Спосіб отримання ентомопатогенного препарату аегерину

Спосіб отримання ентомопатогенного препарату Аегерину, що включає культивування гриба Beauveria bassiana (Bals.)Vuili, який відрізняється тим, що як діючу речовину препарату беруть штам ентомопатогенного гриба Beauveria bassiana (Bals.)Vuill M-1966, виділений із організму гусениць смородинової склівки (Aegeria tipuliformis Cl.). (19) (21) u200807589 (22) 03.06.2008 (24) 10.11.2008 (46) 10.11.2008, Бюл.№ 21, 2008 р. (72) ДРОЗДА ВАЛЕНТИН ФЕДОРОВИЧ, UA, КОЧЕРГА МАРИНА ОЛЕКСАНДРІВНА, U A (73) НАЦІОНАЛЬНИЙ АГРАРНИЙ УНІВЕРСИТЕТ, UA 3 36935 шенню до гусениць склівок (Lepidoptera, Aegeriidae) – смородинової, яблуневої, великої тополевої, темнокрилої, чорно-жовтої та дубової. Поставлене корисною моделлю завдання досягається тим, що у способі отримання ентомопатогенного препарату Ае герину, що включає культивування гриба Beauveria bassiana (Bals.)Vuill, згідно корисній моделі як діючу речовину препарату беруть штам ентомопатогенного гриба Beauveria bassiana (Bals.)Vuill M-1966, виділений із організму гусениць смородинової склівки (Aegeria tipuliformis Cl.). Суть запропонованого способу полягає у тому, що із природних популяцій смородинової склівки виділяють збудника ентомопатогенного грибного походження - Beauveria bassiana (Bals.)Vuill. Гусениці смородинової склівки з першого віку і до заляльковування перебувають всередині пагонів смородини і інших ягідників. Вони добре захищені від різноманітних стресових факторів, у тому числі і від збудників хвороб. Внаслідок моніторингу розтину великої кількості пагонів смородини, вдалося відшукати гусениць смородини останнього віку заражених цим штамом гриба. Внаслідок послідовного проведення ряду прийомів у складі способу, з використанням штаму гриба М-1966, отримано ентомопатогенний препарат Аегерин. Приклад 1 Типова мікробіологічна лабораторія з набором стандартного обладнання. Попередньо виділений із заражених природних умовах штам ентомопатогенного гриба В. bassiana (Bals.)Vuill. №M-1966, проводили культивування впродовж 40-55 годин, за умов постійної аерації. І їх інтенсивність становила величині, що дорівнює розчинності 0,2-0,3г кисню у 1л середовища впродовж 1 години. Штам гриба В. bassiana (Bals.)Vuill. №M-1966 виділено із гусениць старших віків смородинової склівки (Aegeria tipuliformis Сl.). Конідії В. bassiana №M1966, випуклі, одноклітинні, в діаметрі 2,0-3,5мкі, без вираженого забарвлення. Конідієносці зібрані у китиці. Конідії утворюються на видовжених стеригмах і розташовані по кінцях конідієносця. Міцелій септирований, без забарвлення. Штам ентомопатогенного гриба №М-1966 на сусло-агарі утворює білі колонії з характерними горбиками. В 4 період утворення повітряних конідій колонії стають борошнистими з характерним жовтуватим відтінком. При вирощуванні на рідному середовищі Чапека характеризується інтенсивним ростом, при цьому утворює на поверхні середовища білу пухнасту плівку. Через 3-4 дні на ній заявляються конідії. Штам гриба №М-1966 гідролізує крохмаль, досить інтенсивно засвоює глюкозу, сахарозу, мальтозу, арабінозу, фр уктозу, цукри не бродять. Досить добре засвоює органічний азот амінокислоти та пептон, азот нітратів. Інші форми азоту засвоює менш інтенсивно. Оптимальна температура росту та конідієутворення в умовах глибинного культивування становить 17-33°С. Оптимальна температура росту та конідієутворення 27-29°С. Оптимальна інтенсивність аерації відповідає розчинності 0,2-0,3г кисню у 1л середовища за 1год. Тривалість глибинного культивування за оптимальних умов 40-55 годин. Вихід сухої конідіальної маси становить 20-22г/л. Титр 110-320млрд./г, що відповідає виходу 0,7-2,5кг стандартного препарату Аегерину з 1л середовища. Приклад 2 Мікробіологічна лабораторія. Природні популяції гусениць склівок: смородинової, яблуневої, великої тополевої та дубової. Досліджували визначальні тестові характеристики запропонованого препарату Аегерину за існуючими, стандартними методами. Крім того, визначали рівень вірулентності В. bassiana №М-1966, який характеризувався досить високим рівнем вірулентності по відношенню до наведених видів склівок. Для порівняння, дослідження проводили, використовуючи відомий препарат Боверин, отриманий згідно способунайближчого аналога. Результати досліджень наведено у таблиці. Спосіб отримання ентомопатогенного препарату Аегерину за використання в якості діючої речовини гриба штама В. bassiana №М-1966, виділено з гусениць смородинової склівки дозволяє у порівнянні з відомим підвищити вихід Аегерину на 15-20%, підвищити вірулентність конідій і ентомоцидна активність Аегерину. Спосіб отримання ентомопатогенного препарату Аегерину на основі штаму В. bassiana №М1966 апробовано в лабораторних умовах. Таблиця Біологічні та технологічні характеристики препарату Аегерин Тестові характеристики Продукція конідій, млрд./л Вихід Аегерину з титром 1,5млрд/г, кг/г Продуктивність конідіеутворення, млрд./л-год Вихід побічного продукту - гонідій, % до продукції конідій Тривалість процесу культивування, год Витрата повітря на аерацію 1л середовища за 1 год. Ефективність: загинуло гусениць смородинової склівки, % загинуло гусениць яблуневої склівки, % загинуло гусениць великої тополевої склівки, % загинуло лялечок смородинової златки, % Спосіб, що пропонується 1100-1450 0,7-2,5 20-22 18-20 45-55 18-20 59-81 61-79 54-82 53-62 Найближчий аналог 950-1200 0,5-2,0 17-19 29-35 65-70 20-25 42-50 43-51 38-49 34-46 5 36935 Приклад 3 Глибинне культивування В. bassiana №М-1966 проводили у середовищі, що вміщувало: цукру 3%, азотнокислого натрію - 0,6%; фосфорнокислого калію - 0,5%; сірчанокислого магнію - 0,2% та пивного сусла - 3% впродовж 45 годин. Умови аерації відповідали розчинності 0,1г кисню в 1л се Комп’ютерна в ерстка А. Крулевський 6 редовища за 1 годину. Далі, конідії відділяли від культуральної рідини шляхом сепарації та присушували за температури 30°С. Продуктивність конідій з 1л середовища складала 12,9г за титра 202,8млрд./г, що відповідає виходу 1,8кг/л препарату Аегерину. Вміст суп утнього продукту - гонідій 12,7%. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601