Спосіб визначення вмісту рибоксину у водному розчині

Спосіб визначення вмісту рибоксину у водному розчині, що включає поляризацію розчину буферною сумішшю при співвідношенні масових частин 1 1 в пробі як форетичному середовищі, дегазацію, детектування оптичної ЩІЛЬНОСТІ рибофлавіну на довжині хвилі аналізатора 270 нм під час міграції ІОНІВ В порожнині капіляра в бік до анода, утворення електрофореграми ВІДПОВІДНО до результатів детектування, обчислення площин ПІКІВ останньої з перетворенням підсумкового результату у показник КІЛЬКІСНОГО вмісту Винахід відноситься до досліджень або аналізу матеріалів, здебільшого шляхом розділення їх на складові частини, та може бути використаним в дослідженнях фармаційних та ХІМІЧНИХ лабораторій Рівень техніки, який досліджений заявником, інформує про відсутність об'єктів аналогічного призначення, які б за сукупністю ознак співпадали з об'єктом, що заявляється У основу винаходу поставлена задача розробити такий спосіб визначення вмісту рибоксину у водному розчині, який шляхом капілярного електрофорезу забезпечує повну реєстрацію вмісту, високу швидкість та чутливість детектування при використанні Означений технічний результат досягається тим, що, згідно з винаходом, спосіб визначення вмісту рибоксину у водному розчині містить поляризацію розчину буферною сумішшю при співвідношенні масових частин 1 1 в пробі, як форетичному середовищі, дегазацію, детектування оптичної ЩІЛЬНОСТІ рибоксину на довжині хвилі аналізатора 254нм під час міграції ІОНІВ В порожнині капіляру в бік до анода, утворення електрофореграми ВІДПОВІДНО до результатів детектування, обчислення площин ПІКІВ останньої з перетворенням підсумкового результату у показ чне середовище, в якому виділяють частки шуканого агента з можливістю переміщення останніх в зону детектування, а оптимізація умов безперешкодливої міграції аналіза-та у іонному вигляді позбавляє зайвих витрат часу на ПІДГОТОВЧІ операції Поляризація розчину активує нейтральні молекули рибоксину за рахунок посилення зв'язків із зарядженими частками буфера, а нативація рибоксину цим шляхом надає змогу ідентифікувати його в розчині Дегазація забезпечує пробі безперешкодливе потрапляння в порожнину капіляра, чим впливає на повноту та швидкість визначення шуканого агента При цьому співвідношення масових частин розчина рибоксину з буферною сумішшю 1 1 в пробі є найбільш ефективним, бо при збільшеній присутності буфера в пробі очікується спотворення вихідних даних, з-поза погіршення чутливості детектора, при зменшенні спостерігаються погіршення поляризації розчину рибоксину та заряду форетичного середовища, а надалі набуває виснаження останнього, що погіршує відтворення процесу Детектування оптичної ЩІЛЬНОСТІ рибоксину в пробі на довжині хвилі 254нм пов'язане з забезпеченням необхідного порогу чутливості при ідентифікації проби та характеризується дискретним значенням довжини хвилі, як найбільш оптимальним при використанні Реєстрація оптичної ЩІЛЬНОСТІ рибоксину, під час міграції його активованих молекул в порожнині капіляру в бік до анода, що має місце після поляризації буфером, тобто після натуралізації ІОНІВ ник КІЛЬКІСНОГО вмісту Зв'язок сукупності ознак запропонованого рішення задачі з технічним результатом полягає в тому, що буферною сумішшю утворюють форети О 00 ю 45280 електрохімічним шляхом (без використання допоміжних реактивів), а від того - забезпечує найбільш повну ідентифікацію, об'єктивне визначення вмісту та істотно скорочує тривалість досліду Утворення фореграми, що відбиває вміст шуканого агента в пробі, надає зручні аналогово-цифрові можливості його обчислення у подальшому, завдяки оптимізацм чутливості детектування та виключенню систематичних і раптових помилок, спотворення результатів при вимірах, які властиві деяким сучасним методикам [1, 2] Отже, сукупність відокремлюючих ознак заявленого об'єкта за наявністю причинно-слідчих зв'язків з технічним результатом можливо кваліфікувати істотною Для визначення вмісту рибоксину у експериментальному розчині можливо застосування промислової системи капілярного електрофорезу «Капель-ЮЗР» (виробництва РФ), кварцового капіляра 0 0,075мм довжиною 600мм, ваг лабораторних 2 класу, мір маси, дозаторів піпеточних змінних обсягів (5 - 50мм3, 50 - 200мм 3 , 200 - 1000мм3), рН метру, програмного забезпечення «Мультіхром» і комп'ютера мінімальної конфігурації Допускається використання приладів і устаткування інших моделей з аналогічними або більш кращими метрологічними характеристиками ДОПОМІЖНІ пристрої центрифуга, пробірки одноразові типу Еппендорфа, МІСТКІСТЮ 1,5СМ , фільтри целюлозно-ацетатні, з діаметром пір біля 20мкм, насадки фільтра Реактиви вода дистильована, борна кислота, натрій тетраборнокислий Спосіб визначення вмісту рибоксину у водному розчині виконують у наступній ПОСЛІДОВНОСТІ ПІСЛЯ фільтрації розчину, що містить рибоксин, у пробірку додають буферний розчин при співвідношенні масових частин в пробі 1 1, які після відповідної дегазації використовують як форетичне середовище Надалі приступають до капілярного електрофорезу Під час цього процесу іонізовані нейтральні молекули рибоксину мігрують від пробірки з пробою в бік до аноду крізь капілярний провідник, завдяки взаємодій із зарядженими молекулами форетичного середовища За допомогою детектора, що розміщується впритул до капіляра, ідентифікують та реєструють оптичну ЩІЛЬНІСТЬ рибоксину шляхом перетворення даних в аналоговий сигнал, визначають вміст рибоксину в пробі При цьому детектування його оптичної ЩІЛЬНОСТІ здійснюють на довжині хвилі аналізатора 254нм ВІДПОВІДНО ДО результатів детектування, за даними отриманих аналогово-цифрових сигналів утворюють електрофореграму Комп'ютерне забезпечення обчислює площі ПІКІВ останньої та перетворює підсумковий результат у показник КІЛЬКІСНОГО вмісту Тож, спосіб дозволив шляхом капілярного електрофорезу визначити міст аналізата, а разом із цим - досягти повне визначення аналізата в пробі, забезпечити оптимальну чутливість та високу швидкість визначення (див таблицю) До додаткових характеристик нового об'єкта належать відсутність токсичності з боку ХІМІЧНИХ реактивів, низька вартість базового обладнання та допоміжних матеріалів, зручність і спрощення умов відтворення способу, висока об'єктивність визначення вмісту й т і Для перевірки технічного результату на прикладі конкретного використання вміст рибоксину визначали у модельному водному розчині в наступній ПОСЛІДОВНОСТІ Для виготовлення буферного розчину у мірну колбу МІСТКІСТЮ 50см 3 додавали 5,5см3 розчину борної кислоти при концентрації 0,2моль/дм , 6,5см3 розчину тетрабората натрію при концентрації 0,05моль/дм3, а потім обсяг доводили до мітки дистильованою водою Розчин рибоксину фільтрували через целюлозно-ацетатний фільтр, заздалегідь промитий дистильованою водою, вміщували в пробірку Еппендорфа у КІЛЬКОСТІ 0,3см3 й додавали 0,3см3 буферного розчину, перемішували та дегазували на центрифузі протягом 4хв зі швидкістю 3200об/хв На ДІЛЯНЦІ між пробіркою з пробою, як електролітичним середовищем, і анодом встановлювали капілярну трубку Перед підведенням потенціалів джерела живлення напругою близько 20кВ, в порожнині капіляра утворювали тиск біля ЗОмБар Після комутації ланцюгів живлення нейтральні молекули рибоксину під впливом електричного струму рухались до аноду у форетичному середовищі крізь капіляр На довжині хвилі детектора 254нм, що контактував із капілярною трубкою, ідентифікували рибоксин та визначали оптичну ЩІЛЬНІСТЬ потоку шляхом детектування Сигнал з приладу надходив до комп'ютера та відбивався у вигляді електрофореграми Побудова градуїровочної залежності, з використанням значень шуканого агента між верхньою та нижньою межами виявлення, визначення площ ПІКІВ заданої концентрації дозволили визначити концентрацію рибоксину в пробі Загальна межа виявлення рибоксину (чутливість) у модельному водному розчині становила 30нг/мл в пробі, його екстракція сягала 100%, час виходу - 5хв, а термін аналізу - 7хв Отже, прикладом конкретного використання доведена можливість відтворення процесу, пов'язаного з визначенням вмісту рибоксину у водному розчині шляхом капілярного електрофорезу, який з рівня техніки, що встановлений заявником, для даного продукту є невідомим Використання способу визначення вмісту рибоксину у водному розчині науково-дослідними лабораторіями фармаційних та ХІМІЧНИХ підприємств допоможе своєчасно корегувати вміст цього фармакологічного засобу в лікарських формах 45280 Таблиця Техніко-економічні характеристики способу визначення вмісту рибоксину в ХІМІЧНИХ сполуках шляхом капілярного електрофорезу Показники та одиниці виміру Заявлене рішення задачі Загальна тривалість підготовки проби, хв 7 Термін аналізу, хв 7 Термін виходу рибоксину, хв 5 Загальна вартість обладнання, ум од 11000 Чутливість визначення рибоксину в пробі, нг/мл ЗО Ступінь екстракції рибоксину, % 100 Джерела Інформації 1 Крамаренко В Ф Токсикологічна ХІМІЯ К «Вища школа», 1989, 446 с 2 http//ilch vsmu edu ua/hplc/drug/1 -0002 htm - Интернет-сайт совместной медикобиологической лаборатории Винницкого государственного университета им Н И Пирогова и Института поверхности НАН Украины Теофиллин (Updated 10 09 2001) ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044) 456 - 20 - 90