Спосіб оцінки функціонального стану слизової оболонки матки

Спосіб оцінки функціонального стану слизової оболонки матки, що включає відбір матеріалу, приготування та фіксацію препаратів, виснаження 3 13258 4 людини, інкубують 1 годину. Ділянки зв'язування Спосіб оцінки здійснюють наступним чином: моноклональних антитіл з відповідними антигена1. Матеріал для дослідження одержують шлями лімфоцитів виявляли за допомогою овідинхом біопсії ендометрію (кюреткою № 1 по передній біотинового набору (Extra-2 Mouse ExtrAvidin стінці матки), транспортують в фізіологічному розPeroxidase Staining Kit, "Sigma"), міченого пероксичині (20-30 хвилин після забору), занурюють в кардазою хріну. Пероксидазу виявляли за допомогою боксиметил-целюлозі та заморожують в рідкому 0,025% розчину діамінобензидину ("Sigma") в азоті. З біоптатів виготовляють на кріостаті зрізи 50,03% розчині перекису водню в ЗФР. Ядра клітин 7мкм, наносять на адгезивні скельця, висушують і дофарбовували 1% розчином малахітового зелефіксують в льодяному ацетоні. ного в дистильованій воді. Відсотковий вміст лім2. Виснажують ендогенну пероксидазу 0,3% фоцитів, що дали позитивну реакцію на пероксирозчином перекису водню 10 хвилин. дазу, підраховували під світовим мікроскопом при 3. Зрізи обробляють первинними моноклональними антитіла до мембраних маркерів імуноцизбільшенні 7 90 під маслянистою імерсією. тів: CD3, CD4, CD8, CD20, HLA-DR, інкубують 1 Однак відомий спосіб має низку недоліків, які годину при t+37°C. знижують ступінь його ефективності, а саме: 4. Тричі по 5 хв. промивають скельця забуфе1. Лімфоцити цервікального слизу дають нереним фізрочином (ЗФР). достатнє уявлення про стан внутрішньоепітеліа5. Наносять на зрізи вторинні антитіла - козячі льних лімфоцитів - основних представників імуноантитіла до мишачих імуноглобулінів, мічені перологічного апарату тканини шийки матки, бо ксидазою хріна ("Сорбент", Росія) (ПАПпотрапляючи в порожнину цервікального каналу, комплексом), або кон'юговані з біотином (Nova вони тривалий час (18 годин) знаходяться під Castra, United Kingdom), інкубують 1 год. при впливом патогенної мікрофлори, ферментів, що t+37°C і знову відмивають ЗФР. призводить до зміни антигенних детермінант іму6. Наносять третичні антитіла ноцитів. ExtraAvidinperoxydase кон'югат (Nova Castra, 2. Недостатня інформативність щодо розтаUnited Kingdom), інкубують 30 хв., відмивають у шування імунокомпетентних клітин в шарах шийЗФР. кового епітелію, внаслідок відсутності гістологічно7. Візуалізують реакцію антиген-антитіло за го контролю, а також передбачає досить допомогою проявочної суміші з аміноетілкарбазоускладнену оцінку кількості імунокомпетентних ном, або диамінобензидином, яку готують ех клітин у слизу. tempore, наносять на зрізи на 10 хв., а потім зми3. Запропонований для виснаження ендогенвають, зануривши в дистильовану воду. ної пероксидази висококонцентрований 10% роз8. Проводиться дозабарвлення препаратів гечин перекису водню призводить до руйнування матоксиліном Майора, що дозволяє оцінити співантигенної детермінанти вивчаємих клітин. відношення виявлених імуноцитів до гістологічної 4. Не взято до уваги визначення CD20+, HLA+ будови слизової оболонки. DR -клітин, що разом з CD4+, CD8+ являються ос9. Ідентифікують клітини, що позитивно прореновними представниками імунологічного апарату агували, оцінюють їх кількість, локалізацію, солослизових оболонок [Дранник Г.Н. Клиническая калізацію і особливості будови, інші характеристииммунология и алергологія. - Одеса: "Астроки. Принт" - 1999. - 603с.]. Приклад 1. В основу корисної моделі поставлено задачу Дослідження проводилося для слизової оборозробити спосіб оцінки функціонального стану лонки матки (ендометрію) у клінічно здорових жіслизової оболонки матки, шляхом удосконалення нок, інфікованих збудниками ІПСШ (хламідії, міковідомого, за допомогою визначення кількості та плазми, уреаплазми, ВПГ II типу), за допомогою розташування в тканині основних імунокомпетентнепрямого біотин-екстравідин-пероксидазного мених клітин (Т-лімфоцитів, В-лімфоцитів, дендриттоду. В якості первинних антитіл використовували них клітин), досягти підвищення інформативності моноклональні мишачі антитіла до CD3, CD4, CD8, та забезпечити підвищення ступеню його ефектиCD20, HLA-DR. Друга реакція полягала у зв'язувності. ванні первинних моноклональних антитіл антитіПоставлену задачу вирішують створенням лами, міченими біотином. Екстравідин використоспособу оцінки функціонального стану слизової вувався у якості третього шару і виявляв оболонки матки, що включає відбір матеріалу, біотинильовану мітку. Візуалізація реакції провоприготування та фіксацію препаратів, виснаження дилася за допомогою діамінобензидину солянокиендогенної пероксидази, обробку препаратів антислого. Отримані результати виявили значну актитілами до маркерів імунокомпетентних клітин, їх вацію всіх ланок (антигенпрезентуючої, індукторної візуалізацію та оцінку, який, згідно винаходу, відріта ефекторної) місцевого клітинного імунітету. зняється тим, що відбір матеріалу виконують шляПриклад 2. хом біопсії ендометрію, препарати виготовляють Проведено дослідження слизової оболонки на кріостаті, виснаження ендогенної пероксидази матки у жінок-носіїв ВМК через 3 місяці викориспроводять 0,3% розчином перекису водню, як антання непрямим імуноферментним методом. В титіло використовують моноклональні антитіла до якості первинних моноклональних антитіл викориCD3, CD4, CD8 та додатково CD20, HLA-DR-клітин стовували моноклональні мишачі антитіла. Другим а оцінку проводять шляхом з'ясування взаєморозшаром служили антитіла кози до IgG миші, мічені ташування імуноцитів та підрахунком їх числа по пероксидазою хріна (anti IgG-HRP). Візуалізацію відношенню до епітеліоцитів (на 100 епітеліоципроводили за допомогою 3-аміно-9-етилкарбазола тів). 5 13258 6 (Nova Castra, United Kingdom). Продукт реакції мав ознаки місцевого імунодефіциту з пригніченням червоне забарвлення. Виявлено активацію антирегуляторно-хелперної (CD4) та ефекторної (CD8) генпрезентуючої (HLA-DR) та регуляторноланок місцевого клітинного імунітету. хелперної (CD4) ланок місцевого клітинного імуніПредставлені результати досліджень, проветету. дених запропонованим способом, дозволяють Приклад 3. зробити висновок, що він забезпечує високу інфоДосліджували біоптат ендометрію у жінокрмативність аналізу функціонального стану слизоносіїв ВМК, інфікованих збудниками ІПСШ, без вої оболонки на глибокому структурному рівні. клінічних проявів запального процесу за допомоВикористання запропонованого способу оцінки гою пероксидаза-антипероксидазного методу. В функціонального стану слизової оболонки матки якості первинних моноклональних антитіл викоридозволить своєчасно діагностувати патологічні стовували кролячі моноклональні антитіла. Другий прояви стану слизової оболонки матки і обрати шар формували немічені антитіла кози до кроляадекватну терапію. чого IgG. Третій шар складався з комплексу кроЗа допомогою запропонованого способу оцінки лячих антитіл до пероксидази, зв'язаних з перокфункціонального стану слизової оболонки матки сидазою (ПАП-комплекс). реакцію візуалізували за було обстежено 63 пацієнтки. Спостереження за допомогою 3-аміно-9-етилкарбазола (Nova Castra, ними, протягом двох років, дає підставу зробити United Kingdom). В місцях зв'язування антигену висновок про його високу інформативність та ефеспостерігалося червоне забарвлення. Виявлено ктивність. Комп’ютерна верстка Г. Паяльніков Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601