Спосіб експериментальної локальної демієлінізації корінця трійчастого нерва

Спосіб експериментальної локальної демієлінізації корінця трійчастого нерва, який включає мікрохірургічний доступ до корінця трійчастого нерва експериментальних тварин і введення спеціальної речовини, який відрізняється тим, що використовують гліотоксичну сполуку, а саме аплікацію волокнистого тефлону на ділянку входу корінця трійчастого нерва, при цьому волокнистий тефлон змочують розчином броміду етидію з концентрацією 0,1 % та об'ємом 1 мікролітр. (19) (21) u200710235 (22) 14.09.2007 (24) 25.03.2008 (46) 25.03.2008, Бюл.№ 6, 2008 рік (72) ЧОМОЛЯК ЮРІЙ ЮРІЙОВИЧ, UA, МАЛИШЕВА ТЕТЯНА АНДРІЇВНА, UA, СМОЛАНКА ВОЛОДИМИР ІВАНОВИЧ, UA, ЧОМОЛЯК ГАННА МИХАЙЛІВНА, UA (73) УЖГОРОДСЬКИЙ НАЦІОНАЛЬНИЙ УНІВЕРСИТЕТ, UA (56) 3 ділянок нервової системи. При цьому важко відтворити локальну демієлінізацію саме ділянки входу трійчастого нерву. Завдання корисної моделі полягає в розробці способу локальної демієлінізації корінця трійчастого нерва в експерименті. Поставлене завдання досягається таким чином, що спосіб експериментальної локальної демієлінізації корінця трійчастого нерва, який включає мікрохірургічний доступ до корінця трійчастого нерва експериментальних тварин і введення спеціальної речовини, який, згідно корисної моделі, відрізняється тим, що використовують гліотоксичну сполуку, а саме аплікацію волокнистого тефлону на ділянку входу корінця трійчастого нерва, при цьому волокнистий тефлон змочують розчином броміду етидію з концентрацією 0,1% та об'ємом 1 мікролітр. Спосіб виконують наступним чином. Приклад Після знечулення розчином кетаміну 5%-0.5, обробки операційного поля та інфільтрації останнього розчином лідокаїну 2% проводився мікрохірургічний доступ до корінця трійчастого нерву морської свинки. Під час візуалізації трігемінального корінця поряд з ділянкою входу останнього у стовбур мозку встановлювався волокнистий тефлон розміром ~ 3х4мм. Виконувалася ін'єкція тефлону бромідом етидію 0,1% - 1 мікролітр. Запропонований спосіб дозволяє виконувати дослідження демієлінізації та ремієлінізації корінця трійчастого нерва експериментальних тварин. Порівняно з близькими методами наша розробка володіє наступними перевагами: Забезпечує локальну демієлінізацію корінця трійчастого нерву експериментальних тварин. Дає можливість відтворювати сегментарний тип демієлінізації, тобто пошкодження мієлінової оболонки при збереженні структурної цілісності осьових циліндрів. Дозволяє використовувати експериментальну модель тривалий час, проводити повторні хірургічні втручання (хронічний експеримент). Прооперовано 32 морські свинки із використанням вказаного способу. Морфологічні дослідження проводились на світлооптичному та субмікроскопічному рівнях. Вивчалися структурні зміни стовбуру мозку, ділянок корінця трійчастого нерву та його ганглія. Для мікроскопічних досліджень головний мозок експериментальних тварин, після декапітації, виймався з порожнини черепа, фіксувався в розчинах нейтрального формаліну зростаючої концентрації (5-7-10%), проходив заливку в парафін. Мікротомні зрізи (5мкм) фарбували оглядовими та спеціальними методиками (гематоксілін-еозін, гематоксілінпікрофуксин), тіоніном по Ніслю, методом Кульчицького, Суданом III (метод Горделадзе). Для електронномікроскопічних досліджень тканина головного мозку бралася на протязі п'яти хвилин після декапітації. Шматочки тканини мозку оброблялись за стандартними методиками і заливались в епоксидні смоли. Ультратонкі зрізи 30972 4 товщиною 600А виготовлялись на ультротомах ЛКБ і Рейхардт. Для підвищення контрастності дофарбовувались по Рейнтгольдсу і продивлялись в електронному мікроскопі ЕМ-400Т фірми "Філіпс". Ідентифікація процесів, що спостерігались в клітинах головного мозку, проводилась за допомогою морфометричноі обробки електронограм на системі аналізу зображень IBAS - 2000 фірми "Оптон" (ФРГ) по наступним критеріям: діаметри осьових циліндрів, рівномірність товщини мієлінових оболонок. Морфологічне дослідження ділянки пошкодженого нерва виявило досить істотні дистрофічно-дегенеративні зміни клітин Шванна оболонок нервових волокон. Спостерігався різкий фокальний периаксональний набряк з утворенням "колосовидних" структур - вогнищ демієлінізації (Фіг.1). Дані електронної мікроскопії отриманих препаратів вказували на розшарування та фрагментацію мієлінових оболонок при збереженні аксонів (Фіг.2). Фрагменти корінця тварин дослідної групи дослідження на відміну від групи контролю характеризувалися значною площею (проекційно відповідній місцю операції) та ступенем демієлінізації: виразний інтраламілярний та периаксональний набряк. Значна кількість (поява відносно норми) мієлінових оболонок з хвилястими та спіралеподібно закрученими та фрагментованими ламелами (Фіг.2). Корисна модель призначена для моделювання локальної демієлінізації корінця трійчастого нерву та способів відновлення нерву. Джерела інформації: 1. Moulin DE, Foley KM, Ebers GC. Pain syndromes in multiple sclerosis // Neurology. - 1988. Vol.38. - P.1830-1834. 2. Coffey RJ, Fromm GH. Familiar trigeminal neuralgia and Charcot-Marie-Tooth neuropathy. Report of two families and review // Surgical Neurology. - 1991. - Vol.35. - P. 49-53. 3. Love S., Coakham H.B. Trigeminal neuralgia: pathology and pathogenesis // Brain. - 2001 - Vol. 124, №12. - Р.2347-2360. 4. Hrvoje Miletic. Німеччина. Патент №WО 2005/053751 від 16.06.2005: Animal model for experimental allergic neuritis and uses there of. прототип. 5 30972 6