Спосіб визначення вторинного імунодефіциту

Спосіб визначення вторинного імунодефіциту шляхом дослідження крові, який відрізняється тим, що як імунологічні показники визначають транспортну функцію альбуміну і по її величині судять про наявність вторинного імунодефіциту. (19) (21) 99116285 (22) 18.11.1999 (24) 16.04.2001 (33) UA (46) 16.04.2001, Бюл. № 3, 2001 р. (72) Наконечна Алла Анатоліївна, Дранник Георгій Миколайович, Кушко Людмила Яківна 36220 нові здібності альбуміну пов'язувати фарбник Конго Червоний. Принцип методу: Конго Червоний преципітують в розчині 8% NaCI, a добавлена сироватка в залежності від кількісних співвідношень оберігає фарбник від преципітуючої дії NaCI - факт, пояснюючи зв'язування фарбника сироватковими білками. Реактиви: 1) 1% водний розчин Конго Червоного, який підлягає фільтруванню через 24 години після розчинення. Зберігається в склянці з темного скла при кімнатній температурі довгий час (місяці). Для роботи використовують 0,1% розчин (розчиняють дистильованою водою перед використанням). 2) насичений розчин NaCI (приблизно 36% водний з нерозчиненими кристалами солі). Хід визначення: до 1 мл сироватки з відомим вмістом альбуміну, попередньо визначеному в реакції з бромкризоловим зеленим, додають 5 мл 0,1% розчину Конго Червоного. Суміш струшують. Через 30 хв. додають 5 мл насиченого розчину NaCI, при цьому, пробірки енергійно струшують. Протягом 24 годин пробірки витримують при температурі 37°С. Після інкубації розчин знову енергійно струшують та фільтрують через два шари фільтрувального паперу. Використовують німецький папір (синій), фільтри повинні мати діаметр 7,0 см. Ці умови фільтрування повинні витримуватись чітко. Фільтрат повинен бути прозорим. Потім 1 мл фільтрату вносять в 4 мл дистильованої води та визначають оптичну щільність розчину на спектрофотометрі при 470 нм. Середня величина значень оптичної щільності у здорових 0,334±0,054 ОД. При використанні 4% розчину бичого кристалічного альбуміну оптична щільність 0,285 ОД. Побудова калібровочної кривої: готують ряд розведень з 1% розчином Конго Червоним після його приготування для роботи (після фільтрування через 24 години після розчину), які містять відповідно 1,0; 0,9; 0,8; 0,7; 0,6; 0,5; 0,4; 0,3; 0,2; 0,1 мг Конго Червоного в 100 мл розчину. Потім вимірюють величину оптичної щільності поглинання, виміряну при 470 нм на спектрофотометрі. На міліметровому папері будують залежність величини оптичної щільності (вісь ординат) від концентрації розчину Конго Червоного (вісь абсцис). Розрахунок зв'язуючої здатності альбуміну: кількість Конго Червоного, який міститься у пробі виявлена по калібровочній кривій, множать на розведення проби та ділять на кількість альбуміну, який міститься у вносимій пробі. Результат визначається в кількості міліграм Конго Червоного, яке зв'язується з міліграмами альбуміну. В нормі це становить 0,054-0,170 мг. Нами по запропонованому способу було обстежено 50 хворих з різною патологією (35 з хронічним персистуючим та хронічним активним гепатитом, 10 з хламідіозом і 5 з хронічним обструктивним бронхітом). Отримані результати обстежених пацієнтів представлені в табл. 1. Виявлено, що транспортна функція альбуміну була знижена в усі х випадках, а кількість альбуміну була знижена у 80% хворих. Серед імунологічних показників найбільш значні зміни відмічались у популяції В-лімфоцитів, кількість яких підвищувалась у середньому на 50%. Спостерігалось також підвищення рівня IgA та IgM на 35-40% та рівня циркулюючих імунних комплексів у 3-4 рази, а також значне зниження імунорегуляторного індексу за рахунок підвищення кількості Т-супресорів/кілерів або зниження Тхелперів (табл. 1). Проводили статистичну обробку отриманих результатів за допомогою методик [4], вираховували коефіцієнт кореляції між найбільш інтегральними показниками: 1) між транспортною функцією альбуміну та імунорегуляторним індексом; 2) між транспортною функцією альбуміну та рівнем циркулюючих імунних комплексів. Підрахунок проводили з допомогою робочих формул при безпосередньому використанні окремих значень х1 та відповідних їм у1. Коефіцієнт кореляції дорівнює 0,91. В результаті статистичної обробки доведена достовірна кореляційна залежність, а саме: 1) між транспортною функцією альбуміну та імунорегуляторним індексом - позитивна кореляція, тобто при зниженні транспортної функції альбуміну знижується імунорегуляторний індекс; 2) між транспортною функцією альбуміну та рівнем циркулюючих імунних комплексів - негативна кореляція, тобто при зниженні транспортної функції альбуміну підвищується рівень циркулюючих імунних комплексів. Отримані результати та проведена статистична обробка дозволяє зробити висновок, що існує достовірний зв'язок між порушеннями транспортної функції альбуміну та змінами в системі імунітету. Після проведення дезінтоксикаційної та симптоматичної терапії у хворих спостерігається підвищення транспортної функції альбуміну і поряд з цим відмічається нормалізація імунологічних показників (табл. 2). Таким чином, нами доведено, що визначення транспортної функції альбуміну може використовуваться для оцінки наявності вторинного імунодефіциту а також для призначення лікування та його оцінки ефективності. Джерела інформації 1. Лебедев К.А., Понякина И.Д. Иммунограмма в клинической практике. – М.: Наука, 1990. – 298 с. 2. Чегер С.И. Транспортная функция сывороточного альбумина. – Бухарест: Изд-во Академии Социалистической республики Румынии, 1975. 3. Толкачев B.C. Связывающая функция сывороточного альбумина в патогенезе, клинике и лечении вирусных гепатитов А и В: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. – К., 1987. 4. Рокицкий П.Ф. Биологическая статистика. – Беларусь, 1967. - 282 с. 5. Логинов А.С., Блок Ю.Е. Хронические гепатиты и цирозы печени. – М.: Медицина, 1987. 6. Комаров Ф.И. Болезни печени и билиарной системы. – Т. 2. – М.: Медицина, 1995. - 615 с. 7. Кольцов П.А., Ша тихин А.Ц. Практическая гастроентерология. – М., 1994. - 552 с. 8. Беляков Н.А. Энтеросорбция. – Л., 1991. 324 с. 2 36220 Таблиця 1 Показники імунного статусу та транспортної функції альбуміну у хворих з хронічним персистуючим та хронічним активним гепатитом (до лікування) Лм Тл 24/984 29/986 21/1092 33/1650 38/2128 34/1870 34/1428 33/2112 44/2200 43/1842 40-60/ 6001600 48/472 32/316 51/557 70/1155 69/1468 54/1010 78/1114 40/845 44/968 68/1287 Норма 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Th Ts/k Вл IgG 33-41/ 10-19/ 715-800 180-380 20-26/ 300-450 11,5± 3,05 25/246 12/118 30/328 25/413 36/766 35/655 45/643 16/338 15/330 35/662 42/413 27/266 33/360 39/644 54/1149 16/299 39/557 36/760 25/550 36/681 19,4 13,5 15,8 13,1 11,0 15,8 18,4 13.2 13,5 27,6 23/226 20/197 21/229 45/743 33/702 19/355 31/443 23/486 29/638 33/626 0,99+ 1,3± 0,2 7 0,2 Аль- ТрансIPI(Th бу портна ЦИК /Ts/k) міни функція 350,054- 0,04- 2,256 0,170 0,09 3,2 1,01 0,99 0,76 1,20 0,76 1,63 1,27 0,62 1,28 1,79 49,1 53,1 36,0 96,5 64,0 31,8 52,0 30,2 64,5 59,1 IgM IgA 2,27 2,250 2,14 2,0 1,27 1.68 1,24 1,88 1,27 2,50 0,042 0,031 0,021 0,035 0,038 0,037 0,043 0,011 0,032 0,028 0,31 0,9 0,42 0,16 0,29 0,22 0,19 0,29 0,21 1,23 1,09 0,6 1,43 0,56 1,09 1,84 1,45 0,7 0,52 1,06 Таблиця 2 Показники імунного статусу та транспортної функції альбуміну у хворих з хронічним персистуючим та хронічним активним гепатитом (після лікування) Лм Норма 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Тл Th Ts/k Вл IgG 32/2688 30/1620 40/1920 30/1170 34/2278 26/2210 30/3540 28/1288 40/2720 36/2700 40-60/ 600-1600 45/1210 60/972 56/1075 54/632 36/820 50/1105 64/2666 51/657 56/1523 53/1431 33-41/ 715-800 32/860 44/713 39/749 40/468 26/592 36/796 42/487 39/502 36/979 40/1080 10-19/ 180-380 13/349 16/259 17/326 14/164 10/228 14/309 22/779 12/154 20/544 13/351 20-26/ 300-450 16/430 26/288 39/557 30/351 27/266 16/430 12/425 38/489 40/492 44/693 IgM 11,5± 0.99± ±3,05 ±0,27 11,2 0,94 14,2 1,2 12,8 1,2 9,2 0,83 12,3 1,02 11,8 1,4 13,8 1,37 16,2 0,70 14,9 1,31 12,5 1,38 IgA 1,3± ±0,2 1,1 1,14 1,62 1,01 1,03 1,24 1,13 1,97 1,43 1,22 Аль- ТрансIPI(Th бупортн. ЦИК /Ts/k) міни функція 350,054- 0,04- 2,256 0,170 0,09 3,2 53,1 0,112 0,08 2,46 72,0 0,142 0,09 2,75 49,4 0,163 0,08 2,29 55,3 0,156 0,06 2,86 64,0 0,134 0,10 2,59 41,5 0,127 0,07 2,57 59,3 0,115 0,10 1,91 62,1 0,168 0,08 3,29 40,2 0,126 0,16 1,8 36,8 0,049 0,31 3,08 __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2001 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 50 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 3