Спосіб виявлення атопічної реактивності у дітей в стані клінічного благополуччя

Спосіб виявлення атопічної реактивності у дітей в стані клінічного благополуччя шляхом дослідження проби крові, який відрізняється тим, що після інкубірування проби крові з нітросинім тетразолієм без пірогеналу та з його додаванням, визначають кількість формазанпозитивних еозинофілів, які враховують, поряд з відносним вмістом еозинофільних лейкоцитів крові, при обчисленні сумарного коефіцієнту показників еозинофілів крові (СКПЕк), та при його значеннях 3,0 та більше діагностують наявність атонічної реактивності у дитини. (19) (21) 98010220 (22) 15.01.1998 (24) 15.11.2000 (33) UA (46) 15.11.2000, Бюл. № 6, 2000 р. (72) Безруков Леонід Олексійович, Богуцька Наталія Казимірівна, Колоскова Олена Костянтинівна, Ластівка Ірина Володимирівна, Ященко Юрій Борисович, Дмитришин Анатолій Андрійович, Гінгуляк Микола Георгієвич (73) НАУКОВО-ДОСЛІДНИЙ ІНСТИТУТ МЕДИКОЕКОЛОГІЧНИХ ПРОБЛЕМ МОЗ УКРАЇНИ, БУКОВИНСЬКА ДЕРЖАВНА МЕДИЧНА АКАДЕМІЯ 30180 еозинофілів крові (СКПЕк), компонентами якого виступає не тільки відносний вміст цих гранулоцитів у крові, але й показники їх кисневозалежного метаболізму у вигляді результатів тесту з нітросинім тетразолієм (НСТ-тест) в його спонтанному та стимульованому варіантах. Ця відмінність дозволяє зробити висновок про відповідність технічного вирішення, що заявляється, критерію "новизна". Суттєва ознака, яка відрізняє технічне вирішення, від прототипу, не виявлена у інших технічних вирішеннях при вивченні даної та суміжних галузей науки та, таким чином, забезпечує відповідність способу, критерію "суттєва відмінність". Спосіб здійснюють наступним чином. Оцінку кисневозалежної метаболічної активності еозинофілів крові, з врахуванням їх стимуляції пірогеналлом, проводять за НСТ-тестом, який виконується за методом Park B.H. та співавт. (Park B.H., Fikrmg S.M., Smithwick B.M. Infection and uitroblue tetrasolium reduction by neufrophils: a diagnostic aid. // Lancet. - 1968. - VoL 11. - P. 534-536) у модифікації Маянського А.Н. та співавт. [Маянский А.Н., Виксман М.Е., Котельников П.Н., Молчанов И.В. Характеристика функциональной активности нейтрофилов крови человека с помощью реакции восстановления нитросинего тетразолия. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1977. – N 6.- С. 108-111). Дві проби крові по 0,5 мл вміщують у сіліконізовані пробірки зі 100 ОД, гепарину в кожній. У першу пробірку додають 0,2 мл пірогеналу (бактеріальний ліпосахарид) у фосфатному буфері при рН 7,2. Через 5 хвилин у обидві пробірки додають по 0,5 мл 0,1% розчину нітросинього тетразолія у фосфатному буфері при рН 7,2 та інкубірують у термостаті при температурі 37°С протягом 30 хвилин. Після центрифугування із швидкістю 1000 g протягом 5 хвилин з верхнього шару осаду кожної пробірки готують по 3 мазкі, які висушують на повітрі, потім фіксують метанолом протягом 10 хвилин. Мазки для ідентифікації еозинофільних гранулоцитів профарбовують реактивом Піралішвілі протягом 40-50 секунд. Реакцію оцінюють при мікроскопіруванні (збільшення 900, об'єктив 90, окуляр 10) у 50 еозинофілах. В залежності від вмісту гранул нерозчинного формазану виділяють три ступені вираженості НСТ-тесту: 0 ступінь - цитоплазма еозинофілів без гранул, І ступінь - мікрогранули займають 1/4-1/3 цитоплазми, ІІ ступінь - гранули займають більше, ніж половину цитоплазми, ІІІ ступінь - гранули заповнюють всю цитоплазму. Результати реакції виражають у відсотках формазанпозитивних клітин. Сумарний коефіцієнт показників еозинофілів крові (СКПЕк) розраховують наступним чином: СКПЕк = жи. Токсикология. Проблемы подросткового возраста. Лабораторные тесты) Пер. с англ. – 2-ое изд. - М.: Медицина, 1994. - С. 500); 12 - середнє значення спонтанного НСТ-тесту еозинофілів крові у дітей контрольної референтної групи (% формазанпозитивних клітин). У тих випадках, коли СКПЕк складає 3,0 та більше, діагностують наявність атонічної реактивності організму у дітей, що знаходяться на момент обстеження у стані повного клінічного благополуччя. Діагностичні критерії способу виявлення атопічної реактивності у дітей в періоді клінічного благополуччя, наступні: специфічність його складає 93%, чутливість способу - 33%. Показник валідності способу, який обчислюється як різниця між сумою чутливості і специфічності та 100%, складає 26%. У дітей за умов наявності у них показника СКПЕк більше 3,0 відношення ризику алергологічної обтяженості спадкового анамнезу збільшується у 4,2 рази (c2=4,7; Р