизно 1,0мкг/мл до після чого аліквоти фасують у окремі контейнери, 50мг/мл, хоча придатними є більш високі і більш наприклад, флакони, ампули або капсули. низькі концентрації, що залежить від передбачуЛіофілізовані композиції за цим винаходом ваного носія для спрямованої доставки, наприможна одержати за допомогою способу, що вклюклад, розчинні композиції будуть відрізнятись від чає змилування FSH або варіанта FSH, LH або композицій, призначених для доставки за допомоваріанта FSH, або суміші FSH, LH, плуронік F68, а гою черезшкірного пластиру, легеневим, трансмутакож додаткових наповнювачів, наприклад, антикозним шляхами або за допомогою осмотичного оксиданта та/або буфера, і піддання згаданої сучи мікронасоса. Концентрація білкового гормону, міші ліофілізації. Змішування компонентів та їх за варіантом, якому віддають перевагу, становить ліофілізацію здійснюють за традиційними методавід приблизно 5,0мкг/мл до приблизно 2мг/мл, за ми. Для одержання відповідної композиції, наприваріантом, якому віддають більшу перевагу, від клад, визначену кількість FSH або варіанта FSH, приблизно 10мкг/мл до приблизно 1мг/мл, за варіLH або варіанта LH, або суміші FSH і LH об'єднуантом, якому віддають найбільшу перевагу, від ють із плуронік F68, і одержану суміш ліофілізуприблизно 50мкг/мл до приблизно 200мкг/мл. ють, після чого фасують у флакони, ампули або За варіантом, якому віддають перевагу, активкапсули. Пересічним фахівцем у цій галузі можуть ність FSH та/або активність LH композицій за цим бути визначені варіанти цього процесу. Напривинаходом під час фасування зберігається щоклад, порядок, у якому додають компоненти, чи найменше на рівні приблизно 80% впродовж 24 застосовують додаткові доміїпки, температура і місяців (перед першим застосуванням). Активність рН, при яких одержують композицію, усе це є фак 27 91960 28 торами, які можуть оптимізуватись відносно конСтійкі консервовані композиції можуть надавацентрації та застосованих засобів введення. тись хворим у вигляді прозорих розчинів. Згаданий Композиції за цим винаходом можуть вводирозчин може призначатись для одноразового затись за допомогою визнаних засобів. Прикладами стосування або може застосовуватись декілька таких одноампульних систем є шприци-ін'єктори разів і його може вистачити для одного або декільдля спрямованої доставки розчину, наприклад, кох циклів лікування хворого і, таким чином, цей EasyJect®, Gonal-F® Pen, Humaject®, NovoPen®, Bрозчин надає можливість застосування більш зруD®Pen, AutoPen® і OptiPen®. чної схеми лікування, аніж та, що є доступною на Продукти, що заявляються у пунктах формули цей час. цього винаходу, включають пакувальний матеріал. FSH або варіант FSH, LH або суміші FSH і LH Пакувальний матеріал, окрім інформації, яка вимау формі стійких або консервованих композицій або гається органами державного регулювання, забезрозчинів, опис яких наведено, можуть вводитись печує умови, за яких згаданий продукт може захворому за цим винаходом різноманітними спосостосовуватись. Пакувальний матеріал за цим бами спрямованої доставки, у тому числі, шляхом винаходом, у разі продукту, розфасованого у двох підшкірної або внутрішньом'язової ін'єкції; черезшфлаконах (вологий/сухий), надає хворому інструккірним, легеневим, трансмукозним шляхом, шляції щодо відновлення FSH або варіанта FSH у вохом імплантації, за допомогою осмотичного насодному розріджувачі з одержанням розчину і застоса, капсули, мікронасоса, пероральним шляхом сування цього розчину впродовж періоду часу або іншими засобами, які визначаються досвідчетривалістю 24год. або більше. У разі розфасованим фахівцем, як добре відомі у цій галузі. ного у один флакон розчинного продукту, етикетка Наведені нижче приклади надаються виключвказує, що такий розчин може зберігатись після но з метою додаткової ілюстрації одержання ліпершого застосування впродовж періоду часу трикарських форм та композицій за цим винаходом. валістю 24год. або більше, за варіантом, якому Обсяг цього винаходу не повинен розглядатись як віддають перевагу, до 12 днів або 14 днів. Продуктакий, що складається лише з наведених нижче ти, що заявляються у пунктах формули цього виприкладів. находу, є придатними для фармацевтичного заПриклад 1 стосування. Порівняльні композиції Матеріали Продукт Нерозфасований r-hFSH, що застосовується для одержання можливих композицій D-маніт (DAB, Ph Eur, BP, FU, USP, FCC, E421) Цукроза (DAB, Ph Eur, BP, NF) NaCl (ACS (Американське онкологічне товариство), ISO (Міжнародна організація стандартів)) Na2HPO4 2Н2О (чистий для аналізів) NaH2PO4 H2O (чистий для аналізів) Бензиловий спирт (чистий для аналізів) м-крезол (для синтезу) Твій 20 (Polysorbate 20) (для синтезу) Плуронік F68 (Poloxamer 188) І-метіонін (для біохімічних досліджень) Ортофосфорна кислота 85% (Ph Eur, BP, NF) 1,5мл скляна капсула Виробник Фірма Laboratoires Serono SA Merck Merck Merck Merck Merck Merck Merck Merck Sigma Merck Merck SFAM (цементована кремнієм на фірмі Aguettant) Гуми типу А West Company Обжимні ковпачки Aguettant Millex-GV Фільтрувальна установка з приводом від шприца- Millipore Durapore Мембранні фільтри Durapore 0,22мкм GV Millipore 20мл пластиковий шприц Plastipak Becton Dickinson Сталевий тримач для фільтрації Sartorius Обладнання Системи високоефективної рід- Детектор, модель 486 або 490 кої хроматографії Регулятор, модель 600S Насос, модель 626 Автоматичний дозатор для введення проб, модель 717 РН-метр Модель 654 Осмометр 030-D Waters 2 Metrohm Osmomat 1 1 29 91960 Під час проведення дослідження, опис якого наведено нижче, для великої кількості композицій оцінювали такі параметри: - сумісність поверхнево-активної речовини і бактеріостатичного агента; - окиснення альфа-субодиниці. Дослідженню піддавали багатодозові композиції, що містили твій 20 або плуронік F68, а також бактеріостатичний агент. Оцінювали три такі бактеріостатичні агенти: 30 - бензиловий спирт 0,9%; - м-крезол 0,3%; - фенол 0,5%. Застосовували такий діапазон концентрацій твін 20 і плуронік F68: - твін 20: діапазон від 10мкг/г до 100мкг/г; - плуронік F68: діапазон від 10мкг/г до 100мкг/г. Одержані розчини наведені у Таблиці 1. Таблиця 1 Порівняльні композиції Ідентифікаційний № 1P 2Р 3Р 4Р 5Р 6Р Na2HPO4 NaH2PO4 2Н2О Н2О (мг/г) (мг/г) 1,11 0,45 1,11 0,45 1,11 0,45 1,11 0,45 1,11 0,45 1,11 0,45 r-hFSH*, Плуронік Твін 20 Бактеріостатичний МОд/г F68 (мкг/г) (мкг/г) агент 600 600 600 600 600 600 10 10 100 100 10 10 7 1,11 0,45 600 100 8 1,11 0,45 600 100 9 1,11 0,45 600 100 10 11 12 13 14 15 16 17 18 1,11 1,11 1,11 1,11 1,11 1,11 1,11 1,11 1,11 0,45 0,45 0,45 0,45 0,45 0,45 0,45 0,45 0,45 600 600 600 600 600 600 600 600 600 100 100 100 10 10 10 10 10 10 19 1,11 0,45 600 100 20 1,11 0,45 600 100 21 1,11 0,45 600 100 22 23 24 1,11 1,11 1,11 0,45 0,45 0,45 600 600 600 100 100 100 25 1,11 0,45 600 10 26 1,11 0,45 600 10 27 1,11 0,45 600 10 28 29 30 1,11 1,11 1,11 0,45 0,45 0,45 600 600 600 10 10 10 0,5% фенол 0,5% фенол 0,5% фенол 0,5% фенол 0,5% фенол 0,5% фенол 0,9% бензиловий спирт 0,9% бензиловий спирт 0,9% бензиловий спирт 0,3% м-крезол 0,3% м-крезол 0,3% м-крезол 0,9% м-крезол 0,9% м-крезол 0,9% м-крезол 0,3% м-крезол 0,3% м-крезол 0,3% м-крезол 0,9% бензиловий спирт 0,9% бензиловий спирт 0,9% бензиловий спирт 0,3% м-крезол 0,3% м-крезол 0,3% м-крезол 0,9% бензиловий спирт 0,9% бензиловий спирт 0,9% бензиловий спирт 0,3% м-крезол 0,3% м-крезол 0,3% м-крезол *До композиції замість білка додавали FSH, виходячи з його біологічної активності. Наповнювач (мг/г) цукроза 70,6 маніт 38,7 цукроза 70,6 маніт 38,7 цукроза 70,6 маніт 38,7 NaCl 6,0 цукроза 62,3 маніт 34,1 NaCl 7,6 цукроза 78,0 маніт 42,7 NaCl 6,0 цукроза 62,3 маніт 34,1 NaCl 7,6 цукроза 78,0 маніт 42,7 NaCl 6,0 цукроза 62,3 маніт 34,1 NaCl 7,6 цукроза 78,0 маніт 42,7 NaCl 6,0 цукроза 62,3 маніт 34,1 NaCl 7,6 цукроза 78,0 маніт 42,7 31 91960 За результатами візуального обстеження дійшли висновку, що твій 20 не може застосовуватись разом з m-крезолом і фенолом, оскільки композиції FSH, що містили твін 20 і m-крезол або твій 20 і фенол, мали вигляд опалесцентної суспензії білого кольору. У протилежність до цього, у композицій FSH, що містили плуронік F68, цієї проблеми з mкрезолом і фенолом не спостерігалось. Застосування плуронік F68 надає можливість застосування фенолу та м-крезолу. Об'єднання FSH і плуронік F68 з антиоксидантами 32 Наведені нижче антиоксиданти оцінювали щодо їх здатності до пригнічення окиснювання αсубодиниці у присутності плуронік F68: - метіонін: діапазон від 10мкг/г до 100мкг/г; - аскорбінова кислота: діапазон від 10мкг/г до 100мкг/г. Цукрозу і маніт застосовували як ізотонічні фактори; твін 20 або плуронік додавали з концентрацією 100мкг/г Одержані композиції представлені у Таблиці 2. Таблиця 2 Порівняльні композиції з/без метіоніну Ідентифікаційний № 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 Na2HPO4 NaH2PO4 Плуронік Твін Аскорбінова RhFSH, Метіонін Бактеріостатичний 2Н2О Н2О F68 20 кислота МОд/г (мкг/г) агент (мг/г) (мг/г) (мкг/г) (мкг/г) (мкг/г) 1,11 0,45 600 100 0,3% m-крезол 1,11 0,45 600 100 0,3% m-крезол 0,9% бензиловий 1,11 0,45 600 100 спирт 0,9% бензиловий 1,11 0,45 600 100 спирт 0,9% бензиловий 1,11 0,45 600 100 спирт 0,9% бензиловий 1,11 0,45 600 100 спирт 1,11 0,45 600 100 10 0,3% m-крезол 1,11 0,45 600 100 10 0,3% m-крезол 1,11 0,45 600 100 100 0,3% m-крезол 1,11 0,45 600 100 100 0,3% m-крезол 1,11 0,45 600 100 10 0,3% m-крезол 1,11 0,45 600 100 10 0,3% m-крезол 1,11 0,45 600 100 100 0,3% m-крезол 1,11 0,45 600 100 100 0,3% m-крезол 0,9% бензиловий 1,11 0,45 600 100 10 спирт 0,9% бензиловий 1,11 0,45 600 100 10 спирт 0,9% бензиловий 1,11 0,45 600 100 100 спирт 0,9% бензиловий 1,11 0,45 600 100 100 спирт 0,9% бензиловий 1,11 0,45 600 100 10 спирт 0,9% бензиловий 1,11 0,45 600 100 10 спирт 0,9% бензиловий 1,11 0,45 600 100 100 спирт 0,9% бензиловий 1,11 0,45 600 100 100 спирт 0,9% бензиловий 1,11 0,45 600 100 10 спирт 0,9% бензиловий 1,11 0,45 600 100 10 спирт 0,9% бензиловий 1,11 0,45 600 100 100 спирт 0,9% бензиловий 1,11 0,45 600 100 100 спирт 0,9% бензиловий 1,11 0,45 600 100 10 спирт Наповнювач цукроза маніт цукроза маніт цукроза маніт цукроза маніт цукроза маніт цукроза маніт цукроза маніт цукроза маніт цукроза маніт цукроза маніт цукроза маніт цукроза маніт цукроза маніт цукроза 33 91960 34 Продовження таблиці 2 Ідентифікаційний № 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 Na2HPO4 NaH2PO4 Плуронік Твін Аскорбінова RhFSH, Метіонін Бактеріостатичний 2Н2О Н2О F68 20 кислота МОд/г (мкг/г) агент (мг/г) (мг/г) (мкг/г) (мкг/г) (мкг/г) 0,9% бензиловий 1,11 0,45 600 100 10 спирт 0,9% бензиловий 1,11 0,45 600 100 100 спирт 0,9% бензиловий 1,11 0,45 600 100 100 спирт 1,11 0,45 600 100 фенол 1,11 0,45 600 100 фенол 1,11 0,45 600 фенол 1,11 0,45 600 100 10 фенол 1,11 0,45 600 100 100 фенол 1,11 0,45 600 100 100 фенол 1,11 0,45 600 100 10 фенол 1,11 0,45 600 100 10 фенол 1,11 0,45 600 100 100 фенол 1,11 0,45 600 100 100 фенол Наповнювач маніт цукроза маніт цукроза маніт цукроза маніт цукроза маніт цукроза маніт цукроза маніт *До композиції замість білка додавали FSH, виходячи з його біологічної активності. По 20г кожної композиції вносили у поліпропіленові пробірки Falcon і фільтрували через фільтрувальну установку з приводом від шприца (3см2, 0,22мкм Millex-GV Syringe Driven filter unit Durapore), після чого аналізували для визначення даних у t=0. Потім розчини зберігали при температурі 40°С і випробували за наведеною нижче схемою: Аналітичний тест Високоефективна рідинна хроматографія з оберненою фазою для визначення окиснених альфа-субодиниць (%) Високоефективна рідинна гель-хроматографія для кількісного визначення білка (мкг/г) Високоефективна рідинна гель-хроматографія для якісного визначення вільних субодиниць Т=0 1 тиждень 2 тижні 3 тижні 4 тижні X X X X X X X X X X X X X X X (X): проведений тест Результати високоефективної рідинної хроматографії з оберненою фазою (HPLC) показали, що окиснення α-субодиниць FSH у композиціях, що містять FSH, плуронік F68, м-крезол і метіонін (10мкг/мл і 100мкг/мл), у разі їх зберігання при температурі 40°С, є значно зниженим, у протилежність до композицій, що не містять метіоніну, як показано на кресленні (Фіг.). Виходячи з усереднених даних двох експериментів, відсоток окиснених α-субодиниць у композиції, що не містить метіоніну, дорівнює 2,3 у Т=0, 4,0 у Т=1 тиждень і 7,1 у Т=2 тижні. У композиції, що містить 10мкг/мл метіоніну, відсоток окиснених α-субодиниць дорівнює 2,0 у Т=0, 3,2 у Т=1 тиждень і 3,8 у Т=2 тижні. У композиції, що містить 100мкг/мл метіоніну, відсоток окиснених α-субодиниць дорівнює 1,8 у Т=0, 1,7 у Т=1 тиждень і 1,3 у Т=2 тижні. Приклад 2 Рідка однодозова композиція рекомбінантного FSH для підшкірної та внутрішньом'язової ін'єкції Виходячи з результатів прикладу 1, одержали таку композицію. Компоненти 1-7, наведені у Таблиці 3, одержали у вигляді титрованих розчинів у WFI. Аліквоти кожного розчину додавали до посудини для змішування з одержанням "маточного розчину". У флакони фасували маточний розчин, що містив 10,9мкг (150 МОд) або 5,45мкг (75 МОд) FSH. У разі рекомбінантного FSH, показники біологічної активності і питомої активності є постійними, що надає можливість фасування FSH за масою, а не за результатами біологічного аналізу. 35 91960 36 Таблиця 3 Компоненти однодозових рідких композицій FSH Компонент № 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Опис RhFSH (мкг/флакон) Цукроза (мг/флакон) NaH2PO4H2O (мг/флакон) Na2HPO4 2Н2О (мг/флакон) плуронік F68 (мг/флакон) Метіонін (мг/флакон) т -крезол (мг/флакон) рН WFI 150 МОд FSH 10,9 (150 МОд) 15,00 0,111 0,273 0,025 0,025 0,75 7,0 Достатня кількість до 1мл Флакони заповнювали і герметично закривали за стерильних умов. Композиція має строк зберігання до двох років при температурі навколишнього середовища. Приклад 3 Рідка багатодозова композиція рекомбінантного FSH для підшкірної та внутрішньом'язової ін'єкції Виходячи з результатів прикладу 1, одержали таку багатодозову композицію. Компоненти 1-7, наведені у Таблиці 4, одержали у вигляді титрованих розчинів у WFI. Аліквоти кожного розчину додавали до посудини для змішування з одержанням "маточного розчину". У флакони фасували маточний розчин, що містив 22,2мкг (305 МОд), 33,3мкг (458 МОд) і 66,7мкг 75 МОд FSH 5,45 (75 МОд) 7,50 0,0555 0,1365 0,0125 0,0125 0,375 7,0 Достатня кількість до 0,5мл (916 МОд) FSH. Одержані композиції забезпечували в загальній кількості 300 МОд, 450 МОд і 900 МОд FSH. Капсули заповнювали і герметично закривали за стерильних умов. Багатодозова композиція може зберігатись при температурі приблизно 2-8°С, за варіантом, якому віддають більшу перевагу, при температурі приблизно 4-5°С до двох років до першого застосування. Після першого застосування капсулу слід зберігати при температурі приблизно 2-8°С, за варіантом, якому віддають більшу перевагу, при температурі приблизно 4-5°С впродовж періоду лікування із застосуванням багатодозової композиції, тривалість якого може становити 24год., 2 дні або до 12-14 днів. Таблиця 4 Компоненти багатодозових композицій FSH Компонент № 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Опис RhFSH (мкг/капсулу) Цукроза (мг/капсулу) NaH2PO4H2O (мг/капсулу) Na2HPO42H2O (мг/капсулу) Плуронік F68 (мг/капсулу) Метіонін (мг/капсулу) м-крезол (мг/капсулу) РН WFI 300 МОд FSH 450 МОд FSH 900 МОд FSH 22,2 (305 МОд) 33,3 (458 МОд) 66,7 (916 МОд) 30,0 45,0 90,0 0,225 0,337 0,675 0,555 0,832 1,665 0,050 0,075 0,150 0,050 0,075 0,150 1,50 2,25 4,50 7,0 7,0 7,0 Достатня кількість Достатня кількість Достатня кількість до 0,5мл до 0,75мл до 1,5мл Приклад 4 Рідка однодозова композиція рекомбінантного LH для підшкірної та внутрішньом'язової ін'єкції Одержали таку композицію. Компоненти 1-7, наведені у Таблиці 5, одержали у вигляді титрованих розчинів у WFI. Аліквоти кожного розчину додавали до посудини для змішування з одержанням "маточного розчину". У флакони фасували маточний розчин, що містив 3мкг (75 МОд) LH. У разі рекомбінантного LH, показники біологічної активності і питомої активності є постійними, що надає можливість фасування LH за масою, а не за результатами біологічного аналізу. Таблиця 5 Компоненти однодозової рідкої композиції LH Компонент № 1 2 3 Опис RhLH (мкг/флакон) Цукроза (мг/флакон) NaH2PO4H2O (мг/флакон) LH 75 МОд 3,0 52,5 0,052 37 91960 38 Продовження таблиці 5 Компонент № 4 5 6 7 9 Опис Na2HPO4 2Н2О (мг/флакон) Плуронік F68 (мг/флакон) Метіонін (мг/флакон) м-крезол (мг/флакон) WFI Флакони заповнювали і герметично закривали за стерильних умов. Композиція має строк зберігання до двох років. Приклад 5 Рідкі багатодозові композиції рекомбінантного FSH і LH (2:1) дляпідшкірної та внутрішньом'язової ін'єкції Одержали нижченаведені багатодозові композиції FSH і LH з відношенням FSH:LH 2:1. Компоненти 1-8, наведені у Таблиці 6, одержали у вигляді титрованих розчинів у WFI. Аліквоти кожного розчину додавали до посудини для змішування з одержанням "маточного розчину". рН маточного розчину, у разі необхідності, доводили до 8,0 шляхом додання NaOH або НСІ. До капсул фасували маточний розчин, що містив 18,3мкг LH (475 МОд) з 66,7мкг FSH (916 МОд), призначений LH 75 МОд 0,825 0,0125 0,125 0,375 Достатня кількість до 0,5мл для 6 доз зі 150 МОд FSH кожна; 9,2мкг LH (230 МОд) з 33,3мкг FSH (458 МОд), призначений для 3 доз зі 150 МОд FSH кожна; і 6,1мкг LH (152,5 МОд) з 22,23мкг FSH (305 МОд), призначений для 2 доз зі 150 МОд FSH кожна. Капсули заповнювали і герметично закривали за стерильних умов. Багатодозова композиція може зберігатись при температурі приблизно 2-8°С, за варіантом, якому віддають більшу перевагу, при температурі приблизно 4-5°С до двох років до першого застосування. Після першого застосування капсулу слід зберігати при температурі приблизно 2-8°С, за варіантом, якому віддають більшу перевагу, при температурі приблизно 4-5°С впродовж періоду лікування із застосуванням багатодозової композиції, тривалість якого може становити 24год., 2 дні або до 12-14 днів. Таблиця 6 Компоненти багатодозових рідких композицій FSH і LH (2:1) Компонент № 1 2 3 4 Опис RhLH (мкг/капсулу) RhFSH (мкг/капсулу) Цукроза (мг/капсулу) Н3РО4 (мг/капсулу) 5 NaOH (мг/капсулу) 6 7 8 9 плуронік F68 (мг/капсулу) Метіонін (мкг/капсулу) m-крезол (мг/капсулу) РН 10 WFI 6 доз 3 дози 2 дози 18,3 (457 МОд) 9,2 (230 МОд) 6,1 (152,5 МОд) 66,7 (916 МОд) 33,3 (458 МОд) 22,23 (305 МОд) 115,5 57,75 38,5 1,35 0,735 0,49 Достатня кількість Достатня кількість Достатня кількість до рН8,0 до рН8,0 до рH8,0 375,0 187,5 125,0 225 112,5 75,0 4,5 2,25 1,5 8,0 8,0 8,0 Достатня кількість Достатня кількість Достатня кількість до 1,5мл до 0,75мл до 0,5мл Приклад 6 Рідкі багатодозові композиції рекомбінантного FSH і LH (1:1) для підшкірної та внутрішньом'язової ін'єкції Одержали нижченаведені багатодозові композиції FSH і LH з відношенням FSH:LH 1:1. Компоненти 1-8, наведені у Таблиці 6, одержали у вигляді титрованих розчинів у WFI. Аліквоти кожного розчину додавали до посудини для змішування з одержанням "маточного розчину". рН маточного розчину, у разі необхідності, доводили до 8,0 шляхом додання NaOH або НСI. До капсул фасували маточний розчин, що містив 36,6мкг LH (914 МОд) з 66,7мкг FSH (916 МОд), призначений для 6 доз зі 150 МОд FSH кожна; 18,4мкг LH (460 МОд) з 33,3мкг FSH (458 МОд), призначений для 3 доз зі 150 МОд FSH кожна; і 12,2мкг LH (305 МОд) з 22,23мкг FSH (305 МОд), призначений для 2 доз зі 150 МОд FSH кожна. Капсули заповнювали і герметично закривали за стерильних умов. Багатодозова композиція може зберігатись при температурі приблизно 2-8°С, за варіантом, якому віддають більшу перевагу, при температурі приблизно 4-5°С до двох років до першого застосування. Після першого застосування капсулу слід зберігати при температурі приблизно 2-8°С, за варіантом, за варіантом, якому віддають більшу перевагу, при температурі приблизно 4-5°С, впродовж періоду лікування із застосуванням багатодозової композиції, тривалість якого може становити 24год., 2 дні або до 1214 днів. 39 91960 40 Таблиця 7 Компоненти багатодозових рідких композицій FSH і LH (1:1) Компонент № 1 2 3 4 Опис RhLH (мкг/капсулу) RhFSH (мкг/капсулу) Цукроза (мг/капсулу) Н3РО4 (мг/капсулу) 5 NaOH (мг/капсулу) 6 7 8 9 Плуронік F68 (мг/капсулу) Метіонін (мкг/капсулу) Λί-крезол (мг/капсулу) РН 10 WFI 6 доз 3 дози 2 дози 36,6 (914 МОд) 18,4 (460 МОд) 12,2 (305 МОд) 66,7 (916 МОд) 33,3 (458 МОд) 22,23 (305 МОд) 115,5 57,75 38,5 1,35 0,735 0,49 Достатня кількість Достатня кількість Достатня кількість до рН8,0 до рН8,0 до рН8,0 375,0 187,5 125,0 225 112,5 75,0 4,5 2,25 1,5 [8,0 8,0 8,0 Достатня кількість Достатня кількість Достатня кількість до 1,5мл до 0,75мл до 0,5мл Приклад 7 Експерименти з визначення стійкості рідких багатодозових композицій FSH, змішаного з LH 7.1 Аналіз на вміст білка засобами HFLC з оберненою фазою Композицію Прикладу 5 (6 доз) засобами HPLC зоберненою фазою оцінювали на вміст білка як за FSH, так і за LH. Вміст білка (FSH і LH) визначали у час нуль і після 1, 2, 3 і 6 місяців зберігання згаданої композиції при температурі 4°С. Результати подані у Таблиці 8 як мікрограми FSH або LH на грам розчинника. 7.2 Аналіз окиснених альфа-субодиниць Відсоток окиснених альфа-субодиниць у композиції прикладу 5 визначали засобами HPLC з оберненою фазою. Відсоток окиснених альфа-субодиниць визначали у час нуль і після 1, 2, 3 і 6 місяців збереження при температурі 4°С. Результати подані у Таблиці 8. 7.3 In vivo аналіз на FSH Композицію Прикладу 5 (6 доз) випробували на активність FSH із застосуванням біологічного аналізу приросту маси яєчників Стілмена-Полі у час нуль і після1, 2, 3 і 6 місяців зберігання при температурі 4°С. Результати подані у Таблиці 8 у вигляді міжнародних одиниць (IU) на грам розчинника. 7.4 In vivo аналіз на LH Композицію Прикладу 5 (6 доз) випробували на активність LH із застосуванням біологічного аналізу приросту маси сім'яних пухирців пацюків у час нуль і після 1, 2, 3 і 6 місяців зберігання при температурі 4°С. Результати подані у Таблиці 8 у вигляді міжнародних одиниць (IU) на грам розчинника. 7.5 Визначення вмісту вільних субодиниць (rFSH+rLH) Відсоток вільних субодиниць для композиції Прикладу 5 визначали за допомогою електрофорезу у поліакриламідному гелі у присутності додецилсульфату натрію (SDS-PAGE). Визначення здійснювали у час нуль і після 1, 2, 3 і 6 місяців зберігання при температурі 4°С. Результати подані у вигляді відсотка загального білка (rFSH+rLH) і наведені у Таблиці 8. 7.5 Визначення вмісту агрегатів Відсоток агрегатів у композиції Прикладу 5 визначали за допомогою SDS-PAGE, як описано вище для визначення вмісту вільних субодиниць у 7.5, за виключенням того, що агрегати більш високої молекулярної маси визначали як відсоток загального білка (rFSH+rLH). Визначення здійснювали у час нуль і після 1, 2, 3 і 6 місяців зберігання при температурі 4°С. Результати подані у Таблиці 8. 7.6 Видимі частинки Вміст частинок у композиції Прикладу 5 визначали візуально у час нуль і після 3 і 6 місяців зберігання при температурі 4°С. Результати подані у Таблиці 8. 7.7 рН рН композиції Прикладу 5 визначали у час нуль і після 1,2, 3 і 6 місяців зберігання при температурі 4°С. Результати подані у Таблиці 8. Таблиця 8 Аналітичні параметри рідкої композиції FSH і LH (2:1) у час нуль і після збереження при температурі 4°С впродовж 1, 2, 3 і 6 місяців Аналіз Вміст rFSH за даними RP-HPLC (мкг/г) Вміст rLH за даними RP-HPLC (мкг/г) Відсоток окиснених альфасубодиниць Час нуль 1 місяць 2 місяці 3 місяці 6 місяців 46,50 46,98 46,71 46,31 44,98 11,74 11,81 12,68 12,67 13,21 2,29 2,17 2,08 2,48 2,95 41 91960 42 Продовження таблиці 8 Аналіз Час нуль In vivo аналіз на FSH (МОд/г) 566 In vivo аналіз на LH (МОд/г) 331 Визначення вмісту вільних субодиниць засобами SDS-PAGE (rFSH+rLH; %) Визначення вмісту агрегатів засобами SDS-PAGE (rFSH+rLH; %) 5 2 Видимі частинки Немає РН 8,262 Приклад 8 Ліофілізована багатодозова композиція FSH і LH Одержали дві ліофілізовані композиції А і В такого складу Композиція А: FSH LH Цукроза NaH2PO4 H2O Na2HPO4 2H2O Плуронік F68 L-метіонін 32,75мкг(450 МОд) 9,0мкг(225 МОд) 15,0мкг 0,052мкг 0,825мкг 0,05мкг 0,05мкг Композиція В: FSH LH Цукроза NaH2PO4 H2O Na2HPO4 2H2O Плуронік F68 L-метіонін 65,5мкг (900 МОд) 18,0мкг (450 МОд) 30,0мкг 0,104мкг 1,65мкг 0,10мкг 0,10мкг Процес виготовлення полягає у змішуванні лікарської речовини безпосередньо з інгредієнтами, фільтрації одержаного розчину і ліофілізації фільтрату. Опис кожної стадії процесу наведено нижче: - внести до контейнера з визначеною масою WFI, дигідрат вторинного кислого двонатрійфосфату, моногідрат первинного кислого ортофосфату натрію, цукрозу, плуронік F68 (5%), L-метіонін і перемішати впродовж 10хв. до повного розчинення; - перевірити рН і, у разі необхідності, виправити його до рН7,00±0,2 за допомогою 10% NaOH або розбавленого розчину Н3РО4; - до одержаної суміші додати FSH і LH і обережно перемішувати одержаний розчин впродовж 10хв.; - знову перевірити рН і, у разі необхідності, довести його до рН7,00±0,1 за допомогою 10% NaOH або розбавленого розчину Н3РО4; - профільтрувати розчин на 0,22мкм мембрані Durapore зі швидкістю фільтрації не менше за 1 місяць Не визначали Не визначали 2 місяці Не визначали Не визначали Не визначали Не визначали Не визначали Не визначали 8,215 Не визначали Не визначали 8,216 3 місяці Не визначали 6 місяців 578 (23 тижні) 311 286 5 5 (23 тижні) >3 4 Немає Немає 8,188 8,283 15г/см2 у атмосфері азоту під тиском не вище за 1,5атм; - зібрати розчин у попередньо простерелізовану колбу; - заповнити профільтрованим розчином скляний контейнер, закрити пробкою і розмістити заповнені флакони на піддоні з нержавіючої сталі; - завантажити піддони у ліофілізаційну сушарку і ліофілізувати продукт за таким циклом ліофілізації: - врівноважити при температурі 4°С впродовж приблизно 20хв.; - довести температуру полиць до рівня -25°С і підтримувати цю температуру впродовж 2год.; - довести температуру полиць до рівня -15°С і підтримувати цю температуру впродовж 1год.; - довести температуру полиць до рівня -45°С і підтримувати цю температуру впродовж 3год.; - довести температуру конденсатора до рівня 65°С; - вакуумувати камеру; - коли вакуум досягне рівня 7 10-2мбар (7 Па), підвищити температуру полиць до рівня -10°С і підтримувати цю температуру впродовж 14год.; - впродовж 8год. підвищити температуру полиць до рівня +35°С і підтримувати цю температуру до кінця циклу (14год.); - зняти вакуум шляхом заповнення камери сухим азотом; - закрити флакони пробками за допомогою автоматичної системи ліофілізаційної сушарки; - закупорити закриті пробками флакони відповідними відкидними ковпачками; Композиції А і В зберігались при температурі 25±2°С і перевірялись на стійкість і біологічну активність, як вказується нижче. Перед проведенням аналізу композицій, вони відновлюються за допомогою води для ін'єкцій, що містить 0,3% розчин мкрезолу як бактеріостатичний агент. Показники стійкості і біологічної активності визначались таким чином: - in vivo аналіз на FSH: Композицію перевіряли на активність FSH за допомогою біологічного аналізу приросту маси яєчників Стілмена-Полі; - in vivo аналіз на LH: Композицію перевіряли на активність LH за допомогою біологічного аналізу приросту маси сім'яних пухирців пацюків; - аналіз на вміст окиснених альфасубодиниць: Відсоток окиснених альфа 43 91960 44 субодиниць визначали засобами HPLC з оберневипробувань наведено, зокрема, у монографії ною фазою (RP-HPLC); "Menotropin". - визначення вмісту вільних субодиниць У Таблиці 9 узагальнено результати аналітич(rFSH+rLH): Відсоток вільних субодиниць визначаних випробувань композиції А на стійкість та біололи засобами SDS-PAGE; гічну активність. Значення визначали у 4 контро- визначення вмісту агрегатів: Відсоток агрегальних точках: у час нуль, через 1 місяць, 3 місяці і тів визначали засобами SDS-PAGE, як описано 6 місяців зберігання при температурі зберігання вище для визначення вмісту вільних субодиниць; 25±2°С. Біологічні випробування здійснювали за нормами Європейської Фармакопеї. Опис методики Таблиця 9 Випробування Біологічна активність FSH (МОд) Біологічна активність LH (МОд) Відсоток окисненого продукту Відсоток димерів/агрегатів Відсоток вільних субодиниць Час нуль 416 276 1,95