Спосіб впливу на staphylococcus aureus (атсс 25923) in vitro

Спосіб впливу на Staphylococcus aureus (ATCC 25923) з використанням методу фотодинамічної антисептики, який відрізняється тим, що використовують поєднаний вплив антисептика 0,04% розчину діамантового зеленого та некогерентного світлодіодного випромінювання λ 0,650,68 мкм, у безперервному режимі, нерухомому положенні випромінювача, розташованого безпосередньо над поверхнею, що опромінюється, щільністю потужності 9,4 Дж/см2, експозицією 10 хвилин. (19) (21) u200507233 (22) 20.07.2005 (24) 16.01.2006 (46) 16.01.2006, Бюл. № 1, 2006 р. (72) Ромаєв Сергій Миколайович, Свириденко Людмила Юріївна, Коваль Євеліна Юріївна, Михайлусов Ростислав Миколайович, Загоруйко Юрій Анатолійович, Коваленко Назар Олегович, Колоколова Ольга Борисівна, Верезуб Людмила Григоріївна (73) ХАРКІВСЬКА МЕДИЧНА АКАДЕМІЯ ПІСЛЯДИПЛОМНОЇ ОСВІТИ 3 12009 4 характер, та обмежується зоною випромінювання, методів дослідження в клініко-діагностичних лабоне має протипоказань. раторіях: 0 - відсутність росту; І - дуже убогий зріст Поставлена задача вирішується в способі (до 10КУО); II - убогий зріст (10-25КУО); III - помірвпливу на Staphylococcus aureus (ATCC 25923) in ний зріст (безліч полічених колоній, не більш vitro шляхом фотодинамічної антисептики, згідно з 50КУО); IV - рясний зріст (суцільний ріст неполічекорисною моделлю, використовують поєднаний них колоній). вплив антисептика - 0,04% розчину діамантового В другій серії експерименту вивчався вплив зеленого та некогерентного світлодіодного випрочервоного світлодіодного випромінювання на ростові властивості S.Aureus. Для забезпечення рівмінювання 0,65-0,68мкм, у безперервному режиномірного розподілу потоку випромінювання і змемі, нерухомому положенні випромінювача, розтаншення втрат світлової енергії в суспензії шованого безпосередньо над поверхнею, що мікроорганізмів, що опромінюється, була викорисопромінюється, щільністю потужності 9,4Дж/см2, тана модифікована лабораторна чашка, з ізольоекспозицією 10 хвилин. ваними ємностями, зі світлонепроникливого матеЗапропонований спосіб впливу забезпечує баріалу. ктерицидний ефект на Staphylococcus aureus У третій серії експериментів вивчали поєднану (ATCC 25923) з використанням світлодіодного видію барвника і випромінювання. Для цього по запромінювання та антисептикакінченні експозиції суспензії мікроорганізмів з відфотосенсибілізатора, що має власне забарвлення, повідними концентраціями барвника проводили та широко використовується в медичній практиці, не володіє мутагенною дією. опромінення червоними світлодіодами 0,65Спосіб має ряд важливих переваг перед тра0,68мкм у безупинному режимі, нерухомому полодиційними способами антибактеріальної терапії женні випромінювача безпосередньо над поверхчерез те, що ефективність фотодинамічного вплинею, що опромінюється, щільністю потужності ву не залежить від спектра чутливості патогенних 9,4Дж/см2, експозицією 10 хвилин. мікроорганізмів до антибіотиків, не веде до резисПо закінченні опромінення 0,8ml суспензії витентності даного впливу. Не має системної дії сівали на жовточно-сольовий агар, та проводили зона впливу строго обмежується областю опроміінкубацію при t°+37°С, 24 години з метою вивчення нення. Однаково ефективний при гострій і хронічростових властивостей мікроорганізмів. ній патології. Результати представлені в таблицях 1, 2, 3. Як об'єкт дослідження використовували музейний штам Staphylococcus aureus (ATCC 25923), Таблиця 1 отриманий з колекції мікроорганізмів НДІ ім. Мечникова АМН України, який має значну плазмокоаКонтроль барвника гулюючу та лецитіназну активність. Експерименти проводили на 24-годинній культурі цього штаму, Концентрація барвника (%) Експощо була зрощена на жовточно-сольовому агарі Контроль зиція (для обліку лецитіназної активності мікроорганізбез барвни- 1 0,2 0,04 0,02 0,01 (мін) мів). Безпосередньо перед експериментом з вирока слої на щільному середовищі культури готували 15 IV(л+) II(л+) III(л+) III(л+) IV(л+) V(л+) суспензію в концентрації 1*106м.т./мл у 1%-м цук30 IV(л+) 0 II(л+) III(л+) IV(л+) V(л+) ровому бульйоні. Концентрацію мікробної суспензії 45 IV(л+) 0 0 II(л+) IV(л+) V(л+) визначали за допомогою фотоелектрокалоримет60 IV(л+) 0 0 0 IV(л+) V(л+) ра (КФК-2) у 10-мм кюветах при довжині хвилі 24 годиIV(л+) 0 0 0 IV(л+) V(л+) 540нм. ни Перша серія експериментів була присвячена вивченню впливу антисептика, що має власне фаЗ таблиці 1 видно, що при експозиціях 15-30 рбування на ростові властивості S. Aureus у різних хвилин у всіх випадках спостерігається зріст мікконцентраціях, при різній експозиції. З вихідного рофлори. 1% водяного розчину барвника одержували 0,2%; 0,04%; і 0,01% розчини шляхом розведення вихідТаблиця 2 ного розчину цукровим бульйоном. Потім до 2,8мл розчину барвника відповідної концентрації додаКонтроль випромінювання вали 0,2мл суспензії мікроорганізмів. Час експозиції в умовах термостата (t°+37°С) Доза випромінювання (Дж/см2) складало: 15хв., 30хв., 60хв. і 24 години. По витіКонтроль канню відповідного часу інкубації з барвниками 0,1 0,5 4,6 9,2 без барвника 1,0мол суспензії висівали на щільне живильне (сеСтупінь редовище жовточно-сольовий агар) і розташовузросту S. IV(л+) IV(л+) IV(л+) IV(л+) IV(л+) вали в термостат на 24 години для вивчення росAureus тових властивостей мікроорганізму. Ступінь росту оцінювали шляхом підрахунку вирослих колоній У всіх випадках спостерігається максимальна S.Aureus і виражали в ступені (0, І, II, III, IV) колоступінь зросту мікрофлори незалежно від дози ній утворюючих одиниць (КУО) відповідно до Мевипромінювання (таблиця 2). тодичних указівок по застосуванню уніфікованих 5 12009 6 Таблиця 3 Спільний вплив антисептика, фотосенсибілізатора і світлодіодного випромінювання Експозиція (сек) 14,43 72,13 300 600 Доза випроміню-вання 0,1 0,5 4,6 9,2 (Дж/см2) Концентрація 1 0,2 0,04 0,01 1 0,2 0,04 0,01 1 0,2 0,04 0,01 1 0,2 0,04 0,01 барвника (%) Ступінь зросту IV(л+) IV(л+) IV(л+) IV(л+) II(л+) II(л+) ІІІ(л+) III(л+) 0 0 II(л+) III(л+) 0 0 0 II(л+) S. Aureus При спільному впливі антисептика, фотосенсибілізатора і світлодіодного випромінювання протягом 5 хвилин спостерігається відсутність росту мікрофлори, при концентрації барвника 0,2%, 1%. При експозиції 10 хвилин спостерігається відсутність росту при концентрації барвника від 0,04%1,0% розчину (таблиця 3). Комп’ютерна верстка В. Мацело Таким чином, запропонований спосіб впливу на Staphylococcus aureus (ATCC 25923) дозволяє досягти бактерицидної дії при комбінованому впливі антисептика-фотосенсибілізатору діамантового зеленого та світлодіодного випромінювання червоного спектру. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601