Спосіб біологічної оцінки токсичності морського середовища

1. Спосіб біологічної оцінки токсичності морського середовища, що включає дослідження фізіологічного стану риб, що є тест-об'єктами, який відрізняється тим, що визначають і порівнюють величини ступеня окислювання білків сироватки крові риб з умовно чистих і досліджуваних районів, 3 27484 4 денатурованих білків доливають 1 мл 2.4-ДФГ проводять відповідно до прототипу. Однак, у (0.1М), розчиненого в 2М НС1. У контрольну пробу зв'язку зі специфікою білкового обміну риб, замість 2.4-ДФГ додають рівний об'єм НС1. довжина хвилі 356нм була замінена авторами на Протягом години при кімнатній температурі 346нм, тому що максимум поглинання в риб здійснюють інкубацію, потім проби центрифугують приходиться саме на цю довжину хвилі, що було протягом 15-20хв. Осад промивають 3 рази виявлено експериментальне. розчином етанол-етилацетат (1:1). Отриманий Приклади реалізації способу осад підсушують і розчиняють у розчині сечовини Приклад 1. (8М). Розчин сечовини доливають до осаду в Оцінка токсичності морського середовища по обсязі 2.5мл і витримують у киплячий бані ступеню окисної модифікації білків сироватки крові протягом 5хв. до повного розчинення осаду. бичка-кругляка Neogobius melanostomus Pallas, що Оптичну щільність динітрофенілгідразонів, що живе в сильно забрудненій прибережній зоні м. утворилися, реєструють на спектрофотометрі. Севастополя (Чорне море) і умовно чистій зоні пНедолік полягає в тім, що спосіб та його ова Казантип (Азовське море), а також риб, що модифікації застосовують винятково в клінічній живуть у трьох севастопольських бухтах (Чорне практиці для оцінки ступеня різних патологій у море) з різним рівнем антропогенного людини, а також прояву інтоксикації, викликаною навантаження дією екзогенних факторів. Риб відновлювали в прибережній зоні м. В основу корисної моделі поставлена задача Севастополь й у трьох севастопольських бухтах шляхом дослідження відповідних реакцій Стрєлецькій, Мартиновій і Карантинній. Аналіз гідробіонтів на дію токсичних речовин чи їхньої забруднення цих районів показував вміст важких суміші забезпечити ранню діагностику морського металів, нафти, біогенів і патогенних середовища для аналізу рівня його токсичності. мікроорганізмів у воді. Паралельно риб Для рішення поставленої задачі вимірюють відновлювали в прибережній зоні п-ова Казантип, показник ступеня окисної модифікації білків що знаходиться в умовно чистій зоні Азовського сироватки крові, рівень якого тим вище, чим моря. Кров риб відбирали пастеровською піпеткою більше забруднення акваторії. Як тест-об'єкти з хвостової артерії, сироватку одержували шляхом використовують масові види риб, що відстоювання на холоду. У сироватці (0.05мл) задовольняють вимогам, пропонованим до визначали зміст 2,4-динітрофенілгідразонів. Білок «моніторних видів», а саме: живуть у прибережній сироватки крові осаджували за допомогою 20% зоні моря, доступні для вилову, ведуть, розчину трихлороцтової кислоти. До переважно, осілий спосіб життя, мають добре денатурованих білків доливали 1мл 2.4-ДФГ вивчену біологію. (0.1М), розчиненого в 2М НС1. У контрольну пробу Спосіб реалізується наступним чином. У замість 2.4-ДФГ додавали рівний обсяг НС1. способі біологічної оцінки токсичності морського Протягом години при кімнатній температурі середовища визначають величини ступеня здійснювали інкубацію, потім проби окислювання білків сироватки крові риб з умовно центрифугували протягом 15-20хв. Осад чистих районів і порівнюють з ними показники риб промивали 3 рази розчином етанол-етилацетат з досліджуваних районів. Чим вище ступінь (1:1), центрифугували протягом 10 хв. Після цього окислювання білків сироватки крові, тим вище отриманий осад підсушували і розчиняли в розчині рівень забруднення середовища. Визначення сечовини (8М). Розчин сечовини доливали до величини ступеня окислювання білків сироватки осаду в обсязі 2.5мл і витримували в киплячій бані крові включає відбір сироватки крові риб, протягом 5хв. до повного розчинення осаду. осадження білка розчином трихлороцтової Оптичну щільність динітрофенілгідразонів, що кислоти, додавання 2.4-динітрофенілгідразина, утворилися, реєстрували на спектрофотометрі. взаємодіючого з альдегідними і кетонними Результати приведені в Таблиці 1. угрупованнями амінокислотних залишків, що утворилися в результаті окислювання білків, інкубування і центрифугування, промивання осаду, підсушування і розчинення в розчині сечовини, Вміст 2.4-динітрофенілгідразонів у сироватці крові бичка-кругляка, щ витримування на водяній бані дорозчинення в трьох севастопольських бухтах, які характеризуються різним рівнем осаду і реєстрацію оптичної щільності, при цьому осад додатково центрифугують перед Одиниці оптичн Район підсушуванням, а для аналізу відбирають 0,05мл 346нм 370нм сироватки крові риб. Азовське море, n = 82 3.20±0.27 4.33±0.31 З метою адаптації даного методу до Чорне море, n = 66 5.79±0.33 7.85±0.45 визначення модифікованих форм білків у Б. Стрєлецька, n = 14 6.83±0.70 10.00±1.00 сироватці крові риб, обсяг якої вкрай обмежений, Б. Мартинова, n = 22 5.25±0.19* 6.48±0.21* кількість зразка (сироватки крові) було доведено Б. Карантинна, n = 30 5.30±0.12* 7.08±0.14*** до мінімальних величин (0.05мл). Це приводить до r = 0.86 r = 0.69 істотного зниження кількості використовуваних реагентів. Крім цього, після промивання осаду з метою прискорення процедури і недопущення втрат проводять додаткове центрифугування для одержання кінцевого преципітату. Визначення модифікованих форм білків і розрахунки Примітка: жирним шрифтом позначена вірогідність розходжень при довжин 530нм р