Спосіб оцінки інтенсивності вільнорадикальних реакцій в клітинах тварин

Спосіб оцінки інтенсивності вільнорадикальних реакцій в клітинах тварин, що включає визна 29908 Для кожного зразка ставлять 2 проби - дослід і контроль. У обидві пробірки вміщують по 2,0 мл біологічного матеріалу, по 0,16 мл 0,2% розчину азиду натрію. Потім до пробірки із дослідною пробою прибавляють 4-6 мл перекису водню, до пробірки з контролем - стільки ж фізрозчину на стандартному фосфатному буфері. Оптимальна кількість (5 мл) перекису водню в інкубаційній суміші підібрана експериментально. Проби ставлять до термостату при 37°С на 1 год. Після інкубації проби охолоджують на льоду (5 хв.). потім до всіх проб добавляють по 2,0 мл 28% трихлоруксусної кислоти (ТХУ) і фільтрують через звичайні паперові фільтри. Відібравши по 2,0 мл отриманого фільтрату з кожної проби, прибавляють по 0,5 мл 1% ТБК. Проби ставлять на киплячу водяну баню на 15 хв., потім 5 хв. о холоджують на льоду. З'являється інтенсивне рожеве забарвлення. Вимірювання екстинкції проби і контролю проводять напроти оптичного контролю (буферний розчин без біологічного матеріалу) на спектрофотометрі при довжині хвилі 532 нм. Потім визначають коефіцієнт вільнорадикального потенціалу біологічного матеріалу - К ср. шля хом ділення показника екстинкції дослідної проби на таку у контрольній пробі. Отримані результати підлягають статистичній обробці з використанням критерію Ст'юдента і по Манцевічуте-Ерінгене. Виконанню способу відповідає об'єм перекису водню 4-6 мл. Менша кількість не забезпечує високого значення К ср, що, як буде показане нижче, знижує чутливість способу. Використання більших об'ємів індуктора перекисного окислення не приводить до збільшення К ср і тому недоцільне. Результати дослідів дозволяють вважати можливим кількість перекису водню 4-6 мл, оптимальною - 5,0 мл (табл. 1). Приклади конкретного виконання способу. 1. Порівняльна оцінка вільнорадикального потенціалу поросят 2-3 місячного віку, які отримували корм з різним ступенем окисленості. 1 група - 5 поросят з масою тіла 12-16 кг, які стримували стандартний комбікорм. 2 група - 5 поросят з масою тіла 12-16 кг, які отримували стандартний комбікорм, та щоденно на протязі 7 днів внутрим'язево антиоксидантний препарат АОХ-1 в дозі 150 мг/кг маси тіла. На 8-й день після почату досліду в кожної тварини відбирали по 5 мг крові з гепарином, відстоювали при температурі 20°С на протязі 1 год., потім відбирали шар лейкоцитів і ресуспендували ці клітини в 2 мл фосфатного буфер у (рН 7,4). Потім проводили визначення вільнорадикального окислення в отриманих суспензіях лейкоцитів паралельно згідно прототипу і даного способу. Результати наведені в табл. 2. 3 наведених даних випливає, що рівень вільнорадикальних реакцій, отриманий згідно відомого способу у тварин, які отримували AОX-1, має тенденцію до зниження (р=0,2), тоді як показники, що їх отримали за даним способом, дозволяють оцінити рівень вільнорадикальних реакцій в лейкоцитах тварин 2 групи як статистично достовірно знижений (р