Спосіб одержання імуномодулюючого засобу

1. Спосіб одержання імуномодулюючого засобу, що включає обробку сировини з тимуса ссавців, центрифугування, очищення супернатанту, очищення і наступне ліофільне сушіння цільового продукту, який відрізняється тим, що як сировину використовують високомолекулярну білкову фракцію з тимуса ссавців, яку піддають гідролізу 3-5% розчином оцтової кислоти з додаванням цинку хлориду до концентрації 0,1-0,5%, очищення супе 39021 Задачею винаходу є створення способу імуномодулюючого засобу, який за рахунок використання визначеної фракції тимуса ссавців і запропонованої технології оброблювання, забезпечується одержання засобу, що має полівалентну дію на імунну систему завдяки наявності водорозчинних фракцій, і який не викликає алергічних реакцій завдяки високому ступеневі очистки. Поставлена задача вирішується даним способом одержання імуномодулюючого засобу, що включає обробку сировини з тимуса ссавців, центрифугування, очищення супернатанта, очищення і наступне ліофільне сушіння цільового продукту, який відрізняється тим, що як сировину використовують високомолекулярну білкову фракцію з тимуса ссавців, яку піддають гідролізу 3-5%ним розчином оцтової кислоти з додаванням цинку хлориду до концентрації 0,1-0,5%, очищення супернатанта проводять ультрафільтрацією, а очищення цільового продукту здійснюють стерилізуючою фільтрацією ультрафільтрату, до якого попередньо додають гліцин. Як сировину використовують високомолекулярну білкову фракцію тимуса молодняку великої рогатої худоби. При цьому, гліцин додають у кількості 5-30 г на л ультрафільтрату. Для стерилізуючої фільтрації використовують мембранні фільтри з розміром пор 0,22 мкм. Ліофільне сушіння здійснюють шляхом заморожування стерильного розчину, що містить продукт, до -(55-70)°С протягом 24-48 годин з наступним підвищенням температури до +(34-38)°С зі швидкістю 5-10°С/год. Нами експериментально було встановлено, що при використанні високомолекулярної фракції тимуса ссавців, підданої гідролізу, вдається ефективно видалити з супернатанту високомолекулярні поліпептиди та білки ультрафільтрацією, і потім, очистити цільовий продукт від мікробного забруднення шляхом стерилізуючої фільтрації через мембранні фільтри. Для збереження активності цільового продукту оптимальним є запропонований режим ліофільного сушіння. Спосіб здійснюється таким чином. Для одержання імуномодулюючого засобу беруть високомолекулярну білкову фракцію - білковий концентрат тимуса ссавців, яку піддають гідролізу 3-5%-ним розчином оцтової кислоти з додаванням цинку хлориду до концентрації 0,1-0,5%, співвідношення об'ємів білкового концентрату і розчину оцтової кислоти з цинку хлоридом 1:4. Гідроліз проводять при температурі 4-10°С протягом 30-50 годин з періодичним перемішуванням: одну годину перемішування чергують з чотирма годинами відстою. Одержаний гідролізат центрифугують 15-20 хвилин при 3-5 тис.об./хв. при температурі 4-10°С. Супернатант піддають ультрафільтрації, при якій одержують ультрафільтрат, що містить цільовий продукт із середньою молекулярною масою 5 кДа, і відділяють високомолекулярні поліпептиди та білки. У одержаний ультрафільтрат додають гліцин у кількості 5-30 г на 1 л розчину і проводять стерилізуючу фільтрацію на фільтрах з розміром пор 0,22 мкм. Одержаний продукт розливають у ампули або флакони і піддають ліофільному сушінню: заморожують до -(55-70)°С протягом 24 годин з наступним підвищенням температури до +(34-38)°С зі швидкістю 5-10°С/год. Приклад 1. До 10 кг подрібненого білкового концентрату тимуса ссавців великої рогатої худоби додали 5%ний розчин оцтової кислоти, 40 г цинку хлориду до концентрації 0,1%. Співвідношення об'ємів білкового концентрату і розчину становить 1:4. Гідроліз проводили при температурі 10°С протягом 46 годин з періодичним перемішуванням. Одержаний гідролізат центрифугували 15 хвилин при 5 тис. об/хв при температурі 10°С. Супернатант піддавали ультрафільтрації, при якій одержали ультрафільтрат, що містить цільовий продукт з молекулярною масою 5 кДа. В одержаний ультрафільтрат додали гліцин у кількості 600 г (20 г/л) і провели стерилізуючу фільтрацію на фільтрах з розміром пор 0,22 мкм. Одержаний продукт розливали в ампули і ліофільне висушували при таких умовах: заморожували до -(55)°С протягом 24 годин з наступним підвищенням температури до 34°С зі швидкістю 5°С/год. Одержано 360 г імуномодулюючого засобу. Вміст вологи - не вище 6%. Вміст пептидів - 1,5 мг у ампулі. Випробування засобу показало, що відновлювана кількість РОК збільшується на 40%, випадків алергічної дії не виявлено. Приклад 2. До 10 кг подрібненого білкового концентрату тимуса ссавців великої рогатої худоби додали 3%ний розчин оцтової кислоти, 50 г цинку хлориду до концентрації 0,5%. Співвідношення об'ємів білкового концентрату і розчину становить 1:4. Гідроліз проводили при температурі 4°С протягом 50 годин з періодичним перемішуванням. Одержаний гідролізат центрифугували 20 хвилин при 3 тис. об/хв при температурі 8°С. Супернатант піддавали ультрафільтрації, при якій одержали ультрафільтрат, що містить цільовий продукт з молекулярною масою 5 кДа. В одержаний ультрафільтрат додали гліцин у кількості 150 г (5 г/л) і провели стерилізуючу фільтрацію на фільтрах з розміром пор 0,22 мкм. Одержаний продую-розливали у флакони і ліофільне висушували при таких умовах: заморожували до (70)°С протягом 24 годин з наступним підвищенням температури до 38°С зі швидкістю 5°С/год. Одержано 370 г імуномодулюючого засобу. Вміст вологи - не вище 6%. Вміст пептидів - 1,5 мг у ампулі. Випробування даного засобу показало, що відновлювана кількість РОК збільшується на 42%, випадків алергічної дії не виявлено. 2 39021 __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2001 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 50 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 3