Спосіб культивування калусної тканини астрагалу шерстистоквіткового (astragalus dasyanthus pall.)

Спосіб культивування калусної тканини астрагалу шерстистоквіткового, що включає виділення експланту, стерилізацію і культивування його на живильному середовищі, що містить мінеральні солі, мікроелементи, інозит, тіамін, піродоксин, 3 36368 кінетин - 0,2-0,5мг/л, 6-бензиламінопурин - 0,20,5мг/л і 2,4-дихлорфеноксіоцетова кислота- 1,05,0мг/л при температурі 18-20°С протягом 20-25 діб. Астрагал шерстистоквітковий містить тритерпенові глікозиди (дазіантозиди), флавоноїди (кемпферол, кверцетин, ізорамнетин і астрагалозид), дубильні речовини, кумарини і оксикумарини, амінокислоти, вітаміни, токоферол (переважно атокоферол з Е-вітамінною активністю), а також різноманітні макро- і мікроелементи (кальцій, кремній, алюміній, залізо, магній, кобальт, цинк, мідь, марганець, молібден, хром). Астрагал відноситься до рослин, що накопичують селен. У його траві знайдено до 1,5мг% органічного селену, який повністю засвоюється організмом. Біологічно активні речовини астрагала забезпечують широкий спектр фармакологічних ефектів. Заспокійливою, гіпотензивною, судинорозширювальною, кардіотонічною і діуретичною властивістю володіють астрагали шерстистоквітковий, солодколистний, піщаний. Разом з седативною і гіпотензивною дією астрагал шерстистоквітковий дає ефект, аналогічний серцевим глікозидам, а також розширює коронарні судини, судини нирок, підвищує ді урез. При експериментальному вивченні астрагала відмічено поліпшення мозкового кровообігу і тканинного дихання мозку. Гіпотензивний ефект забезпечується також судинорозширювальними властивостями астрагала і підвищенням діурезу унаслідок поліпшення ниркової гемодинаміки, збільшення клубочкової фільтрації. Коронаророзширяючі та підвищуючи скоротливу здатність сердця властивості астрагала на тлі уповільнення темпу серцевих скорочень покращують загальну і органну гемодинаміку. З астрагалів одержано ізофлавон з цитостатичною активністю. Виділений з рослин роду астрагал флавоновий глікозид надає гіпоазотемічну дію, аналогічну імпортному препарату леспенефріл. Відомі фітопрепарати на основі екстракту астрагала виробництва Росії, США і ін. Використання замість інтактних рослин астрагала їх клітинних культур, одержаних біотехнологічним методом, має ряд переваг: зменшення антропогенної дії на дику природу (астрагал шерстистоквітковий занесений в «Червону книгу» і на території України в даний час зустрічається дуже рідко), можливість отримання фітомаси, повністю вільної від полютантів (гербіцидів, пестицидів, важких металів і ін.) і управління процесом біосинтезу цільових продуктів. Приклад 1. Готують живильне середовище Мурасіге і Скуга, що містить, мг/л: мінеральні солі, мікроелементи, сахарозу і інозит за прописом Мурасіге і Скуга (Murashige Т., Skoog F. // Phisiol. Plant. - 1962. Bd.15. - № 13. - P.473-497), агар - 6000, тіамін - 1,0, піродоксин - 0,5, нікотинова кислота - 0,8, аскорбінова кислота - 0,8-1,2, кінетин - 0,2, 6бензиламінопурин -0,2 і 2,4-дихлорфеноксіоцетова кислота- 1,0, розливають в культиваційні судини ємкістю 50мл кожен. Закупорені ватяно 4 марлевими пробками судини стерилізують в автоклаві при 118° С протягом 30 хвилин, рН середовища до автоклавування 5,5-5,8. У застигле живильне середовище в стерильних умовах вводять експланти (сегменти листя астрагала шерстистоквіткового), заздалегідь стерилізовані 70%-ним розчином етилового спирту протягом 1 хвилини, культивують при температурі 18°С протягом 20 діб, після чого калус витягують з судини, відокремлюють від експланту і зважують. Вихід сухої біомасі при п'ятикратній повторності досліду склав 360мг. Приклад 2. Готують живильне середовище Мурасіге і Скуга, що містить, мг/л: мінеральні солі, мікроелементи, сахарозу і інозит за прописом Мурасіге і Скуга, агар - 6500, тіамін - 1,5, піродоксин - 0,75, нікотинова кислота - 1,0, аскорбінова кислота - 0,8-1,2, кінетин - 0,3, 6-бензиламінопурин - 0,3 і 2,4дихлорфеноксіоцетова кислота - 2,0, розливають в культиваційні судини, ємкістю 50мл кожен. Закупорені ватяно-марлевими пробками судини стерилізують в автоклаві при 118°C протягом 30 хвилин, рН середовища до автоклавування 5,5-5,8. У застигле живильне середовище в стерильних умовах вводять експланти (сегменти листя астрагала шерстистоквіткового), заздалегідь простерилізовані 50%-ним розчином брадофена 10Н протягом 10 хвилин, культивують при температурі 20°С протягом 22 діб, після чого калус витягують з судин, відокремлюють від експланту і зважують. Вихід сухої біомаси при п'ятикратній повторності досліду склав 320мг. Приклад 3. Готують живильне середовище Мурасіге і Скуга, що містить, мг/л: мінеральні солі, мікроелементи, сахарозу і інозит за прописом Мурасіге і Скуга, агар - 6500, тіамін - 1,5, піродоксин - 0,75, нікотинова кислота - 1,0, аскорбінова кислота - 0,8-1,2, кінетин - 0,4, 6-бензиламінопурин - 0,4 і 2,4дихлорфеноксиоцетова кислота - 3,0, розливають в культиваційні судини ємкістю 50мл кожен. Закупорені ватяно-марлевими пробками судини стерилізують в автоклаві при 118°С протягом 30 хвилин, рН середовища до автоклавування 5,5-5,8. У застигле живильне середовище в стерильних умовах вводять експланти (сегменти листя астрагала шерстистоквіткового), заздалегідь простерилізовані 50%-ним розчином брадофена 10Н протягом 10 хвилин, культивують в темноті при температурі 18°С протягом 25 діб, після чого калус витягують з судин, відокремлюють від експланту і зважують. Вихід сухої біомаси при п'ятикратній повторності досліду склав 420мг. Приклад 4. Готують живильне середовище Мурасіге і Скуга, що містить, мг/л: мінеральні солі, мікроелементи, сахарозу і інозит за прописом Мурасіге і Скуга, агар - 6500, тіамін - 1,5, піродоксин - 0,75, нікотинова кислота - 1,0, аскорбінова кислота - 0,8-1,2, кінетин - 0,5, 6-бензіламинопурин - 0,5 і 2,4дихлорфеноксиоцетова кислота - 5,0, розливають в культиваційні судини ємкістю 50мл кожен. Закупорені ватяно-марлевими пробками судини стерилізують в автоклаві при 118°С протягом 30 хвилин, рН середовища до автоклавування 5,5-5,8. У за 5 36368 стигле живильне середовище в стерильних умовах вводять експланти (сегменти листя астрагала шерстистоквіткового), заздалегідь простерилізовані 50%-ним розчином брадофена 10Н протягом 10 хвилин, культивують в темноті при температурі 20°С протягом 25 діб, після чого калус витягують з судин, відокремлюють від експланту і зважують. Вихід сухої біомаси при п'ятикратній повторності досліду склав 400мг. Комп’ютерна в ерстка І.Скворцов а 6 Пропонований спосіб культивування калусної тканини астрагала шерстистоквіткового може бути використаний для біотехнологічного виробництва його біомаси з метою отримання біологічно активних речовин - тритерпенових глікозидів і органічного селену, що є основою для цінних лікарських препаратів. Перевагою даного способу є зниження антропогенної дії на навколишнє середовище і отримання екологічно чистої сировини не залежно від періоду вегетації. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601