Спосіб моделювання гострого абсцесу легень

Спосіб моделювання гострого абсцесу легень, що включає безпосереднє введення в тканину 3 Відомим аналогам, у тому числі і прототипу, характерні вагомі недоліки: 1. низька ефективність відтворення ГАЛ (50-65%), така частота відтворення гострого абсцесу легень не дозволяє використовувати модель-прототип для обробки нових схем лікування; 2. замале приближения до реального перебігу гострих абсцесів легень, у реальних умовах гострий абсцес легень ніколи не закінчується самоодужанням; 3. не враховано вплив фактору переохолодження на резистентність організму. Таким чином, враховуючи усе вище вказане, в основу корисної моделі покладено задачу: підвищення точності та ефективності моделювання гостро абсцесу легень. Задачу вирішують тим, що у відомому способі моделювання ГАЛ, що включає у себе безпосереднє введення у тканину легені тварини шляхом ін'єкції у проекції V-VI міжребер'я інфекційного агенту, з наступним виведенням тварини з експерименту, згідно корисної моделі, тварину попередньо охолоджують при температурі +4 градуси за Цельсієм в умовах підвищеної до 75% вологості повітря. Позитивний ефект моделі, що заявляється, полягає у тому, що вона дозволяє приблизити експериментальне інфікування до реальних умов виникнення (відтворена гіпотермія та підвищена вологість повітря) та перебігу захворювання, виключає вплив штучних агентів запалення, дає вірогідну клінічну картину захворювання та достатньо проста у відтворенні. Етапи моделювання. Експериментальну тварину охолоджують при температурі +4 градуси за Цельсієм в умовах підвищеної до 75% вологості повітря протягом 30 хвилин. Вводять безпосередньо в тканину легені тварини шляхом ін'єкції у проекції V-VI міжребер'я інфекційний агент. Виводять тварину з експерименту. Ефективність моделі, що заявляється, підтверджена експериментально. Моделювання виконують таким чином: Беруть морських свинок вагою 450-500гр, обох статей, які знаходяться у стандартних умовах лабораторного утримання та раціону травлення. Експеримент проводять протягом 14 діб. Усі тварини були розділені на дві групи: контрольну (n=20) та експериментальну (n=20). Тваринам контрольної групи ін'єкційне в проекції V-VI міжребер'я справа вводять 1,5мл стерильного ізотонічного розчину хлориду натрію. Експериментальних тварин за 30 хвилин до інфікування розташовують в камері з відносною вологістю повітря 75% та температурою +4 градуси за Цельсієм. В експериментальній групі тварин інфікування проводять шляхом ін'єкційного введення 1,5мл міліардного завису добової агарової культури S.aureus (штам АТСС 25923) у проекції V-VI міжребер'я за допомогою стерильного шприцу для ін'єкцій в умовах строгої асептики. Тварин виводять з експерименту на 14 добу. Усі маніпуляції, що могли викликати біль, проводилися згідно до Хельсинскої декларації про гуманне відношення до тварин. 17953 4 Розрахунок LD50 при вказаному методі інфікування проводять за формулою Ашмарина І.П. та Воробьева А.А. (1962). У тварин роблять кількісний висів мікроорганізмів із легень, для цього уражену легеню зважують, після чого 1г легеневої тканини, взятий із зони некрозу, розтирають у ступці зі стерильним піском та 5мл 0,85% розчину NaCl. При висівах мікроорганізмів на м'ясопептонний агар виділяли S.aureus у кількості 4 109-8 109КОЕ/мл по культуральним та біохімічним властивостям ідентичні взятому для інфікування. Легені також досліджують морфологічно, макро- та мікроскопічно. При макроскопічному дослідженні уражена легеня містить одиничні порожнини деструкції з виразним періфокальним запальним валом. Ткань легені для морфологічного дослідження фіксують у 10% нейтральному формаліні, дегидратують, заливають целоїдин-парафіном, забарвлюють гематоксиліном та еозином. На підставі цього виявляють типові ознаки гострого абсцесу легень, що характеризується наступною картиною. В мікроскопічних препаратах легені відмічають вогнище деструкції, де спостерігається скупчення збудника, некротичні рештки клітин та міжальвеолярних перетинок, гнійний ексудат, навколо ділянки некрозу тонкостінна сполучнотканинна капсула, інфільтрована лейкоцитами і нейтрофілами. Результати обробляють за допомогою параметричних та непараметричних критеріїв. Ефективність моделі ілюструє наступний приклад. Приклад. Морська свинка-самка вагою 450г, яка знаходилась в стандартних умовах лабораторного утримання та раціону травлення. Попередньо тварину тримають у камері, де температура повітря становила +4 градуси за Цельсієм, а відносна вологість повітря 75%, протягом 30 хвилин. В умовах ефірного наркозу пункційно трансплеврально в проекції V-VI міжребер'я справа вводять 1,5мл міліардного завису добової агарової культури S.aureus (штам АТСС 25923) у кількості 4 109-8 109КОЕ/мл. Морську свинку виводять з експерименту на 14-ту добу після інфікування. Для встановлення існування гострого абсцесу легень мікробіологічному та гістологічному дослідженню була піддана права легеня тварини. Для підтвердження ідентичності мікроорганізмів, що були використані для інфікування та виділених з легені експериментально інфікованої тварини, вивчаються їх біологічні властивості. Досліджують посіви з попрожнини деструкції на м'ясо-пептонному агарі та виділяють S.aureus у кількості 4 109-8 109КОЕ/мл. Було встановлено, що по морфологічним, культуральним та біохімічним властивостям виділений від експериментальної тварини штам ідентичний взятому для інфікування. Права легеня також була досліджена морфологічно. Цитологічну оцінку ураження легеневої тканини проводять мікроскопією забарвлених по Романовському мазків, де були знайдені скупчення 5 17953 стафілококу у вогнищі деструкції та у сусідніх альвеолярних структурах, некротичні залишки клітин і міжальвеолярних перетинок, гнійний ексудат, навколо ділянки некрозу тонкостінна сполучнотканинна капсула, інфільтрована лейкоцитами та нейтрофілами. В альвеолах, розташованих більш переферично, переважно зустрічалася фібринозна ексудація. Для гістологічного дослідження використовують парафінові зрізи тканини ураженої легені товщиною 5мкм, забарвлені гематоксиліном та еозином. Комп’ютерна верстка М. Ломалова 6 Гістологічне у легеневій тканині виявлена порожнина деструкції, яка має тонкостінну сполучнотканинну капсулу, інфільтровану лейкоцитами та нейтрофілами. У тканинах навколо вогнища деструкції виявлено повнокрів'я, стазикрововиливи у стінку альвеол, лейкоцитарний ексудат, локалізований у порожнині деструкції та у навколишніх бронхіолах та альвеолах, що заповнені фібрином та нейтрофілами. По периферії знаходиться зона серозного набряку. На підставі отриманих даних можна стверджувати про наявність у цієї тварини гострого абсцесу легень, викликаного S.aureus. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601