Спосіб діагностики аутоімунних захворювань нервової системи

Спосіб діагностики аутоімунних захворювань нервової системи за даними вмісту теплового тау білка в сироватці крові, який відрізняється тим, що використовують імунофлюоресцентний метод, де визначення рівня тау білка здійснюють в імунофлюоресцентній реакції з використанням первинних та вторинних мишачих моноклональних антитіл. (19) (21) u200903903 (22) 21.04.2009 (24) 25.09.2009 (46) 25.09.2009, Бюл.№ 18, 2009 р. (72) ВОЛОШИН ПЕТРО ВЛАСОВИЧ, ВОЛОШИНА НАТАЛІЯ ПЕТРІВНА, ЛЕКОМЦЕВА ЄВГЕНІЯ ВОЛОДИМИРІВНА, ЄГОРКІНА ОЛЬГА ВІКТОРІВНА, ГАПОНОВ ІВАН КОСТЯНТИНОВИЧ, ГОРБАЧ ТЕТЯНА ВІКТОРІВНА, ГУБІНА-ВАКУЛИК ГАЛИНА ІВАНІВНА 3 44235 Taupathy / Tau positive filamentous lesions in neurodegenerative diseases, 2000. - 332р.). Суть корисної моделі полягає в тому, що у хворих на аутоімунні захворювання вивчається вміст тау білку імунофлюоресцентним методом з використанням первинних та вторинних моноклональних антитіл порівняно з даними контрольної групи здорових осіб та неврологічним контролем. Задача, яку покладено в основу корисної моделі, вирішується тим, що у відомому способі діагностики аутоімунних захворювань нервової системи в сироватці крові хворих на аутоімунні захворювання вивчається вміст тау білку імунофлюоресцентним методом з використанням первинних й вторинних моноклональних мишачих антитіл порівняно з даними контрольної групи здорових осіб та неврологічним контролем хворих на епілепсію. Імунофлюоресцентний метод дає змогу виявлення субклітинного компоненту за допомогою імунологічної флюоресцентної реакції, цей метод відзначається високою специфічністю та чутливістю, та основане на конкурентному зв'язуванні моноклональних антитіл, які є специфічними до різних епітопів IgG та IgM дослідних високоглобулярних молекул тау протеїну. За умов імунофлюоресцентної реакції з первинними і вторинними моноклональними антитілами було продемонстровано значне збільшення рівню тау білку в сироватці крові хворих на аутоімунні запальні захворювання нервової системи, на відміну від зниження цього показника у хворих неврологічного контролю та здорових осіб. Таким чином, застосування корисної моделі у клініці за допомогою імунофлюоресцентного дослідження надасть можливість ранньої та адекватної діагностики аутоімунних захворювань нервової системи. Спосіб діагностики здійснюється таким чином. У пацієнта одержують кров і заморожують при – 20°С. Зразки, отримані від хворих, та стандарти, отримані від контрольної групи, а також, у зв'язку, з відсутністю стандартної калібровочної кривої, в якості контрольної групи згідно з методикою Zemlan (Zemlan F. US Patent 6589746 - Method of detecting axonally-derived protein tau in patients with 4 traumatic CNS injury // Traumatic CNS injury, 2003), додають до контрольної групи, так званий, «неврологічний контроль», який складається із хворих на епілепсію у міжнападний період. Зразки й подвійні стандарти (контроль та неврологічний контроль) інкубують з першим моноклональним мишачим Anti-t (Tau, clon 2) антитілом протягом 2 годин у термостаті при температурі +37°С в присутності вторинного антитіла, міченого ізотіоціанід (FITC) флюоресцентом специфічним до IgG. Після інкубації зміст відмивається у буферному розчині з твином для вилучення не зв'язувальних комплексів антитіл до тау. Для визначення тау білку імунофлюоресцентним методом використовують стандартні набори фірми Sigma (USA). Далі формують базу даних з показників здорових осіб (контрольна група) і порівнюють з нею показники пацієнтів з аутоімунними демієлінізуючими захворюваннями нервової системи (основана клінічна група) і показники пацієнтів неврологічного контролю з епілепсією (група порівняння). Приклад У ході дослідження було обстежено 3 клінічні групи - 1 група складалася з 18 хворих (з них 11 жінок, 62%; та 7 чоловіків, 38%; у віці від 34 до 42 років) на аутоімунні демієлінізуючі запальні захворювання, що знаходилися на лікуванні у відділенні нейроінфекцій та розсіяного склерозу, 10 хворих жінок на епілепсію (середній вік складав 33,78±11,09р.) та 10 здорових осіб (з них 8 жінок, 80% та 2 чоловіка, 20% у віці від 27 до 33 років). Середній вік пацієнтів 1 групи складав 43,67±15,22 років, середній вік контрольної групи - 29,11±7,14 років. В ході дослідження було з'ясовано, що пацієнти з аутоімунними захворюваннями нервової системи мають дуже високий рівень тау білку в сироватці крові та статистичне підвищення його рівню на 0,972ум. од. оптичної щільності (ОЩ, D) порівняно зі здоровим контролем (р