Фармацевтична композиція у вигляді тестостеронового гелю та його застосування при лікуванні гіпогонадизму в чоловіків

1. Фармацевтична композиція водоспиртового гелю, що включає: і. від 1,15 % до 1,8 % тестостерону; іі. від 0,6 % до 1,2 % ізопропілміристату; ііі. від 60 % до 80 % спирту, вибраного з групи, що складається з етанолу і ізопропанолу; іv. кількість загусника, достатню для надання композиції в'язкості понад 9000 сантипуазів; і v. воду, в якій процентний вміст ( % ) є відношенням ваги компонентів до ваги водоспиртового гелю. 2. Композиція за п. 1, яка відрізняється тим, що дана композиція містить від 67,0 % до 74,0 % спирту, вибраного з групи, що складається з етанолу і ізопропанолу. 3. Композиція за п. 1 або 2, яка відрізняється тим, що дана композиція містить від 1,50 % до 1,70 % тестостерону. 4. Композиція за п 3, яка відрізняється тим, що дана композиція містить близько 1,62 % тестостерону. 5. Композиція за п. 1 або 2, яка відрізняється тим, що дана композиція містить від 1,15 % до 1,25 % тестостерону. 6. Композиція за п. 5, яка відрізняється тим, що дана композиція містить близько 1,22 % тестостерону. 2 (19) 1 3 87627 крові пацієнта від 298 до 1043 нг тестостерону на 1 дл сироватки. 18. Спосіб за п. 17, який відрізняється тим, що лікуванню піддають пацієнта, який перед початком лікування має концентрацію сироваткового тестостерона менше 300 нг/дл. 19. Спосіб за п. 17 або 18, який відрізняється тим, що терапевтично ефективну дозу композиції наносять на шкіру пацієнта щодня. 20. Спосіб за п. 19, який відрізняється тим, що терапевтично ефективну дозу наносять щодня один раз, двічі або три рази на день протягом принаймні близько 7 днів. За даним винаходом витребовується пріоритет, відповідний до пріоритету тимчасової патентної заявки США №60/725,276, поданої 12 жовтня 2005, зміст якої повністю включений до даної заявки методом посилання. Тестостерон, основний циркулюючий андроген в чоловіків, синтезований з холестеролу. Більш ніж 95% з 6-7мг тестостерону, що виробляється щодня, виділяється, приблизно, 500 мільйонами клітин Лейдіга в яєчках. Для розвитку і підтримки тестикулярной функції і негативного регулювання створення тестостерону необхідна наявність двох гормонів, що виробляються гіпофізом, а саме, лютеїнізуючого гормону ("LH") і фолікулостимулюючого гормону ("FSH"). У тілі людини циркулюючий тестостерон перетворюється у всілякі 17кетостероїди двома різними метаболічними шляхами. Тестостерон може перетворюватися в дигідротестостерон ("DHT") під дією ферменту 5аредактази або в естрадіол ("Е2") під впливом ферментного комплексу ароматози. В крові циркулює тестостерон, що на 98% зв'язаний з протеїном. В чоловіків майже 40% зв'язків складають зв'язки з вьісокоафінним гормонозв'язувальним статевим глобуліном ("SHBG"). Інші 60% слабо зв'язані з альбуміном. При цьому ряд вимірювань тестостерону отримано з клінічних лабораторій. Термін "вільний" тестостерон в контексті даного опису означає фракцію тестостерону в крові, яка не зв'язана з протеїном. Термін "загальний тестостерон" або "тестостерон" в даному контексті означає кількість, складену з вільного тестостерону і тестостерону, зв'язаного з протеїном. Термін "біодоступний тестостерон" в контексті даного опису означає не-SHBG-зв'язаний тестостерон і включає тестостерон, слабо зв'язаний з альбуміном. Наведена нижче таблиця, що підготовлена UCLA-Harbor Medical Center, підводить підсумок дослідження концентрації гормонів в організмі нормального дорослого чоловіка: Таблиця 1 Рівні гормонів в організмі нормального чоловіка Гормон Тестостерон Нормальний діапазон від 298 до 1043нг/дл (ng/dL) 4 21. Застосування тестостерону для приготування композиції за будь-яким з пп. 1-14 для лікування гіпогонадизму в чоловіків. 22. Застосування за п. 21, яке відрізняється тим, що перед початком лікування пацієнт має концентрацію сироваткового тестостерону менше 300 нг/дл. 23. Застосування за п. 21 або 22, яке відрізняється тим, що терапевтично ефективна доза композиції наноситься пацієнту щодня. 24. Застосування за п. 23, яке відрізняється тим, що терапевтично ефективну дозу наносять щодня один раз, двічі або три рази на день протягом принаймні близько 7 днів. Вільний тестостерон DHT Відношення DHT/T DHT+T SHBG FSH LH Е2 від 3,5 до 17,9нг/дл (ng/dL) від 31 до 193нг/дл (ng/dL) від 0,052 до 0,33 від 372 до 1349нг/дл (ng/dL) від 10,8 до 46,6нмоль/л (nmol/L) від 1,0 до 6,9мл а.е.м./мл (mlU/mL) від 1,0 до 8,1мл а.е.м./мл (mlU/mL) від 17,1 до 46,1пг/мл (pg/mL) Виходячи з публікацій, спостерігаються значні розбіжності в тривалості часу на півжиття тестостерону, діапазон якого знаходиться в межах від 10 до 100 хвилин. Проте, дослідники, дійсно, згодні з тим, що в нормального молодого чоловіка спостерігаються добові коливання тестостерону. Максимальні рівні досягаються, приблизно, з 6.00 до 8.00 ранку, при цьому покажчики рівнів відхиляються від максимальних значень протягом дня. Максимальний рівень тестостерону для характеристичних профілів складає 720нг/дл, а мінімальний - 430нг/дл. Проте фізіологічне значення даного добового циклу, якщо він існує, на даному етапі досліджень не з'ясоване. Чоловічий гіпогонадизм є результатом різних патофізіологічних станів, при яких концентрація тестостерону опускається нижче за нормальний рівень. Гіпогонадальний стан іноді пов'язаний з цілою низкою фізіологічних змін, наприклад, із зниженням інтересу до сексу, імпотенцією, зниженням м'язової маси тіла (виснаженням), зниженням густини кісток, депресією і занепадом сил. Дослідники, в основному, підрозділяють гіпогонадизм на три типи. Перший тип гіпогонадизму включає тестикулярні порушення через природжену або придбану анорхію, синдром XYY, характерні особливості осіб чоловічої статі XX, синдром Нунан, гонадальний дисгенезис, пухлини клітин Лейдіга, порушення процесу опускання яєчок, варикозного розширення вен сім'яного канатика, синдром Sertoli-Cell-Only, крипторхидизм, білатеральний перекрут, синдром блукаючих яєчок (втрачають здатність функціонувати), орхіектомію, синдром Клайнфелтера-РейнфенштейнаОлбрайта, хіміотерапію, токсичне пошкодження 5 алкоголем або важкими металами, загальні захворювання (ниркову недостатність, цироз печінки, діабет, міотоничну дистрофію). Пацієнти з першим типом гіпогонадизму проявляють інтактний механізм зворотного зв'язку, при якому низькі концентрації сироваткового тестостерону асоціюються з високими концентраціями FSH і LH. Проте через тестикулярну або іншу недостатність, високі концентрації LH виявляються нездібними ефективно стимулювати відтворювання тестостерону. Другий тип гіпогонадизму припускає дефіцит ідиопатичного гонадотропіну або LH-виділяючого (секретуючого) гормону. Даний тип гіпогонадизму включає синдром Колмана, синдром ПрадераЛабхарта-Віллі, синдром Лоренса-Муна-Бідля, недостатність гіпофізу/аденоми, синдром Паськуаліні, гемохроматоз, гіперпролактинемію або гіпофіз-гіпоталамічне ослабіння унаслідок пухлини, травми, радіації або ожиріння. Оскільки пацієнти з другим типом гіпогонадизму не проявляють інтакного метаболічного шляху зворотного зв'язку, знижені концентрації тестостерону не асоціюються з підвищеними рівнями LH або FSH. Таким чином, хоча дані чоловіки і мають низькі рівні сироваткового тестостерону, але їх гонадотропіни знаходяться в нормі, наближаючись до нижньої межі. Гіпогонадизм, ймовірно, залежить від віку. Чоловік зазнає повільного, але неухильного зниження вмісту середньої кількості тестостерону у віці, приблизно від 20 до 30 років. За підрахунками дослідників, дане зниження складає 1-2% в рік. Дослідження, що стосуються різних вікових груп чоловіків, показали, що середнє значення кількості тестостерону у віці 80 років складає приблизно 75% від тієї кількості, яка спостерігалася в 30 років. Оскільки в чоловіків сироваткова концентрація SHBG з віком збільшується, зниження біологічно активного і вільного тестостерону відбувається навіть інтенсивніше, ніж зниження загального тестостерону. Дослідники підрахували, що, приблизно, 50% здорових чоловіків у віці від 50 до 70 років мають рівні біологічно активного тестостерону нижчі за нормальну нижню межу. Більш того, циркадний ритм концентрації тестостерону з віком у чоловіків знижується, затухає або повністю зникає. Проблема старіння, головним чином, пов'язана з функціонуванням гіпоталамічно-гіпофізного апарату. Так, наприклад, дослідники встановили, що з віком рівні LH не підвищуються, не дивлячись на низькі рівні тестостерону. Незалежно від причини, такий непіддатний лікуванню дефіцит тестостерону в чоловіків більш старшого віку може привести до різних фізіологічних змін, включаючи порушення статевої функції, зниження лібідо, втрату м'язової маси, зниження густини кісток, депресію, зниження розумових здібностей. Неминучим результатом всього цього є виникнення геріатричного гіпогонадизму або, іншими словами, "чоловічої менопаузи". В даний час гіпогонадизм є найбільш поширеною гормонною недостатністю в чоловіків, що вражає 5 чоловік на кожну тисячу. Підраховано, що тільки п'ять відсотків з обстежених від чотирьох до п'яти мільйонів американських чоловіків всіх віків, уражених гіпогонадизмом, одержують тера 87627 6 пію, що забезпечує адекватну заміну тестостерону, якого бракує. Винахід відноситься до поліпшеної трансдермальної композиції водоспиртового тестостеронового гелю, який, крім всього іншого, забезпечує заданий фармакокінетичний гормонний профіль, і до способів її використовування. На Фіг.1 показана стандартизована схема Pareto, що демонструє дію тестових показників тестостерону, ізопропілміристату і етилового спирту на співвідношення "змінна реакції-в’язкість". На Фіг.2 показана стандартизована схема Pareto, що демонструє дію тестових показників тестостерону, ізопропілміристату і етилового спирту на відсоток просочування наклейки. На Фіг.3 показана стандартизована схема Pareto, що демонструє дію тестових показників тестостерону, ізопропілміристату і етилового спирту на коефіцієнт CAR (Ratio CAR). На Фіг.4 дана схема дослідженої поверхні реакції, яка ілюструє досліджене співвідношення (коефіцієнт CAR) для даної комбінації тестостеронк і ізопропілміристату для вмісту спирту (95% ν/ν (об'єм/об'єм)), що становить 74,3 вагових відсотків (wt%). На Фіг.5 показана контурна схема, що представляє контури схеми дослідженої поверхні реакції на Фіг.4. На Фіг.6 показаний графік, що представляє накопичену кількість тестостерону, виділеного протягом заданого проміжку часу, відносно різних тестостеронових композицій (від F57 до F59), порівняно з еталонною композицією (F56). На Фіг.7 показаний графік, який представляє кумулятивну (сукупну) кількість тестостерону, що просочився протягом заданого проміжку часу, відносно композиції F57. На Фіг.8 показаний графік, який представляє сукупну кількість тестостерону, що просочився протягом заданого проміжку часу, відносно композиції F58. На Фіг.9 показаний графік, який представляє сукупну кількість тестостерону, що просочився протягом заданого проміжку часу, відносно композиції F59. На Фіг.10 показаний графік, який представляє профілі співвідношення "середня концентрація час" для досліджуваного тестостерону в день 1. На Фіг.11 показаний графік, що представляє профілі співвідношення "середня концентрація час" для досліджуваного тестостерону в день 14. Не дивлячись на те, що даний винахід може бути представлений цілим рядом різних прикладів здійснення, в даному описі наведені тільки деякі з них, при цьому слід мати на увазі, що опис цих прикладів є тільки ілюстрацією основних істотних ознак, а об'єм захисту винаходу не обмежується наведеними прикладами. Не дивлячись на те, що в даному документі винахід ілюструється, посилаючись на тестостерон, слід розуміти, що будь-який інший стероїд в синтетичному шляху тестостерону, при необхідності, може повністю або частково використовуватися замість тестостерону в розкриваємих способах, медичних наборах, комбінаціях і композиціях. 7 Даний винахід відноситься до вдосконаленої композиції тестостеронового гелю і способів його використовування. В одному з прикладів здійснення даний винахід направлений на створення способу введення через шкіру тестостерону у складі водоспиртного гелю. Гель включає тестостерон (або похідне тестостерону); один або декілька нижчих спиртів, наприклад етанол або ізопропанол; речовину, що підсилює проникаючу здатність, наприклад, ізопропілміристат; загусник і воду. Крім того, композиція за даним винаходом, як альтернатива, може включати солі, емульгатори, стабілізатори, протимікробні засоби, ароматизатори і смакові добавки, а також пропеланти. Даний винахід включає також медичні набори, способи, комбінації і фармацевтичні композиції для лікування, запобігання (профілактики) виникнення захворювання або хворобливого стану, повернення до первинного здорового стану, припинення або уповільнення розвитку гіпогонадизму або інших хворобливих станів, асоційованих з низьким вмістом тестостерону в особи, у якої симптоми хвороби клінічно виражені, або лікування симптомів, пов'язаних або таких, що відносяться до гіпогонадизму або хворобливого стану, асоційованого з низьким вмістом тестостерону. Пацієнт може вже мати діагноз гіпогонадизму та/або стану, визначуваного низьким вмістом тестостерону у момент прийому, відноситися до групи ризику розвитку гіпогонадизму та/або стану, визначуваного низьким вмістом тестостерону. Даний винахід, переважно, використовується при лікуванні дорослих пацієнтів старших за 18 років. Більш переважно, даний винахід використовується при лікуванні дорослих пацієнтів старших за 21 рік. Термін "похідне" відноситься до сполуки, яку одержують з іншої сполуки подібної структури шляхом заміни або заміщення одного атома, молекули або групи іншим атомом, молекулою або групою. Наприклад, атом водню будь-якої сполуки може замінятися алкілом, ацилом, аміно і іншими елементами для отримання похідного початкової сполуки. В контексті даного винаходу термін «нижчий спирт», окремо або в комбінації, означає спиртову частку з прямим або розгалуженим ланцюгом, що містить від одного, приблизно, до шести атомів вуглецю. В одному з прикладів здійснення нижчий спирт містить від одного до, приблизно, 4 атомів вуглецю і ще в одному прикладі здійснення нижчий спирт містить від одного до, приблизно, 3 атомів вуглецю. Прикладами таких спиртових часток є метанол, етанол, етанол USP (тобто, 95% v/v (об'єм/об'єм)), n-пропанол, ізопропанол, n-бутанол, ізобутанол, сек-бутанол і терт-бутанол. В контексті даного винаходу термін "етанол" відноситься до сполуки за формулою С2Н5ОН. Він може бути використаний у вигляді зневодненого спирту USP (фармакопеї США), спирту USP або у вигляді будь-якої іншої звичайної форми, включаючи комбінацію з різними кількостями води. Композиція використовується у "фармакологічно ефективній кількості". Це означає, що концентрація введеного лікарського засобу повинна бути 87627 8 такою, який забезпечує в композиції належний терапевтичний рівень ліків, що доставляються в тканини протягом всього періоду часу, коли дані ліки повинні бути використані. Специфіка такої доставки залежить від ряду змінних величин, включаючи період часу, протягом якого окрема дозована одиниця повинна бути використана, швидкості витрати ліків з композиції, наприклад, тестостерону з гелю, площі поверхні нанесення гелю і т.п. Наприклад, відносно тестостерону, необхідна кількість тестостерону може бути експериментально визначена, грунтуючись на швидкості витрати тестостерону через гель і через шкіру з використанням підсилювачів процесу і без них. В одному з прикладів здійснення даний винахід направлений на створення способу черезшкірного введення тестостерону у водоспиртовому гелі. Гель включає один або декілька нижчих спиртів, наприклад етанол або ізопропанол; речовину, що підсилює проникаючу здатність, загусник і воду. В одному з прикладів здійснення гель містить попередник аніонного полімерного загусника, нейтралізований речовиною, що виділяє гидроксид, наприклад гидроксид натрію. Крім того, композиція за даним винаходом, як альтернатива, може включати солі, емульгатори, стабілізатори, протимікробні засоби, ароматизатори і смакові добавки, а також пропелланти. Способи і фармацевтичні композиції за даним винаходом включають ізомеричні форми і таутомери описаних сполук і їх фармацевтично прийнятних солей. Наведені приклади фармацевтично прийнятних солей готують з мурашиної, оцтової, пропіонової, янтарної, гліколевої, глюконової, молочної, яблучної, винної, лимонної, аскорбінової, глюкуронової, малеїнової, фумарової, піровиноградної, аспаргінової, глютамінової, бензойної, антранилової, мезилової, стеаринової, саліцилової, р-гідроксибензойної, фенілоцтової, мигдалевої, ембонової (памової), метансульфонової, етансульфонової, бензолсульфонової, пантотенової, толуолсульфонової, 2-гідроксиетансульфонової, сульфанілової, циклогексиламіносульфонової, альгенової, b-гідроксимасляної, галактарової і галактуронової кислоти. Перелік загусників, придатних для використовування даного винаходу, можуть включати нейтралізовані аніонні полімери, наприклад, поліакрилову кислоту. Переважними є карбомерні поліакрилові кислоти, зокрема, такі, що виробляються і продаються на ринку товарів фірмою Noveon Inc. Cleveland, Ohio з торговою маркою Carbopol® (див. інформацію на сайті http://www.noveon.com, включену в даний документ методом посилання). Особливо переважними є Carbopols® Ultrez 10, 940, 941, 954, 980, 981, ETD 2001, EZ-2 і EZ-3. Найбільш переважним є Carbopol® 940 і Carbopol® 980. Перелік інших придатних до використовування аніонних полімерів включає карбоксиполіметилен і карбоксиметилцелюлоза. Придатними до використовування є також інші відомі з рівня техніки полімерні загусники, наприклад, полімерні емульгатори під торговою маркою Pemulen® і полікарбофіли під торговою маркою Noveon®. Додаткові загусники, підсилюва 9 87627 чі і ад'юванти можуть бути знайдені в довіднику США по фармакопеї (Remington's Science and Practice Pharmacy, Meade Publishing Co., United States Pharmacopeia/National Formulary), все перераховане включене в цей документ методом посилання. В одному з прикладів здійснення даного винаходу композиція є гелем, маззю, кремом або шіастиром і складається з тестостерону, підсилювача проникаючої здатності, наприклад, ізопропілміристату; загусника, наприклад, нейтралізованого карбомера, нижчого спирту, наприклад, етанолу або ізопропанолу, і води. В іншому прикладі здійснення винаходу композиція містить попередник аніонного полімерного загусника, наприклад, карбомер, який заздалегідь сполучений з нейтрализатором, в кількості, достатній для формування гелю в процесі формування композиції. Ще в одному прикладі здійснення винаходу композиція містить попередник аніонного полімерного загусника, наприклад, карбомер, заздалегідь сполучений з нейтрализатором, в кількості, достатній для формування гелю з в'язкістю вище за 9000 cps (сантипуазів), виміряній за допомогою віскозиметра Brookfield RV D VII+ зі шпінделем (крутильним пристроєм) рівним RV6, при швидкості обертання, рівній 10об/мин, і підтримуваній температурі 20°С. Ще в одному прикладі здійснення винаходу композиція містить попередник аніонного полімерного загусника, наприклад, карбомер, заздалегідь сполучений з нейтралізатором, вибраним з групи, що включає гідроокис натрію (їдкий натр), гідроокис амонію, гідроокис калію (їдкий калій), аргінін, амінометилпропанол, тетрагідроксипропіл етилендіамін, тієтаноламін ("TEA"), трометамін, PEG-15 10 кокамін, діізопропаноламін і триізопропаноламін або їх комбінації в кількості, достатній для нейтралізації попередника аніонного полімерного загусника, з метою формування гелю в процесі приготування композиції. Придатні для використовування нейтралізуючі речовини і їх застосування з вибраними попередниками аніонних полімерних загусників розкриті компанією Noveon Inc. Cleveland, Ohio, в роботі "Neutralizing Carbopol® and Pemulen® Polymers in Aqueous and Hydroalcoholic Systems ("Нейтралізуючі полімери Carbopol® і Pemulen® у водних і водоспиртних системах")," Commercial Brochure TDS-237 (October 1998), що включена в даний документ методом посилання. Ще в одному прикладі здійснення винаходу композиція містить попередник аніонного полімерного загусника, наприклад, карбомер, заздалегідь сполучений з нейтралізатором, яким є водний розчин гідроокису натрію, наприклад, 0,1N гідроокис натрію, або 1,5N гідроокис натрію, або 2,0N гідроокис натрію, або будь-який інший відповідний сильний водний розчин в кількості, достатній для формування гелю. В одному з прикладів здійснення винаходу композиція була приготована з використовуванням, приблизно, від 1,0% до 10,0% 0,1N гідроокису натрію. Відповідно, можуть бути використані приклади здійснення, в яких застосовується будь-який процентний вміст від 1,0% до 10,0% 0,1NNaOH, наприклад, 1,0%, 2,0%, 3,0%, 4,0%, 5,0%, 6,0%, 7,0%, 8,0%, 9,0% або 10,0% 0,1N NaOH. В одному з прикладів здійснення композиція представлена у вигляді гелю і приготована шляхом з'єднання наступних речовин з наступним зразковим процентним вмістом. Таблиця 2 Інгредієнти, сполучені для отримання тестостеронової композиції (% w/w (вага/вага)) Τ (Тестостерон) 1,20 1,40 1,60 Спирт (95% об'єм/об'єм) 73,5 73,5 73,5 Ізопропіл мірістат 1,00 1,00 1,00 Ще в одному прикладі здійснення композиція містить, приблизно, від 1,22% тестостерону до 1,62% тестостерону, наприклад, близько 1,22% тестостерону, близько 1,42% тестостерону або близько 1,62% тестостерону. Ще в одному прикладі здійснення композиція містить, приблизно, від 1,15% тестостерону до 1,22% (вага/вага) тестостерону. Ще в одному прикладі здійснення композиція містить, приблизно, від 1,30% тестостерону до 1,45% (вага/вага) тестостерону. Ще в одному прикладі здійснення композиція містить, приблизно, від 1,50% тестостерону до 1,70% (вага/вага) тестостерону. В одному з прикладів здійснення композиція містить, приблизно, від 1,15% до 1,8% (вага/вага) тестостерону; від 0,6% до 1,2% (вага/вага) ізопро Карбо пол 980 1,0 1,0 1,0 0,1Ν NaOH Очищена вода 7,00 7,00 7,00 16,3 16,1 15,9 пілміристату; від 60% до 80% (вага/вага) спирту, вибраного з групи, що складається з етанолу і ізопропанолу; достатньої кількості загусника для надання композиції в'язкості понад 9000 cps (сантипуазів); і воду. Ще в одному прикладі здійснення композиція містить, приблизно, від 1,15% до 1,8% (вага/вага) тестостерону; приблизно, від 0,6% до 1,2% (вага/вага) ізопропілміристату; приблизно, від 67% до 74% (вага/вага) спирту, вибраного з групи, що складається з етанолу і ізопропанолу; достатньої кількості загусника для надання композиції надмірної в'язкості 9000 cps (сантипуазів); і воду. Ще в одному прикладі здійснення композиція містить, приблизно, від 1,15% до 1,25% (вага/вага) тестостерону, від 1,30% до 1,45% (вага/вага) тес 11 тостерону або від 1,50% до 1,70% (вага/вага) тестостерону. В одному з прикладів здійснення в'язкість композиції за даним винаходом складає, приблизно, від 13000 cps (сантипуазів) до 33,000 cps (сантипуазів). Відповідно, в'язкість композиції за даним винаходом може скласти будь-яку величину від 13000 cps (сантипуазів) до 33000 cps (сантипуазів), наприклад, 14000, 15000, 16000, 17000, 18000, 19000, 20000, 21000, 22000, 23000, 24000, 25000, 26000, 27000, 28000, 29000, 30000, 31000, 32000 або 33000 cps (сантипуазів). В одному з прикладів здійснення даного винаходу композицію одержують шляхом з'єднання від 1,30% до 1,45% (вага/вага) тестостерону; від 0,6% до 1,4% (вага/вага) ізопропілміристату; приблизно, від 67% до 74% (вага/вага) етанолу; приблизно, від 0,6% до 1,4% (вага/вага) карбомеру; приблизно, від 6,5% до 7,5% (вага/вага) 0,1N NaOH; і додаткову воду. В одному з прикладів здійснення даного винаходу композицію одержують шляхом з'єднання від 1,50% до 1,70% (вага/вага) тестостерону; від 0,6% до 1,4% (вага/вага) ізопропілміристату; приблизно, від 67% до 74% (вага/вага) етанолу; приблизно, від 0,6% до 1,4% (вага/вага) карбомеру; приблизно, від 6,5% до 7,5% (вага/вага) 0,1N NaOH; і додаткову воду. Ще в одному з прикладів здійснення даного винаходу композицію одержують шляхом з'єднання від 1,15% до 1,25% (вага/вага) тестостерону; від 0,6% до 1,4% (вага/вага) ізопропілміристату; приблизно, від 67% до 74% (вага/вага) етанолу; приблизно, від 0,6% до 1,4% (вага/вага) карбомеру; приблизно, від 6,5% до 7,5% (вага/вага) 0,1N NaOH; і додаткову воду. Гель втирається або просто наноситься на ділянку шкіри суб'єкта і висихає. Гель висихає швидко, тобто протягом періоду часу, приблизно, від 30 секунд до 3 хвилин з моменту нанесення на шкіру. Наприклад, гель втирається на верхній зовнішній ділянці шкіри стегна та/або на боку один раз на добу. Після нанесення суб'єкт миє руки. Процедура нанесення гелю призводить до підвищення рівня тестостерону, що має заданий фармакокинетический профіль, і ефективного при лікуванні або профілактиці гіпогонадизму і/або стану, викликаного низьким рівнем тестостерону, або симптомів, асоційованих або таких, що відносяться до гіпогонадизму або стану, викликаному низьким рівнем тестостерону в суб'єкта. При цьому дана композиція успішно використовується при лікуванні ряду хвороб або хворобливих станів. В одному з прикладів даний винахід здійснюється з використанням пакету, що має поліетиленову футеровку, сумісну з компонентами тестостеронового гелю, як буде описано нижче. Пакет може містити одну окрему дозу або множинну дозу. В іншому прикладі здійснення способи і композиції використовуються з застосуванням композиції, яку відбирають з жорсткого, включаючого безліч доз контейнера (наприклад, за допомогою ручного насоса), забезпеченого наповненим ком 87627 12 позицією пакетом з фольги більшого розміру, розташованим усередині контейнера. Такі пакети більших розмірів можуть також мати поліетиленову футеровку, описану вище. В одному з прикладів здійснення мультидозуючий контейнер (з множинним дозуванням) містить вакуумний насос, який включає футеровану поліетиленом упаковку з фольги усередині контейнера (каністри), з вбудованим ручним насосом. В одному з прикладів здійснення упаковка з фольги, футерована поліетиленом, вміщає від 44г до 88г продукту. Ще в одному прикладі здійснення насос може розподіляти (подавати) гель, в цілому, вагою 75г. Ще в одному прикладі здійснення насос перед використовуванням заливають, наприклад, насос повністю три рази заливають методом скидання тиску і вивантажують гель. В одному з прикладів здійснення насос містить достатню кількість продукту для попередньої заливки і заправки деяким числом точних дозувань. Ще в одному з прикладів здійснення кожне скидання тиску (дозована розпиленість) наповненого насоса доставляє 1,25г тестостеронового гелю. В іншому прикладі здійснення доза 3,75г вимагає 3 дозованих розпиленостей насосом (3 скидань тиску в насосі). Доза 5г вимагає 4 дозованих розпиленостей насосом. Доза 7,5г вимагає 6 дозованих розпиленостей насосом. Доза 10г вимагає здійснення 8 дозованих розпиленостей насосом і так далі. Безумовно, кожна дозована розпиленість насосом може доставляти будь-яку кількість тестостеронового гелю, необхідну для введення в організм заданої дози. Розмір упаковки, кількість розподіленого і доставленого об'єму на одне скидання тиску не обмежуються наведеними прикладами здійснення і можуть змінюватися і встановлюватися залежно від особливостей і вимог, продиктованих станом пацієнта. Порівняно з відомими з рівня техніки, способи і композиції за даним винаходом забезпечують вдосконалені підходи до лікування, профілактики, повернення до первинного стану (відновлення), припинення або уповільнення розвитку гіпогонадизму або інших хвороб, асоційованих з низьким рівнем вмісту тестостерону у суб'єкта, наприклад, у чоловіка,. В одному з прикладів здійснення фармацевтична композиція за даним винаходом приймається один раз, двічі або три рази на добу або стільки разів, скільки це необхідно для досягнення заданого терапевтичного результату. В іншому прикладі здійснення композиція за даним винаходом приймається один раз, двічі або три рази на добу кожний другий день. В іншому прикладі здійснення композиція за даним винаходом приймається один раз, двічі або три рази на день щонеділі, кожні два тижні або кожного місяця. В одному з прикладів здійснення терапевтично ефективна доза складає, приблизно, від 1,0г до 10,0г, переважно від 1,25г до 6,25г. Крім того, що даний винахід використовується для лікування людини, воно також успішно застосовується у ветеренарії для лікування ссавців, рептилій, птахів, екзотичних тварин і домашніх тварин, включаючи ссавців, гризунів і інших. В іншому прикладі здійснення ссавці включають при 13 матів, наприклад, людину, мавпу або лемура, коня, собаку свиню або кішку. Ще в одному прикладі здійснення гризуни включають крису, мишу, білку або морську свинку. Після нанесення на шкіру композиція здатна виділяти стероїд з інтенсивністю і тривалістю в часі, при яких в одному з прикладів здійснення винаходу в сироватку крові пацієнта доставляється, щонайменше, близько 10мкг стероїда на добу. В іншому прикладі здійснення даного винаходу після нанесення на шкіру пацієнта композиція здатна виділяти тестостерон з інтенсивністю і тривалістю в часі, при яких концентрація тестостерону в циркулюючій сироватці досягає більше 300нг на 1дл сироватки. В іншому прикладі здійснення даного винаходу після нанесення на шкіру пацієнта композиція здатна виділяти тестостерон з інтенсивністю і тривалістю в часі, при яких концентрація тестостерону в циркулюючій сироватці досягає більше 300нг на 1дл сироватки протягом періоду часу, що починається, приблизно, через 0,5 години і закінчується, приблизно, через 24 годин з моменту нанесення на шкіру. Ще в одному прикладі здійснення даного винаходу після нанесення на шкіру пацієнта композиція здатна виділяти тестостерон з інтенсивністю і тривалістю в часі, при яких концентрація тестостерону в циркулюючій сироватці досягає величини, приблизно, від 298нг тестостерону на 1дл сироватки до 1043нг тестостерону на 1дл сироватки В іншому прикладі здійснення даного винаходу після прийому композиції концентрація сироваткового тестостерону підтримується в межах від 400 до 1050нг тестостерону на 1дл сироватки. В іншому прикладі здійснення даного винаходу після прийому композиції концентрація сироваткового тестостерону підтримується в межах від 200 до 1800нг тестостерону на 1дл сироватки. В іншому прикладі здійснення даного винаходу після прийому композиції отримане значення Сmах складає від 300 до 5000нг/дл. Ще в одному прикладі здійснення винаходу композиція призначена для щоденного введення в організм пацієнта в дозованій кількості, приблизно, від 1,25г до 3,75г, наприклад, з дозуванням близько 1,25г, або, приблизно, 2,50г, або близько 3,75г. Може вводитися будь-яка інша відповідна доза. Ще в одному прикладі здійснення даного винаходу пацієнт, потребуючий лікування, має рівень (попередній початку лікування) сироваткового тестостерону перед першим нанесенням композиції за даним винаходом, приблизно, менш ніж 300нг/дл. В іншому прикладі здійснення даного винаходу після, приблизно, принаймні, 30 днів щоденного прийому композиції за даним винаходом концентрація сироваткового тестостерону в пацієнта складає, принаймні, приблизно, від 300нг/дл до 1050нг/дл, наприклад, від 300нг/дл до 400нг/дл, від 300нг/дл до 500нг/дл, від 500нг/дл до 700нг/дл, від 700нг/дл до 900нг/дл, від 400нг/дл до 500нг/дл, від 500нг/дл до 600нг/дл, від 600нг/дл до 700нг/дл, від 700нг/дл до 800нг/дл, від 800нг/дл до 900нг/дл, від 900нг/дл до 1000нг/дл, від 1000нг/дл до 1100нг/дл, 87627 14 від 400нг/дл до 1050нг/дл, від 500нг/дл до 1050нг/дл, від 600нг/дл до 1050нг/дл до 700нг/дл до 1050нг/дл. Ще в одному прикладі здійснення даного винаходу після щоденного прийому композиції за винаходом концентрація загального тестостерону в пацієнта перевищує 300нг/дл. Ще в одному прикладі здійснення даного винаходу загальна концентрація сироваткового тестостерону в пацієнта складає, приблизно, більше 400нг/дл, 600нг/дл, або більше 700нг/дл. Ще в одному прикладі здійснення загальна концентрація сироваткового тестостерону вимірювалася після 24 годин прийому. Ще в одному прикладі здійснення загальна концентрація сироваткового тестостерону вимірювалася після більше 2 днів щоденного прийому, наприклад, після 10 днів, після 14 днів, після 20 днів або після 30 днів. Ще в одному прикладі здійснення способів, медичних наборів, комбінацій і композицій за даним винаходом композиція за винаходом застосовувалася пацієнтом один раз, двічі або три рази на добу щодня протягом, принаймні, близько 7 днів. Ще в одному прикладі здійснення дана композиція приймалася один раз на добу. Приклад 1: Розробка поліпшеного тестостеронового гелю (гелів) Загальна інформація Для розробки нової композиції тестостеронового гелю проводився цілий ряд досліджень, з метою приготування композиції гелю, що містить різні рівні тестостерону, ізопропілміристату і етилового спирту. Попередні випробування продемонстрували, що в'язкість гелю може бути збільшена при незначному збільшенні концентрації гелеутворюючих і нейтралізуючих речовин. Дослідження дії трьох інгредієнтів, а саме, тестостерону, етилового спирту і ізопропілміристату на в'язкість і на проникання in vitro тестостерону з водоспиртових гелів проводилися на основі статистичної програми. Дослідження проникання in vitro проводилися з використанням дифузійних камер (комірок) Франца . Концентрація тестостерону, присутнього в зразках рецептора, була проаналізована за допомогою устаткування високоефективної рідинної хроматографії (HPLC) або лічильника бета-сцинтиляції (для техніки мічення радіоактивними ізотопами). Грунтуючись на результатах цих досліджень, були приготовані і випробувані методом (HPLC) на проникання через шкіру три оптимізовані композиції. Всі три оптимізовані композиції продемонстрували значне поліпшення показників в'язкості і проникання через шкіру in vitro, порівняно з сучасною композицією, відомою на комерційному ринку (1% тестостероновий гель). Технічна задача Даний винахід є підсумком досліджень, направлених на створення композиції (композицій) тестостеронового гелю) з поліпшеними показниками в'язкості, зниженим об'ємом нанесення на шкіру, поліпшеним in vitro прониканням через шкіру, порівняно з сучасною композицією, відомою на комерційному ринку (1% тестостероновим гелем) і потенційним зниженням об'єму застосування гелю. 15 87627 Процес здійснення а. Статистичний проект Статистичний проект був розроблений (StatGraphics Plus 5.1) для дослідження дії трьох інгредієнтів, а саме, тестостерону, етилового спирту і ізопропілміристату на показники в'язкості і на проникання тестостерону з водоспиртового гелю in vitro. Концентрація двох інших інгредієнтів, Carbopol 980 і розчину гідроокису натрію 0,1N, заРечовина Тестостерон Ізопропілміристат Спирт (95% об’єм/об’єм) лишалася постійною. Були отримані наступні результати: Вид проекту: Чутлива поверхня Найменування проекту: Проект Box-Behnken Число речовин, що беруть участь в експерименті: 3 (всі постійні) Число блоків: 1; кількість дослідів: 15 (неврегульованих) Показник вірогідності помилки: 5 Нижча межа (%) 1,33 0,5 72,5 Наступна таблиця підводить підсумки відносно інгредієнтів випробовуваних композицій, отриманих в результаті реалізації статистичного проекту. Дані композиції були приготовані в кількості 1 кг і 16 Вища межа (%) 2,0 1,0 76,1 упаковані в скляні банки для проведення аналітичних досліджень і досліджень на проникання через шкіру. Таблиця 3 Інгредієнти, сполучені для отримання композицій, що тестуються, і контрольної композиції (% вага/вага) F № (композиція) 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 (контр.) Τ (Тестостерон) 1,665 1,665 1,665 2,000 1,330 1,330 2,000 1,665 1,330 2,000 1,665 2,000 1,665 1,330 1,665 1,000 Спирт (95% Carbopol ізопропілміристат об'єм/об'єм) 980 74,3 0,75 1,0 72,5 0,50 1,0 76,1 0,50 1,0 74,3 0,50 1,0 74,3 0,50 1,0 76,1 0,75 1,0 74,3 1,00 1,0 74,3 0,75 1,0 74,3 1,00 1,0 72,5 0,75 1,0 76,1 1,00 1,0 76,1 0,75 1,0 72,5 1,00 1,0 72,5 0,75 1,0 74,3 0,75 1,0 72,5 0,50 0,9 b. Аналітичні дослідження Всі композиції, що тестуються, і контрольні зразки були проаналізовані щодо фізичних (зовнішній вигляд, показник рН і в'язкість) і хімічних (кількісні аналізи на наявність тестостерону, ізопропілміристату і спирту) характеристик. c. Дослідження проникання через шкіру in vitro Проникання тестостерону досліджувалося з застосуванням методу кількісного аналізу на людській шкірі, поміщеній на дифузійній комірці Франца. Шкіра розміщувалася горизонтально між половиною рецептора і донора. Площа поверхні шкіри, відкрита для дії композиції в камері донора складала 0,64см2, об'єм рецептора склав 5,0мл. Температура 37°С підтримувалася, завдяки наявності кожуха з подвійною циркуляцією води, який оточував нижню частину комірки. Камера донора була відкрита у верхній частині. Спосіб мічення радіоактивними ізотопами. Композиції, що тестуються, знаходили пікові сплески, що виникають завдяки 14С-міченому тес 0,1Ν Очищена NaOH вода 7,00 15,3 7,00 17,3 7,00 13,7 7,00 15,2 7,00 15,9 7,00 13,8 7,00 14,7 7,00 15,3 7,00 15,4 7,00 16,8 7,00 13,2 7,00 13,2 7,00 16,8 7,00 17,4 7,00 15,3 4,75 20,4 тостерону. Пікова (мічена радіоактивним ізотопом) композиція (5-15мг гелю, що містить 0,1250,250mСі (мкКи) гравіметричним способом наносилася на поверхню епідермісу. Зразки з інтервалом 0, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 22 і 24 години відбиралися від комірки (камери) рецептора для вимірювання радіоактивності/кількості лікарської речовини, що проникла через шкіру. Крім того, визначали кількість мічених ізотопів/ліків, що залишилися на шкірі зразків. Подробиці вказаних експериментів і їх результати представлені в опису прикладу 2. Метод високоефективної рідинної хроматографії Композиція (300мг±5%, що містить 3000мкг ліків на основі 1% гелю) гравіметричним способом наносилася на поверхню епідермісу. Періодично (через 0, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 22 і 24 години) збиралися шари, замінювалися свіжим буферним розчином. Після цього шари досліджувалися на вміст тестостерону. Подробиці вказаних експериментів і їх результати представлені в опису прикладу 3. 17 87627 d. Аналіз даних На додаток до даних, представлених в описах відповідних прикладів, дані, отримані в результаті тестування методом мічення радіоактивними ізотопами і методом високоефективної рідинної хроматографії (HPLC), були додатково проаналізовані з використанням статистичної програми (StatGraphics Plus 5.1). Програма StatGraphics була також використана для прогнозування оптима 18 льних рівнів різних речовин, які можуть забезпечити максимальний ефект. Результати досліджень і висновки Аналітичні дані Всі композиції, що тестуються, були прозорі і мали показник рН 5,68-5,82. Вміст тестостерону, ізопропілміристату і спирту наближався до заданого. Наступна таблиця підводить підсумок результатів аналітичних досліджень через 1 місяць зберігання при 40°С/75% - відносної вологості. Таблиця 4 Результати аналітичних досліджень випробовуваних композицій і контрольної композиції* F № (композиція) 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 (контрольний) Зовнішній вигляд Прозорий гель Прозорий гель Прозорий гель Прозорий гель Прозорий гель Прозорий гель Прозорий гель Прозорий гель Прозорий гель Прозорий гель Прозорий гель Прозорий гель Прозорий гель Прозорий гель Прозорий гель рН 5,79 5,76 5,82 5,75 5,76 5,69 5,78 5,79 5,76 5,72 5,82 5,83 5,72 5,69 5,79 5,59 В'язкість, cps (сан- Аналіз на Τ типуази) (%) 23567 1,69 26900 1,66 23000 1,69 26700 2,00 25467 1,32 30233 1,40 24733 2,02 24767 1,66 24300 1,33 26133 2,02 20700 1,75 19733 2,00 26033 1,68 28267 1,34 23567 1,69 22033 1,01 Аналіз на спирт (95% об'єм/об'єм) 73,8 71,8 75,5 74,1 73,7 74,5 73,3 74,3 73,8 71,7 75,4 75,5 71,7 71,9 73,8 72,4 Аналіз на ІРМ (%) 0,67 0,45 0,44 0,44 0,44 0,74 0,92 0,68 0,93 0,68 0,93 0,68 0,95 0,69 0,67 0,44 * результати випробувань через 1 місяць зберігання при 40°С/75% - відносній вологості, Τ = тестостерон, ІРМ = ізопропілміристат Оскільки одною із задач, які вирішують дані дослідження, є підвищення в'язкості гелю, статистичний аналіз (розрахунок) був здійснений для оцінки дії речовин (тестостерону, ізопропілміристату і етилового спирту), що тестуються на змінну чутливості - в'язкість. Отримані наступні підсумкові аналітичні показники: Таблиця 5 ANOVA для дослідження показника в'язкості Аналіз відхилень (варіацій) по в'язкості Джерело А:Т В:ІРМ С:ЕtOН АА АВ АС ВВ ВС СС Загальне відхилення Усього (кор.) Сум. квадр. 9,41613Е6 3,16945Е6 1,94337Е7 1,43962Е6 3,37413Е6 3,50601Е7 1,00605Е6 1,95303Е6 286812,0 Df 1 1 1 1 1 1 1 1 1 Середи, квадр. 9,41613Е6 3,16945Е6 1,94337Е7 1,43962Е6 3,37413Е6 3,50601Е7 1,00605Е6 1,95303Е6 286812,0 4,16608Е7 7 5,95155Е6 1,17733Е8 16 Співвідношення - F 1,58 0,53 3,27 0,24 0,57 5,89 0,17 0,33 0,05 Значення Ρ 0,2488 0,4892 0,6379 0,6379 0,4760 0,0456 0,6933 0,5847 0,8325 19 87627 На Фіг.1 показано схематичне зображення А (графік), що представляє тестостерон, В, що представляє ізопропілміристат, С, що представляє EtOH, a також об'єднання букв, що представляють комбінації речовин. З даного графіка витікає, що комбінація із спирту і тестостерону (тобто, АС) надає значної негативної дії показникові в'язкості. Дане спостереження співпадає з висновками попередніх досліджень; для максимізації показника в'язкості рівень спирту повинен бути доведений до найбільш низької допустимої межі. Дані, що характеризують проникаючу здатність (ліків): Технічні засоби, що забезпечують мічення радіоактивними ізотопами 20 В дослідженні використані зразки шкіри двох донорів. Для зведення до мінімуму різноманітності між зразками шкіри, дані, що характеризують проникаючу здатність, відсоток проникнення мітки (%LP) з композицій, що тестуються, були нормалізовані відповідно до контрольної композиції, що тестується з відповідною шкірою донора. Додатковий статистичний аналіз проводився на процентне співвідношення проникнення мітки (%LP) (тест./контрольн., Ratio %LP) для визначення напрямів розвитку і оптимальних концентрацій тестостерону, ізопропілміристату і етилового спирту. Отримані наступні підсумкові аналітичні показники: Таблиця 6 Таблиця даних, отриманих за допомогою мічених радіоактивних ізотопів, які використані для статистичного аналізу* F № (композиція) 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 (конт роль.) 56 (контроль.) Донор Τ DPM 8127 8127 8127 8127 8300 8300 8300 8300 8300 8300 8300 8300 8300 8300 8300 8127 8300 1,665 1,665 1,665 2,000 1,330 1,330 2,000 1,665 1,330 2,000 1,665 2,000 1,665 1,330 1,665 1,000 1,000 0,75 0,50 0,50 0,50 0,50 0,75 1,00 0,75 1,00 0,75 1,00 0,75 1,00 0,75 0,75 0,50 0,50 Спирт (95%, об'єм/об'єм) 74,3 72,5 76,1 74,3 74,3 76,1 74,3 74,3 74,3 72,5 76,1 76,1 72,5 72,5 74,3 72,5 72,5 %LP Співвідношення %LP 4,86 3,45 2,7 3,8 3,51 6,37 3,57 5,38 9,47 5,69 6,73 2,22 4,61 4,33 4,33 5,87 7,56 0,83 0,59 0,46 0,65 0,46 0,84 0,47 0,71 1,25 0,75 0,89 0,29 0,61 0,57 0,57 1,00 1,00 * %LP дані з прикладу 2. Процентне співвідношення мітки, що проникла (Ratio %LP), підраховано із процентних значень %LP. Т = тестостерон, ІРМ = ізоіфопілміристат, LP = мітка, що проникла Таблиця 7 ANOVA для процентного співвідношення прониклої мітки (Ratio%LP) Аналіз відхилень (варіацій) по в'язкості Джерело А:Т В:ІРМ С:ЕtOН АА АВ АС ВВ ВС СС Загальне відхилення Усього (кор.) Сум. квадр. 0,213314 0,107294 0,00430679 0,119589 0,131132 0,0554353 0,00724917 0,0800686 0,00941549 Df 1 1 1 1 1 1 1 1 1 Середн.квадго 0,213314 0,107294 0,00430679 0,119589 0,131132 0,0554353 0,00724917 0,0800686 0,00941549 0,207716 7 0,0296737 0,947084 16 F-співвідн. 7,19 3,62 0,15 4,03 4,42 1,87 0,24 2,70 0,32 Знач. Ρ 0,0315 0,0990 0,7145 0,0847 0,0736 0,2140 0,6363 0,1445 0,5908 21 87627 Графік Pareto, представлений на Фіг.2, показує, що рівень тестостерону має значний негативний ефект, тоді як рівень ізопропілміристату має позитивний вплив (статистично незначний) на процентний вміст мітки, що проникла. За наслідками проведених досліджень, передбачається, що максимальний рівень тестостерону в композиції гелю повинен бути нижчим за вищий рівень, показаний в згаданих дослідженнях. За наслідками проведених досліджень, також передбачається, що максимальний рівень ізопропілміристату в композиції гелю повинен наближатися до щонайвищого рівня, показаного в даних дослідженнях. Дані, що характеризують проникання: Технічні засоби для здійснення високоефективної рідинної хроматографії (HPLC) 22 В даних дослідженнях було використано декілька зразків шкіри (двох донорів), що пройшли дослідження з використанням мічення радіоактивними ізотопами. Для зведення до мінімуму чинників різноманітності між зразками шкіри дані, що характеризують проникаючу здатність (потік або кумулятивну кількість витікання (CAR) з композицій, що тестуються, були нормалізовані відповідно до контрольної композиції, що тестується з відповідною шкірою донора. Додатковий статистичний аналіз проводився на співвідношення кумулятивної кількості витікання (CAR) (тест./контроль., Ratio CAR) для визначення тенденцій розвитку і оптимальних концентрацій тестостерону, ізопропілміристату і етилового спирту. Отримані наступні підсумкові аналітичні показники: Таблиця 8 Даних, отриманих в результаті високоефективної рідинної хроматографії (HPLC), які використані для статистичного аналізу* F № (композиція) Донор Τ ІРМ 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 (конт роль.) 56 (конт роль.) 8127 8127 8127 8127 8300 8300 8300 8300 8127 8127 8127 8127 8127 8127 8127 8127 8300 1,665 1,665 1,665 2,000 1,330 1,330 2,000 1,665 1,330 2,000 1,665 2,000 1,665 1,330 1,665 1,000 1,000 0,75 0,50 0,50 0,50 0,50 0,75 1,00 0,75 1,00 0,75 1,00 0,75 1,00 0,75 0,75 0,50 0,50 Спирт (95%, об'єм/об'єм 74,3 72,5 76,1 74,3 74,3 76,1 74,3 74,3 74,3 72,5 76,1 76,1 72,5 72,5 74,3 72,5 72,5 CAR 189,81 188,21 50,11 151,95 74,13 117,87 114,61 208,82 298,76 94,71 254,57 113,93 326,46 200,45 240,61 185,71 107,79 Співвідношення CAR 1,02 1,01 0,27 0,82 0,69 1,09 1,06 1,94 1,61 0,51 1,37 0,61 1,76 1,08 1,30 1,00 1,00 • Т = тестостерон, ІРМ = ізопропілміристат, САR = кумулятивна кількість витікання Таблиця 9 ANOVA для процентного співвідношення кумулятивної кількості витікання (Ratio %CAR) Аналіз відхилень (варіацій) по в'язкості Джерело А:Т В:ІРМ СrЕtOН АА АВ АС BB ВС СС Заг. відх. Усього (кор.) Сум. квадр. 0,452519 1,01713 0,18431 0,164241 0,0291287 0,0600202 0,000234383 0,0737582 0,200542 0,968701 3,03859 Df 1 1 1 1 1 1 1 1 1 7 16 Середн.квадр. 0,452519 1,01713 0,18431 0,164241 0,0291287 0,0600202 0,000234383 0,0737582 0,200542 0,138386 F-співвідн. 3,27 7,35 1,33 1,19 0,21 0,43 0,00 0,53 1,45 Знач. Ρ 0,1135 0,0302 0,2864 0,3120 0,6603 0,5312 0,9683 0,4891 0,2678 23 87627 Результати, представлені в таблиці 8 були піддані регресійному аналізу, і був розроблений наступний алгоритм: Співвідношення CAR=5,12390,4403*Т+1,5781*ІРМ-0,0607*ЕtOН де Τ - кількість тестостерону % (вага/вага), ІРМ - кількість ізопропілміристату% (вага/вага), а ЕtOН - кількість (вага/вага) спирту, 95% об'єм/об'єм. В одному з прикладів здійснення даного винаходу значення Т, ІРМ і ЕtOН вибрані з наданого нижче діапазону значень з урахуванням того, що наведений вище алгоритм забезпечує отримання значення співвідношення (коефіцієнту) CAR, що перевищує 1, переважно, більше 1,1, найбільш переважно, більше 2. Передбачені наступні діапазони: від 1,0 до 2,0% (вага/вага) тестостерона, переважно, від 1,15 до 1,8% (вага/вага) тестостерону; від 0,2% до 2,0% (вага/вага) ізопроцілміристату, переважно, від 0,6 до 1,2% (вага/вага) ізопропілміристату; і від 60,0% до 80% (вага/вага) спирту 95% об'єм/об'єм, переважно, від 72,5% до 76,1% (вага/вага) спирту, 95% об'єм/об'єм. Відповідно до графіка Pareto на Фіг.3, статистичний аналіз чітко визначає, що рівень ізопропілміристату надає значну позитивну дію, а рівень тестостерону має негативний (статистично незна 24 чний) вплив на співвідношення (коефіцієнт) CAR. Виходячи з Фіг.3, рекомендований максимальний рівень тестостерона в композиції гелю повинен бути нижчим за щонайвищий рівень, представлений в дослідженнях. За наслідками досліджень, максимальний рівень ізопропілміристату в композиції гелю повинен наближатися до щонайвищого рівня, представленого в дослідженнях. Результати проникання, отримані в результаті методу HPLC, цілком співпадають з результатами, отриманими в результаті використовування способу мічених радіоактивних ізотопів. Оптимізація чутливості (реакції) шкіри Результати дослідження методом високоефективної рідинної хроматографії (HPLC) кількісно співпадають з результатами таких же досліджень методом мічення (введення радіоактивних ізотопів). Для зручності дані, отримані в результаті досліджень методом HPLC, були використані для прогнозування (методом статистичної оптимізації) оптимальних рівнів тестостерону, ізопропілміристату і спирту для заданої чутливості. Статистична програма сформувала наступну комбінацію рівнів речовин, дана комбінація максимізувала співвідношення (коефіцієнт) кумулятивної кількості витікання (співвідношення CAR). Таблиця 10 Оптимізовані рівні речовин для кумулятивної кількості витікання (співвідношення CAR) Задача: максимізувати коефіцієнт CAR (Ratio CAR) Речовина Нижня межа Τ 1,0 ІРМ 0,5 EtOH 72,5 Оптимальне значення = 1,81748 Верхня межа 2,0 1,0 76,1 Фіг.4 і 5 ілюструють виміряну чутливість (Ratio CAR) щодо заданої комбінації тестостерону і ізопропілміристату при рівні 74,3% (вага/вага) спирту, 95%, об'єм/об'єм. Вибір композиції Оптимальне значення 1,28995 1,0 73,7366 Грунтуючись на графіках чутливості поверхонь і прогнозованих оптимальних рівнях речовин, були вибрані наступні три композиції для подальших досліджень проникання. Для зручності вказані три композиції випробовувалися тільки методом HPLC. Таблиця 11 Інгредієнти, призначені для складання вибраних композицій і контрольної композиції (% вага/вага) F № (композиція) 57 58 59 56 (конт роль.) Τ (тестосте- Спирт (95%, рон) об'єм /об'єм) 1,20 73,5 1,40 73,5 1,60 73,5 1,00 72,5 Ізопропілміристат Carbopol 980 0,1Ν NaOH Очищена вода 1,00 1,00 1,00 1,0 1,0 1,0 7,00 7,00 7,00 16,3 16,1 15,9 0,50 0,9 4,75 20,4 Наступна таблиця представляє результати первинних (виконуваних після приготування композиції) аналітичних досліджень вибраних композицій. 25 87627 26 Таблиця 12 Результати аналітичних досліджень вибраних композицій і контрольної композиції F № (композиЗовнішні й вигляд ція) 57 Прозорий гель 58 Прозорий гель 59 Прозорий гель 56 (конт роль) Прозорий гель рН 5,66 5,71 5,68 5,57 В'язкість, cps (сантипуази) 24500 25533 24800 20267 Аналіз на Т(%) 1,21 1,42 1,61 1,02 Аналіз на спирт (95% об'єм/об'єм) 73,1 72,7 73,3 71,8 Аналіз на ІРМ (%) 0,94 0,94 0,94 0,43 Наступна таблиця і Фіг.6 представляють підсумкові дані, що характеризують проникання з трьох вибраних композицій (дані для Фіг.6 і таблиці отримані з прикладу 4, таблиць 17-20). Таблиця 13 Таблиця даних HPLC, використаних для статистичного аналізу* Час (год.) 0 1 2 4 6 8 10 22 24 F56 (1% гель) CAR SD 0 0 0 0 0 0 0,40 0,1 1,52 0,3 6,96 1,5 18,35 3,4 48,20 12,5 50,76 12,3 F57 (1,2% гель) CAR SD 0,0 0 0,5 0,7 1,3 0,5 4,3 1,3 14,2 4,5 38,0 11,5 57,0 17,9 119,2 51,0 129,7 50,4 F58 (1,4% гель) CAR SD 0,0 0,0 0,0 0,0 1,3 1,2 4,0 1,0 11,0 2,7 35,9 11,0 65,4 14,3 129,1 11,8 137,0 13,9 F59 (1,6% гель) CAR SD 0,0 0 0,0 0 0,5 0,3 2,9 1,3 13,8 4,6 43,5 10,8 64,5 10,4 137,5 30,6 156,3 36,4 * Дані, отримані з Прикладу 4, таблиць 17-20 Всі три вибрані композиції продемонстрували значно поліпшені показники проникання (подвоєна або потрійна кумулятивна кількість витікання), порівняно з контрольним показником. Такі результати підтвердили справедливість висновків, отриманих на підставі первинного скринінгу композицій, і сформували основні критерії для остаточного відбору композицій. Висновки Статистична програма була використана для розробки експериментів на основі трьох ключових чинниках (речовин), а саме, на тестостероні, ізопропілміристаті і етиловому спирті. Програма була також використана для аналізу аналітичних даних і даних in vitro, що характеризують проникання композиції через шкіру, а також для визначення тенденцій розвитку і наявності оптимальних рівнів кожної з речовин для максимізації чутливості (інтенсивності проникання композиції через шкіру). Три вибрані композиції тестостеронового гелю мають більш високу в'язкість (приблизно, 4 000 сантипуазів(ср8), ніж контрольна композиція. Три вибрані композиції тестостеронового гелю продемонстрували значне поліпшення інтенсивності проникання in- vitro тестостерону через ділянку людської шкіри, на яку були нанесені композиція (в 2-3 рази в порівнянні з контрольним варіантом). Приклад 2: Дослідження методом мічення радіоактивними ізотопами процесу трансдермальної (черезшкірної) абсорбції in vitro через шкіру люди ни експериментальних композицій тестостеронового гелю Матеріали Композиції були приготовані і поставлені організацією Solvay Pharmaceuticals. Тестостерон (14С) був забезпечений American Radiolabeled Chemicals Inc (St Louis, MO). Решту хімічних речовин і реагентів було поставлено затвердженими постачальниками. Матеріали відрізнялися найвищою якістю і надійною чистотою. Способи Опис апаратури з черезшкірними (трансдермальними) дифузійними комірками (камерами). Використовувана в даному дослідженні апаратура з трансдермальними дифузійними камерами (виробництва PermeGear, Bethlehem, PA) містить до 9 розташованих послідовно дифузійних комірок, при цьому рідкоплинне середовище рецептора перемішується магнітними кульками при швидкості обертання 600об/хвил. Черезшкірна абсорбція in vitro піддавалася кількісному аналізу на шкірі людини, розміщеній на дифузійній комірці Франца. Шкіра розміщувалася горизонтально між половинами рецептора і донора. Площа поверхні шкіри, відкрита для дії композиції, в камері донора складала 0,64см2, об'єм рецептора складав 5,0мл. Відділення рецептора було заповнено сіллю, стабілізованою фосфатом, рН 7,4 (PBS), пропіленгліколем (1:1) і гентаміцинсульфатом (50мг/мл). Кожух (37°С) з подвійною циркуляцією води оточує камеру рецептора для підтримки температури шкі 27 ри на фізіологічному рівні. Камера донора була відкрита навколишньому середовищу для забезпечення доступу лабораторного повітря до поверхні шкіри. Відносна вологість (RH) зони проведення експерименту (навкруги пристрою з дифузійними комірками) регулювалася для кожного експерименту окремо в діапазоні від 35 до 45% для всіх експериментів. Дослідження інтенсивності проникання (композиції) в шкіру Зразок людської шкіри товщиною до 0,3мм (щільна ділянка) виділявся за допомогою дерматома з банку шкіри (US Tissue and Cell (Банк тканин і клітин США), Salt Lake City, Utah), відокремленої від трупів. Шкіра відбиралася протягом 8 годин з моменту смерті донора і заморожувалася в 10% (вага/об'єм) гліцеролі в нормальному сольовому розчині. Шкіра зберігалася при -80°С аж до моменту використовування. В експериментах використовували шкіру двох різних донорів. Кожний експеримент проводили з кожною окремою композицією, принаймні, 6 разів, використовуючи шкіру одного окремого донора. Дані про проникання композиції через шкіру порівнювалися з даними про проникання 1% гелю, відомого на ринку збуту товарів (в 6 повтореннях) і випробуваного на шкірі того ж самого донора, на якому була випробувана композиція, що перевіряється, а всі дані були нормалізовані з урахуванням еталонної (відомій на ринку збуту) композиції. 3 цією метою використовували тестостерон, мічений радіоактивними ізотопами (14С, специфічна активність 50-60мКі/ммол (mCi/mmol). Даний продукт поставляється Американською службою хімічних речовин, мічених радіоактивними ізотопами (American Radiolabeled Chemicals) і характеризується 99,5% чистотою, що підтверджено результатами HPLC. Радіоактивні гелі були приготовані для нанесення від 0,125 до 0,250мкКі (mСі) у мінімальній кількості геля, який розповсюджується на 0,64см2 дифузійній площі комірки Франца (Franz) (0,64см2). Мінімальна кількість склала, принаймні, від 5,0 до 15,0мг. Відповідну кількість радіоактивного тестостерону (12,5мκΚі (mСі) на 125мкл етанолу) випаровували в колбі з круглим дном до тих пір, доки розчинник повністю не осушувався. В колбу додавали 500мг охолодженої композиції гелю, перемішували протягом 5 хвилин, давали можливість збалансуватися протягом періоду часу від 12 до 16 годин. Потім композицію гелю перемішували протягом 30 хвилин для отримання гомогенної композиції гелю. Рівномірність радіоактивності композиції визначали підрахунком рівнів дев'яти (9) точно зважених (приблизно, 5мг) зразків (стандартів). Заморожену шкіру відтавали до кімнатної температури, витримуючи шкіру при температурі навколишнього середовища протягом періоду часу від 30 до 45 хвилин. Після цього її обполіскували водою для видалення гліцеролу. Потім шкіру поміщали в PBS (солі, стабілізованій фосфатом), рН 7,4, і акуратно струшували у вібраторі (100об/хв.) протягом 20хв. для видалення слідів гліцеролу. Промиту шкіру утримували на комірках, приблизно, протягом 30 хвилин перед нанесенням компо 87627 28 зицій. Композицію (від 5 до 15мг) наносили на поверхню епідермісу гравіметричним способом, використовуючи шприц (для кожного визначення витрачалася кількість гелю, достатня для покриття поверхні, що тестується, і визначали вагу гелю, витраченого для покриття). Періодично зразки витягували з комірки рецептора для вимірювання кількості ліків, перенесених через шкіру (через 1, 2, 4, 6, 8, 10, 22 і 24 години). Промивка: Наприкінці випробувань (через 24 години) залишок ліків видаляли з поверхні шкіри, промиваючи її 200мкл різних розчинників відповідно до наступного протоколу: 1-а промивка: спиртовий Cetavlon™ (10/90 об'єм/об'єм) 2-а промивка: вода 3-а промивка: спиртовий Cetavlon™ (10/90 об'єм/об'єм) 4-а промивка: вода 5-а промивка: вода. Після цього оброблена зона витиралася паличкою з ватним тампоном на кінці (Qнаконечником). Промивальні матеріали, ватний тампон і донорська комірка поміщалися в 20мл етанолу для виведення всієї радіоактивності в етанол. Оброблена зона була зібрана дерматоном. Для аналізу латеральної дифузії латеральні ділянки шкіри збиралися і досліджувалися на показник радіоактивності, з метою складання масового балансу експериментів. Шкіра на ділянці активної дифузії, а також латеральна шкіра подрібнювалася на дрібні фрагменти спеціальними гострими ножицями (Sigma), піддавалася переробці для усунення радіоактивності за допомогою 3мл Soluene 350™ (PACKARD) протягом 12 годин. Радіоактивність, що міститься в зразках, отриманих відповідно до раніше описаної методики, вимірювалася у всій повноті зразків або в зважених аліквотах, використовуючи сцинтиляційний рідинній бета-лічильник, оснащений відповідним програмним забезпеченням Проводилася оцінка стандартних зразків (0,5мл/5мл picofluor40™), рецепторного середовища (1,0мл/10мл Picofluor 40™) і точно зваженої аліквоти етанолового розчину, що містить миючі розчинники (0,5мл/5мл Picofluor 40™). Після переробки до епідермісу і дермісу додавали 15мл Hionic Fluor 30™ (PACKARD). Рахунок імпульсів радіоактивного фону автоматично віднімався з інтинсивності рахунку для кожного зразка в кількості рахунків в хвилину (dpm (число розпадів в хвилину)). Аналіз даних: Результати виражалися кількісно або у вигляді процентного вмісту використаного тестостерону, знайденого в різних комірках. Введені кількості тестостерону визначалися з рівнів підрахунків розбавлених еталонів. Кожний результат представляє собою середнє значення шести експериментальних детермінацій і асоційований із стандартною погрішністю середнього значення. 1. Кількість тестостерону і процентний вміст (%) поглиненої дози в середовищі рецептора для кожного моменту часу розраховувалися по наступному рівнянню: 29 87627 %=(Qt/Qi)×100 де Qt є поглиненою кількістю при значенні часу t, a Qi є нанесеною кількістю при значенні часу 0 2. Загальна кількість і відповідний процентний вміст поглиненої дози є функцією часу (кумулятивні значення) 3. Середнє значення потоку тестостерону, що проник в організм, розраховувалося як тангенс кута нахилу (кутовий коефіцієнт) лінійної ділянки графіка залежності Q - час і мало вид мкКі/см2/час (mСі/сm2/h) 4. Визначалися кількість і процентний вміст введеної дози, які були знайдені в шкірі і в промивальних розчинниках. Справедливість тестування перевірялася урівноваженням радіоактивності, знайденої в різних зразках (для кожного тестування підсумкове значення повинне знаходитися в діапазоні від 90% до 110% від введеної дози). Результати і підведення підсумків Таблиця 14 показує, що композиції F45, F47, F52, F53, F54 і F55 вводять набагато меншу кількість тестостерону, ніж F56 (Р0,05). Проте, F49 відрізняється більшим прониканням, ніж F56, але відмінності між цими двома композиціями були статистично незначними (Р>0,05). Дані про рівновагу мас указують на мінливість рівнів утримування наявності тестостерону в шкірі. Крім того, вказані дані також демонструють, що загальна рівновага мас складає від 90% до 110% від початкової кількості введеного 14С тестостерону (Таблиця 14). 30 Хоча потік композицій F41, F42, 46, F49 і F50 і є вищим порівняно з F56, відмінності між ними статистично незначні (Р>0,05). Потоки решти композицій також виявилися нижчими за контрольні, при цьому відмінності між композиціями відносно F56 були статистично незначними, за винятком F45 (Р>0,05). Виходячи з результатів даного дослідження, ясно, що інтенсивність і обширність проникання тестостерону крізь шкіру людини для всіх композицій, що тестуються, були нижчими (або однаковими, в окремих випадках), ніж в посилальній (еталонній) композиції, і жодна з композицій, що тестуються, не продемонструвала інтенсивності проникання, яка виявилася б в значній мірі більш високою, ніж інтенсивність проникання еталонної композиції (F56). Обмеженнями для досліджень потоку було наступне: дослідження, що проводяться, були засновані на кінцевих кінетичних характеристиках дози, при яких обмежуючим інтенсивність моментом була кількість використаного гелю. Завдяки використовуванню принципу кінцевої (граничної) дози, був досягнутий нелінійний профіль проникання для більшості композицій, відносно яких виникала проблема з розрахунком потоку в стаціонарному (стабільному) стані. Проте, були використані 2-10 годинні моменти часу для розрахунку значень потоку, що є швидше припущенням лінійної прогресії, що характеризує потік, а не віддзеркаленням дійсності. Насправді ж, стабільного стану в приведених експериментах досягнуто не було. Отже, значення AUC (розрахунку атомних одиниць) є більш репрезентативними для порівняння композицій, ніж значення, що характеризують потік. Таблиця 14 Дослідження рівноваги мас ДОНОР 8127 F41 Середнє, значення % у промивочн. середовищі % у зоні латеральної кожі % у центр зоні шкіри % проникання % в цілому ДОНОР 8300 F43 Середнє, значення SD F44 Середнє, SD значення F56 Середнє, значення SD 72,84 19,88 82,63 12,27 95,46 08,71 92,22 03,68 92,01 13,45 01,15 02,14 00,27 00,18 00,31 00,41 00,36 00,29 00,59 00,40 10,57 04,86 89,42 04,50 01,53 06,38 03,45 92,73 05,27 00,43 04,18 02,70 102,65 01,14 00,70 05,80 03,80 102,18 02,28 02,05 03,52 05,87 101,99 02,39 05,05 F45 Середнє, значення % у промивочн. середовищі % у зоні латеральної шкіри % у центр зоні шкіри % проникання % в цілому SD F42 Середнє, SD значення SD F46 Середнє, SD значення F47 Середнє, SD значення F48 Середнє, SD значення F56 Середнє, SD значення 95,41 05,29 86,91 03,16 87,98 13,59 79,68 07,41 86,08 03,67 00,24 00,14 00,42 00,17 00,14 00,08 00,25 00,10 00,21 00,09 04,09 03,51 103,25 02, 05 01,65 04,67 06,37 98,37 01,84 03,98 02,29 03,57 93,98 00,84 01,25 04,88 05,38 90,19 02,76 03,81 04,07 07,56 97,92 01,59 01,78 31 87627 32 ДОНОР 8300 F49 Середнє, SD значення % у промивочн. середовищі % у зоні латеральної шкіри % у центр зоні шкіри % проникання % в цілому ДОНОР 8300 F51 Середнє, SD значення F52 Середнє, SD значення F56 Середнє, SD значення 79,64 05,61 88,34 02,30 91,04 08,28 95,51 04,07 86,08 03,67 00,41 00,24 00,29 00,25 00,54 00,59 00,23 00,21 00,21 00,09 08,29 09,47 97,82 02,69 02,14 05,70 05,69 100,01 02,12 01,72 06,58 06,73 104,89 01,92 02,28 02,67 02,22 100,67 00,84 00,40 04,07 07,56 97,92 01,59 01,78 F53 Середнє, значення % у промивочн. середовищі % у зоні латеральної шкіри % у центр зоні шкіри % проникання % в цілому F50 Середнє, SD значення SD F54 Середнє, значення SD F55 Середнє, значення SD F56 Середнє, значення SD 85,33 04,58 87,39 04,37 90,02 02,64 86,08 03,67 00,20 00,08 00,35 00,33 00,09 00,05 00,21 00,09 09,14 04,61 99,28 02,93 00,62 05,88 04,33 97,953 7 03,69 00,68 04,37 04,33 98,81 03,29 00,68 04,07 07,56 97,92 01,59 01,78 Приклад 3: Дослідження методом високоефективної рідинної хроматографії (HPLC) трансдерманої (черезшкірної) абсорбції експериментальних композицій тестостеронового гелю крізь людську шкіру in vitro. Методи Людська шкіра: Заморожена людська шкіра поставлялася банком клітин і тканин США (U.S. Tissue and Cell (Cincinnati, OH). Шкіра відправлялася на сухому льоду і відразу після отримання зберігалася при -80°С аж до використовування. Середня товщина відсіченої шкіри складала 540мкм. Кожний експеримент проводився з шістьма (n=6) повтореннями і з використанням одного і того ж донора для кожної окремої композиції. Крім того, кожний донор тестувався на проникання 1% гелю, існуючого на ринку збуту (F56), з трьома повтореннями, причому всі дані приводилися у відповідність з даним вимірюванням. Композиції: Композиції були приготовані і поставлені Solvay Pharmaceuticals. Композиції були скритними, за винятком контрольної композиції/формули продукту, відомого на ринку збуту (F56). Дослідження способу введення продукту в організм: Черезшкірне поглинання in vitro досліджувалося по кількісному методу на людській шкірі, поміщеній на дифузійній комірці (камері) Франца (Franz). Шкіра розміщувалася горизонтально між половинами рецептора і донора. Площа поверхні шкіри, відкрита для дії композиції в камері донора складала 0,64см2, об'єм рецептора складав 5,0мл. Температура підтримувалася на рівні 37°С, завдяки використовуванню оболонки з подвійною циркуляцією води, оточуючої нижню частину комірки. Це забезпечувало підтримку температури шкіри на фізіологічному рівні. Камера донора була відкрита у верхній частині. Відділення рецептора було заповнено плинним середовищем рецептора, що складається з солі, стабілізованої фосфатом (PBS), рН 7,4, і пропіленгліколем (1:1). Шкіру розміщували на комірках, приблизно, за 30 хвилин до нанесення композицій. Композиція (300мг±5%, що включають 3000мкг ліків на 1% основі гелю) наносилася на поверхню епідермісу гравіметричним способом. Зразки об'ємом 0,3мл періодично відбиралися (через 0, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 22 і 24 години) і замінювалися свіжим буферним розчином. Дослідження: Зразки досліджувалися на вміст тестостерону, використовуючи метод високоефективної рідинної хроматографії (HPLC). Дослідження проводилися на наступних режимах: Мобільна фаза: ацетонітрил:вода (50:50) Колонка: С18, 3мк, 150мм Phenomenex (Nucleosil) Об'єм уприскування: 30мкл Витрата: 1мл/хв. Виявлення UV: 239нм Результати Відповідно до таблиці 15, результати були надані у вигляді кумулятивних кількостей прониклого в організм тестостерону, залежно від різної тривалості періоду проникання для різних композицій. Таблиця демонструє кумулятивну кількість проникання щодо контрольного зразка/формули продукту, відомого на ринку збуту і використаного для одного і того ж донора людської шкіри. Середній показник, що характеризує потік проник тестостерону, розраховувався із співвідношення кутового коефіцієнта лінійної ділянки, що характеризує CAR (кумулятивну кількість витікання) і даних кривої часу і може бути представлений як мкг/см2/год. Результати були виражені у вигляді співвідношення потоків досліджуваної композиції і контрольної композиції (досліджувана композиція/контрольна композиція). Кумулятивна кількість ліків, що проникли в організм через шкіру на одному квадратному сантиметрі шкіри, порівнювалася також з подібними показниками композиції, відомої на ринку збуту, і була представлена у вигляді співвідно 33 87627 шення (досліджувана композиція/контрольна композиція). Таким чином, кожна композиція порівнювалася з композицією, існуючою на ринку збуту, щодо її кумулятивного проникання і величин, що характеризують потік, а результати порівняльного аналізу заносилися в таблицю 15. Порівняння кожної досліджуваної композиції з композицією ринкового продукту проводилося для визначення статистичної значущості, використовуючи ANOVA. Середні показники відмінності при р300нг/дл) вже після нанесення одиночної дози в день 1-й. Консистентні рівні тестостерону спостерігалися в більшості 24-годинних профілів залежності "концентрація-час" після множинного дозування 1,62% тестостеронового гелю. Виняток становить нанесення D, 5,00г, при якому через 6 годин після нанесення дози композиції спостерігався значний пік. Таке збільшення в середньому профілі спостерігалося через результати одного пацієнта, який продемонстрував концентрацію тестостерону 4980нг/дл через 6 годин після нанесення дози. У відповідності з Фіг.11, середні профілі на день 14-й демонструють концентрації тестостерону, які залишаються вищими за нижчу межу еугонадального діапазону (>300нг/дл) протягом 24годинного інтервалу в дозуванні для всіх п'яти доз. Зростання проникнення тестостерону спостерігалося при збільшенні дози на величину в діапазоні від 1,25г до 6,25г, за винятком другого піку в процедурі D нанесення композиції, 5,00р. Фармакокінетичні результати тестостерону В таблиці 26 показані фармакокінетичні результати тестостерону для досліджуваного тестостерону і тестостерону, відкоригованого по нульовій лінії, після того, як пацієнти отримали одиночну дозу 1,62% тестостеронового гелю в день 1-й. 45 87627 46 Таблиця 26 Фармакокінетичні параметри одиночної дози 1,62% тестостеронового гелю в день 1-й Доза Середнє арифметичне (SD) Лікувальна Доза тестостегелю Отримано в результаті спостеВідкориговано по нульогрупа рону (мг) N N (г) реження вій лінії А 1,25 20,3 11 7376 (1465) 11 1934 (1005) AUC (0в 2,50 40,5 11 9112 (3354) 9 3168 (1845) 24) С 3,75 60,8 11 8719 (2831) 10 3330 (1875) (нг*год/дл) D 5,00 81 12 11933 (3188) 12 5329 (3296) Ε 6,25 101,3 11 11137 (3024) 11 5573 (2602) А 1,25 20,3 11 307 (61) 11 81 (42) В 2,50 40,5 11 380 (140) 9 132 (77) Ссередн С 3,75 60,8 11 363 (118) 10 139 (78) (нг/дл) D 5,00 81 12 497 (133) 12 222 (137) Ε 6,25 101,3 11 464 (265) 11 232 (108) А 1,25 20,3 11 387 (80) 11 159 (57) В 2,50 40,5 11 479 (161) 9 234 (102) Смакс С 3,75 60,8 11 533 (211) 10 305 (178) (нг/дл) D 5,00 81 12 698 (231) 12 424 (200) Ε 6,25 101,3 11 657 (215) 11 424 (210) А 1,25 20,3 11 12 (4-24) 11 12 (4-24) В 2,50 40,5 11 12 (4-24) 9 16 (8-24). Еn-[а] С 3,75 60,8 11 16 (8-24) 10 16 (8-24). (год.) D 5,00 81 12 12 (2-24) 12 12 (6-24) Ε 6,25 101,3 11 12 (8-24) 11 12 (8-24) Параметр [а] середнє значення (діапазон) Спостережуване середнє значення Ссередн в день 1-й знаходилося в діапазоні еугонадальних значень 300-1000нг/дл для всіх рівнів дозування. Середні значення AUC і Середи, в основному, зросли в діапазоні дозування до значень дози від 1,25г до 6,25г при таких же значеннях для лікувальних груп В і С та лікувальних груп D і Е, відповідно. Середнє Смакс зростало при дозах від 1,25г до 5,00г, а потім знижувалося. Середнє Тмакс для всіх груп, за винятком 5,00г, складало 12 годин і знаходилося в діапазоні від 2 до 24 годин. Спостережувані значення Смакс в день 1-й для 1,25г, 2,50г і 3,75г залишалися нижче за верхню межу еугонадального діапазону (