Спосіб культивування калусної тканини цикламену (cyclamen)

Спосіб культивування калусної тканини цикламену (Cyclamen), що включає виділення експла 3 14366 чин щорічного масового знищення рідкісного і зникаючого кримського виду цикламену - цикламену Кузнецова. Перші згадки про лікувальні властивості цикламену зустрічаються у літературних джерелах ще в IV-ІІІст. до н.е. У даний час розроблений і стандартизований лікарський препарат "Синуфорте", отриманий на основі соку бульб цикламену європейського, який застосовують у отолорингології при лікуванні запальних захворювань навколоносових пазух. Бульби цикламену, які використовували як вихідну сировину, вирощуються на плантаціях Батумського ботанічного саду у екологічно чистих високогірних районах Аджарії при постійному контролі умов зростання. Дефіцит такої сировини визначає високу вартість препарату "Синуфорте". Інший вид цикламену - цикламен перський (Cyclamen persicum) є декоративною культурою, а його масове розмноження дуже дороге. У зв'язку з цим становить інтерес дослідження можливості одержання гликозидів у культурі ізольованих тканин цикламену. Використання біомаси клітинних культур має ряд переваг у порівнянні із інтактними рослинами: відсутність полютантів, керування процесом біосинтезу цільових продуктів, а також зменшення антропогенного впливу на дику природу. Приклад 1 Готують живильне середовище Мурасіге і Скута, що містить, мг/л: мінеральні солі, мікроелементи, сахарозу й інозит за прописом Мурасіге і Скуга [Murashige Т., Skoog F. // Phisiol. Plant - 1962. Bd.15. - №13. - P.473-497], агар - 6000, тіамін - 1,0, піродоксин - 0,5, нікотинова кислота - 0,8; фітогормони: 2,4-дихлорфеноксіоцтова кислота - 2,0 і 6бензиламінопурин - 0,2, розливають у культиваційні судини ємністю 50мл кожна. Закупорені ватно-марлевими пробками судини стерилізують у автоклаві при 118°С протягом 30 хвилин, рН середовища до автоклавування 5,5-5,8. У застигле живильне середовище у стерильних умовах вводять експланти (сегменти молодих листків цикламену перського), попередньо простерилізовані 70%-ним розчином етилового спирту, протягом 1 хвилини культивують у темряві при температурі 18°С протягом 20 діб, після чого калус витягають і визначають вихід біомаса та вміст гликозидів. Вихід за сухою біомасою при п'ятикратній повторності досліду склав 355мг. Дослідження методом тонкошарової хроматографії показало подібність якісного і кількісного складу глікозидів, виділених із калусної біомаси і бульб інтактних рослин цикламену перського. Приклад 2 Готують живильне середовище Мурасіге і Ску Комп’ютерна верстка Д. Шеверун 4 та, що містить, мг/л: мінеральні солі, мікроелементи, сахарозу й інозит за прописом Мурасіге і Скута, агар - 6500, тіамін - 1,5, піродоксин - 0,75, нікотинова кислота 1,0; фітогормони: 2,4дихлорфеноксіоцтова кислота - 5,0 і 6бензиламінопурин - 1,0, розливають у культиваційні судини ємністю 50мл кожна. Закупорені ватно-марлевими пробками судини стерилізують у автоклаві при 118°С протягом 30 хвилин, рН середовища до автоклавування 5,5-5,8. У застигле живильне середовище у стерильних умовах вводять експланти (сегменти молодих листків цикламену перського), попередньо простерилізовані 50%-ним розчином брадофену 10 Н протягом 10 хвилин, культивують у темряві при температурі 20°С протягом 25 діб, після чого калус і визначають вихід біомаси та вміст гликозидів. Вихід за сухою біомасою при п'ятикратній повторності досліду склав 310мг. Досліджених методом тонкошарової хроматографії показало подібність якісного і кількісного складу глікозидів, виділених з калусної біомаси і бульб інтактних рослин цикламену перського. Приклад 3 Готують живильне середовище Мурасіге і Скута, що містить, мг/л: мінеральні солі, мікроелементи, сахарозу й інозит за прописом Мурасіге і Скута, агар - 7000, тіамін - 2, піродоксин - 1,0, нікотинова кислота 1,2; фітогормони: 2,4дихлорфеноксіоцтова кислота -15,0 і 6бензиламінопурин - 2,0, розливають у культиваційні судини ємністю 50мл кожна. Закупорені ватно-марлевими пробками судини стерилізують у автоклаві при 118°С протягом 30 хвилин, рН середовища до автоклавування 5,5-5,8. У застигле живильне середовище у стерильних умовах вводять експланти (сегменти молодих листків цикламену перського), попередньо простерилізовані 0,1%-ним розчином диациду протягом 15 хвилин, культивують у темряві при температурі 22°С протягом 30 діб, після чого калус витягають і визначають вихід біомаси та вміст глікозидів. Вихід за сухою біомасою при п'ятикратній повторності досліду склав 325 мг. Дослідження методом тонкошарової хроматографії показало подібність якісного і кількісного складу гликозидів, виділених із калусної біомаси і бульб інтактних рослин цикламену перського. Запропонований спосіб культивування калусної тканини цикламену може бути використаний для біотехнологічного виробництва його біомаси з метою виділення біологічно активних речовин, що є основою для отримання лікарських препаратів. Перевагою даного способу є зниження антропогенного впливу на навколишнє середовище, одержання екологічно чистої сировини незалежно від періоду вегетації. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601