Спосіб імуноферментного визначення до вірусу інфекційного ларинготрахеїту курей

Спосіб імуноферментного визначення до вірусу інфекційного ларинготрахеїту курей у сироватці крові за допомогою ІФА, що включає внесення 3 30089 4 За результатами дослідів по виявленню антитно-індикаторної суміші, яку готували таким чином: тіл до вірусу інфекційного ларинготрахеїту курей у 10мл 0,2моль/л цитратно-фосфатного буферу за допомогою антигену визначено, що розведення розчиняли 4 мг ортофенілендіаміну і вносили компонентів запропонованим розчином та внесен0,4мл 30% розчину Н2О2. Планшети витримували ня запропонованого блокуючого розчину дозволяє 7 хвилин у темному місці при кімнатній температууникнути неспецифічних реакцій, збільшити чутлирі. Реакцію зупиняли внесенням у кожну лунку по вість імунохімічних реакцій, уніфікувати склад бу0,05мл 10% сірчаної кислоти. феру та блокуючого розчину і, разом з тим, знизиПриклад. ти собівартість аналізу. Для експериментальної перевірки заявленого Для проведення досліджень використовували способу був приготовлений буфер: полістиролові планшети, розчин антигена, позитиNa2HPO4 х 12Н2О 5,16г розчиняли у 72мл Н2О вні сироватки крові птиці, які утримували б антитіNaH2PO4 х 2Н2О 0,9г розчиняли у 28мл Н2О ла до антигену, негативну сироватку, яка не містиОбидва розчини об'єднували, додавали 11,6г ла антитіла до вірусу інфекційного NaCl і після його розчинення доводили об'єм буларинготрахеїту, кон'югат антивидових антитіл із фера до 2000мл дистильованою водою. пероксидазою хрону. Результати щодо використання сольового роСпосіб виконується таким чином: зчину при постановці імуноферментного аналізу У лунки полістиролових планшетів вносили (розведення компонентів, відмивання лунок) і блоантиген, розведений в карбонатному буфері з рН куючого розчину та їх переважності в порівнянні з 9,5-9,6, інкубували протягом 18 годин при 4°С. прототипом наведені в таблицях 1,2. Компонент, що не сорбувався, відмивали заОблік результатів проводили інструментально пропонованим фосфатним буфером і розчином, за допомогою аналізатора імуноферментного фощо використовується в прототипі. Далі вносили по тоелектричного АІФ-М/340 при довжині хвилі 0,1мл 10% - аглобулінової сироватки і розчин, що 492нм. використовується в прототипі. Планшети витримуЯк видно із даних таблиць №1 і №2, показники вали 1 годину за кімнатної температури. Потім у ІФА при використанні запропонованих фосфатного лунки вносили контрольні та дослідні сироватки у буфера та блокуючого розчину перевищують за відповідних розведеннях з використанням запроактивністю показники прототипу, де використовупонованого фосфатного буферу та розчину, що ються тріс буфер та 10% сироватка коней. використовують у прототипі і витримували 2 годиНа підставі одержаних результатів можна зрони при 37°С. Після інкубування лунки планшетів 3бити висновок, що спосіб визначення антитіл до 4 рази відмивали запропонованим розчином та вірусу інфекційного ларинготрахеїту в сироватці розчином, що використовували в прототипі. крові за допомогою ІФА з використанням недороВиявлення комплексу антиген-антитіло провоговартісного сольового фосфатного буферу як дили шляхом внесення в лунки кон'югату антивирозчинника та аглобулінової сироватки як блокуюдових антитіл з ферментом пероксидазою хрону, чого розчину за активністю реакції є більш чутлиінкубували 1 годину в термостаті і відмивали. Повим. тім в лунки планшету додавали по 0,1мл субстраТаблиця 1 Спосіб імуноферментного визначення антитіл до вірусу інфекційного ларинготрахеїту курей АВС+ D+ Е F G Н 1 0.425 0.431 1.243 0.990 0.080 0.085 0.075 0.080 2 0.394 0.377 1.191 1.053 0.085 0.085 0.075 0.080 3 0.355 0.342 0.910 0.957 4 0.365 0.340 0.900 0.902 5 0.345 0.320 0.890 0.896 6 0.330 0.310 0.860 0.833 7 0.335 0.315 0.846 0.828 8 0.325 0.309 0.831 0.811 9 0.320 0.300 0.812 0.799 10 0.290 0.286 0.804 0.756 11 0.285 0.279 0.796 0.743 12 0.270 0.270 0.745 0.717 5 30089 6 Таблиця 2 Спосіб імуноферментного визначення антитіл до вірусу інфекційного ларинготрахеїту курей АВС+ D+ Е F G Н 1 0.399 0.400 1.100 0.997 0.075 0.060 0.065 0.070 2 0.400 0.389 0.999 0.989 0.060 0.060 0.065 0.070 3 0.388 0.378 0.949 0.929 Комп’ютерна верстка М. Мацело 4 0.363 0.350 0.921 0.905 5 0.348 0.340 0.900 0.899 6 0.321 0.333 0.870 0.884 7 0.310 0.307 0.880 0.873 8 0.300 0.299 0.875 0.870 Підписне 9 0.279 0.281 0.850 0.843 10 0.268 0.276 0.830 0.827 11 0.262 0.260 0.820 0.816 Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 12 0.259 0.244 0.756 0.864