Спосіб розмноження винограду в культурі тканини

Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к производству суперэлитных саженцев винограда и может быть применено для выращивания безвирусного посадочного материала винограда. Известен способ выращивания посадочного материала винограда, разработанный Молдавским НПО "Виерул" [1], который заключается в вычислении инициальных эксплантов, посадке на питательную агаровую среду, культивировании в пробирках, микрочеренковании, укоренении на питательной агаровой среде и адаптации в индивидуальных пакетах из полиэтиленовой пленки, наполненных торфом с минеральными добавками. Растения извлекают из питательной среды In vitro и погружают в питательный раствор В.А. Чеснокова половинной концентрации. Высаживают растения в заранее подготовленные борозды, засыпанные торфом или перлитом и поливают питательным раствором Чеснокова. Посадка осуществляется при работе туманообразующей установки. Адаптация состоит из 2-х этапов. На первом этапе ежедневно проводят внекорневую подкормку растений раствором Чеснокова. Влажность поддерживают на уровне 1000/0. На втором этапе пленку снимают постепенно увеличивая экспозицию. Через 7-10 дней растения раскрывают полностью. Влажность в теплице понижают, проводя дождевание раз в два дня. Способ технологически сложен, нуждается в оснащении туманообразующей установкой, из-за наличия органического вещества в субстрате есть возможность попадания вирусной и бактериальной инфекции. По известному способу, разработанному во ВНИИВИПП "Магарач" [1], из проросших в лаборатории верхушек, затем осуществляют посадку на питательную агаровую среду и культивируют до получения побегов, которые затем микрочеренкуют и укореняют на агаровой среде, после чего производят адаптацию к не стерильным условиям. Растения с корнями, побегами, 4-10 листиками и активно растущей верхушкой из условия in vliro высаживают в теплицу для адаптации. Перед посадкой осуществляют выдержку в пленочной теплице в течение 7-14 дней в условиях In vitro на солнечном свету под туманообразующей установкой, не допуская повышения температуры пробирок более 30°С. Растения высаживают в гряды, состоящие из почвы и торфа в соотношении 1:1. Вместо торфа можно использовать хорошо перепревший, прошедший 'термообработку против сорняков, вредителей и болезней, перегной. Растения высаживают в бороздки, которые предварительно засыпают известкованным торфом (рН 5-7) или смесью торфа с перлитом в соотношении 2:1 по объему. Субстрат увлажняют раствором минеральных элементов (по В.А. Чеснокову). Затем растения выращивают в контролируемых условиях защи щенного грунта. Недостатком описанного способа является травмирование растений при пересадке на адаптацию, сложность практической реализации способа и наличие в субстрате органического вещества как потенциального носителя инфекции. В основу изобретения поставлена задача создания способа размножения винограда в культуре ткани, к котором одноглазковые черенки микроклонов, выращенных in vitro, высаживают рядами с площадью питания 4 см в питательный субстрат (цеолит + ионитная почва в соотношении 100:1) при поддерживании оптимальных условий выращивают до появления на побегах 3 листочков. Обеспечивается укоренение растений и одновременная адаптация, а также исключается травмирование растений при пересадке на адаптацию и за счет этого повышается качество приживаемости в не стерильных условиях и увеличивается выход посадочного материала. Поставленная задача решается тем, что в способе размножения винограда в культуре ткани, включающем вычленение эксплантов, посадку их в питательную среду и культивирование до получения побегов, микрочеренкование, укоренение черенков и адаптацию к не стерильным условиям согласно изобретению для укоренения и одновременной адаптации черенки высаживают группой с площадью питания 4 см в культивациомный сосуд с субстратом на основе цеолита с добавкой ионитной почвы. Способ осуществляют следующим образом: Микроклоны, выращенные in vitro на питательной агаровой среде Мурасиге Скуга и имеющие 8-10 листьев на побеге, черенкуют на одноглазковые черенки, которые помещают в кристаллизатор, (либо стеклянный сосуд любой формы) наполненный питательным субстратом. - одномиллиметровой фракцией цеолита, смешанного с Искусственной ионитной почвой "БИОНА" в соотношении 100:1. Питательный субстрат и кристаллизатор предварительно стерилизуют в автоклаве в течение 15 минут под давлением 0,5 атм. Микрочеренки высаживают рядами, создавая площадь питания 4 см 2. Для поддержания в кристаллизаторе влажности 85-90% его накрывают полиэтиленовой пленкой. Микрочеренки помещают в условия температуры 25-30°С, естественной освещенности и досветке в осенне-зимний период. Через 6-7 дней начинают закалку, для чего пленку в первые два дня снимают на 30 минут, увеличивая в последующее время до 1,5-2 часов. С 12-13-го дня растения раскрывают полностью. С появлением на побегах 3 листочков укорененные и адаптированные растения высаживают на постоянное место. Пример осуществления № 1 Микрочеренки сорта винограда Смена в количестве 63 штук высаживали в кристаллизатор высотой 9 см, диаметром 50 см на питательный субстрат высотой слоя 6 см (смесь цеолита одномиллиметровой фракции с БИОНОЙ в соотношении 100:1) и поливали дистиллированной водой. С целью исключения грибных заражений микрочеренки и полиэтиленовую пленку опрыскивали 5%-ным раствором фундазола. Кристаллизатор, накрытый полиэтиленовой пленкой, помещали в тепличный бокс, и в течение 7 дней выдерживали при температуре 2530°С, влажности 90%, освещенности 200 вт/м 2 при 16-часовом световом дне. Через 7 дней пленку снимали на 0,5 часа (30 мин) утром и вечером (9 часов и 16 часов). Полив начинали на 2-ой день закаливания и проводили ежедневно до высадки в теплицу. С третьего дня экспозицию закаливания увеличивали на полчаса ежедневно, и на 13-й день со дня посадки растения оставляли Открытыми полностью. Через 21 день микроклоны, имеющие 3 листочка, высаживали в теплицу в минеральный субстрат для доращивания до стандартных размеров. Контролем являлись растения того же сорта, выращенные на агаровой среде. Пример осуществления № 2. Микрочеренки трудноукореняемого сорта винограда Мускат белый в количестве 15 штук высаживали в кристаллизатор высотой 5,5 см, диаметром 17см. на питательный субстрат высотой слоя 3 см. Условия содержания черенков такие же, как и в примере № 1. Отличия заключаются в более длительном выдерживании их под пленкой, что связано с сортовыми особенностями Муската белого. Закаливание начинали на 10-ый день после посадки черенков. Укорененные микроклоны, на 33-ий день высадили в теплицу. Контролем являлись растения того же сорта, выращенные на агаровой среде. Исследования проведены в лабораторно-тепличном комплексе НПО по виноградарству и питомниководству в 1988-1989 гг., на сортах винограда Смена, Мускат белый, Одесский сувенир, Мечта. Результаты испытаний приведены в таблицах 1, 2 и 3. Анализ показывает, что высаживание растений для адаптации группами в кристаллизатор способствует повышению их приживаемости на 20-25% (табл. 1) и активизирует развитие микроклонов (табл. 2). В результате технологический цикл производства суперэлитных стандартных саженцев сокращается на 18-20 дней по сравнению с указанными технологиями.