Спосіб підбору оптимального строку культивування клітин ендокринних органів, призначених для трансплантації

Способ подбора оптимального срока культивирования клеток эндокринных органов, предназначенных для трансплантации, включающий культивирование клеток с последующим отбором проб клеток и анализом биологической активности в динамике, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что из отобранных на разных сроках культивирования проб клеток выделяют антигены, иммунизируют ими животных, в полученных иммунных сыворотках определяют титры антител и подбирают срок культивирования клеток в соответствии с минимальным титром антител. инсулинпродуцирующей активности - гистохимический метод, который заключается в окрашивании псевдоизоцианхлоридом бета-клеток, и по специфической метахроматической реакции с инсулином измеряют интенсивность люминесценции в УФ-лучах (А. с. СССР № 1493920). Однако, поскольку культура клеток применяется при трансплантации в клинике, а быстрому отторжению трансплантата способствует высокая антигенность пересаживаемой ткани, более эффективным способом является определение срока ее культивирования, характеризующегося минимальной и антигенной активностью. Задачей настоящего изобретения является повышение пригодности клеток для трансплантации, за счет выявления их минимальной антигенной активности в процессе культивирования. С > с ~ Ґ*\ 11267 Поставленная задача достигается путем получения комплексного антигена из исследуемых культур, иммунизацией животных полученным антигеном, получением иммунных сывороток, по уровню антителооб- 5 разования в иммунологических реакциях определяют антигенность культуры клеток. Способ осуществляется следующим образом: из культур клеток эндокринных тканей, приготовленных по методу И. С. 10 Турчина и др. (А. с. № 1119696; А. с. № 1377291) получают антиген, соответствующий разным срокам культивирования путем пятикратного замораживания и растирания в фарфоровой ступке. После 30-минутного 15 центрифугирования, надосадочную жидкость используют в качестве антигена для иммунизации животных. Последнюю процедуру повторяют 3 раза с 5-ти дневным интервалом. Через 7 дней после последней 20 иммунизации у животных производят забор крови и получают иммунную сыворотку. Сыворотку инактивируют, делают разведения и смешивают с эритроцитами барана, предварительно танизированными и сенсибилизи- 25 рованными теми же антигенами, которые использовались для иммунизации животных. По угнетению феномена антителообразования определяют срок культивирования ткани, соответствующий наименьшей ее 30 антигенной активности. Пример 1. Культуру клеток поджелудочных желез новорожденных поросят 3-, 5-, 7-, 94 11-дневного культивирования отмывают и из нее путем замораживания и растирания 35 в фарфоровой ступке получают антиген. Для иммунизации используют лабораторных животных по 10 индивидуумов в каждой группе. Интервал между иммунизацией составляет 5 дней, перед забором крови - 7 дней. Для усиления гуморального иммунного ответа используют адъювант Фрейнда. После получения и инкубации на водяной бане иммунной сыворотки ставят реакцию пассивной гемагглютинации (В. И. Говалло, 1967). По результату реакции, где сыворотка обнаруживала наименьшую активность, в данном случае 7-9 день культивирования, определяют срок культивирования ткани, который соответствует минимальной антиген ности (таблица 1). Пример 2. Вышеописанным способом определяли срок оптимального культивирования культуры клеток надпочечных желез новорожденных поросят. Иммунную сыворотку, полученную от животных иммунизированных антигеном культуры клеток надпочечных желез различных сроков культивирования, использовали в реакции пассивной гемагглютинации. Результат реакции показал, что наименьшей антигенностью обладают культуры клеток надпочечных желез 5-7 дневного культивирования. Преимуществом данного способа по сравнению с прототипом является: достигается повышение функционирования трансплантата при пересадке; способ не наносит ущерб иммунной системы реципиента и обеспечивает снижение реакции отторжения трансплантата за счет минимальной антигенной активности пересаживаемой ткани. Таблица 1 Изменение активности сыворотки, полученной после иммунизации животных антигеном культуры клеток поджелудочных желез, в процессе культивирования День культивирования Титр иммунной сыворотки 3 5 7 9 11 1:8 1:4 цельная цельная 1:4 11267 Таблица 2 Изменение активности сыворотки, полученной после иммунизации животных антигеном культуры клеток надпочечных желез, в процессе культивирования День культивирования Титр иммунной сыворотки3 5 7 9 11 1:4 1:2 1:2 1:8 1:8 Упорядник Замовлення 4056 Техред М.Моргентал Коректор Л.Лукач Тираж Підписне Державне патентне відомство України, 254655, ГСП, КиТв-53, Львівська пл., 8 Відкрите акціонерне товариство "Патент", м. Ужгород, вул.Гагаріна, 101