Спосіб визначення фагоцитарної активності нейтрофілів

Спосіб визначення фагоцитарної активності нейтрофілів, що включає ліофілізацію свіжих дріжджів Sachfromyces cereevisiae при Т 100°С, витримку їх у киплячій водяній бані протягом 60хв, відмивання у буферному розчині, з доведенням рН до 7,2-7,4, розведення дріжджів Sachfromyces cereevisiae 0,9% розчином NaCl, при співвідношенні об'ємів 1:5, відбір проби периферичної крові, добавку до її необхідної кількості розведених дріжджів Sachfromyces cereevisiae, інкубацію сумі U 2 (19) 1 3 33984 4 ті, адже використання стафілококу штаму 209, як водяній бані на протязі 60хв, відмивання у буферживої одноденної тест-культури мікробного похоному розчині, з доведенням pH до 7,2-7,4, розведження, вимагає ретельних умов стерилізації віддення дріжджів Sachfromyces cereevisiae 0,9% працьованого матеріалу, виготовлення та зберірозчином NaCl, при співвідношенні об'ємів 1:5, гання використовуваної тест-культури, відбір проби периферичної крові, добавку до її застосування дороговартісного обладнання, автонеобхідної кількості розведених дріжджів клавів тощо та інши х ви трат, а залучення одноSachfromyces cereevisiae, інкубацію суміші при денної тест-культури суттєво стримує її лаборатозаданій Т°С на протязі 30хв, формування мазків на рну придатність, внаслідок обмеженого життєвого предметних стеклах, сушіння, фіксацію етаноциклу. лом'96, забарвлення фарбою Гимза-Романівського Найбільш близьким за сукупністю істотних та мікроскопіювання, виявлення в полі зору мікроознак серед об'єктів аналогічного призначення до скопа 100 нейтрофілів, визначення відсотка резодійсної корисної моделі є спосіб визначення фагорбції Sachfromyces cereevisiae нейтрофілами, сецитарної активності нейтрофілів, що включає ліореднього числа їх поглинання кожним фагоцитом і філізацію свіжих дріжджів Sachfromyces оцінку стану фагоцитарної активності нейтрофілів cereevisiae, як тест-культури, при Τ 100С°, витримна їхній основі, відповідно до корисної моделі, доку у киплячій водяній бані на протязі 60хв, відмидатково до 3мл досліджуваної крові послідовно вання у буферному розчині з доведенням до 7,2додають 0,2мл гепарину і 0,05мл суспензії дріж7,4 pH, розведення 0,9% розчином NaCl, при співджів Sachfromyces cereevisiae, інкубацію суміші відношенні об'ємів 1:5, відбір проби периферичної здійснюють при Τ 37°С, в умовах струшування крові, добавку до її необхідної кількості 1мл серечерез кожні 5хв, а перед формуванням мазків її прохолоджують проточною водою та центрифугудовища Ігла (2 ´106), 10% розчину сироватки зародка корови, 100мл розведених дріжджів ють зі швидкістю 1500об/хв на протязі 5-7хв, видаляють надосадову рідину, ресуспензують осад, Sachfromyces cereevisiae, інкубацію цієї суспензії відбирають 0,2мл від залишку і доводять в ньому при кімнатній Т°С протягом 30хв, формування маспіввідношення клітин дріжджів і фагоцитів до зків на предметних стеклах, сушку, фіксацію ета10:1. нолом'96, забарвлення фарбою ГимзаРоманівського, їх мікроскопіювання, виявлення в Причинно-наслідковий зв'язок сукупності відмітних ознак дійсного способу з покращенням екополі зору мікроскопа 100 нейтрофілів, визначення номічних і технологічних властивостей процесу відсотка резорбції Sachfromyces cereevisiae нейтполягає в наступному. рофілами, середнього числа їх поглинання 1 фаДоопрацювання режиму інкубації гоцитом і оцінку стану фагоцитарної активності нейтрофілів на їхній основі [2]. Виведення стафіSachfromyces cereevisiae націлене на виключення з використання середовища Ігла та сироватки залококу штаму 209, як живої одноденної тестродка корови, як дороговартісних реактивів, і скокультури мікробного походження, з фагоцитозу, а рочення терміну підготовки мазків до дослідження разом із цим, і дороговартісного обладнання, дещо фагоцитарної активності нейтрофілів. покращує технологічні властивості прототипу, а також дозволяє реалізувати як економічні, так і Послідовне додавання до 3мл досліджуваної крові 0,2мл гепарину і 0,05мл суспензії дріжджів певні експлуатаційні переваги. Це зумовлене можSachfromyces cereevisiae до досліджуваної крові ливістю довготривалого зберігання Sachfromyces скорочує термін і процедуру підготовки мікрофагів cereevisiae, за умов їх ліофілізації, стерилізації та до реакції фагоцитозу. Інкубація суміші при Τ 37°С, кислотної нейтралізації. Натомість ліофілізація дріжджів дозволяє відтворювати дослідження фаза умов її стр ушування через кожні 5хв зберігає реакцію мазків, а її охолодження проточною водою гоцитарної активності нейтрофілів в лабораторіях, та центрифугування зі швидкістю 1500об/хв на котрі позбавлені спеціального устаткування для протязі 5-7хв дозволяють відділити лейкоцити від стерилізації відпрацьованого матеріалу. Але, екосироватки та зберегти фагоцитарну активність номічні й технологічні властивості прототипу ще залишаються недосконалими, з-поза використання нейтрофілів, а разом із цим, виключити застосування додаткових промоторів реакції. Водночас, середовища Ігла та сироватки зародка корови, як це збільшує термін зберігання препарату до 12 дороговартісних реактивів, а також надмірно тримісяців, що, з урахуванням складності його підговалого терміну підготовки мазків до дослідження, товки та стерилізації, сприяє перевершенню екощо, поряд з підвищеними вимогами до зберігання та стерилізації реактивів, ускладнює дослідження номічних і технологічних власти востей прототипу. Видалення надосадової рідини та її ресуспензуфагоцитарної активності нейтрофілів. вання зумовлює підготовку 0,2мл лейкоцитарної До основи корисної моделі поставлено задачу маси, як оптимально інформативної кількості, до вдосконалити спосіб визначення фагоцитарної оцінки фагоцитарної активності нейтрофілів. Доактивності нейтрофілів периферичної крові, застосування котрого дозволило б шляхом доопрацюведення 0,2мл аналізату до співвідношення 10:1 клітин дріжджів і фагоцитів забезпечує оптимальну вання режиму інкубації дріжджів Sachfromyces редукцію залишкового осаду, з можливістю дифеcereevisiae покращити економічні та технологічні ренційованої оцінки активності нейтрофілів у порівластивості процесу. внянні різних проб, без застосування зайвих проПоставлена задача вирішується тим, що при використанні у відомому способі визначення фамоторів або інгібіторів реакції. Сукупність ознак запропонованого рішення загоцитарної активності нейтрофілів, що включає дачі дозволяє виключити експлуатацію дороговарліофілізацію свіжих дріжджів Sachfromyces тісного обладнання, живих мікробних тест-культур, cereevisiae при Τ 100С°, витримку їх у киплячій 5 33984 6 реактивів, таких як середовище Ігла та 10% сировідсоток поглинання Sachfromyces cereevisiae, ватка зародка корови, зі зниженням собівартості середнє число їх поглинання кожним фагоцитом і дослідження у 5-6 разів. Додаткова перевага над оцінюють фагоцитарну активність нейтрофілів. прототипом зв'язується з можливістю використанПриклад постановки фагоцитозу. Свіжі дріжджі ня способу в лабораторіях, котрі позбавлені умов Sachfromyces cereevisiae піддавали ліофілізації для стерилізації відпрацьованого матеріалу чи при Т 100°С, витримували їх у киплячій водяній залученого обладнання, з технологічним спробані на протязі 60хв, відмивали буфером, доводященням визначення фагоцитарного числа і фагочи pH до 7,3, розводили 0,9% розчином NaCl, при цитарного індексу периферичної крові. співвідношенні об'ємів 1:5. Надалі у центрифужну Тож, сукупність ознак способу визначення фапробірку з 3мл досліджуваної крові послідовно гоцитарної активності нейтрофілів є суттєвою та додавали 0,2мл гепарину і 0,05мл суспензії відповідає критерію «новизна», оскільки має приSachfromyces cereevisiae. Інкубацію суміші здійсчинно-наслідковий зв'язок з перевершенням технінювали при Τ 37°С на протязі 30хв, в умовах чного результату та не випливає з досліджуваного струшування через кожні 5хв, прохолоджували рівня техніки явним чином, відповідно. проточною водою та центрифугували зі швидкістю Відомості, котрі підтверджують можливість 1500об/хв на протязі 6хв. По завершенню видалявідтворення дійсного способу та його «промислову ли надосадову рідину, ресуспензували осад, відпридатність» полягають в наступному. бирали 0,2мл від залишку, доводячи в ньому співДля визначення фагоцитарної активності нейвідношення клітин дріжджів і фагоцитів до 10:1. трофілів залучають проби периферичної крові, Мазки формували на предметних стеклах, висусвіжі ліофілізовані дріжджі Sachfromyces шували, фіксували етанолом'96 та забарвлювали cereevisiae, гепарин 125од, 0,9% розчин NaCl, етафарбою Гимза-Романів-ського. При мікроскопіюнол 96%, фарбу Гимза-Романівського, лабораторванні в полі зору мікроскопа виявляли 100 нейтний термостат ТПС, флюорометр МФТХ-2М і рофілів. З підрахунку, показник резорбції центрифугу зі швидкістю обертання 1500об/хв. Sachfromyces cereevisiae з нейтрофілами, які фаСутність способу визначення фагоцитарної акгоцитують за реакцією, становив 51%, а середнє тивності нейтрофілів полягає в тім, що для здійсчисло їх поглинання кожним фагоцитом - 6,2. Це нення процесу залучають ліофілізовані при Τ відбивало нормальний стан фагоцитарної актив100С° свіжі дріжджі Sachfromyces cereevisiae, що ності (імунного статусу) у конкретній пробі. витримані у киплячій водяній бані на протязі 60хв, Виходячи з наданих тверджень, заявник допувідмиті у буферному розчині й доведені до 7,2-7,4 скає, що вдосконалення відомого способу визнаpH. Надалі Sachfromyces cereevisiae розводять чення фагоцитарної активності нейтрофілів відпо0,9% розчином NaCl, при співвідношенні об'ємів відає критерію «промислова придатність», адже 1:5. Для відтворення реакції фагоцитозу до 3мл перевершення вищезазначеного технічного редосліджуваної крові послідовно додають 0,2мл зультату відбулося на основі засобів, що були вігепарину і 0,05мл суспензії Sachfromyces домі з рівня техніки за подією пріоритету, а його cereevisiae. Інкубацію отриманої суміші здійснюхарактеристика, що зазначена у формулі, визнають при Τ 37°С на протязі 30хв. В період інкубації чає відмінність його від об'єктів аналогічного присуміш піддають струшуванню через кожні 5хв, а значення й межі правового статусу, що дозволяє перед формуванням мазків - прохолоджують у кваліфікувати запропоноване рішення задачі корипроточній воді і центрифугують зі швидкістю оберсною моделлю процесу. тання 1500об/хв на протязі 5-7хв. Потім видаляють Аналоги: надосадову рідину, ресуспензують осад у залиш1. Лабораторные методы исследования в клику, доводячи співвідношення клітин дріжджів і фанике. Справочник. Под ред. проф. В.В.Мечникова. гоцитів до 10:1 у 0,2мл ви хідної суспензії і формуМ.: Медицина, 1987. ють мазки на предметних стеклах, піддаючи їх 2. С.А.Кетшлинский. Н.М.Калинина. Иммуноприродній сушці, фіксації етанолом'96 і забарвлогия для врача. С.-Пб., 1998. ленню фарбою Гимза-Романівського. При мікро3. Ю.И.Иванов, О.Н.Погорелюк. Обработка рескопіюванні мазка в полі зору мікроскопа виявлязультатов медико-биологических исследований. ють 100 нейтрофілів, визначають серед них М.: Медицина, 1990. -217с. Комп’ютерна в ерстка Л.Литв иненко Підписне Тираж 26 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601