Застосування біотестування для оцінки біологічної активності лектинів та лектиновмісних екстрактів

Застосування біотестування на паростках крес-салату для оцінки біологічної активності лектинів та лектиновмісних екстрактів. (19) (21) u200507653 (22) 01.08.2005 (24) 17.04.2006 (46) 17.04.2006, Бюл. № 4, 2006 р. (72) Поспєлова Ганна Дмитрівна, Поспєлов Сергій Вікторович 3 13551 4 довжини 1-3мм, по 20-25 штук розміщують в чашці Хімічно чисті лектини квасолі (виробництво Петрі з досліджуваними розчинами або екстрактафірми «Reanal»), сочевиці та гороху (виробництва ми. Кількість їх десятикратного розведення визнаНВК «Лектинотест», м.Львів) розчиняють в фізіочається схемою досліду. Паралельно закладають логічному розчині і проводять серію їх розведень. контрольну чашку Петрі з дистильованою водою. Потім в чашки Петрі з пророслим насінням кресНа наступну добу вимірюють довжину корінців в салату додають по 5мл кожної концентрації лектидосліді і контролі, вираховують середнє, і резульнів і через добу вимірюють довжину корінців. Контати досліду виражають у відсотках до приросту троль - фізіологічний розчин. За традиційним спокоренів контрольних проростків. Про біологічну собом розчини оцінюють за інтенсивністю реакції активність лектинів або екстрактів судять за стигемаглютинації з еритроцитами людини 1 (0) групи мулюванням або інгібуванням тест-системи. крові. Результати наведені у таблиці 1. Приклад 1. Таблиця 1 Оцінка біологічної активності хімічно чистих лектинів 1% Лектини Квасолі За традиційним способом (титр) За пропонованим способом Сочевиця За традиційним способом (титр) За пропонованим способом Горох За традиційним способом (титр) За пропонованим способом 0,1% Концентрація лектинів (в %) 0,01% 0,001% 0,0001% 0,00001% 1:256 1:256 1:256 1:128 1:128 1:64 0,0 -56,6 +1,0 +23,0 -4,7 -4,7 -15,0 -19,0 1:256 1:256 1:128 1:64 1:64 0,0 0,0 -9,0 -11,0 -19,0 +4,0 +11,0 +16,0 +20,2 1:256 1:256 1:128 1:64 1:32 0,0 0,0 -18,4 +0,4 +12,8 +2,6 +7,9 +21,0 +27,2 Дані таблиці 1 свідчать про те, що при оцінці за рекомендованим способом можна не тільки судити про високу ступінь біологічної активності лектинів, але й виявити, в яких концентраціях спостерігається ефект пригнічення (лектин квасолі - 1%, 0,01-0,000001%; лектин сочевиця - 10,01%; лектин гороху - 1%), а в яких спостерігається стимулюючий вплив (лектин квасолі -0,10,01%; лектин сочевиці - 0,001-0,000001%; лектин гороху - 0,1-0,000001%). Це надзвичайно важливо під час вивчення фізіологічного впливу лектинів на процеси росту і розвитку рослин. Під час оцінки традиційним способом біологічна активність при більших розведеннях не фіксується, також неможливо зробити висновок про характер направленості активності. Все це свідчить про більш високу достовірність пропонованого способу. Приклад 2. Суху подрібнену сировину звіробою звичай 0,000001% ного (Hypericum perforatum) екстрагують фізіологічним розчином в співвідношенні 1:10. Через 2 години нативний екстракт фільтрують і визначають його біологічну активність в серії розведень. За традиційним способом розчини лектинів оцінюють за інтенсивністю реакції гемаглютинації з еритроцитами людини 1(0) групи крові. Результати наведені в таблиці 2. Під час оцінки традиційним способом активність лектинів в нативному екстракті не реєструвалася, починаючи з 0,1%-ної концентрації. В цей же час при оцінці за рекомендованим способом можна зробити висновок, що нативний екстракт має істотну інгібуючу активність (-100 -32,6%) в усьому досліджуваному діапазоні. Отже, використання пропонованого способу дозволяє характеризувати направленість фізіологічної дії речовин, які містяться в екстракті на тест-систему. Таблиця 2 Оцінка біологічної активності лектинвмісних екстрактів Об'єкти експерименту Звіробій звичайний За традиційним способом (титр) За пропонованим способом Цмин пісковий За традиційним способом (титр) За пропонованим способом 10% 1% 0,1% 0,01% 0,001% 0,0001% 1:256 -100 1:64 -91,0 0,0 -68,4 0,0 -60,0 0,0 -72,6 0,0 -32,6 1:64 -100 1:8 -73,2 1:2 +22,3 0,0 +24,8 0,0 +29,2 0,0 +56,1 5 13551 Приклад 3. Суха подрібнена речовина цмину піскового (Helichrysum arenarium) екстрагується фізіологічним розчином в співвідношенні 1:10. Через 2 години нативний екстракт фільтрують і визначають його біологічну активність в серії розведень. Паралельно з цим проводять оцінку біологічної активності за допомогою реакції гемаглютинації. Результати наведені в таблиці 2. З отриманих даних можна зробити висновок, Комп’ютерна верстка В. Мацело 6 що біологічна активність нативного екстракту цмину піскового висока, і в концентраціях 10% 1% проявляє інгібуючу дію, а при розведенні 0,1% -0,0001% - стимулює тест-систему. Під час оцінки традиційним способом активність лектинів реєструється тільки до 0,1%-ної концентрації, що підтверджує більш високу достовірність пропонованого способу. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601