Спосіб діагностики морфофункціонального стану кардіоміоцитів на основі вивчення біоптатів та некроптатів міокарда

Спосіб діагностики морфофункціонального стану кардіоміоцитів на основі вивчення біоптатів та некроптатів міокарда, що передбачає фарбування гістологічних зрізів за методикою MSB в модифікації Зербіно-Лукасевич, який відрізняється тим, що ділянки міокарда, що знаходяться в стані спокою, зафарбовують в сіро-блакитний колір, в той час як м'язові волокна під час виконання активної роботи набувають буруватого кольору, кардіоміоцити в стані контрактури (гіперскорочення) - яскраво-червоного, а зони дистрофії та некрозу кардіоміоцитів мають яскраво-жовте забарвлення. (19) (21) u200908910 (22) 26.08.2009 (24) 10.03.2010 (46) 10.03.2010, Бюл.№ 5, 2010 р. (72) ЗАХАРОВА ВАЛЕНТИНА ПЕТРІВНА, РУДЕНКО КОСТЯНТИН ВОЛОДИМИРОВИЧ, ЛАЗОРИШИНЕЦЬ ВАСИЛЬ ВАСИЛЬОВИЧ, ЛЕВЧИШИНА ОЛЕНА ВОЛОДИМИРІВНА, РУДЕНКО ОЛЕНА ВОЛОДИМИРІВНА (73) ДЕРЖАВНА УСТАНОВА "НАЦІОНАЛЬНИЙ ІНСТИТУТ СЕРЦЕВО-СУДИННОЇ ХІРУРГІЇ ІМ. М.М. АМОСОВА" АМН УКРАЇНИ 3 дорослих лабораторних щурів (маса 200-250г), які були згруповані наступним чином: 1) препарати серця, отримані на фоні фібриляції шлуночків серця при реперфузії після етапу гіпоксії (n=6), 2) препарати серця, що підлягали впливу кардіоплегічного розчину кустадіолу (n=6), 3) контрольна група препаратів серця, що не підлягали жодному впливу (n=6). Препарати серця фіксували в 10% розчині нейтрального формаліну, за загальноприйнятою методикою виготовляли парафінові блоки, робили зрізи товщиною 5-10мкм, які забарвлювали гематоксиліном - еозином, а також за методом MSB в модифікації Зербіно-Лукасевич [3, 7]. Спосіб використання здійснювався наступним чином: зрізи тканин, поміщені за загальноприйнятою методикою в парафін, депарафінували в ксилолі з подальшим відмиванням спиртом і дистильованою водою. Фарбування ядер, на відміну від міокарда, проводилось з використанням забарвлення Гемалаун Майера. Помістити зрізи в Гемалаун Майера на 5 хвилин, промити під проточною водою і залишити в ній до набуття препаратами синього кольору. Фарбувати зрізи в розчині Марциуса жовтого або оранжевого Ж протягом двох хвилин з подальшим промиванням водою. Далі занурити зрізи на сім хвилин в 1% розчин кислотно-червоного 2 С в 2,5% водному розчині оцтової кислоти. Обробити 1% водним розчином фосфорвольфрамової кислоти протягом п'яти хвилин з наступним промиванням водою. Перенести препарати на 1 хвилину в 0,5% розчин водного блакитного в 1% водному розчині оцтової кислоти і промити водою. Зневодити препарати в спиртах, освітлити в ксилолі і заключити в бальзам. При вивченні гістологічних препаратів отриманих сердець виявлено, що у зразках, зафіксованих під час кардіоплегії, кардіоміоцити були забарвлені переважно в сіроблакитний колір (Фіг.1). Кардіоцити сердець тількищо забитих тварин набували бурого кольору (Фіг.2). Зони гіперскорочення відрізнялись яскравочервоним кольором (Фіг.3). Крім того, в препаратах, отриманих під час реперфузії, зустрічались ділянки з усіма видами забарвлення, причому в зонах гіперскорочення кардіоміоцити іноді гомогенізувались, набухали і мали яскраво-жовтий колір. Подібну картину спостерігали в препаратах міокарда ряду пацієнтів, які померли на фоні гострого інфаркту міокарда (Фіг.4). У всіх випадках елементи сполучної тканини мали блакитний колір [4, 5, 6]. В основу корисної моделі покладено завдання розробити спосіб діагностики морфофункціональної компетентності кардіоміоцитів при різних патологічних станах міокарда на основі до 48119 4 слідження гістологічних препаратів, отриманих з операційного і секційного матеріалів і пофарбованих методом MSB в модифікації ЗербіноЛукасевич. Впровадження цього методу діагностики дозволяє вдосконалити тактику післяопераційного лікування хворих, оперованих з приводу гіпертрофічної та дилатаційної кардіоміопатій, субаортального стенозу, підклапанного стенозу легеневої артерії та ін.. Крім того, цей метод дозволяє оцінити ефективність кардіоплегії, яка необхідна при проведенні операцій зі штучним кровообігом. Метод відрізняється тим, що, на відміну від загальноприйнятих стандартів, ми забарвлюємо гістологічні препарати міокарда за методом MSB в модифікації Зербіно-Лукасевич, який зазвичай використовується для визначення фібрину різного ступеня зрілості. Застосування цього методу в наших цілях дозволяє диференціювати кардіоміоцити, які знаходяться на різних стадіях функціональної активності, і отримати уявлення про сумарну компетентність міокарда і змінах його морфологічних структур. Отже, представлене дослідження дозволило зробити висновок, що в міокарді, забарвленому за методом MSB в модифікації Зербіно-Лукасевич, кардіоміоцити, які перебувають в стані спокою, набувають сіро-блакитного кольору; кардіоміоцити, що скорочуються, - буроватого; зони гіперскорочення (контрактури) зафарбовуються в яскравочервоний. Некротизовані ділянки міокарда відрізняються яскраво-жовтим забарвленням. Список літератури: 1. Захарова В.П., Демьянчук В.Б., Демьянчук О.В. Гипертрофия миокарда правого желудочка при тетраде Фалло // Грудная и сердечнососудистая хирургия - 1997.-№ 2.- 36-37. 2. Зербіно Д.Д., Лукасевич Л.Л. Методика для определения возраста фибрина при синдроме диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови // Арх. патологии - 1984.- № 8.- 72-75. 3. Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия. // Под ред. чл. - кор. АМН В.В. Португалова. - Москва «Мир». -1969. - С. 603. 4. Непомнящих Л.М. Патологическая анатомия и ультраструктура сердца. -Новосибирск «Наука». -1981.-С. 322. 5. Пальцев М.А., Аничков Н.М. Патологическая анатомия в 3 т. - Москва «Медицина». - 1997. - Т.1. - С. 515. 6. Стеченко Л.А., Петренко В.А. Сердце при гипотиреозе. - Киев. - 2008. -С. 194. 7. Уикли Б. Электронная микроскопия для начинающих. // Под ред. канд. биол. наук В.Ю. Полякова. - Москва «Мир». - 1975. - С. 313. 5 Комп’ютерна верстка А. Крижанівський 48119 6 Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601