Інгібітор росту злоякісних клітин

Изобретение относится к области медицины, в частности к препаратам, ингибирующим рост злокачественных опухолей. Известен ряд препаратов, ингибирующи х рост злокачественных клеток, а именно противоопухолевые препараты, содержащие в качестве активного ингредиента витамин Ε [Заявка РСТ № 79/0041, кл. А 61 К 31/355; Патент США № 4578391, кл. А 61 К 31/40]. Кроме того, известно, что витамин Ε используется в комбинированной химиотерапии злокачественных опухолей в качестве средства, уменьшающего токсичность противоопухолевы х препаратов [Relantloship between vitamin E and cancer-facts, not fancy. Ellison Neil M. "Cancer.Bull"., 1985,37, №3, 112-113]. Однако, данные по влиянию витамина Е на канцерогены противоречивы. В некоторых случаях отмечают даже цитотоксический эффект витамина Ε [Evidense for cyto-toxic effekt of vitamin Ε on human lymphocytes in virto. Narryanareddy K., Murth y E.B.K. "Nurt, Repts.lnc", 1982, 26, № 5, 901-906]. Целью изобретения является изыскание препарата, позволяющего более эффективно ингибировать рост злокачественных опухолей. Для достижения этой цепи исследовано влияние витамина Ε и a-токоферола, а также их производных на жизнеспособность и рост культур злокачественных клеток и предложено применение соединений производных α-токоферола с укороченной до С6 боковой цепью или С 1вместо боковой цепи общей формулы: где: R1 СН3СОО или ОН; R2 - СН2СН2СНС(СНз)2 или СН2СН2СН2С(СН3)2 или СН3 в качестве ингибиторов роста злокачественных клеток. Выявление ингибирующи х свойств исследуемых производных α-токоферола является неочевидным решением. Впервые доказано их угнетающее действие на жизнеспособность и рост клеток эпителоидной карциномы человека Hela-S3К, перевиваемой карциномы человека С-4-1 и острой лейкемии человека СЕМ-С1 и СЕМ-С-7. Для доказательства новых свойств производных α-токоферола исследовались витамин Ε фармакопейный, токоферол и 4 производных витамина Ε хроматографической чистоты: - витамин Ε фармакопейный, т.е. a-токоферолацетат с C16 в боковой цепи (ЕФ); - токоферол с С16 в боковой цепи (ТФC16); - токоферолацетат с С6 в боковой цепи и ненасыщенной связью на ее конце (ТФАC6); - токоферолацетат с С6 в боковой цепи и насыщенной связью на ее конце (ТФАC6); - токоферолацетат с С1 вместо боковой цепи (ТФАC1); - токоферол с С6 в боковой цепи (ТФC6). Испытания проводились в такой последовательности: Культуры прикрепленных клеток: элителиоидной карциномы Hela-S3Ки перевиваемой карциномы С-4-1 выращивали в среде Дульбекко-модифицированная среда Игла (ДМЕМ) с добавлением 10% бычьей сыворотки с 5% СО2 в воздухе при 37°С и 100% влажности. Добавляли в среды пенициллин (100 ед. на мл) и стрептомицин (100 мг на мл), инкубировали в среде Пскова с инактивиро-ванной 1% бычьей сывороткой. После преинкубации в среде Пскова к клеточным культурам добавляли α-токоферол в конечной концентрации 25 мкг/мл или его производные в эквимолярных концентрациях. За ростом клеток вели наблюдение 48 часов. В конце инкубации определяли скорость клеточного роста по уровню щелочной фосфа тазы (1) и клеточного белка (2) - показателей, характеризующи х жизнеспособность клеток для прикрепленных объектов. Методы определения этих показателей описаны: [Hung S.C., Melnycovych G. Alkaline phosphatasa In Hela cells. Stimulation by phospolipasa A2 and lysophosphatidylcholine.// Biochem. Blophys. Acta. - 1976.- 429. - P.409-420]; [Zowry O.N., Rosebrough N.J., Farr A.IJ, Randall R.J. // J.BIol. Chem. 1951. v.193. № 1.P.265-275]. Культуры прикрепленных клеток: острой лейкемии СЕМ-С-1 и СЕМ-С-7 были выращены в среде RPMI 1640 с инактивированной 10% бычьей сывороткой (FBC) с добавлением пенициллина (100 ед/мл) и стрептомицина (100 мг/мл). В эксперименте суспензии клеток доводили до плотности 0,4-1,5*105 клеток на мл, переносили их в пластиковые чашки диаметром 25 мм. После преинкубации в среде Пскова в течение 24 часов к клеточным культурам добавляли a-токоферол в количестве 25 мкг на мл среды или его производные в эквимолярной концентрации. За ростом клеток наблюдали 24 и 48 часов. В конце инкубации количество клеток определяли счетчиком (Coulter-Counteiv Model В). Клетки считали при пороге Ϊ25 - более высоком, улавливающем только живые клетки, и при пороге Т7 - более низком, улавливающем все клетки. О степени выживания клеток судили по проценту клеток нормального размера, выражая его как отношение Т25/Ту100. Также регистрировали пик Гауссовского распределения клеток. Результаты приведены в табл. 1-3. Как видно из табл.1 обработка культуры неприкрепляющихся клеток витамином Ε фармакопейным (ЕФ) и токоферолом с обычной длиной боковой цепи (ТФС16) приводит через 24 часа инкубации к незначительному увеличению общего содержания клеток для СЕМ-С-1, в основном, за счет увеличения количества живых клеток. К 48 часу количество клеток увеличивается, 94% клеток сохраняют нормальные размеры, что говорит о хорошей жизнеспособности. Аналоги токоферолацетата с укороченной до С 6 боковой цепью или с С1 вместо боковой цепи, с насыщенной и ненасыщенной связью на конце, как в форме токоферола, так и с ацетатной группой в хромановом ядре, практически полностью ингибируют рост культуры клеток СЕМ-С-1. Об этом свидетельствует и пик Гауссовского распределения, который уменьшается до 2-3 усл.единиц с 28-32 усл. единиц в контроле. При инкубации клеток СЕМ-С-7 (табл.2) с ЕФ и ТФС16 наблюдается даже некоторое активирующее действие их. Тормозящее рост клеток влияние аналогов с укороченной до С 6 боковой цепью и С1 вместо боковой цепи менее выражено, чем при выращивании культуры СЕМ-С-1, но значительно по сравнению с контрольной культурой и культурой, обработанной ЕФ и ТФС16 Пик Гауссовского распределения клеток снижается с 27-34 усл.ед. в контроле до 3-5. Из табл.3 видно, что все производные витамина Ε с укороченными до Сб боковыми цепями или Сі вместо боковой цепи уменьшают содержание белка в культурах Hela-S3K и С-4-1 более чем в 3 раза относительно контроля. Параллельно со снижением содержания белка в культуре клеток идет уменьшение фосфатазной активности, что свидетельствует о значительной потере жизнеспособности клеток. Таким образом, полученные нами экспериментальные данные свидетельствуют о том, что производные токоферола с укороченной до С6 боковой цепью или С 1 вместо боковой цепи общей формулы: где: R1 СН3СОО или ОН; R2 - СН2СН2СНС(СН3)2 или СН2СН2СН2С(СН3)2 или СН3 значительно ингибируют рост злокачественных клеток.