Спосіб культивування калусної тканини плюща (hedera helix l.)

Спосіб культивування калусної тканини плюща, що включає виділення експланту, стерилізацію і культивування його на живильному середо 3 20753 умовах протягом 30-80 діб в темряві, наприкінці циклу культивування біомасу перемішують, одну частину використовують для відтворення інокуляту, а іншу - для одержання цільового продукту. Приклад 1 (прототип) Готують живильне середовище Мурасіге і Скуга, що містить, мг/л: мінеральні солі, мікроелементи, сахарозу й інозит за прописом Мурасіге і Скуга [Murashige Т., Skoog F. // Phisiol. Plant. - 1962. Bd.15. - №13. - P.473-497], агар - 6000, тіамін - 1,0, піродоксин - 0,5, нікотинова кислота - 0,8; фітогормони: 2,4-дихлорфеноксіоцтова кислота - 4,0 і 6бензиламінопурин - 0,5, розливають у культуральні судини по 50мл у кожний. Закупорені ватномарлевими пробками судини стерилізують в автоклаві при 118°С протягом 30 хвилин, рН середовища до стерилізації 5,5-5,8. У застигле живильне середовище у стерильних умовах висаджують 30добову біомасу калусу плюща. Інокулюм відбирають від біомаси в стерильних умовах у кількості 2,0-2,5г/50мл і культивують у темряві при температурі 18°С протягом 40 діб, після чого калус витягають із судини і зважують. Приріст біомаси (у % від вихідної біомаси) при п'ятикратній повторності досліду склав 20%. Приклад 2 Готують живильне середовище Мурасіге і Скуга, що містить, мг/л: мінеральні солі, мікроелементи, сахарозу й інозит за прописом Мурасіге і Скуга [Murashige Т., Skoog F. // Phisiol. Plant. - 1962. Bd.15. - №13. - P.473-497], агар - 6000, тіамін - 1,0, піродоксин - 0,5, нікотинова кислота - 0,8; фітогормони: 2,4-діхдорфеноксіодтова кислота - 2,0 і 6бензиламіиопурин - 0,3, розливають у культуральні судини по 50мл у кожний. Закупорені ватномарлевими пробками судини стерилізують в автоклаві при 118°С протягом 30 хвилин, рН середовища до стерилізації 5,5-5,8. У застигле живильне середовище у стерильних умовах висаджують 30добову біомасу калусу плюща. Інокулюм відбирають від біомаси в стерильних умовах у кількості 2,0-2,5г/50мл і культивують у темряві при температурі 18°С протягом 30 діб, після чого калус витягають із судини і зважують. Приріст біомаси (у % від вихідної біомаси) при п'ятикратній повторності досліду склав 50%. Приклад 3 Готують живильне середовище Мурасіге і Скуга, що містить, мг/л: мінеральні солі, мікроелементи, сахарозу й інозит за прописом Мурасіге і Скуга [Murashige Т., Skoog F. // Phisiol. Plant. - 1962. Bd.15. - №13. - P.473-497], агар - 6000, тіамін - 1,0, піродоксин - 0,5, нікотинова кислота - 0,8; фітогормони: 2,4-дихлорфеноксіоцтова кислота - 1,0 і 6бензиламінопурин - 0,2, розливають у культуральні судини по 50мл у кожний. Закупорені ватномарлевими пробками судини стерилізують в автоклаві при 118°С протягом 30 хвилин, рН середовища до стерилізації 5,5-5,8. У застигле живильне середовище у стерильних умовах висаджують 30добову біомасу калусу плюща. Інокулюм відбирають від біомаси в стерильних умовах у кількості 4 2,0-2,5г/50мл і культивують у темряві при температурі 18°С протягом 55 діб, після чого калус витягають із судини і зважують. Приріст біомаси (у % від вихідної біомаси) при п'ятикратній повторності досліду склав 200%. Приклад 4 Готують живильне середовище Мурасіге і Скуга, що містить, мг/л: мінеральні солі, мікроелементи, сахарозу й інозит за прописом Мурасіге і Скуга [Murashige Т., Skoog F, // Phisiol. Plant. - 1962. Bd.15. - №13. - P.473-497], агар - 6000, тіамін - 1,0, піродоксин - 0,5, нікотинова кислота - 0,8; фітогормони: 2,4-дихлорфеноксіоитова кислота - 0,1 і 6бензиламінопурин - 0,2, розливають у культуральні судини по 50мл у кожний. Закупорені ватномарлевими пробками судини стерилізують в автоклаві при 118°С протягом 30 хвилин, рН середовища до стерилізації 5,5-5,8. У застигле живильне середовище у стерильних умовах висаджують 30добову біомасу калусу плюща, інокулюм відбирають від біомаси в стерильних умовах у кількості 2,0-2,5г/50мл і культивують у темряві при температурі 18°С протягом 65 діб, після чого калус витягають із судини і зважують. Приріст біомаси (у % від вихідної біомаси) при п'ятикратній повторності досліду склав 400%. Приклад 5 Готують живильне середовище Мурасіге і Скуга, що містить, мг/л: мінеральні солі, мікроелементи, сахарозу й інозит за прописом Мурасіге і Скуга [Murashige Т., Skoog F. // Phisiol. Plant. - 1962. Bd.15. - №13. - P.473-497], агар - 6000, тіамін - 1,0, піродоксин - 0,5, нікотинова кислота - 0,8; фітогормони: 2,4-дихлорфеноксіоптова кислота - 0,01 і 6бензиламінопурин - 0,01, розливають у культиваційні судини по 50мл у кожний. Закупорені ватномарлевими пробками судини стерилізують в автоклаві при 118°С протягом 30 хвилин, рН середовища до стерилізації 5,5-5,8. У застиглу живильне у середовище стерильних умовах висаджують 30добову біомасу калусу плюща. Інокулюм відбирають відбіомаси в стерильних умовах у кількості 2,0-2,5г/50мл і культивують у темряві при температурі 18°С протягом 80 діб, після чого калус витягають із судини і зважують. Приріст біомаси (у % від вихідної біомаси) при п'ятикратній повторності досліду склав 300%. Запропонований спосіб культивування калусної тканини плюща (Hedera helix L.) може бути використаний для біотехнологічного виробництва його біомаси, що може бути сировиною для одержання лікарських препаратів. Використання замість інтактних рослин плюща їхніх клітинних культур, отриманих біотехнологічним методом, зменшує антропогенний вплив на дику природу (плющ відрізняється повільним ростом, ця єдина рослина родини аралієвих, що зустрічається в дикому виді у Європі), дає можливість одержання фітомаси, цілком вільної від полютантів (гербіцидів, пестицидів, важких металів і ін.), не залежно від періоду вегетації і дозволяє керувати процесом біосинтезу цільових продуктів. 5 20753 6 Таблиця Вплив концентрації фітогормонів на приріст біомаси пасажних калусних культур Hedera helix L. Приклади 1 (прототип) 2 3 4 5 2,4-Д 4,0 2,0 1,0 0,1 0,01 Комп’ютерна в ерстка А. Рябко Фітогормони, мг/л 6-БАП 0,5 0,3 0,2 0,2 0,01 Підписне Приріст біомасси, % 20 50 200 400 300 Тираж 26 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601