4-ацетокси- 3 -ацетоніл-2,5,6-триметилфенол, що проявляє нейропротекторну активність

4-Ацетокси-3-ацетоніл-2,5,6-триметилфенол, що проявляє нейропротекторну активність HO CH2-CO-CH3 O-CO-CH3 Однією з ланок патогенезу нейродеструкції головного мозку при гострій ішемії є гіперпродукція активних форм кисню біоенергетичними та нейрохімічними системами клітин, що призводить до окислювальної модифікації та деструкції білків, ліпідів і нуклеїнових кислот [1]. Такі порушення змінюють білкові та ліпідні фрагменти мембран нейроцитів, ініціюють апоптичні процеси і розвиток запальних реакцій, погіршують специфічність рецепторів, порушують синаптичну провідність, секреторну і трансляційну та транскрипційну активність [2]. У зв'язку з цим, одним з нових перспективних шляхів нейропротекції може бути застосування антиоксидантів. Саме такі властивості притаманні МВ-5 [3]. За найближчий аналог обрано препарат пірацетам, що має широке клінічне застосування. Недоліком пірацетаму є відсутність лікувального ефекту в гострий період ішемії мозку та висока лікувальна доза. Приклади конкретного виконання (13) 54515 O-CO-CH3 (11) CH2-CO-CH3 UA HO Приклад 1 Синтез 4-ацетокси-3-ацетоніл-2,5,6триметилфенолу У тригорлий реактор ємністю 100мл, обладнаний крапельною воронкою на 0,5мл, зворотнім холодильником, механічною мішалкою вміщують 3г (0,02М) 2,3,5-триметилбензохінону 1,4 (псевдокумохінону) та 5,17мл (0,05М) ацетилацетону. Суміш перемішують до одержання гомогенного розчину, який охолоджують на водяній бані до 20°С, потім протягом 3-4хв. з крапельної воронки при переметуванні додають 2мл (0,02М) піперидину. Реакційну суміш залишають на водяній бані при 20°С на 12год. Темно-вишневого кольору суміш, яка утворилась, розводять в 5мл метилового спирту, охолоджують до 0°С, при перемішуванні обережно з крапельної воронки додають 2мл концентрованої хлористоводневої кислоти до зміни кольору до жовтого. Потім додають 50мл дистильованої води, фільтрують, промивають 20мл 5% водного розчину натрію гідроксиду, 150мл дистильованої води. Додають 50мл метилового спирту та кристалізують. Вихід 4-ацетокси-3-ацетоніл-2,5,6триметилфенолу (С14Н18О4) - 3,25г (65%). Продукт являє собою безбарвні голчасті кристали з температурою плавлення 131°С, молекулярною масою 250 D. Будову та ідентичність синтезованої сполуки доводили за допомогою елементного аналізу, тонкошарової хроматографії, ІЧта ПМРспектроскопії. ІЧ-спектр, см-1: 3500 (ОН), 1733, 1705 (С=О). ПМР-спектр, , м.д.: 5,72с. (1Н, ОН), (19) Корисна модель належить до галузі медицини, а саме до біологічно активних речовин, що можуть використовуватись для створення засобів захисту клітин головного мозку за умов гострої ішемії. Сполука 4-ацетокси-3-ацетоніл-2,5,6триметилфенол (МВ-5) загальної формули: U . 3 54515 3,57с. (2Н, СН2), 2,25с. (6Н, 2СН3, С(=О)СН3), 2,0м. (9Н, 3СН3). Приклад 2 Вивчення нейропротекторної активності 4ацетокси-3-ацетоніл-2,5,6-триметилфенолу Експериментальні дослідження проводили на білих щурах-самцях Вістар вагою (170-200)г. Усі експериментальні процедури і оперативні втручання проводили відповідно до "Положення про застосування лабораторних тварин в біомедичних дослідах". Гостре порушення мозкового кровообігу (ГПМК) визивали незворотною двобічною оклюзією сонних артерій під етамінал-натрієвим наркозом (40мг/кг) [4]. Нейропротекторну активність сполук визначали за показниками: виживання тварин з гострою ішемією, ступінь неврологічного дефіциту, показники процесів перекісного окиснення ліпідів (ПОЛ) та системи антиоксидантного (АО) захисту кори головного мозку, морфофункциональний стан нейронів IV-V шарів кори головного мозку щурів з ГПМК. Тварини були розділені на 4 експериментальних групи по 20 тварин у кожній. Перша група несправжньооперовані (інтактні) тварини, друга тварини з ГПМК (контрольна), третя - тварини з 4 ГПМК, яким вводили сполуку МВ-5 (25мг/кг), четверта - тварини з ГПМК, яким вводили пірацетам (500мг/кг). Введення сполук проводили внутрішньоочеревинно, одразу після наркозу та один раз на добу впродовж 4 (гострий період ішемії) та 18 діб (відновлювальний період). Щоденно впродовж 18 діб визначали виразність неврологічного дефіциту за шкалою McGrow [2] (табл.1). Біохімічні дослідження проводили на 4 добу від початку експерименту. Визначали вміст продуктів окислювальної модифікації білків (ОМБ) за рівнем альдегідних (АФГ) і карбоксильних (КФГ) продуктів в реакції з 2,4-динітрофенілгідразином [5]. Також визначали вміст дієнових кон'югатів (ДК), триєнкетонів (ТК) і малонового диальдегіду (МДА) [6]. Стан АО-системи визначали за активністю глутатіонпероксидази (ГПР) в тканині мозку [2] (табл. 2). Для вивчення морфофункціонального стану нейронів IV-V шарів кори головного мозку проводили морфометричний аналіз клітин мозку у автоматичному режимі за допомогою макропрограми, яка розроблена у спеціалізованому середовищі програмування VIDAS-2,5 [1]. Визначали концентрацію РНК у нейронах за [7] (табл.3, 4). Таблиця 1 Вплив сполук на виживання тварин та розвиток неврологічного дефіциту після ГПМК Середній бал за шкалою С.Р. McGrow 4 доба 18 доба Групи тварин Несправжньо оперовані тварини (інтактні) Тварини з ГПМК (контроль) Тварини з ГПМК + пірацетам Тварини з ГПМК + МВ-5 Кількість тварин, що вижили, % 0,88±0,11 0,00±0,00 100 19,7±2,15 15,8±2,80 14,0±1,77* 7,3±0,77 5,6±0,72 4,5±0,85* 30* 50 50 Примітка: * - р