Спосіб підвищення якості ембріонів людини

Спосіб підвищення якості ембріонів людини, що включає забір біоматеріалу, його культивування до утворення моношару і поміщення на нього ембріонів для співкультивування, який відрізняється тим, що як біоматеріал для співкультивування використовують кріоконсервовані клітини гранульози і кумулюса. (19) (21) u200906110 (22) 15.06.2009 (24) 25.12.2009 (46) 25.12.2009, Бюл.№ 24, 2009 р. (72) ГРИЩЕНКО ВАЛЕНТИН ІВАНОВИЧ, ПІНЯЄВ ВОЛОДИМИР ІВАНОВИЧ, ПЕТРУШКО МАРИНА ПАВЛІВНА, ЧУБ НАТАЛЯ НЕСТЕРІВНА, ДОБРУНОВА ІННА ВОЛОДИМИРІВНА 3 одержання ендометріальних епітеліальних клітин здійснюється шляхом біопсії ендометрію. В основу корисної моделі поставлено задачу створити такий спосіб підвищення якості ембріонів людини, в якому б, шляхом заміни біоматеріалу, що використовується для співкультивування з ембріонами, забезпечувалась можливість підвищити якість ембріонів і, тим самим, збільшити кількість ембріонів, що розвились до стадії бластоцисти. Ця задача вирішується тим, що в способі підвищення якості ембріонів людини, який включає забір біоматеріалу, його культивування до утворення моношару і поміщення на нього ембріонів для співкультивування, згідно з корисною моделлю, як біоматеріал для співкультивування використовують кріоконсервовані клітини гранульози і кумулюса (КГК). Спільне культивування ембріонів с КГК забезпечує підвищення якості ембріонів, про що свідчить збільшення кількості ембріонів, розвитих до стадії бластоцисти. В Таблиці наведені дані, які указують на те, що після співкультивування з КГК (№4, 5) кількість ембріонів, що досягли стадії бластоцисти, вища ніж після співкультивування з іншими біоматеріалами (№1, 2, 3). У порівнянні з прототипом (№3) кількість нативних ембріонів, що досягли стадії бластоцисти, підвищується майже на 30%, кріоконсервованих - на 25%. При цьому спосіб нескладний і дозволяє знизити ризик фізичного і психологічного травмування пацієнтки. Спосіб здійснюють таким чином. Під час проведення програми ЗІВ, шляхом аспірації фолікулів, одержують фолікулярну рідину з ооцит-кумулюсним комплексом і виділяють клітини КГК. Відмиті від крові клітини КГК помішують в середовище культивування і культивують у СО2 46451 4 інкубаторі при 37°С. Утворений моношар клітин переносять до пластикових віол з розчином кріопротектору і витримують 30хв в парах азоту, далі занурюють у рідкий азот. Розморожують КГК на водяній бані при 37°С і культивують протягом 24 годин. Після культивування нативні або кріоконсервовані ембріони поміщають на утворений моношар і співкультивують с КГК до утворення бластоцисти. Приклад. Під час проведення програми ЗІВ, шляхом аспірації фолікулів, одержували фолікулярну рідину. Після виділення ооцит-кумулюсного комплексу препарованою гілкою відрізали частинки розміром 10-20мкл і ресуспендували в середовищі культивування Meneso B2. Відмивали в цьому ж середовищі для видалення еритроцитів. Після відмивання КГК помішували в чашки Петрі (Д=30мм) із середовищем Meneso B2 і переносили до СО2інкубатора, де культивували при 37°С протягом 24 годин. На цей час на дні культуральних чашок відмічалися адгезія і розростання КГК з утворенням моношару. Моношар відділяли пастеровською піпеткою і поміщали у 1мл пластикові віоли з розчином кріопротектору (1М розчин 1,2-пропандіолу, 0,5М розчин сахарози). Віоли витримували 30хв в парах азоту, після чого занурювали у рідкий азот. За день до початку проведення співкультивування ембріонів з КГК віолу з КГК розморожували на водяній бані при 37°С, культуру триразово відмивали від розчину кріопротектору в середовищі Meneso B2 і поміщали в чашки Петрі з 3мл середовища Meneso B2, куди далі переносили нативні або кріоконсервовані ембріони. Співкультивування ембріонів з КГК здійснювали в СО2-інкубаторі до утворення бластоцист. Результати наведені в Таблиці (№ 4, 5). Таблиця Порівняльний аналіз розвитку ембріонів in vitro до стадії бластоцисти із застосуванням різних систем співкультивування №№ п/п 1 2 3 4 5 Системи співкультивування Епітеліальні клітини яйцеводу вівці 10% фолікулярна рідина Епітеліальні клітини ендометрію Клітини КГК для нативних ембріонів (n=15) Клітини КГК для кріоконсервованих ембріонів (n=10) Кількість ембріонів, що досягли стадії бластоцисти 58,5 50,0 61,2 92,2 8,5 86,4 8,2 дані авторів Джерела інформації: 1. Wiemer К., Hoffman D., Macson W. Embryonic morphology and rate of implantation of human embryos following co-culture on bovine oviductal epithelial cells // Hum. Rep. - Vol.8, №1, P.97-101. 2. Hemmings R., Lachapelle M., Falcone T. et al. / Effect of follicular fluid supplementation on in vitro development of human pre-embryos // Fertil. & Steril. - 1994. - Vol.62, №5. - P.1018-1021. 3. Simon C, Mercades A., Velasco J. Coculture of human embryos with autologous human endometrial cells in patients with implantation failure // The J. of Clinical Endocrin. & Metabolism. - 1999. - Vol.84, №8. - P.2638-2646 (прототип). 5 Комп’ютерна верстка Л. Ціхановська 46451 6 Підписне Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601