Вакцина “рококол” інактивована проти ешерихіозу та рота-, коронавірусних інфекцій телят

Вакцина інактивована проти ешерихюзу та рота-, коронавірусних інфекцій телят, що містить антигени ешерихій, яка відрізняється тим, що до и складу вводяться ентеротоксигенні ешерихм (термостабільний та термолабільний ентеротоксини) та ешерихм з адгезивними антигенами (К99, Att25, F41, К88ас, K88ab, K88ad), антигени ротавірусу і коронавірусу, шактивовані формаліном, і призначається для оральної вакцинації Передбачуваний винахід відноситься до ветеринари, а саме до мікробіологи та бютехнологп В етіологічній структурі інфекційних захворювань новонароджених телят, що перебігають з ознаками ураження шлунково-кишкового тракту, провідне місце відводиться ешерихюзам (Фельдман І І, 1975, Гушул В А, 1984, Зароза В Г, 1988) та рота-, і коронавірусним ентеритам (Хараламбіев X Е , 1977, Коромислов Г Ф , 1984, Зароза В Г , 1988, Mebus С , 1977, Hudson D , 1981) Досить часто збудником захворювання виступає асоціація мікроорганізмів, яка за даним Г Дворских и Л Белянко (1990) зустрічається до 62,5% випадків, а по даним Otto P , Ganther H та Prudlo J (1997), вони реєструються до 73,4% випадків Для профілактики ешерихюзу розроблено ряд препаратів для активної профілактики (патент Великобританії № 1472624 А61К39/02, патент Франції № 2466251, патент Россм № 2053792 ) Для профілактики рота- і коронавірусних ентеритів розроблено вакцину "Рокоген" (ТУУ 46 15 388-99), полівалентна вакцина проти місцевих кишкових інфекцій для орального застосування (патент ФРН № 1792256 від 09 11 78 р А61К39/02) Найбільш близьким за технічним рішенням до об'єкту, що заявляється, є коліпротектан ВІЕВ, що є прототипом До його складу входять антигени ешерихій Коліпротектан призначений для профілактики лише колібактеріозу, за допомогою цього препарату провести профілактику рота-, та коронавірусних ентеритів у телят неможливо В основу винаходу, що передбачається, по ставлено завдання розробити вакцину шактивовану проти ешерихюзу та рота, коронавірусних інфекцій телят Поставлена задача вирішується шляхом введення до складу вакцини, що містить антигени ешерихій, ентеротоксигенні ешерихм (термостабільний та термолабільний ентеротоксини) та ешерихм з адгезивними антигенами (К99, Att25, F41, К88ас, K88ab, K88ad), антигени ротавірусу і коронавірусу, шактивовані формаліном, і призначається для оральної вакцинації Приклад 1 Одержання комплексних ешерихюзних антигенів Штами Е соїі, що експресують адгезивні антигени К99, Att25, F41, К88ас, K88ab, K88ad, в титрах 1 320 - 1 1280 в реакції аглютинації з антиадгезивними сироватками і штами, що утворюють термолабільний і термостабільний ентеротоксини, вирощують окремо в рідкому живильному середовищі Хоттінгера або УНДІЕВ при 37°С протягом 1 8 - 2 0 годин В отримані культури виробничих штамів Е соїі з концентрацією 5 - 8 млрд, мікробних клітин вносять 0,5 - 0,6% формаліну і витримують при 37°С 180 - 240 годин До складу комплексного антигену входять 1) антигени ентеротоксигенних ешерихій, взятих у співвідношенні 1 1, 2) антигени адгезинпродукуючих ешерихій, взятих у співвідношенні 1 1 1 1 1 1 Комплексний ешерихюзний антиген вміщує антигени ентеротоксигених ешерихій та антигени адгезинсинтезуючих ешерихій, взятих у СПІВВІДНО 00 о> (О ю шенні 1 1 Приклад 2 Отримання вірусних компонентів вакцини Для отримання вірусних компонентів вакцини ротавіруста коронавірус роздільно розмножують у перещеплюваних культурах кліток нирки теляти (НТ) та телячої трахеї (ТТр) ВІДПОВІДНО у присутності в живильному середовищі трипсину в КІЛЬКОСТІ 3 З - 5 мг/см Отримані культуральні ротавірус та коронавірус з титром інфекційності не нижче 5,0 Ід та 6,0 Ід в см , ВІДПОВІДНО, змішують у рівних об'ємах та шактивують 40% формаліном до кінцевої концентрації від 0,05% до 0,1% при +37°С на протязі 48 годин Приклад 3 Виготовлення вакцини "Рококол" Отримані комплекси ешерихюзних та вірусних антигенів у вакцину вносять у співвідношенні 1 1 Вакцину перевіряють на стерильність за ГОСТ 28085-89, а також на нешкідливість - загальноприйнятим методом на лабораторних тваринах Приклад 4 Застосування вакцини Вакцину застосовують для імунізації новонароджених телят у неблагополучних господарствах по ешерихюзута рота-, коронавірусним інфекціям Вакцину застосовують перорально 4-ри кратно в дозі 15см - перше введення вакцини здійснюється за ЗО хвилин до першої дачі молозива, - друге введення через 6 - 8 годин після пер Таблиця 45698 шої, а наступні дві випойки через 24 години, ВІДПОВІДНО Приклад 5 Вакцина була випробувана на лабораторних тваринах При оральній імунізації мишей у дозі 0,5 мл 4-рикратно, не спостерігали негативного впливу препарату на стан тварин, в сироватці крові виявляли вірогідне зростання титрів антитіл у мишей дослідної групи до всіх антигених компонентів вакцини в порівнянні з контролем Вакцину випробували також на новонароджених телятах Було сформовано 2 групи тварин дослідна та контрольна, по 10 тварин у кожній групі Телятам дослідної групи вакцину задавали чотирьохразово per os, no зазначеній схемі У тварин обох груп на п'ятий день життя відбирали проби крові та фецесу В сироватці та копрофільтратах визначали титри антитіл до антигенів Е соїі та рота-, коронавірусів Результати наведені у таблицях 1, 2 Приклад 6 Вакцину випробували на телятах в ксп "Нива", Дергачівського району, ксп "Рассвет" Балаклійського району Харківський області, при цьому зрівнювали захворюваність та загибель серед імунізованих та неімунізованих телят Результати наведені в табл З Результати апробації свідчать про те, що вакцина "Рококол" забезпечує надійний захист імунізованих тварин від спонтанного захворювання інфекційними гастроентеритами 1. Показники титрів антитіл до рота-, коронавірусів та фімбріальних адгезинів E.coli в сироватці крові телят (Iog2). Титр AT к ротавірусам Групи телят Титр AT к коронаК99 вІрусам Телята контрольної групи 2,37 ± 0,19 4,5 ± 0,40 3,7 ± 0,97 Телята дослідної групи 0,2,1 ± 0,27 4,7 ± 0,37 8,32 ± 0,28 Титри AT к фімбріальним адгезинам Е соїі F41 3,6 ± 0,86 7,41 ± 0,26 АИ25 K88ab К88ас K88ad 5,3 ± 0,34 5,19 ± 0,47 7,05 ± 0,31 4,53 ± 0,78 4,15 ± 0,69 6,95 ± 0,25 7,68 ± 0,29 8,32 ± 0,31 Таблиця 2. Середні показники титрів антитіл к рота-, коронавірусам та фімбріальним адгезинам E.coli в копрофільтратах телят (log2). Групи телят Телята контрольної групи Телята дослідної групи Титр AT к ротавірусам Титр AT к коронавірусам 1,87 ± 0,36 4,6 ± 0,57 Титри AT к фімбріальньш адгезинам Е соїі К99 F41 АИ25 K88ab К88ас K88ad 3,42 ± 0,77 2,9 ± 1,27 4,07 ± 0,55 3,5 ± 0,28 2,99 ± 1,27 3,57 ± 0,28 2,74 ± 1,08 7,8 ± 1,0 4,72 ± 0,44 4,52 ± 0,65 4,32 ± 0,61 5,12 ± 0,41 4,72 ± 0,57 4,32 ± 0,35 45698 Таблиця 3. Результати випробовування вакцини "Рококол" неблагополучних господарствах. Назва господарства Групи телят Кількість тварин Із них У групі захворіло Із них загинуло Дослідна 25 Контрольна 20 12 3 Дослідна 15 контрольна 15 9 1 Ксп "Рассвет" Ксп "Нива" ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044)456-20- 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71 у