Спосіб отримання ентомопатогенного вірусного інсектициду вірин кд

Корисна модель відноситься до сільського господарства, зокрема до галузі захисту рослин та галузі отримання засобів захисту рослин від шкідливих видів комах, біологічного походження і може бути використана в сучасних технологіях отримання біологічних інсектицидів. Відомий спосіб використання ентомопатогенних мікроорганізмів для обмеження шкідливої дії комах-фітофагів [Исси И.В. Применение микроспоридий для биологической борьбы с насекомыми, вредителями сельскому хозяйству. В кн.: Биологические средства защиты растений. М.: Колос, 1974, с.350-375]. Проте, внаслідок ряду труднощів технологічного характеру, повільної інсектицидної дії на організм шкідливих комах, цей напрямок не знайшов практичної реалізації. Відомий також спосіб отримання мікробіологічних препаратів для потреб захисту рослин, який є найбільш близьким технічним рішенням до способу, що пропонується і вибраний як найближчий аналог [Третьяков А.П., Шкода B.C., Квасенков О.И., Стирманова Н.И., Онацкий Н.М. Способ производства микробиологических препаратов. Патент Российской Федерации №95107036, МПК АО1 N63/00; A61 K35/66; C12 N1/20. Опубл. 10.11.1996. Бюл. №31]. Згідно способу – найближчого аналога, передбачається підготовка посівної культури мікроорганізмів із штаму-продуцента та живильне середовище, що вміщує водорозчинні вуглеводи, джерело органічного азоту, солі та воду. Згідно способу, у живильне середовище вносять посівну культуру мікроорганізмів, проводять їх культивування та виділення кінцевого продукту із культуральної рідини. Для культивування у відомому способі використовують мікроорганізми виду Salmonella enteritidis або Streptomyces albolongus або Streptomyces avermitilis або Trichoderma lignorum або Trichoderma harzianum або Trichoderma koningii. Використовуються різноманітні наповнювачі. У підсумку, отримують мікробіологічні препарати у вигляді сухих порошків з вираженою ентомоцидною активністю. Недоліком відомого способу є те, що кінцевий продукт - мікробіологічні препарати, має форму сухого порошку, що пов'язано з додатковими витратами коштів та часу на процес сушіння та частковою втратою ентомопатогенних характеристик. В основу корисної моделі поставлене завдання обгрунтувати спосіб отримання ентомопатогенного вірусного інсектициду Вірин КД, з діючою речовиною природного походження, зокрема біологічного препарату для поповнення арсеналу безпечних, вітчизняних інсектицидів. Поставлене корисною моделлю завдання досягається тим, що у способі отримання ентомопатогенного вірусного інсектициду Вірин КД, що включає підбір та використання штаму-продуцента, а також речовин наповнювачів, згідно корисній моделі з насаджень смородини та аґрусу проводять збір гусениць 3-4-го віків смородинового (Itame wauaria Z) та аґрусового (Abraxas grossularia Z) п'ядунів у співвідношенні 1:1, утримують їх без їжі в лабораторних умовах 1,5 доби, потім впродовж 4,5...5,0 годин витримують за температури +32±2°С, далі гусениць обох видів утримують в марлевих садках за температури повітря +24±2°С та відносній вологості повітря 70,0±3,0% і згодовують їм листя смородини, попередньо інфіковане природним штамом вірусу ядерного поліедрозу з титром 107 поліедрів/мл, а після загибелі гусениць їх подрібнюють, розтирають у ступі, додають на кожні 50мг біомаси по 0,5л води, фільтрують через марлю, розливають у пробірки об'ємом 15-20мл, центрифугують 18-20 хвилин за 8тис. обертів/хвилину, відбирають вірусну суспензію і готують препарат Вірин КД у такому співвідношенні компонентів, мас.% : вірусна суспензія- 0,7...0,8; гліцерин - 45,0...46,5; активоване вугілля - 15,5...16,5; двоокис титану -1,5...2,0; вода - решта. Суть запропонованого способу полягає у тому, що внаслідок дії стресових факторів - голодування гусениць, висока температура, лабораторне утримання, в популяціях обох видів п'ядунів виникає спонтанно захворювання вірусної природи - ядерний поліедроз, який постійно знаходиться в популяціях комах у латентному стані. Отже діюча речовина препарату Вірин КД - складова частина екосистем, агроценозів, популяцій п'ядунів. Саме тому запропонований препарат безпечний для довкілля, урожаю. Гліцерин виконує роль наповнювача. Специфічна роль компонентів препарату - активованого вугілля та двоокису титану, як протектантів, що захищають діючу речовину - вірус ядерного поліедрозу від згубної дії сонячної інсоляції. Суттєвим є також те, що препарат пропонується у формі концентрату емульсії. Приклад 1. Агроценози чорної смородини та аґрусу, технології їх вирощування не передбачають використання хімічних пестицидів. Спостерігається значне біорізноманіття шкідливих комах. Серед них смородиновий та аґрусовий п'ядуни. Існуючі способи контролю чисельності п'ядунів, передбачають використання тільки хімічних інсектицидів. Внаслідок гігієнічних обмежень, їх використання недопустиме. Розвиток п'ядунів відбувається в період цвітіння та формування урожаю. В цей період допускається використання тільки біологічних способів. Проводили збір з кущів гусениць п'ядунів 3-4-го віків, разом з гілками та листям переносили в лабораторні умови для паралельного вирощування. Виявили гусениць заражених вірусом ядерного поліедрозу. Виділили збудник, ідентифікували його. Діагностичні дослідження проводили за допомогою світлового мікроскопу. В окремих випадках застосовували методи фарбування за прописами Гімза-Романовського та Шведової. Вірусну масу ядерного поліедрозу вирощували та накопичували в живих культурах гусениць смородинового та аґрусового п'ядунів, гусениці яких відбирали у співвідношенні 1:1. Гусениць утримували в лабораторії впродовж 4,5-5,0 годин, витримували за температури +32±2°С, без їжі. Стресові умови утримування спричинили масовий спонтанний спалах захворювання - вірусу ядерного поліедрозу. Гусениці, що загинули, подрібнили та розтерли у ступці. На кожні 50мг біомаси додавали по 0,5л води, фільтрували через марлю та розливали у пробірки, об'ємом 15-20мл. Далі проводили очищену від домішок вірусну суспензію і готували препарат Вірин КД у такому співвідношенні компонентів, мас.%: вірусна суспензія 0,7...0,8; гліцерин- 45,0...46,5; активоване вугілля - 15,5...16,5; двоокис титану - 1,5...2,0; вода - решта. Порівняльні показники інсектицидної дії Вірину КД приведені в таблиці 1. Приклад 2. Оцінювали ентомопатогенну активність вірусного інсектициду Вірин КД по відношенню до гусениць п'ядунів. Проводили відбір фізіологічно здорових гусениць 3-го віку п'ядунів. Оцінювались три варіанти з різними варіаціями способу, що пропонується та спосіб -прототип. Визначали рівень ентомопатогенної активності вірусного Таблиця 1 Порівняльні показники інсектицидної дії запропонованого інсектициду Вірин КД по відношенню до гусениць п'ядунів на ягідниках Варіанти Кількість поліедрів 1,80´105 1,80´106 1,80´107 1,80´108 1,80´105 1,80´106 1,80´107 1,80´108 1,80´105 1,80´106 1,80´107 1,80´108 Ентомопатогенннй вірусний інсектицид Вірин КД (спосіб, що пропонується) Нативний вірус смородинового п'ядуна Нативний вірус аґрусового п'ядуна Загинуло гусениць п'ядунів від поліедрозу, % 50,3 56,8 78,9 94,6 40,3 48,6 70,2 84,6 41,2 46,3 69,7 80,2 інсектициду у складі препарату Вірин КД в оптимальному режимі та режимі, коли компоненти були за межами оптимуму. Результати досліджень наведені в таблиці 2. Таблиця 2 Ентомопатогенна активність вірусного інсектициду Вірин КД по відношенню до гусениць п'ядунів Варіанти, що порівнюються Спосіб, що пропонується: вміст ВЯП гліцерин активоване вугілля двоокис титану вода Спосіб, що пропонується: вміст ВЯП гліцерин активоване вугілля двоокис титану вода Спосіб, що пропонується: вміст ВЯП гліцерин активоване вугілля двоокис титану вода (за межами оптимальних режимів) Спосіб - прототип НІР05 ЛК50,% Довірчі інтервали,% ЛЧ50, дні Довірчі інтервали, дні ЛЧ90 ЛЧ90/ЛЧ50 0,03 0,01-0,03 5,1 4,4-7,5 60,8 1,3 0,03 0,01-0,03 4,9 4,2-7,6 7,7 1,6 0,18 0,12-0,21 12,0 10,2-18,7 24,6 2,0 0,18 0,13-0,26 18,4 2,2 13,5-22,8 36,8 3,1 2,0