Процес оцінки якості фармацевтичних препаратів

Процес оцінки якості фармацевтичних препаратів, який відрізняється тим, що методом КХЧдіелектрометрії здійснюють контроль стану фармацевтичного препарату на основі білка або сироватки по релаксаційних характеристиках конформації макромолекул, які оцінюють по реакції на тепловий вплив. (19) (21) u200608787 (22) 07.08.2006 (24) 15.03.2007 (46) 15.03.2007, Бюл. №3, 2007р. (72) Щеголєва Тетяна Юріївна (73) Щеголєва Тетяна Юріївна 3 21287 ності, De' - зміщення дійсної частини діелектричної проникності при внесенні в клітинну суспензію біостимулятора стосовно контролю. Для препаратів інсуліну, показана можливість тонкої експрес ідентифікації якості по аналізу конформаційних переходів глобули, унаслідок яких реалізується переважний шлях реакції, що складається з послідовних переходів між під станами при теплових впливах. Були проведені серії експериментів, в яких використані різні варіанти теплового впливу у фізіологічне м'яких умовах. Конформаційну релаксацію спостерігали по зміні стану водної компоненти системи. Нагрівання робили протягом години, швидкість теплового удару не перевищувала 5град/хв. Вимір проводили при кімнатній температурі через 15 хвилин після прогріву. Взяли зразки інсуліну, один зіпсований і другий свіжий. При тепловому впливі на зразки в 37°С зміни в зіпсованому зразку перебували в межах 59%, а при 45°С в межах 10-15%. Ці зміни діелектричних характеристик вказують на те, що в цьому процесі порушені водні структури. Показано, що цей процес дозволяє контролювати кінцеву просторову організацію макромолекули, що забезпечує її функціональні можливості і залежить, від ступеня очищення і шляхів досягнення остаточної стабільної конформації. Отримані результати свідчать про те, що якщо у зволожених зразках рухи ферментів макромолекули приводять до зміни її найближчого гідратного оточення, то в розчині, у фізіологічних м'яких умовах, і в кристалах має місце зсув „великомасштабних” фрагментів, або доменів макромолекул, чим і визначаються їхні функціональні можливості, зокрема ферментативна активність. У діапазоні 3745°С воно супроводжується зміною повного гідратного оточення, що включає протяжні водні кластери. Вимір діелектричної проникності здійснювали за допомогою КХЧ-діелектрометра, розробленого в ІРЭ Н АН України. [UA, патент №9844 від 11.03.2005р. "Пристрій для дослідження водної компоненти біологічних об'єктів", кл. G01N 33/48, Щеголева Т.Ю.]. Завдяки процесу, що заявляється, є можливість проводити прямий порівняльний аналіз відмінностей конформації лікарського препарату по відношенню до еталонної фармацевтичної форми, при розробці лікарських препаратів по різним технологіям, для аналізу впливу біологічно активних добавок по відношенню до еталонної речовини, завдяки чому можна вибрати оптимальний комбінований вплив. Виявлена кореляція цих ефектів з просторовою організацією білків, відомої по даним рентгеноструктурного аналізу, свідчить про те, що теплоіндуковані переходи є показниками, що визначають просторову організацію та рухливість конформації макромолекули в розчині. Цей процес дозволяв визначати тонкі зміни конформації макромолекул, обумовлені різними технологічними способами одержання препарату, присутністю в препараті домішок або біологічно активних домішок без руйнування та модифікації об'єкту. 4 Порівняння діелектричних параметрів цих переходів в водних розчинах нових препаратів, що розробляються з еталонними зразками планується використати для створення експрес-тестів їх структурно-функціональної організації для визначення їхньої якості при виробництві лікарських форм. Таким чином цей процес може використовуватися для експрес-аналізу структурно-функціональної організації макромолекул в водних розчинах для створення нових методів оцінки якості фармпрепаратів. Створений процес аналізу нових лікарських форм та розробки їх з оптимальними параметрами, а також процес аналізу молекулярного механізму дії й адекватного контролю їх якості на біологічних об'єктах. Це е важливим напрямком для конструювання ліків, підбору in vitro їх доз і сполук. Методологічний підхід випробуваний на біооб'єктах різних рівнів організації: макромолекул розчинів білка, сироватках, різних полімерних препаратів рослинного походження, при аналізі дії ліків на організм. Процес виконується таким чином. Приклад 1 Досліджували дію Са на альбумін за допомогою теплоіндукованих переходів. У Таблиці 1 приведені зміни діелектричних параметрів розчину альбуміну по відношенню до непрогрітого зразку: 1 - без додатку СаСl2, 2 - з додатком 27мМ CaCl2, 3 - з додатком 2,7мМ СаСl2. Приклад 2 У Таблиці 2 приведені зміни діелектричних параметрів сироваток щурів при дії препаратів Са, який їм давали у вигляді сиропу, 1 - без додатку СаСl2, 2 - з додатком 2,7мМ СаСl2, 3 - з додатком 27мМ СаСl2. Приклад 3 У Таблиці 3 приведені зміни діелектричних параметрів сироваток щурів при дії препаратів Са, який їм давали у таблетках, 1 - без прогріву, 2 після прогріву до 37°С, 3 - після прогріву до 48°С. Приклад 4 У Таблиці 4 приведені результати діелектричних параметрів сироваток. Перші інтактні сироватки, 2 - сироватки щурів, які одержували таблетки, 3 - сироватки щурів, які одержували сироп. Отримані результати свідчать про те, що зміни найближчого гідратного оточення в розчині, у фізіологічних м'яких умовах, і в кристалах відображають зсув „великомасштабних” фрагментів, або доменів макромолекул, чим і визначаються їхні функціональні можливості, зокрема ферментативна активність. У діапазоні 37-45°С воно супроводжується зміною повного гідратного оточення, що включає протяжні водні кластери. Завдяки цьому процесу є можливість контролювати кінцеву просторову організацію макромолекули, що забезпечує її функціональні можливості і залежить, насамперед, від ступеня очищення і шляхів досягнення остаточної стабільної конформації. Метод КХЧ діелектрометрії дозволяє проводити аналіз якості стану фармацевтичних препаратів на основі білка при теплових впливах на розчин макромолекул, при їхньому створені у виробництві. 5 21287 6 Таблиця 1 De' 2 3,8 1,0 1 3,0 2,0 без прогріву Т=37°С 3 7,0 -4,0 Таблиця 2 De' 2 2,0 1,5 -4,0 1 2,0 1,0 -3,0 нативні Т=37°С Т=45°С 3 6,0 10,0 3,8 Таблиця 3 e' інтакті сироватки 18,3 19,0 19,3 без прогріву Т=37°С Т=45°С таблетки 18,5 22,0 18,8 Таблиця 4 Доза нативні Т=37°С Т=48°С e' таблетки 18,4 20,0 18,4 інтактні сироватки 18,2 19,0 19,5 Комп’ютерна в ерстка М. Ломалова Підписне сироп 19,0 21,0 18,0 Тираж 26 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601