Спосіб діагностики прогресуючого атеросклерозу

Спосіб диагностики прогресуючого атеросклерозу, що включає забор крові, отримання сироватки, напластовування фізиологічного розчину, центрифугування, видалення сироватки з-під сольового шару, додавання до неї преципітанту, визначення оптичної щільності отриманої суміші, центрифугування, видалення надосадної рідини та розрахунок результатів, який відрізняється тим, що забирають 5 мл крові, отримують 2 мл сироватки, напластовують на неї 0,6 мл фізиологічного розчину, центрифугують 15 хвилин при 8000 g, визначають оптичну щільність виділеної з-під сольового розчину сироватки і додають до неї преципітант у співвідношенні 1:10, визначають оптичну щільність A (54) СПОСІБ ДІАГНОСТИКИ ПРОГРЕСУЮЧОГО АТЕРОСКЛЕРОЗУ 30972 витрат препаратів, що мають велику вартість: глутаміну, канаміцину, сироваточного альбуміну та ін., що в решті знижує можливість його застосування в широкій медичній практиці. Найбільш близьким по технічній суті запропонованому є спосіб діагностики прогресуючого атеросклерозу (див.: Лабораторные методы для дифференцированного назначения и оценки эффектов противоатеросклеротических средств / О.Н. Воскресенский, В.А. Туманов // Антиопротекторы. – 1982. - С. 94-96), який полягає в тому, що з 10 мл крові, взятої натщесерце, отримують 5 мл сироватки, на яку шприцом напластовують фізіологічний розчин в кількості 1,4 мл. Потім центрифугують 10 хв при 10000 g. Сироватку шприцом відсосують з-під сільового шару та вимірюють в ній сумарну кількість ліпопротеідів низької та дуже низької щільності. Таким чином до 4 мл 0,025 М розчину СаСІ2 (преципітант) добавляють 0,4 мл сироватки та визначають оптичну щільність на ФЕК в кюветі 0,5 см при 700 нм проти води. Потім добавляють 0,08 мл 1% розчину гепарину, суміш перемішують та через 4 хвилини визначають оптичну щільність в тих же умовах. Вміст кювет після визначення центрифугують при 1500 g 10 хвилин. Видаляють надосадну рідину, а осад розчинюють в 3 мл 5% NaCI. Оптичну щільність вимірюють на спектрофотометрі (232 нм, кювета 1 см) проти води. Вміст гідроперекисів ліпідів дають в одиницях екстінкції на мілілітр сироватки крові або на кількість ліпопротеїдів низької та дуже низької щільності. Кількість гідроперекисів ліпідів низької та дуже низької щільності оцінюють згідно того, що в нормі вміст гідроперекисів ліпідів в ліпопротеідах низької та дуже низької щільності є 1,08-5,40 DД232/мл крові, в той час, коли у хворих на прогресуючий атеросклероз цей показник вищий за 5,40 DД232/мл крові. Однак і цьому способу притаманні слідуючі недоліки: по-перше, використовується значна кількість сироватки крові; по-друге, визначається вміст тільки гідроперекисів ліпідів без урахування змін ліпопротеідної молекули в цілому, проте як останнє відіграє важливу роль в придбанні ліпопротеідами атерогенних властивостей. Дані обставини ведуть до зниження точності, та тим самим до зниження ефективності діагностики та лікування прогресуючого атеросклерозу. В основу винаходу поставлена задача удосконалення способу діагностики прогресуючого атеросклерозу, в якому з 5 мл крові отримують 2 мл сироватки, в ній визначають оптичну щільність ліпопротеідів низької та дуже низької щільності, кількість дієнових кон'югатів і по формулі розраховують індекс перекисної модифікації ліпопротеідів низької та дуже низької щільності, що дозволяє скоротити трудоємкі операції, зменшити кількість вихідного матеріалу, визначити в ліпопротеідах низької та дуже низької щільності вміст продуктів переокислення ліпідів та білків з дієновим зв'язком, та тим самим підвищити точність діагностики, що сприяє підвищенню ефективності лікування хворих на прогресуючий атеросклероз. Поставлена задача досягається тим, що з 5 мл крові, взятої натщесерце, отримують 2 мл сироватки, на яку шприцом напластовують 0,6 мл фізіологічного розчину та центрифугують 15 хв при 8000 g. Сироватку обережно шприцом видаляють з-під сільового шару та в ній визначають кількість ліпопротеідів низької та дуже низької щільності. Для цього вимірюють оптичну щільність сироватки при довжині хвилі 700 нм в кюветі 0,5 см проти води (д1). Додають до неї преципітант, наприклад, фірми "Cormay", у співвідношенні 1:10, та через 15 хвилин визначають оптичну щільність в тих же умовах проти води (д 2). Різниця д2-д1 (Д1) визначає оптичну щільність ліпопротеідів низької та дуже низької щільності. Потім вимірюваний розчин центрифугують 15 хвилин при 4000 g. Надосадну рідину зливають. В осад добавляють суміш гептанізопропіловий спирт (1:1) у співвідношенні 1:5. Струшують протягом 15 хвилин. Потім пробицентрифугують 10 хв при 4000 g. Відбирають надосадну фракцію і додають до неї воду у співвідношенні 10:1. Після струшування та розділу фракцій, відбирають верхню фракцію. До нижньої фракції додають етиловий спирт у співвідношенні 1:5. Оптичну щільність отриманого розчину вимірюють на спектрофотометрі (дейтерієва лампа) при 232 нм в кюветі 1 см (Д2). В якості контролю використовують екстрагуючий розчин (гептан-ізопропіловий спирт). Розрахунок індексу перекисної модифікації ліпопротеідів низької та дуже низької щільності виконують за слідуючою формулою: Д ІПМ АЛП= 2 × 10 , Д1 де: ІПМАЛП - індекс перекисної модифікації ліпопротеідів низької та дуже низької щільності Д1 - оптична щільність ліпопротеїдів низької та дуже низької щільності Д2 - оптична щільність дієнових кон'югатів, і при індексі перекисної модифікації ліпопротеідів низької та дуже низької щільності, що дорівнює 2,5 та вище діагностують прогресуючий атеросклероз. Спосіб пояснюється слідуючими прикладами. Приклад 1 Хворий К., 52 роки, діагноз: ішемічна хвороба серця, стенокардія напрягу, атеросклероз. Коронарографія зафіксувала атеросклеротичний стеноз коронарних артерій без подальшого прогресування. По вищеописаному способу було проведено дослідження. Отримані слідуючі результати: д1 0,046, д2 - 1,562, Д1 - 1,516, Д2 - 0,148. Розрахунок [0,148:(1,562-0,046)]´10=1,71. Індекс перекисної модифікації ліпопротеідів низької та дуже низької щільності - 1,71, що становить норму. Приклад 2 Хворий Б., 49 років, діагноз: ішемічна хвороба серця, стенокардія напрягу, атеросклероз. Коронарографія зафіксувала атеросклеотичний стеноз коронарних артерій, що має тенденцію до збільшення. По вищеописаному способу було проведено дослідження. Отримані слідуючі результати: д1 0,030, д2 - 1,465, Д1 - 1,435, Д2 - 0,370. Розрахунок: [0,370:(1,465-0,030)]´10=2,65. Індекс перекисної модифікації ліпопротеідів низької та дуже низької щільності - 2,65, що є показником прогресуючого атеросклерозу. 2 30972 Приклад 3 Хворий М., 50 років, діагноз: ішемічна хвороба серця, стенокардія напрягу, атеросклероз. Коронарографія зафіксувала атеросклеотичний стеноз коронарних артерій, що прогресує. По вищеописаному способу було проведено дослідження. Отримані слідуючі результати: д1 0,028, д2 - 1,293, Д1 - 1,265, Д2 - 1,536. Розрахунок: [1,536:(1,293-0,028)]´10=9,45. Індекс перекисної модифікації ліпопротеідів низької та дуже низької щільності - 9,45, що є показником прогресуючою атеросклерозу. Треба підкреслити, що коронарографічні дослідження є травматичні та небезпечні для пацієнтів, і показані до використовування не всім хворим на прогресуючий атеросклероз. Так протипоказан ня для цієї процедури мають хворі з значною гіпертрофією міокарду; з стенокардією ІV функціонального класу, з значною серцевою недостатністю та недостатністю кровообігу, а також з тяжкими порушеннями серцевого ритму та ін. В порівнянні з прототипом, запропонований спосіб дозволяє використання меншої кількості досліджуваного матеріалу та підвищує точність діагностики за рахунок того, що в ліпопротеідах низької та дуже низької щільності визначається вміст не тільки переокислених ліпідів, а також продукти переокислення білкової частини молекули ліпопротеідів, що має вирішальне значення в процесі атерогенезу, а тим самим сприяє підвищенню ефективності лікування хворих на прогресуючий атеросклероз. __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2002 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 50 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 3