Спосіб моделювання ішемічного пошкодження мозку

Спосіб моделювання ішемічного пошкодження мозку, що включає емболізацію судин, який відрізняється тим, що тваринам у сонну артерію вводять суспензію ізольованих адипоцитів у розчині, що містить 2,8г/л кальцію хлориду та 10г/л твіну. (19) (21) u200805453 (22) 25.04.2008 (24) 11.08.2008 (46) 11.08.2008, Бюл.№ 15, 2008 р. (72) ГРАБОВИЙ ОЛЕКСАНДР МИКОЛАЙОВИЧ, UA, ЯРЕМЕНКО ЛІЛІЯ МИХАЙЛІВН А, U A, ПАНІШИНА НАТАЛІЯ ГРИГОРІВНА, UA 3 34604 теріях виявляються адипоцити, спостерігається дилатація кровоносних мікросудин, периваскулярний набряк. З третьої доби в сенсорній корі виявляються реактивно змінені і дегенеруючі нейроцити. Через 30 діб на верхньо-бічній поверхні ураженої півкулі виявляється дефект тканини або кіста. Прикладами конкретного виконання способу, що пропонується, є дослідження модельованого ішемічного ушкодження мозку у щурів. Піддослідні тварини були поділені на дві групи. Оперативні втр учання здійснювали під внутрішньочеревним тіопенталовим наркозом (50мг/гк). Першу гр упу (контроль) склали 20 щурів, яким в ліву сонну артерію вводили 0,2мл фізіологічного розчину й лігували. Другу гр уп у склали 20 тварин, в сонну артерію яким вводили 0,2мл розчину, що містить 20мл відмитих ізольованих адипоцитів, 2,8мл 10% розчину кальцію хлориду, 10г твіну та 0,9% розчин натрію хлориду до 100мл. Матеріал для дослідження, після евтаназії тварин передозуванням наркотичних засобів, забирали через 1, 3, 10 та 30 діб після початку досліду. Мозок щурів фіксували в 10% нейтральному формаліні при 4°С протягом 24 годин та ущільнювали у парафіні. Гістологічні парафінові зрізи товщиною 7мкм забарвлювали азур II-еозином. Гістологічні препарати вивчали візуально і морфометрично. Визначали питому кількість змінених нейроцитів у сенсомоторній корі темпоральної долі головного мозку з боку операції та контрлатеральної. Морфометрію проводили за допомогою дослідницького комплексу з мікроскопом Olympus BX51, цифрової камери Olympus C4040ZOOM, комп'ютера із програмним забезпеченням Olympus DP-Soft 3.2. Отримані цифрові дані оброблялися стандартними статистичними методами. Проведені спостереження показали, що через 1 добу після початку досліду в щурів, яким моделювалася ішемія спостерігається звуження очної щілини з боку операції, тонічна флексія контрлатеральної передньої лапи та її менший супротив поверхні при пасивному руху назад, рух у контрлатеральний бік при утриманні щура за хвіст, тенденція до спонтанного обертання тварин у контрлатеральну сторону при знаходженні на горизонтальній поверхні. Гістологічно в ураженій півкулі мозку іноді виявлятися адипоцити. Кровоносні судини з боку ураження були розширені. Виявлявся значний периваскулярний набряк. Відмічалось гіперхромне забарвлення більшої частини нейроцитів. У щурів контрольної групи спостерігалася звуження очної щілини з боку операції, слабка тонічна флексія контрлатеральної передньої лапи. Гістологічно визначалось розширення помірно окремих мікросудин, іноді незначно виражений периваскулярний набряк. Кількість змінених нейроцитів у сенсомоторній корі щурів з модельованою ішемією складала 87,1±1,6%, а у контрольній групі - 8,1±0,4%. Через 3 доби після початку досліду в щурів, 4 яким моделювалася ішемія спостерігається звуження очної щілини з боку операції, тонічна флексія контрлатеральної передньої лапи та її менший супротив поверхні при пасивному русі назад, рух у контрлатеральний бік при утриманні щура за хвіст. Гістологічно в ураженій півкулі мозку виявлялося розширення кровоносних судини з боку ураження, виражені явища периваскулярного набряку. У щурів контрольної групи неврологічна симптоматика обмежувалася звуженням очної щілини з боку операції. Збоку перев'язаної артерії кількість змінених нейроцитів в корі мозку достовірно не відрізнялася від контлатеральної півкулі. Спостерігалися інколи помірно розширені кровоносні мікросудини та незначний периваскулярний набряк. Практично усі нейроцити у сенсомоторній корі щурів з модельованою ішемією є зміненими, тоді як у контрольній групі кількість змінених нейронів складає 8,8±0,5%. Через 10 діб після початку досліду в щурів, яким моделювалася ішемія, спостерігається зменшення виразності неврологічної симптоматики, рух у контрлатеральний бік при утриманні щура за хвіст виражений слабо, спонтанне обертання тварин у контрлатеральну сторону при знаходженні на горизонтальній поверхні практично відсутнє. В ураженій півкулі мозку зберігається розширення кровоносних судин з боку ураження, периваскулярний набряк зменшується у порівнянні з попереднім строкомспостережень. У щурів контрольної групи зберігалося звуження очної щілини з боку операції. Виявлялися окремі помірно розширені кровоносні мікросудини, периваскулярний набряк практично не визначався. Практично всі нейроцити у сенсомоторній корі щурів з модельованою ішемією зазнають некрозу або знаходяться у стані дегенерації, а у контрольній групі - змінені нейроцити складають 9,6±0,4%. Через 30 діб після початку досліду в щурів, яким моделювалася ішемія, спостерігається звуження очної щілини з боку операції, а інша неврологічна симптоматика є невиразною. В ураженій півкулі мозку виявлялися окремі розширені кровоносні судини, незначно виражений навколо них периваскулярний набряк. На гістологічних препаратах з боку операцій у корі мозку візуально у 3 тварин визначається дефект тканин, а у 2 - кісти заповнені рідиною. Навколо дефекту тканин або кіст у сенсомоторній корі щурів з модельованою ішемією виявляються змінені нейроцити, кількість яких становила 31,7±1,9%, а у контрольній групі - 9,1±0,4%. Таким чином, проведені спостереження показали, що емболізація дрібних артерій головного мозку ізольованими адипоцитами призводить до розвитку ішемічного ушкодження мозку і розвитку в ньому інфаркту. Джерела інформації: 1. Цимбалюк В.І., Бондар Л.В. Спосіб моделювання гострого церебрального ішемічного інсульту у щурів. Патент на винахід №25489А від 30.10.1998р. 5 34604 2. Kogure К., Busto R., Scheinberg P., Reinmuth O.M. Energy metabolites and water content in rat brain during the early stage of development of cerebral infarction //Brain. - 1974. - V. 97. - P.103114. 3. Xue D., Slivka A., Buchan A.M. Tirilazad reduces cortical infarction after transient but not permanent focal cerebral ischemia in rats /Stroke. 1992. - V. 23. - P.894-899. Комп’ютерна в ерстка М. Ломалова 6 4. Zhang Z., Zhang R.L., Jiang Q., Raman S.В., Cantwell L., Chopp M. A new rat model of thrombotic focal cerebral ischemia /J Cereb Blood Flow Metab. 1997. V. 17, N 2. P.123-35. 5. Zhang R.L., Zhang L., Jiang Q., Zhang Z.G., Goussev A., Chopp M. Postischemic intracarotid treatment with TNK-tPA reduces infarct volume and improves neurological deficits in embolic stroke in the unanesthetized rat. Brain Res. - 2000. - V. 878, N 1-2. - P.64-71. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601