Спосіб одержання біологічно активної субстанції рослинного походження з анаболічною дією

Спосіб одержання біологічно активної субстанції рослинного походження з анаболічною дією шляхом двоступеневої екстракції рослинної сировини гарячою водою протягом відповідно 2 годин та 0,5 години з подальшою фільтрацією та упарюванням об'єднаних екстрактів до густої консистенції з вмістом сухого залишку 65-75 %, який відрізняється тим, що екстракції піддають траву сої щетинистої у стадії цвітіння при загальному співвідношенні сировини і екстрагенту 1:39-1:41 та постійно підтримуваній температурі 100-105 °С. (19) (21) u200800470 (22) 14.01.2008 (46) 25.06.2008, Бюл.№ 12, 2008 р. (72) КАРПЮК УЛЯНА ВОЛОДИ МИРІВН А, U A, ЄРЬОМЕНКО РИ ММА ФУ АТІВНА, U A, ГРИЦЕНКО ВІТА ІВАНІВН А, U A, КИСЛИЧЕНКО ВІКТОРІЯ СЕРГІЇВНА, U A, МАЛОШТАН ЛЮДМИЛА МИКОЛАЇВНА, U A, ШАТАЛОВА ОКС АН А МИХАЙЛІВН А, UA, ГЛАДУ Х ЄВГЕН ВОЛОДИМИРОВИЧ, UA (73) НАЦІОН АЛЬНИЙ ФАРМАЦЕВТИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ, UA 3 33401 помірний рівень анаболічної активності, проблематичність видобування кореневищ з коренями пирію повзучого. Завданням корисної моделі є створення нового способу одержання біологічно активної субстанції рослинного походження з анаболічною дією шляхом екстракції трави сої щетинистої у стадії цвітіння водою при заданих параметрах способу, в результаті чого одержують субстанцію з вираженою анаболічною дією, не токсичну, без побічних ефектів, яка може бути використана як активна діюча речовина лікарських засобів аналогічного призначення, виконаних у різних лікарських формах. Поставлене завдання вирішується таким чином, що у способі одержання біологічно активної субстанції з анаболічною дією шляхом двоступеневої екстракції рослинної сировини гарячою водою, протягом відповідно 2 годин та 0,5 години з подальшою фільтрацією та упарюванням об'єдна 4 них екстрактів до густої консистенції з вмістом згідно з винаходом передбачено, що в якості рослинної сировини використовують траву сої щетинистої у стадії цві тіння, екстракцію проводять при температурі 95-105°С при співвідношенні сировина:екстрагент 1:39-1:41, а сушці піддають відокремлену надосадову рідину. В якості рослинної сировини вибрана трава сої щетинистої у стадії цвітіння. Саме ця стадія вегетації даної рослинної сировини характеризується максимальним накопиченням різноманітних біологічно активних речовин, зокрема таких, які обумовлюють анаболічну дію субстанції, одержаної за заявленим способом. Вибір екстрагента та його температури було здійснено експериментальним шляхом, виходячи з кількості одержаних екстрактивних речовин, вартості та екологічної безпечності екстрагента. Фрагмент результатів проведених дослідів наведено у таблиці 1. Таблиця 1 Вибір екстрагента Екстрагент Вода 44-46°С Вода 95-105°С Вихід екстрак25,53±0,3 29,93±0,25 тивних речовин, % спирт 30% спирт 50% спирт 70% спирт 96% 25,92±0,17 25,59±0,4 23,51±0,27 11,27±0,4 Дані таблиці 1 свідчать, що оптимальним з безпечності експерименту є вода 95-105°С. Такий екстрагент є дешевим, доступним та екологічно безпечним. Співвідношення сировини екстрагент 1:39-1:41 знайдено експериментально та є оптимальним для даного виду сировини. Менша кількість екстрагенту не дозволяє ефективно провести екстракцію, окрім того, виникають труднощі технологічного характеру при обробці великої кількості сировини. Надмірна кількість екстрагенту нераціональна тому, що екстракція повністю здійснюється заявленою кількістю екстрагенту. Збільшення останнього веде до зниження концентрації екстракту та, як слідство, до збільшення енергетичних витрат та часу при упарюванні такого екстракту. Заявлений спосіб здійснюють наступним чином. Траву сої щетинистої у стадії цвітіння висушують, подрібнюють та для найбільш повного вилучення біологічно активних речовин з сировини одну і ту ж порцію сировини двічі екстрагують дистильованою водою підігрітою до 100-105°С при загальному співвідношенні сировини: екстрагент 1:39-1:41. Першу екстракцію проводять протягом 2 годин при постійній температурі, а шрот для найбільш повного вилучення біологічно активних речовин повторно екстрагують протягом 30 хвилин. Отримані екстракти об'єднують. Надосадову рідину відфільтровують, з використанням бажано мембранного фільтру і упарюють до густого залишку з вмістом сухи х речовин 65-75%. В результаті здійснення заявленого способу одержують субстанцію у вигляді густого розчину темно-коричневого кольору, солодкуватого на смак, з приємним запахом, легко розчинного у во ді, практично нерозчинного у спирті етиловому 96°С. Вихід екстрактивних речовин 32,4-32,5% від повітряне сухої сировини. Корисна модель ілюструється прикладами. Приклад 1. 100г висушеної, подрібненої трави сої ще тинистої стадії цві тіння завантажили у екстрактор і залили 3000мл дистильованої води підігрітої до 100°С при співвідношенні сировина:екстаргент 1:30. Сировину екстрагували на водяній бані протягом 2 години. Одержаний екстракт злили. Вихід екстрактивних речовин першої екстракції склав 19,0г. Ту саму порцію сировини вдруге залили 1000мл води дистильованої у співвідношенні сировина:екстаргент 1:10 та екстрагували протягом 30 хвилин. Вихід екстрактивних речовин після другої екстракції склав 10,2г. Обидва екстракти об'єднали (4л), піддали фільтрації на мембранному фільтрі та упарили до густої консистенції з вмістом сухи х речовин 70%. Загальний вихід екстрактивних речовин склав 29,2г, тобто 32,44% від повітряне сухої сировини. Приклад 2. З метою вивчення специфічної фармакологічної активності субстанції сої щетинистої, одержаної за заявленим способом, вивчали її анаболічну дію на моделі примусового плавання з навантаженням на статево незрілих щурах. [Фармакологическая коррекция утомления / Ю.Г. Бобков, В.М. Виноградов, В.Ф. Катков и др. - М.: Медицина, 1984 207 с.; Доклинические исследования лекарственных средств (методические рекомендации) Под ред. А.В. Сте фанова. Киев, 2002. - 568 с.] Як інтегральні критерії анаболічної дії було обрано: приріст загальної маси тіла та литкового м'язу дослідних тварин по відношенню до інтакт 5 33401 ного контролю, вміст загального білка у тканинах внутрішніх органів та литковому м'язі, вміст сечовини у сироватці крові та у сечі. Досліди проводились на білих нелінійних щурах обох статей масою 60±5. Тварин поділили на 4 групи (по 8 голів у кожній) та протягом всього досліду (28 днів) утримували в умовах віварію на традиційному водно-харчовому раціоні. Групи характеризували наступним чином: 1 - інтактний контроль, 2 - тварини, що одержували біологічно активну субстанцію за заявленим способом у дозі 100мг/кг. 3, 4 - тварини, що одержували препарати порівняння, а саме «Елькар» (20% розчин левокарнініну) та калію оротат відповідно [Машковский 6 М.Д. Лекарственные средства: В 2-х т. - Т. 1-2. М.: Высшая школа, 2003. - 358 с.]. На 28-му добу від початку експеримента всіх тварин зважували та виводили з експерименту шляхом декапітації під тіопенталовим наркозом, після чого препарували та визначали масу внутрішніх органів (печінка, серце) та литкового м'язу. У тканині скелетних м'язів (литкова) та тканині печінки і серця визначали вміст загального білку за методом Лоурі, а у сироватці крові та у сечі вміст сечовини з використанням тест-наборів «Lachema». Результати дослідження наведені у таблиці 2. Таблиця 2 Вплив 28-ми денного внутрішлункового введення біологічно активної субстанції трави сої на показники анаболічної дії Вивчаємий показник Маса тіла ви хідна, г Маса тіла наприкінці експерименту, г Приріст маси тіла по відношенню до вихідної маси, % (у кілька разів) Приріст маси по відношенню до контролю, г Маса литкового м'язу, г Кількість білка у литковому м'язі, мг/100мг тканини Кількість білка у печінці, мг/100мг тканини Кількість білка у серці, мг/100мг тканини Сечовина у сироватці крові, ммоль/л Сечовина у сечі, ммоль/л Умови експерименту Інтактний конт- Субстанція сої щеЕлькар роль тинистої 61,4±0,6 62,5±1,4 61,0±0,6 91,0±2,5 131,0±3,0*** 108±1,3* Калия оротат 61,3±0,6 103,4±1,7* 28,75±2,24 68,5±2,1* 46,75±1,25* 42,1±1,9* 48,2 (1,48) 109,6 (2,1) 77 (1,77) 69 (1,68) 0,154±0,002 0,1б8±0,002* 18,1±0,4 24,6±1,1* ** 21,6±0,8* 19,7±0,4 17,0±0,6 17,2±0,6 4,6 ±0,3 418,4±29,2 23,5±0,6* 24,3±0,8* ** 3,45±0,2* ** 291,1±13,8*** 21,0±0,6* 20,1±0,7* 4,4±0,2 375,7±18,6 18,7±0,5* 18,4±0,6 4,45±0,3 396±20,3 0,163±0,001* 0,154±0,002 * р