Спосіб експрес-генотипування свиней за генами естроген- та меланокортин-4-рецепторів

Спосіб експрес-генотипування свиней за генами естроген- та меланокортин-4-рецепторів, що 3 45109 4 Таблиця 1 Встановлені параметри ампліфікації Ампліфікатори з активним регулюванням температури (за об'ємом рідини в пробірці - 25мкл) Етапи ампліфікації Температура Час Кількість циклів початкова денатурація 95°С 1хв 1 ДНК денатурація 94°С 20с 35 відпал праймерів 60°С 20с синтез 72°С 20с фінальний синтез 72°С 5хв 1 4°C зберігання Праймери-затравки мають наступну структуру 9 (див. таблицю 2): Таблиця 2 Послідовності праймерів Локус F: R: F: R: ESR MC4R Послідовність 5' -CCTGTTTTTACAGTGACTTTTACAGAG-3' 5' -CACTTCGAGGGTCAGTCCAATTAG-3' 5' -TACCCTGACCATCTTGATTG-3' 5v -ATAGCAACAGATGATCTCTTTG-3' Для рестриктазного гідролізу ампліфікованих фрагментів використовують ферменти рестрикції PVu II, для гену ESR та Taq І для гену MC4R. Зразки інкубують протягом 12-16 годин (залишають на ніч) при 37°С (або близько 3 год. додавши в два рази більше ферменту). По закінченню проводять електрофоретичний аналіз продуктів рестрикції. Під час ДНК-ідентифіації свиней за геном ESR після обробки рестриктазою Pvu II, генотип АА дає фрагмент розміром 120п.н, АВ-120 п.н. і 55п.н., а генотип ВВ - 55п.н. відповідно (Фіг.1). Під час ДНКідентифіації свиней за геном MC4R після обробки рестриктазою Taq І, генотип MM характеризується наявністю продуктів розмірами 156п.н. і 70п.н., РМ - 226, 156 і 70, РР - 226п.н., відповідно (Фіг.2). Запропонований спосіб експрес-генотипування апробований на свинях породи велика біла. Свині мали різне походження: у ВАТ «Маки», ДПДГ «Христинівське» УААН - тварини місцевої селекції, у СП ТОВ «Нива Переяславщини» - датської і у ВАТ агрокомбінаті «Калита» - англійської селекції. З використанням даної методики проаналізовано 119 тварин за геном MC4R та 123 тварини за геном ESR. В результаті проведених досліджень виявлено частоти генотипів (див. таблицю 3). Таблиця 3 Частоти генотипів генів ESR та MC4R у свиней великої білої в різних господарствах Ген N ESR 25 MC4R 20 ВАТ «Маки» АА-9 АВ-14 ВВ-2 РР-ЇЗ РМ-7 ММ-0 N 36 30 СП ТОВ «Нива Переяславщини» АА-27 АВ-7 ВВ-2 РР-6 РМ-13 MM-11 Таким чином, за допомогою нового способу експрес-генотипування свиней за генами естрогента меланокортин-4-рецепторів були виявлені генотипи тварин, використання яких в селекції дозволить збільшити показники плідності і швидкості N 62 49 ВАТ агро комбінат «Калита» АА-39 АВ-6 55-17 РР-20 PM-2S ММ-1 N ДПДГ«Христинівське» УААН EN 123 20 РР-20 РМ-0 ММ-0 119 росту у нащадків. Запропонований спосіб генотипування свиней (Sus scrofa L.) за генами ESR та MC4R одночасно, методом ПЛР-ПДРФ, за рахунок оптимізації режиму дозволяє знизити затрати реактивів та час проведення реакції. 5 Комп’ютерна верстка М. Ломалова 45109 6 Підписне Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601