Спосіб отримання культури клітин стромально-васкулярної фракції жирової тканини котів

Реферат: Спосіб отримання культури клітин стромально-васкулярної фракції жирової тканини котів, при якому отримують в асептичних умовах пунктат жирової тканини, подрібнюють її на шматочки та дезагрегують у колагеназі. Фрагменти жирової тканини піддають дезагрегації у суміші ферментів колагенази у концентрації 1 мг/мл та гіалуронідази у концентрації 10 мг/мл з додаванням 4 % бичачого сироваткового альбуміну. Фрагменти центрифугують при 200 g протягом 10 хв. Надосадову рідину видаляють, осад переносять до культурального посуду. Додають необхідну кількість поживного середовища та культивують методом експланту . UA 118933 U (12) UA 118933 U UA 118933 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Корисна модель належить до галузей ветеринарної медицини та біотехнології. Відомий аналог [Protocol 23.12. Primary culture of adipose cells /Culture of animal cells. A manual of basic technique // Edited by R.Ian. Freshney John Wiley 2005. - 642 p.], у якому отриманий в асептичних умовах пунктат жирової тканини подрібнюють на шматочки розміром 13 3 мм та дезагрегують колагеназою у концентрації 20 мг/мл протягом 1 год. при температурі 37 °C, після чого додають буфер у співвідношенні 1:10, підігрітий до температури 37 °C, та ресуспендують. Далі клітини осаджують центрифугуванням, а надосадову рідину видаляють. Процедуру повторюють тричі, після чого клітини ресуспендують у культуральному середовищі. Недоліком даного способу є значне пошкодження клітин високою концентрацією ферменту. В результаті спостерігається масова загибель клітин під час дезагрегації тканини, а також під час їх культивування. Задачею корисної моделі є вдосконалення способу прижиттєвого отримання культури клітин стромально-васкулярної фракції жирової тканини котів, який може бути використаний для напрацювання біологічного матеріалу з метою подальшого його застосування. Поставлена корисною моделлю задача вирішується тим, що у способі отримання культури клітин стромально-васкулярної фракції жирової тканини котів, у який входить отримання в асептичних умовах пунктату жирової тканини, подрібнення її на шматочки, згідно з запропонованим рішенням, фрагменти піддають дезагрегації у суміші ферментів колагенази у концентрації 1 мг/мл та гіалуронідази у концентрації 10 мг/мл з додаванням 4 % бичачого сироваткового альбуміну, після чого фрагменти центрифугують при 200 g протягом 10 хв, надосадову рідину видаляють, осад переносять до культурального посуду, додають необхідну кількість поживного середовища та культивують методом експланту без дезагрегації на окремі клітини. Запропонований спосіб дає змогу зменшити негативний вплив на клітини високої концентрації колагенази, а завдяки використанню низьких концентрацій суміші ферментів та бичачого сироваткового альбуміну - зменшити вплив ферментів на клітинну стінку, зруйнувати міжклітинні контакти у тканині та активізувати клітини до поділу. 3 Спосіб здійснюється наступним чином. Фрагменти жирової тканини розміром 1-3 мм вносять у стерильну пробірку, заливають розчином колагенази у концентрації 1 мг/мл та гіалуронідази у концентрації 10 мг/мл, розбавлених до потрібної концентрації фосфатнобуферним розчином, з додаванням 4 % бичачого сироваткового альбуміну (співвідношення об'єму тканини та ферментів - 1:10) та витримують протягом 1 год. при температурі 37 °C. Після ферментативної обробки фрагменти жирової тканини центрифугують при 200 g протягом 10 хв, надосадову рідину видаляють, осад переносять до культурального посуду та додають необхідну кількість поживного середовища. Технічним рішенням пропонованої новизни є те, що за допомогою способу отримання культури клітин стромально-васкулярної фракції жирової тканини котів вдається зменшити негативний вплив на клітини високої концентрації колагенази, а завдяки використанню низьких концентрацій суміші ферментів та бичачого сироваткового альбуміну - зменшити вплив ферментів на клітинну стінку, зруйнувати міжклітинні контакти у тканині та активізувати клітини до поділу. Крім того, культивування фрагментів жирової тканини, які піддали обробці сумішшю колагенази та гіалуронідази, методом експланту підвищує проліферативну активність клітин стромально-васкулярної фракції, що здешевлює та значно прискорює процедуру їх отримання. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ Спосіб отримання культури клітин стромально-васкулярної фракції жирової тканини котів, у який входить отримання в асептичних умовах пунктату жирової тканини, подрібнення її на шматочки, дезагрегація у колагеназі, який відрізняється тим, що фрагменти жирової тканини піддають дезагрегації у суміші ферментів колагенази у концентрації 1 мг/мл та гіалуронідази у концентрації 10 мг/мл з додаванням 4 % бичачого сироваткового альбуміну, після чого фрагменти центрифугують при 200 g протягом 10 хв, надосадову рідину видаляють, осад переносять до культурального посуду, додають необхідну кількість поживного середовища та культивують методом експланту без дезагрегації на окремі клітини. 55 Комп’ютерна верстка А. Крижанівський Міністерство економічного розвитку і торгівлі України, вул. М. Грушевського, 12/2, м. Київ, 01008, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 1