Спосіб комбінованого лікування гліом головного мозку

Спосіб комбінованого лікування гліом головного мозку, що включає хірургічне видалення пухлини та наступну хіміотерапію, який відрізняється тим, що після хірургічного видалення пухлини та перед початком хіміотерапії проводять дослідження хіміорезистентності пухлини шляхом визначення експресії генів MDR1, MRP, GST-P, MGMT та життєздатності пухлинних клітин в короткостроковій культурі, для чого пухлинні клітини інкубують з хіміопрепаратами, а потім проводять хіміотерапію препаратом або комплексом препаратів, до яких пухлина чутлива. (19) (21) u200801168 (22) 31.01.2008 (24) 10.12.2008 (46) 10.12.2008, Бюл.№ 23, 2008 р. (72) РОЗУМЕНКО ВОЛОДИМИР ДАВИДОВИЧ, UA, ГЛАВАЦЬКИЙ ОЛЕКСАНДР ЯКОВИЧ, U A, ВАСИЛЬЄВА ІРИНА ГЕОРГІЇВНА, UA, ЧОПИК НАТАЛІЯ ГРИГОРІВНА, UA, ОЛЕКСЕНКО НАТАЛІЯ ПАВЛІВНА, U A, ЦЮБКО ОЛЬГА ІВАНІВН А, U A, ГАЛАНТА ОЛЕНА СТЕП АНІВН А, U A (73) ІНСТИТУТ НЕЙРОХІРУРГІЇ ІМ. АКАД. А.П. РОМОДАНОВА АМН УКРАЇНИ, U A 3 37591 застосування хіміопрепаратів при лікуванні злоякісних гліом головного мозку виявляється малоефективним. Завданням корисної моделі було створення способу комбінованого лікування гліом головного мозку, який був би високоефективним, економічним, малозатратним і широкодоступним. Поставлене завдання вирішується таким чином, що у способі комбінованого лікування гліом головного мозку, що включає хірургічне видалення пухлини та наступну хіміотерапію, після хірургічного видалення пухлини та перед початком хіміотерапії проводять дослідження хіміорезистентності пухлини шляхом визначення експресії генів MDR1, MRP, GST-P, MGMT та життєздатності пухлинних клітин в короткостроковій культурі, для чого пухлинні клітини інкубують з хіміопрепаратами, а потім проводять хіміотерапію препаратом або комплексом препаратів, до яких пухлина чутлива. Попередня оцінка хіміорезистентності пухлинних клітин шляхом визначення рівня експресії генів резистентності та дослідження життєздатності пухлинних клітин при їх інкубації з хіміопрепаратами надає можливість адекватного відображення чутливості пухлини до антибластичних препаратів та підвищення ефективності застосування хіміотерапії, а отже покращення лікування пацієнтів з гліомами головного мозку, а використання реагентів та устатк ування виробництва України та Росії робить пропонований спосіб відносно економічним і широкодоступним. Спосіб відтворюють наступним чином: після хірургічного видалення пухлини переносять тканину в фізіологічний розчин, відмивають від крові та суспендують в середовищі Ігла, розділяють суспензію на дві порції, одну з яких використовують для визначення експресії генів резистентності MDR1, MRP, GST-P та MGMT, а іншу - для оцінки життєздатності пухлинних клітин в короткостроковій культурі при інкубації їх з хіміопрепаратом. Із першої порції суспензії клітин виділяють РНК, переводять в кДНК за допомогою реакції зворотної транскрипції і полімерадна ланцюгова реакція (ПЛР) далі проводять ПЛР з використанням специфічних праймерів («Syntol», Росія). Результати ПЛР аналізують за допомогою електрофорезу у 2% агарозному гелі з використанням спеціалізованої системи для обробки відеозображень «Biotest». Відсутність в гелі специфічної світної смуги заданої довжини свідчить про нульову експресію досліджуваного гену фактору резистентності, а отже, про можливу чутливість пухлини до препаратів, що є субстратами цих генів. В іншу порцію суспензії пухлинних клітин, що містить 1-4106 клітин в 1мл, вносять хіміопрепарат та інкубують протягом 24 годин, після чого здійснюють підрахунок живих клітин. Концентрацію препаратів у живильному середовищі розраховують із максимально можливого їх вмісту в плазмі крові. Підрахунок кількості клітин здійснюють за допомогою світлового мікроскопу та камери Горяєва. Зразки, для яких зменшення кількості живих клітин при дії хіміопрепарату становить більше ніж 10% за добу, вважаються чутливими до його дії, а зразки, для яких зменшення кількості живих клітин становить 4 менше 10%, - резистентними. На основі цих двох комплексів досліджень підбирають препарат (комплекс препаратів), до яких пухлина виявляється найбільш чутливою, після чого проводять хіміотерапію із застосуванням цього препарату (комплексу препаратів). Поданий спосіб комбінованого лікування гліом головного мозку має беззаперечні переваги в лікуванні хворих з цією патологією, оскільки підвищує ефективність надходження хіміопрепарату до пухлинних клітин та його впливу на різні етапи клітинного циклу, що в кінцевому випадку підвищує е фективність застосованої хіміотерапії, а отже, строк ремісії та виживаності прооперованих хворих. При застосуванні описаного способу комбінованого лікування гліом головного мозку встановлено позитивну кореляцію (відсутність продовженого росту через 14 місяців і більше) для 6 злоякісних гліом головного мозку і з 8 досліджених (75%): 2 олігодендроастроцитоми анапластичних, 1 астроцитома анапластична, 3 гліобластоми, які демонстрували низький рівень експресії генів MDR1, MRP, GST-P, MGMT; і навпаки, серед 7 гліом (5 астроцитом анапластичних та 2 олігодендроастроцитом анапластичних) з високим рівнем експресії цих генів у 4х випадках спостерігався значний продовжений ріст пухлини вже через 2-4 місяці після її видалення при застосуванні комбінованого лікування (променева та хіміотерапіяпереважно алкілюючими агентами або поліхіміотерапія). Співставляючи результати експериментальних досліджень з оцінки життєздатності пухлинних клітин в короткостроковій культурі та ефективності застосування даних препаратів при лікування пацієнтів, ми спостерігали позитивну кореляцію у 8 випадках із 10 обстежених (80%): відсутність продовженого росту протягом 10-25 місяців і більше для астроцитом анапластичних та гліобластом. Використання пропонованого способу комбінованого лікування гліом головного мозку в нейрохірургії та нейроонкології дозволить підвищити ефективність застосування хіміотерапії та продовжити строки ремісії захворювання у даної категорії хворих. Джерела інформації: 1. Главацкий А.Я., Семенова В.М., Олейник Г.М., Хмельницкий Г.В. Клинико-морфологическая оценка чувствительности глиобластом к антибластической операции// Бюл.Укр.Ассоциации нейрохирурго в.-1998.-Вып.4. 2. Бурнин К.С., Улитин А.Ю., Чеснокова Е.А., Шевченко Е.Н. Результаты лечения больных с первичными глиомами головного могза. // III Съезд нейрохирургов России: материалы съезда. 4-8 июня 2002 г. Санкт -Петербург 2002.С.125. 3. Burger Р. С., Vogel F. С., Green S. В., Strike Т. A. Glioblastoma multiforme and anaplastic astrocytoma. Pathologic criteria and prognostic implications // Cancer.-1985.-Vol.56.-P.1106-1111. 4. Mahaley M. S., Mettlin C., Natarajan N. et al. National survey of patterns of care for brain-tumor patients// J. Neurosurg.-1989.-Vol.71 .-P.826-836. 5. Nagane M., Asai A., Shibui S., Olama K., et al. Expression Pattern of Chemoresistance-related 5 37591 Genes in Human Malignant Brain Tumors: a Working Knowledge for Proper Selection ofAnticancer Drugs //Jap.J.Clin.Oncol.-1999.-P.527-534. 6. Чехун В.Ф., Шишова Ю.В. Современные взгляды на механизмы формирования лекарственной устойчивости опухолей// Онкология.-2000.Т.2, №1.-С. 11-15. Комп’ютерна в ерстка Л. Купенко 6 7. Патент 38903, Україна, МПК А61В17/00, А61М1/00, А61Р 35/00, Спосіб лікування гліом головного мозку. Патент 38903, Україна, МПК А61В17/00, А61М1/00, А61Р 35/00 // Главацький О.Я., Інститут нейрохірургії ім. акад. А.П.Ромоданова АМН України (Україна) - № Заявки 2000116570, Заявл. 21.11.2000р., Опубл.15.05.2001р. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601