Спосіб визначення тканинної фібринолітичної активності у молодих і старих щурів
Номер патенту: 30962
Опубліковано: 25.03.2008
Автори: Самараш Василь Семенович, Магаляс Віктор Миколайович, Висоцька Віолетта Георгієвна, Пішак Василь Павлович, Дікал Мар'яна Вікторівна
Формула / Реферат
Спосіб визначення тканинної фібринолітичної активності у молодих і старих щурів, що включає використання азофібрину в інкубаційній системі, яка містить гомогенати тканини, який відрізняється тим, що в інкубаційне середовище додається відома кількість плазміногену, азофібрину і гомогенати тканини, причому оцінку фібринолітичної активності проводять спектрофотометричним визначенням азобарвника, який вивільняється при лізисі азофібрину внаслідок інкубації з гомогенатом тканини.
Текст
Спосіб визначення тканинної фібринолітичної активності у молодих і старих щурів, що включає використання азофібрину в інкубаційній системі, яка містить гомогенати тканини, який відрізняється тим, що в інкубаційне середовище додається відома кількість плазміногену, азофібрину і гомогенати тканини, причому оцінку фібринолітичної активності проводять спектрофотометричним визначенням азобарвника, який вивільняється при лізисі азофібрину внаслідок інкубації з гомогенатом тканини. (19) (21) u200708923 (22) 02.08.2007 (24) 25.03.2008 (46) 25.03.2008, Бюл.№ 6, 2008 рік (72) ВИСОЦЬКА ВІОЛЕТТА ГЕОРГІЄВНА, UA, ПІШАК ВАСИЛЬ ПАВЛОВИЧ, UA, МАГАЛЯС ВІКТОР МИКОЛАЙОВИЧ, UA, ДІКАЛ МАР'ЯНА ВІКТОРІВНА, UA, САМАРАШ ВАСИЛЬ СЕМЕНОВИЧ, UA (73) МАГАЛЯС ВІКТОР МИКОЛАЙОВИЧ, UA (56) 3 (неферментативна фібринолітична активність). Пробірки "СФА" містять 5мг азофібрину, 10 ФО плазміногену (Simko Ltd, Львів); 1мл боратного буферу (рН - 7,4). В пробірки "НФА" крім того додається 20мг e(епсилон)-амінокапронової кислоти, яка пригнічує ферментативний фібриноліз. Дублікати пробірок (РП - розчин порівняння) замість гомогенату додається 0,5мл боратного буферу. Всі пробірки одночасно інкубують у водяному термостаті "ТПС-1" при температурі 37°С протягом 15хв. за цей проміжок часу проходить розпад азофібрину і звільнення азобарвника в інкубаційний розчин відповідно фібринолітичній активності тканин. Після інкубації всі пробірки одночасно охолоджують до 5°С для зупинки лізису азофібрину. В кожну пробірку додається для залужування середовища по 20мкл 5М розчину NaOH. Потім вміст пробірок фільтрується через шар вати, яка знаходиться в шприцах (слід запобігти відновлення піни). На спектрофотометрі (СФ-46) в кюветах 1,0см при довжині хвилі 440нм проти розчину порівняння проводять замір обтичної густини проб. Отримані екстинції перераховують на 1г тканини на 1 годину інкубації за формулою: СФА (НФА)=(Е440´4´100):n(мг)=Е440/г тканини/год; де n - маса наважки органа. Ферментативний фібриноліз (ФФА) визначається як різниця між сумарною та неферментативною активністю тканин. Збільшення часу інкубації не є доцільним, також, як збільшення наважки тканини, оскільки інтенсивність світопоглинання розчину може вийти за межі дозволяючої здатності приладу. Отже, оптимальний час 15хв, оптимальна наважка 10100мг. Отримані дані наведені в Таблиці. В головному мозку у старих щурів СФА була нижчою ніж у молодих тварин майже в 2 рази. НФА зникала, а ФФА - достовірно знижувався. Достовірне зменшення тканинного фібринолізу спостерігається в серці, легенях (тільки НФА), печінках, нирках. Лише в тканинах тонкої кишки змін фібринолітичної активності тканини не спостерігалося. Отже, на відміну від відомого прототипу, при якому не виявлено достовірних змін фібринолітичної активності, при користуванні запропонованим способом відмічено підвищення точності визначення фібринолітичної активності на 72%, що забезпечує даній корисній моделі "позитивний ефект". Відповідність критерію "новизна" забезпечує даній корисній моделі те, що вперше для оцінки фібринолітичної активності використано азофібрин і гомогенати тканин. Той факт, що оцінка фібринолітичної активності проводиться по лізісу азофібрину, при чому звільняється азобарвник, концентрація вимірюється спектрофотометричне і забезпечує вказаному методу відповідність критерію "суттєві відмінності". 30962 4 Стан тканинної фібринолітичної активності (Е 4 у молодих і старих щурів (x±Sx № п/п 1. 2. 3. 4. 5. 6. Тканини Головний мозок: СФА НФА ФФА Серце: СФА НФА ФФА Легені: СФА НФА ФФА Печінка: СФА НФА ФФА Нирки: СФА НФА ФФА Тонка кишка: СФА НФА ФФА Молоді щури (n=16) Старі щу 196,73±25,81 68,72±4,54 128,01±22,98 79,85 0,001± 79,85 273,50±56,32 117,09±22,98 156,41±38,76 70,98 10,75 60,23 57,83±15,26 27,43±5,50 30,38±10,33 26,68 9,99 16,69 26,71±3,19 15,47±1,50 11,24±2,06 11,27 7,91 3,36 93,85±15,07 36,10±1,91 57,67±14,01 32,50 8,33 24,17 55,30±6,56 20,89±2,33 34,41±7,29 48,81 21,93 26,88 р - ступінь достовірності різниць показників; n - число спостережень. Висновок. При користуванні запропонованим способом відмічено підвищення точності визначення фібринолітичної активності на 72%, що вперше для оцінки фібринолітичної активності використано азофібрин та гомогенати тканин, оцінка фібринолітичної активності проводиться по лізісу азофібрину при чому звільняється азобарвник, концентрація вимірюється спектрофотометричне. Мета корисної моделі сформулювати спосіб визначення тканинної фібринолітичної активності у молодих і старих щурів. Поставлена мета досягається тим, що для визначення фібринолітичної активності тканин використовується азофібрин та гомогенати тканин, оцінка фібринолітичної активності проводиться по лізісу азофібрину при чому звільняється азобарвник, концентрація вимірюється спектрофотометрично. Технічне рішення: Під нембуталовим наркозом у щурів сіліконовим шприцем із черевної аорти забрали кров і одразу ж проводили забір тканини (головний мозок, серце, легені, печінку, нирки, тонку кишку). Наважки тканин відмивали від домішок крові в охолодженому боратному буфері (рН - 7,4). Гомогенізацію проводили в скляному гомогенізаторі під візуальним контролем. По 0,5мл 5% гомогенату тканини вносили в 2 ряді пробірок з марками "СФА" (сумарна фібринолітична активність) і "НФА" (неферментативна фібринолітична активність). Пробірки "СФА" Таблиця містять 5мг азофібрину, 10 ФО плазміногену 5 (Simko Ltd, Львів); 1мл боратного буферу (рН-7,4). В пробірки "НФА" крім того додається 20мг e(епсилон)-амінокапронової кислоти, яка пригнічує ферментативний фібриноліз. Дублікати пробірок (РП - розчин порівняння) замість гомогенату додається 0,5мл боратного буферу. Всі пробірки одночасно інкубують у водяному термостаті "ТПС1" при температурі 37°С протягом 15хв. за цей проміжок часу проходить розпад азофібрину і звільнення азобарвника в інкубаційний розчин відповідно фібринолітичній активності тканин. Після інкубації всі пробірки одночасно охолоджують до 5°С для зупинки лізису азофібрину. В кожну пробірку додається для залужування середовища по 20мкл 5М розчину NaOH. Потім вміст пробірок фільтрується через шар вати, яка знаходиться в шприцах (слід запобігти відновлення піни). На спектрофотометрі (СФ-46) в кюветах 1,0см при довжині хвилі 440нм проти розчину порівняння проводять замір обтичної густини проб. Суть даного способу заключається в тому, що спосіб полягає в тому, що відмічено підвищення точності визначення фібринолітичної активності на 72%. Висновок Спосіб визначення тканинної фібринолітичної активності у молодих і старих щурів забезпечується тим, що при користуванні запропонованим способом відмічено підвищення точності визначення фібринолітичної активності на 72%, що вперше для оцінки фібринолітичної активності використано азофібрин та гомогенати тканин, оцінка фібринолітичної активності проводиться по лізісу азофібрину при чому звільняється азобарвник, концентрація вимірюється спектрофотометрично. Відповідність критерію "новизна" забезпечує даній корисній моделі те, що вперше для оцінки фібринолітичної активності використано азофібрин і гомогенати тканин. Той факт, що оцінка фібринолітичної активності проводиться по лізісу азофібрину при чому звільняється азобарвник, концентрація вимірюється спектрофотометрично і забезпечує вказаному методу відповідність критерію "суттєві відмінності". Отже, на відміну від відомого прототипу, при якому не виявлено достовірних змін фібринолітичної активності, при користуванні запропонованим способом відмічено підвищення точності визначення фібринолітичної активності на 72%, що забезпечує даному винаходу "позитивний ефект". Джерела інформації: 1. Братчик A.M. Клинические проблеммы фибринолиза. - К.: Здоров'я. - 1993. -344с. 2. Гоженко А.И. Некоторые общие закономерности формирования патологического процесса в почках // Труды VIII Всесоюзной конфер. по физиологии почек и водно-солевого обмена. - Харков, 1989. - С.50. 3. Жила В.В., Кушнирук В.И. Местный фибринолиз почек. - К: Наукова думка, 1986. 168с. 30962 6 4. Наточин Ю.В. Основи физиологии почек. М.: Медицина, 1982. - 280с.
ДивитисяДодаткова інформація
Назва патенту англійськоюMethod for determination of tissue fibrinolytic activity in young and old rats
Автори англійськоюVysotska Violetta Heorhiivna, Pishak Vasyl Pavlovych, Mahalias Viktor Mykolaiovych, Dikal Mariana Viktorivna, Samarash Vasyl Semenovych
Назва патенту російськоюСпособ определения тканевой фибринолитической активности у молодых и старых крыс
Автори російськоюВысоцкая Виолетта Георгиевна, Пишак Василий Павлович, Магаляс Виктор Николаевич, Дикал Марьяна Викторовна, Самараш Василий Семенович
МПК / Мітки
МПК: G01N 33/48
Мітки: визначення, спосіб, старих, фібринолітичної, щурів, активності, молодих, тканинної
Код посилання
<a href="https://ua.patents.su/3-30962-sposib-viznachennya-tkaninno-fibrinolitichno-aktivnosti-u-molodikh-i-starikh-shhuriv.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Спосіб визначення тканинної фібринолітичної активності у молодих і старих щурів</a>
Попередній патент: Спосіб гасіння пожежі
Наступний патент: Спосіб приготування бісквітного напівфабрикату
Випадковий патент: Ящик полімерний багатооборотний