Спосіб біохімічної діагностики остеодистрофії кіз

Спосіб біохімічної діагностики остеодистрофії кіз, що включає одночасне визначення рівня зага 3 50153 ливість оцінити інтенсивність процесів резорбції та синтезу кісткової тканини. Поставлена задача досягається тим, що у способі біохімічної діагностики остеодистрофії кіз, який включає одночасне визначення рівня загального та іонізованого кальцію, неорганічного фосфору, активності лужної фосфатази та її кісткового ізоферменту, активності амінотрансфераз у сироватці крові, вмісту кальцію та фосфору в сечі, згідно корисної моделі, додатково визначають вміст показників стану сполучної тканини (глікопротеїнів, загальних хондроїтинсульфатів, загальних глікозаміногліканів та їх фракцій) у сироватці крові, а також оксипроліну та уронових кислот в сечі. За даного діагностичного підходу вперше, розглядається можливість дослідження стану сполучної тканини кіз. За наявності патології дистрофічного характеру у кістковій тканині застосування наведених методик дозволяє оцінити ступінь ураження досліджуваної системи. Приклад конкретного використання Для проведення власних досліджень були відібрані кози віком 3-4 роки, за даними клінічних досліджень було створено дві групи тварин. Першу групу склали - 5 клінічно здорових кіз. Другу 4 групу - 17 тварин з клінічними ознаками остеодистрофії. У цих групах кіз було відібрано з яремної вени зразки крові об'ємом 20мл для подальшого отримання сироватки крові за загальноприйнятою методикою. Зразки сечі відбирали під час природнього сечовиділення. У сироватці крові кіз визначали вміст наступних показників: глікопротеїнів -за методом О.П. Штейнберг та Я.Н. Доценко, хондроїтинсульфатів реакцією з риванолом, загальних глікозаміногліканів (ГАГ) та їх фракцій -реакцією з резохіном, активність лужної фосфатази визначали по гідролізу βгліцерофосфата за методом Боданського [2], загального та іонізованого кальцію визначали на аналізаторі АЄК - 01, фосфору - спектрофотометричним методом (тест «Phosph-DAC. Lq» фірми DACSpectro Med S.R.L.), активність аланінамінотрансферази (АлАТ) та аспартатамінотрансферази (АсАТ) визначали оптимізованим ензиматичним кінетичним методом за допомогою набіру реагентів фірми «Витал Диагностике Спб» У сечі визначали вміст оксипроліну за методом Л.М. Фурцевої [6] та сумарних уронових кислот - за N. Di Ferrante, та С. Rich [7]. Таблиця 1 Біохімічні показники сироватки крові кіз Показник АлАТ, од/л АсАТ, од/л Лужна фосфатаза, од. Бод. Кістковий ізофермент лужної фосфатази, % Кальцій загальний, ммоль/л Кальцій іонізований, ммоль/л Фосфор, ммоль/л Хондроїтинсульфати, г/л Глікопротеїни, од І фракція ГАГ, од. II фракція ГАГ, од. III фракція ГАГ, од. Сума фракцій ГАГ, од. 1) У кіз, хворих на остеодистрофію, показники мінерального обміну (загальний та іонізований кальцій, неорганічний фосфор) були практично однаковими з такими ж у групі контролю, що означає низьку їх інформативність. 2) У хворих на остеодистрофію кіз достовірно більшим, ніж у контролі, був рівень хондроїтинсульфатів (на 54%), що на тлі підвищення активності лужної фосфатази вказує на патологію опорнорухової системи. 3) У 50% дослідних тварин активність Ал AT у сироватці крові була достовірно вищою, ніж у контрольної групи і складала - 41,2±1,9од/л. Збіль Контрольна група 28,50±1,04 26,00±1,08 3,78±0,63 52,73±6,30 2,67±0,08 1,28±0,04 1,24±0,02 0,11±0,01 0,60±0,01 5,9±0,55 2,63±0,08 2,0±0,17 10,2±0,62 Дослідна група 33,80±2,71 38,90±1,56 8,31±1,09 63,13±5,37 2,78±0,05 1,32±0,04 1,24±0,02 0,24±0,04 0,67±0,05 8,1±0,52 3,42±0,17 2,6±0,31 14,2±0,84 шення активності сироваткової АсАТ у кіз з клінічними ознаками остеодистрофії (38,90±1,08од/л) проти (26,00±1,08од/л) у контролі є наслідком порушення стану печінки, адже відомо, що її функції порушуються при остеодистрофії. 4) У тварин дослідної групи достовірно вища концентрація II фракції глікозаміногліканів (на 23%). Підвищення рівня саме II фракції, яка містить переважно хондроїтин-4-сульфати, свідчить про патологію саме кісткової системи, оскільки у кістках кількісно переважає фракція хондроїтин-4сульфату [5]. 5 50153 6 Таблиця 2 Біохімічні показники сечі кіз Показник Оксипролін мг/л Уронові кислоти мг/л Кальцій мг/л Фосфор г/л Контрольна група 50,6±4,04 3,17±0,34 92,5±12,4 0,17±0,04 1) У кіз, хворих на остеодистрофію, порівняно з контрольною групою вірогідно вища екскреція оксипроліну (на 33%), уронових кислот (на 39%) та кальцію (на 78%). Це зумовлено різним співвідношенням остеосинтезу і резорбції кісткової тканини у тварин на період обстеження. Таким чином, метод діагностики остеодистрофії кіз дозволяє: 1. розширити спектр тестів для постановки діагнозу на остеодистрофію кіз 2. підвищити ефективність діагностичних заходів. Список використаних джерел прийнятих до уваги при експертизі: 1. Влізло В.В. До етіології та діагностики хвороб печінки у кіз / В.В. Влізло // Вісник аграрної науки. - 2006.- №9. - С.42-46. 2. Камышников B.C. Справочник по клиникобиохимическим исследованиям и лабораторной диагностике. - [2-е изд.]. - М.: МЕД-пресс-информ, 2004. - 920с., ил. Комп’ютерна верстка О. Рябко Дослідна група 75,1±4,82 8,08±1,35 420,6±60,43 0,13±0,02 3. Liesegand A., Bone metabolism of milk goats and sheep during second pregnancy and lactation in comparison to first lactation / A. Liesegand, J. Risteli, M. Wanner // J. Anim. Physol. Anim. Nutr (Berl), 2007. - №6. P.91. 4. Cms L. Osteodystrophia fibrosa in milking goats: report of clinical case / Re vista Portuguesa de Ciencias Veterinarias // Luis A. Cruz, Miguel S. Lima, M. Conceicao Peleteiro. - 2002. - №97. - p.147-150. 5. Клінічна біохімія: навч. посіб. для студ. вищ. фарм. навч. закл. і фармац. фак.мед.навч. закл. 34 рівнів акредитації / [О.П. Тимошенко, Л.М. Вороніна, В.М. Кравченко та ін.] - X.: НФаУ «Золоті сторінки», 2003.-239с. 6. Крель А.А. Методы определения оксипролина в биологических жидкостях и их применение в клинической практике /А.А. Крель, Л.Н. Фурцева // Вопросы Мед. Химии. -1968. - Т.14, №6. - С.635. 7. Di Ferrante N. The determination of acid aminopolysacharides in urine/. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601