Спосіб отримання лікарського препарату з ембріонального мозку

1. Спосіб отримання лікарського препарату з ембріонального мозку, що включає гомогенізацію ембріонального мозку, екстракцію розчинних компонентів і стерилізацію отриманої біологічно активної фракції фільтруванням, який відрізняється тим, що ембріональний мозок заморожують в рідкому азоті, безпосередньо перед використанням розморожують, гомогенізують, виділяють біологіч 34141 Етап 3: стерилізація отриманої фракції на фільтрах з розмірами пор 22 мкм, заморожування та зберігання при температурі -18°С. Етап 4: препарат тестується на його біологічну активність: біологічно активний препарат при додаванні в культур у клітин стріопаллідарного комплексу головного мозку новонароджених щурів в концентрації 15 мкг білку/мл після 24 годин культивування викликає збільшення рівню сумарного білку (за методом Лоурі) у 1,5-2 рази та активності ацетилхолінестерази у 1,5-2 рази. За допомогою запропонованого способу отримання препарату екстракту з ембріонального головного мозку людини досягається збереження нативної структури макромолекул, в результаті чого при додаванні в культур у клітин стріопаллідарного комплексу головного мозку новонародженого щура в концентрації 15 мкг білку/мл після 24 годин культивування спостерігається збільшення рівню сумарного білку (за методом Лоурі) у 1,5 рази та активності ацетилхолінестерази у 1,5 рази. Сутність винаходу ілюструється конкретними прикладами його здійснення і результатами дослідження кінцевого продукту як біологічно активного препарату. Приклад 1. Етап 1: 5 г замороженого в рідкому азоті ембріонального головного мозку людини заливають 10 об'ємами фізіологічного розчину і гомогенізують 13 хвилини до отримання однорідної суспензії. Отриману суспензію центрифугують при 4000 g. Етап 2: супернатант фільтрують крізь мембранні фільтри для виділення фракції з молекулярною масою більше 5 кД та менше 120 кД, в отриманому фільтраті виміряють концентрацію білку (Лоурі) та фізіологічним розчином доводять концентрацію білку до 150 мкг/мл. Етап 3: 50 мл цільового препарату, що містить 7500 мкг білку, стерилізують з використанням фільтрів “Мілліпор” з розміром пор 22 мкм та розливають в ампули по 5-10 мл і заморожують при температурі -20°С. Етап 4: отриманий цільовий продукт перед використанням тестується на наявність біологічної активності: біологічно активний препарат при додаванні в культур у клітин стріопаллідарного комплексу головного мозку новонародженого щура в концентрації 15 мкг білку/мл після 24 годин культивування спостерігається збільшення рівню сумарного білку (за методом Лоурі) у 1,5 рази та активності ацетилхолінестерази у 1,5 рази. Приклад 2. Етап 1: 10 г замороженого в рідкому азоті ембріонального головного мозку людини заливають 10 об'ємами фізіологічного розчину і гомогенізують 1-3 хвилини до отримання однорідної суспензії. Отриману суспензію центрифугують при 4000 g. Етап 2: супернатант фільтрують крізь мембранні фільтри для виділення фракції з молекулярною масою більше 5 кД та менше 120 кД, в отриманому фільтраті виміряють концентрацію білку (Лоурі) та фізіологічним розчином доводять концентрацію білку до 150 мкг/мл. Етап 3: 100 мл цільового препарату, що містить 15000 мкг білку, стерилізують з використанням фільтрів “Мілліпор” з розміром пор 22 мкм та розливають в ампули по 5-10 мл і заморожується при температурі -18°С. Етап 4: отриманий цільовий продукт перед використанням тестується на наявність біологічної активності: біологічно активний препарат при додаванні в культур у клітин стріопаллідарного комплексу головного мозку новонародженого щура в концентрації 15 мкг білку/мл після 24 годин культивування спостерігається збільшення рівню сумарного білку (за методом Лоурі) у 1,5 рази та активності ацетилхолінестерази у 1,5 рази. Приклад 3. Дослідження біологічної активності проводять з використанням культури клітин кори головного мозку людини (клінічний матеріал), куди додають цільовий продукт - комплекс макромолекул з нативною структурою, що тестується в концентрації 15 мкг білку/мл. Після 24 годин культивування в нервовій тканині головного мозку людини збільшується рівень гаммааміномасляної кислоти в 1,5-3 рази. Приклад 4. Дослідження біологічної активності проводять з використанням культури клітин кори головного мозку людини (клінічний матеріал), куди додають цільовий продукт - комплекс макромолекул з нативною структурою, що тестується в концентрації 15 мкг білку/мл. Після 24 годин культивування в нервовій тканині головного мозку людини збільшується активність ацетилхолінестерази в 3-10 разів. Таким чином, отриманий згідно із заявленим способом препарат має властивість збільшувати рівень гаммааміномасляної кислоти та активність ацетилхолінестерази в культурі нервових клітин кори головного мозку людини і може бути застосований при лікуванні захворювань центральної та периферичної нервової систем. Джерела інформації. 1. Машковский М.Д. Лекарственные средства. – Харьков: Торсинг, 1997. – С. 133. 2. П. України № 237631, з № 97020880. 2 34141 __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2001 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 50 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 3