Спосіб моделювання тромбоемболії легеневої артерії

Спосіб моделювання тромбоемболм легеневої артерії в експерименті, що включає введення у венозну систему ембологенних факторів, який відрізняється тим, що як тромбоемболи використовують суспензію висушеного протягом доби і подрібненого згустку венозної крові щура на 0,9 % розчині хлориду натрію (200 мкг порошку на 1 мл фізрозчину) висушеного протягом доби і подрібненого згустка венозної крові щура на 0,9% розчині хлориду натрію (200мкг порошка на 1мл фізрозчину) Запропонований нами спосіб дає можливість вивчати тромбоемболію дрібних гілок легеневої артерії в експериментальних тварин Окрім того, він є єдиним способом відтворення ТЕЛА на щурах, проведення досліджень на яких є дешевим, доступним і простим у виконанні Методика заготівлі суспензії Стерильним одноразовим шприцом об'ємом 2мл здійснюємо забір крові з нижньої порожнистої вени безпородного білого щура-самця віком 4 міс і масою 300г, який в подальшому в експерименті не використовується (доступ до вени див нижче) Як тільки кров у шприці згорнеться, знімаємо з нього голку, згусток крові витискаємо у стерильну фарфорову ступку і висушуємо одну добу Висушений згусток венозної крові у ступці ретельно подрібнюємо стерильною спеціальною паличкою Далі в стерильних умовах відважуємо 200мкг порошка, висипаємо його у невисоку стерильну пробірку, додаємо 1мл фізіологічного розчину і збовтуємо Утворену суспензію забираємо одноразовим шприцом і за вищевказаною методикою вводимо в нижню порожнисту вену іншого ПІДДОСЛІДНОГО щура Моделювання ТЕЛА Для створення моделі беремо безпородного білого щура-самця віком 4 МІСЯЦІ (300Г) Як засіб для наркозу використовуємо каліпсол внутрішньоочеревинно вводимо по 0,05мл каліпсолу на кожні 100г маси тіла щура У тварини, фік ю СО Ю 53542 сованої спинкою донизу, вищипуємо шерсть у ДІЛЯНЦІ грудної та черевної порожнин Операційне поле ДВІЧІ обробляємо розчином йоду Після ЦЬОГО ЗДІЙСНЮЄМО серединний розріз шкіри протяжністю 5 - 6см (серединну лапаратомію), починаючи від кінця мечеподібного відростка грудини Потім розтинаємо м'язи передньої черевної стінки Операційне поле обкладаємо стерильними серветками Далі готуємо доступ до нижньої порожнистої вени обережно відгорнувши органи черевної порожнини вбік, на задній СТІНЦІ черевної порожнини, біля хребта, побачимо венозний стовбур (синюватого забарвлення, не пульсує), покритий парієтальною очеревиною і фасцією Для кращої фіксації голки у вені очеревину і фасцію розсікаємо скальпелем, відтягуючи їх пінцетом вентрально За допомогою одноразового шприца вводимо суспензію висушеного протягом доби і подрібненого згустка венозної крові на 0,9% розчині хлориду натрію (детальна методика заготівлі суспензії вказана вище) Вміст шприца вводимо повільно Витягнувши голку, забезпечуємо гемостаз, використовуючи стерильні марлеві тампони Через 5хв марлеві тампони видаляємо (стінка судини не просочується кровю) Далі вкладаємо органи черевної порожнини на місце Рану ушиваємо пошарово, використовуючи поодинокі вузлові шви Після ушивання черевної порожнини рану обробляємо йодом і накладаємо асептичну повязку Тварину утримуємо у КЛІТЦІ при температурі не менше 20°С Асептичну пов'язку змінюємо кожний другий день При ЗМІНІ повязки рану обробляємо розчином йоду Післяопераційне знеболення 0,03мл 0,03% розчину бупренорфіну на 500г маси щура один раз на добу до загоєння післяопераційної рани Експеримент відтворений на 33 безпородних білих щурах-самцях віком 4 МІСЯЦІ (300 - 400г) Всі ці тварини були розділені на такі групи 1 Група норми з 5 здорових інтактних щурів 2 Контрольна група з 14 тварин, яким проводили серединну лапаротомію з ушиванням черевної порожнини без моделювання ТЕЛА 3 Піддослідна група з 14 щурів, на яких відтворювали запропоновану нами модель тромбоемболм дрібних гілок легеневої артерії Усіх тварин групи норми виводили з експерименту і проводили забір їх легень для морфологічних досліджень Для цього ж через 2 години після ушиття лапаротомної рани виводили з експерименту 7 тварин 2-ої і 7 щурів 3-ої групи Морфологічне дослідження легень тварин кожної з груп полягало у виготовленні з них ГІСТОЛОГІЧНИХ препаратів і зафарбуванні їх спеціальною диференційованою методикою для виявлення фібрину -"ОКГ" за Д Д Зербшо(1989) [2] Решту щурів 2 і 3 груп з експерименту не виводили У них до оперативного втручання та на 2 добу після нього проводили електрокардіографію і вивчали зміни на ЕКГ, в тому числі наявність ЕКГкритермв ТЕЛА При аналізі ЕКГ у щурів у нормі (до моделювання ТЕЛА) виявлено право-граму, яка у людини є діагностичним критерієм ТЕЛА У зв'язку з цим, діагностика ТЕЛА за ЕКГ проводилася у тварин шляхом порівняння вираженості правограми до моделювання і після моделювання ТЕЛА у одного і того ж щура Одержані такі результати У контрольній групі тварин, яким проводили серединну лапаротомію з ушиванням черевної порожнини без моделювання ТЕЛА, жодних морфологічних змін у легенях та ЕКГ-змін виявлено не було, що свідчило про відсутність впливу самого оперативного втручання на використовувані нами параметри для діагностики ТЕЛА При аналізі ГІСТОЛОГІЧНИХ препаратів легень (зафарбаваних за Д Д Зербіно) щурів піддослідної групи, виведених з експерименту через 2 години після моделювання ТЕЛА, у всіх тварин виявлено безповітряні ділянки легень з крововиливами в альвели, спазмовані бронхи, повнокровні судини, наявність в просвіті судин тромботичних мас з фібрином різного ступеня зрілості молодого і старого фібрину (за методикою Д Д Зербіно вік фібринового тромба залежить від його кольору оранжевий колір - молодий фібрин, віком до 6 годин, червоний колір - зрілий фібрин, віком 6 - 24 годин, синій колір - старий фібрин, віком >24 годин) Наявність старого фібрину в дрібних гілках легеневих артерій свідчила про те, що це якраз той фібрин, який був введений нами у вигляді вищевказаної суспензії Наявність молодого фібрину вказувала нате, що на введені нами тромбоемболи відбулося нашарування новоутвореного ендогенного фібрину Аналіз ЕКГ-змін на 2 добу після моделювання ТЕЛА у тварин піддослідної групи виявив ЧІТКІ ознаки ТЕЛА появу екстрасистол у відведенні AVL, електричну альтернацію у відведенні AVR, підняття вище ІЗОЛІНІІВ сегмента ST в III відведенні, не виражений зубок R в І відведенні, у V відведенні ST нижче ІЗОЛІНІЇ, у III відведенні сформований P-pulmonale, появу компонента rSr Приклад 1 На безпородному білому щурісамці віком 4 МІСЯЦІ (масою 300г) відтворено запропоновану нами модель тромбоемболм дрібних гілок легеневої артерії При аналізі ГІСТОЛОГІЧНИХ зрізів легень (забір легень через 2 години після моделювання ТЕЛА) виявлено прямі і опосередковані ознаки тромбоемболм легеневої артерії спазм дрібних бронхів, повнокров'я судин, в судинах - тромби зі старим (блакитного кольору) і молодим фібрином (оранжевого кольору) Оскільки для утворення старого фібрину за Д Д Зербіно необхідно не менше 24 годин, то виключається його утворення в кров'яному руслі за 2 години, які пройшли з моменту моделювання нами патологічного процесу А таким чином це ті ж тромби, які були використані нами для моделювання ТЕЛА Наявність тромбів з молодого фібрину свідчить про нашарування на введений нами фібрин нового ендогенного фібрину Приклад 2 На безпородному білому щурісамцю віком 4 МІСЯЦІ (350Г) відтворено запропоновану нами модель тромбоемболм дрібних гілок легеневої артерії На другу добу проведена електрокардіографія На ЕКГ Виявлено такі зміни поява екстрасистол у відведенні AVL, електрична альтернація у відведенні AVR, сегмент ST піднімається вище ІЗОЛІНІЇ в III відведенні, в І відведенні не виражений зубок R, що свідчить про зниження біоелектричної активності, у V відведенні ST нижче 53542 ІЗОЛІНІЇ - діастолічне перевантаження, у III відведенні сформований P-pulmonale, у цьому ж відведенні поява компоненту rSr, що вказує на порушення проведення імпульсу по правій НІЖЦІ пучка Гіса Ці ознаки чітко вказують на наявність у щура ТЕЛА [1] Всі одержані результати дозволяють стверджувати, що запропонована нами модель тромбоемболм дрібних гілок легеневої артерії дає відтворюваність у 100% взятих для цього тварин Отримані дані дають можливість рекомендувати застосування даного способу в експериментальній практиці для вивчення тромбоемболм дрібних гілок легеневої артерії на щурах Література 1 Грицюк А И Пособие по кардиологии - К Здоров'я, 1984 -с 510 2 Зербино Д Д Диссеминированное внутрисосудистое свертывание крови - М Медицина, 1989 -С 239-240 3 Мазаев П Н , Куніцин Д В Кпиникорентгенологическая диагностика тромбоемболии легочных артерий - М Медицина, 1979 -с 32 4 Рзаев Н М Эмболии и тромбозы легочной артерии - Баку Азербайджанское государственное издательство, 1970 - С 86-91 5 Рзаев Н М Эмболии и тромбозы легочной артерии - Баку Азербайджанское государственное издательство, 1970 -С 146-147 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24